Mục tiêu của bài viết nhằm nghiên cứu tác dụng hạ axít uric máu của cao lỏng Thống phong khang (TPK) trên động vật thực nghiệm gây tăng axít uric máu cấp và mạn.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2015 ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG HẠ AXÍT URIC MÁU CỦA CAO LỎNG THỐNG PHONG KHANG TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Vũ Bình Dương*; Nguyễn Hồng Ngân* Trần Quốc Bảo**; Trần Đăng Đức** TÓM TẮT Mục tiêu: nghiên cứu tác dụng hạ axít uric máu cao lỏng Thống phong khang (TPK) động vật thực nghiệm gây tăng axít uric máu cấp mạn Đ i tượng phương pháp: cho chuột nhắt trắng uống cao lỏng TPK liều (điều trị cấp) uống dự phòng ngày trƣớc gây tăng axít uric máu cấp kali oxonat tiêm phúc mạc 300 mg/kg Mơ hình gây tăng axít uric mạn cách tiêm cách nhật kali oxonat liều giảm dần (từ 300 mg/kg xuống 150 mg/kg), uống thuốc liên tục 14 ngày Kết quả: cao lỏng TPK làm giảm có ý nghĩa thống kê nồng độ axít uric máu mơ hình gây tăng axít uric cấp mạn, uống liều hay uống dự phòng ngày Tác dụng tƣơng đƣơng với nhóm dùng allopurinol làm tham chiếu Kết luận: cao lỏng TPK có tác dụng tốt điều trị bệnh tăng axít uric máu * Từ khóa: Cao lỏng Thống phong khang; Tăng axít uric; Chuột nhắt trắng Study on Hypouricemic Effect of Thong phong khang Liquid Extracts on Animal Model Summary Objective: Study hypouricemic effect of Thong phong khang liquid extract on acute and chronic hyperuricemia animal model Methods: In acute hyperuricemia model, oral administration of Thong phong thang liquid extract, only one dose (acute treatment) or days (prophylactic treatment) before intraperitoneally injection of 300 mg/kg potassium-oxonate in mice Chronic hyperuricemia model was induced by every other day intraperitoneally injection of descending dose of potassium-oxonate (from 300 mg/kg to 150 mg/kg), Thong phong thang liquid extract was oral administrated in 14 days Results: Thong phong thang liquid extract produced a significant reduction in the serum uric acid level in both acute and chronic hyperuricemia model, both in acute and prophylactic treatment This activity is equal to standard allopurinol Conclusion: Thong phong thang liquid extract could be a potential candidate as a natural drug to treat hyperuricemic disease * Key words: Thong phong khang liquid extract; Hyperuricemia; Mice * Học viện Quân y ** Bệnh viện Quân y 103 Người phản hồi (Corresponding): Vũ Bình Dương (vbduong2978t@gmail.com) Ngày nhận bài: 07/07/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 08/09/2015 Ngày báo đăng: 18/09/2015 11 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2015 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện chứng tăng axít uric máu ngày trở nên phổ biến cộng đồng [2] Ngoài việc gây bệnh gout, tình trạng tăng axít máu gây tổn thƣơng cho nhiều quan nhƣ thận, mạch máu, tim, mắt, màng não, quan sinh dục [3] Các thuốc hóa dƣợc nhƣ allopurinol đƣợc dùng phổ biến lâm sàng với tác dụng làm hạ axít uric máu Tuy nhiên, thuốc thƣờng gây tác dụng không mong muốn nhƣ viêm gan, bệnh lý thận, dị ứng… [4] Vì vậy, việc phát triển chế phẩm nguồn gốc tự nhiên sử dụng hiệu hạ axít uric máu có tính an tồn cao cần thiết Học viện Quân y nghiên cứu bào chế cao lỏng TPK từ vị dƣợc liệu nƣớc nhằm tạo chế phẩm có tác dụng điều trị hạ axít uric máu tốt, hạn chế tác dụng không mong muốn Để có khoa học việc sử dụng sản phẩm lâm sàng, tiến hành đánh giá tác dụng hạ axít uric máu cao lỏng TPK động vật thực nghiệm ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên vật liệu, đối tƣợng thiết bị * Nguyên vật liệu h a chất: + Cao lỏng TPK 1:1, đạt tiêu chuẩn sở (TCCS), Trung tâm Nghiên cứu øng dụng Sản xuất thuốc, Học viện Quân y cung cấp 12 + Thuốc tham chiếu allopurinol (Cơng ty Domesco - Việt Nam) + Hóa chất: kali oxonat số hóa chất khác (Hãng Sigma, Hoa Kỳ) * Động vật thí nghiệm: - Chuột nhắt trắng trƣởng thành dòng Swiss, khơng phân biệt giống, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm, cân nặng trung bình 18 - 22 g Động vật thí nghiệm Ban Cung cấp động vật thí nghiệm, Học viện Quân y cung cấp, ni dƣỡng phòng ni động vật thí nghiệm tuần trƣớc tiến hành thí nghiệm Động vật ăn thức ăn theo tiêu chuẩn thức ăn cho động vật nghiên cứu, nƣớc đun sôi để nguội uống tự Hàng ngày theo dõi ghi chép diễn biến kết thí nghiệm * Thiết bị dụng cụ: Thiết bị nghiên cứu: máy xét nghiệm sinh hoá tự động Chemix 180 (Hãng Sysmex); kim đầu tù cho chuột uống thuốc số thiết bị, dụng cụ phụ trợ khác Phƣơng pháp nghiên cứu Đánh giá tác dụng hạ axít uric máu cao lỏng TPK mơ hình gây tăng axít uric cấp mạn kali oxonat chuột nhắt trắng, theo phƣơng pháp Daibeth [5], có cải tiến * Đánh giá tác dụng mơ hình gây tăng axít uric cấp: - Đánh giá tác dụng điều trị dự phòng Chia chuột nhắt trắng ngẫu nhiên làm lô, lô 10 cho uống với thể TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2015 tích cố định 0,2 ml/20 g trọng lƣợng thể (TLCT) 05 ngày, ngày lần vào cố định nhƣ sau: + Lô (chứng sinh lý): uống nƣớc cất + Lô (chứng bệnh lý): uống nƣớc cất + Lô (allopurinol): uống allopurinol liều mg/kg/24 + Lô (cao lỏng liều 1): uống cao lỏng TPK liều 40 g/kg/24 + Lô (cao lỏng liều 2): uống cao lỏng TPK liều 80 g/kg/24 Vào ngày thứ 05, chuột lô 2, 3, 4, đƣợc tiêm phúc mạc ổ bụng dung dịch kali oxonat liều 300 mg/kg TLCT trƣớc cho uống thuốc liều cuối Lô đƣợc tiêm phúc mạc nƣớc muối sinh lý Hai sau tiêm, lấy máu chuột để xét nghiệm axít uric - Đánh giá tác dụng điều trị cấp Chia chuột nhắt trắng ngẫu nhiên làm lô, lô 10 Chuột lô 2, 3, 4, đƣợc tiêm phúc mạc ổ bụng dung dịch kali oxonat liều 300 mg/kg TLCT Một sau tiêm, chuột đƣợc uống với thể tích cố định 0,2 ml/20 g TLCT + Lơ (chứng sinh lý): uống nƣớc cất + Lô (chứng bệnh lý): uống nƣớc cất + Lô (allopurinol): uống allopurinol liều 10 mg/kg/24 + Lô (cao lỏng liều 1): uống cao lỏng TPK liều 40 g/kg/24 + Lô (cao lỏng liều 2): uống cao lỏng TPK liều 80 g/kg/24 Hai sau tiêm, lấy máu chuột xét nghiệm axít uric * Đánh giá tác dụng mơ hình gây tăng axít uric mạn: Chia ngẫu nhiên chuột nhắt trắng đủ tiêu chuẩn thí nghiệm làm lô, lô 10 Cho chuột uống hàng ngày, 14 ngày, với thể tích cố định 0,2 ml/20 g TLCT/24 + Lô (chứng sinh lý): uống nƣớc cất + Lô (chứng bệnh lý): uống nƣớc cất + Lô (allopurinol): uống alopurinol liều 10 kg/24 + Lô (cao lỏng liều 1): uống cao lỏng TPK liều 40 g/kg/24 + Lô (cao lỏng liều 2): uống cao lỏng TPK liều 80 g/kg/24 Chuột lô 2, 3, 4, đƣợc tiêm phúc mạc ổ bụng dung dịch kali oxonat cách ngày, liều 300 mg/kg TLCT (ngày 1), giảm dần xuống 250 mg/kg TLCT (ngày 3), 200 mg/kg TLCT (ngày 5) trì liều 150 mg/kg TLCT (ngày 7, 9, 11, 13) Lấy máu đuôi chuột thời điểm ngày 1, (2 sau tiêm) ngày 14 để xét nghiệm axít uric * Xử lý s liệu: Biểu thị kết trị số trung bình so sánh thống kê đánh giá khác biệt lô nghiên cứu One-way ANOVA test, sử dụng phần mềm SPSS 16.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 13 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2015 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Kết đánh giá tác dụng mơ hình gây tăng axít uric cấp Bảng 1: Nồng độ axít uric máu lô nghiên cứu đánh giá tác dụng mơ hình gây tăng axít uric cấp (XTB ± SD) ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ LÔ NGHIÊN CỨU Tỷ lệ (%) tăng Tỷ lệ (%) Hàm lƣợng axít Tỷ lệ (%) Tỷ lệ (%) giảm Nồng độ axít uric so với chứng giảm so với uric máu tăng so với so với chứng máu (μmol/l) sinh lý chứng bệnh lý (μmol/l) chứng sinh lý bệnh lý (n = 10) Chứng sinh lý ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ CẤP DỰ PHÕNG (1) 158,03 ± 20,60 - - 160,39 ± 21,13 - - Chứng bệnh lý (2) 311,90 ± 27,36 97,37% - 310,32 ± 29,71 96,37% - Allopurinol (3) 210,21 ± 31,99 33,02% 32,60% 211,02 ± 27,68 33,53% 32,34% Cao lỏng liều 40 g/kg (4) 220,29 ± 22,32 39,40% 29,37% 224,15 ± 25,41 41,84% 28,13% Cao lỏng liều 80 g/kg (5) 211,16 ± 20,92 33,62% 32,30% 211,80 ± 22,48 34,03% 32,09% p2-1 < 0,001; p3,4,5-1 < 0,01; p3,4,5-2 < 0,01; p4,5-3 > 0,05; p5-4 > 0,05 Lô chứng bệnh lý tiêm kali oxonat có nồng độ axít uric máu tăng 96,37 - 97,37%, đạt ý nghĩa thống kê (p2-1 < 0,001) so với lơ chứng sinh lý Điều chứng tỏ: kali oxalate với liều 300 mg/kg tiêm phúc mạc ổ bụng có tác dụng ức chế enzym uricase, làm tăng nồng độ axít uric máu thực nghiệm Ở lơ 3, 4, nồng độ axít uric máu tăng so với lô chứng sinh lý, nhƣng mức tăng giảm so với lô chứng bệnh lý Đánh giá mơ hình tác dụng điều trị dự phòng mơ hình tác dụng điều trị cấp, nồng độ axít uric máu lơ dùng thuốc (allopurinol cao lỏng liều 40 g/kg, liều 80 g/kg) giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh lý (p3,4,5-2 < 0,01) Theo đánh giá tác dụng điều trị dự phòng, nồng độ axít uric máu lơ allopurinol giảm 32,60%, lô cao lỏng liều 14 40 g/kg giảm 29,37% liều 80 g/kg giảm 32,30% so với lô chứng bệnh lý Theo đánh giá tác dụng điều trị cấp (dùng liều nhất), nồng độ axít uric máu lô allopurinol giảm 32,34%, lô cao lỏng liều giảm 28,13% liều giảm 32,09% so với lô chứng bệnh lý Kết nghiên cứu chứng tỏ allopurinol cao lỏng TPK hai mức liều sử dụng, phác đồ dự phòng (dùng ngày trƣớc gây tăng axít uric máu) điều trị cấp (dùng liều nhất) có tác dụng làm hạ axít uric máu rõ rệt So sánh nồng độ axít uric máu lơ dùng cao lỏng TPK với lô dùng thuốc đối chiếu allopurinol mơ hình dự phòng mơ hình điều trị cấp thấy khác biệt chƣa có ý nghĩa thống kê (p4,5-3 > 0,05) TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2015 So sánh lô dùng cao lỏng TPK với nhau, mơ hình dự phòng mơ hình điều trị cấp, nồng độ axít uric máu lơ dùng liều cao giảm so lơ dùng liều thấp, khác biệt chƣa có ý nghĩa thống kê (p4-5 > 0,05) Kết đánh giá tác dụng mơ hình gây tăng axít uric mạn Bảng 2: Nồng độ axít uric máu lô nghiên cứu đánh giá tác dụng mô hình gây tăng axít uric mạn (XTB ± SD) NỒNG ĐỘ AXÍT URIC MÁU (μmol/l) LƠ NGHIÊN CỨU (n = 10) Ngày Ngày Ngày 14 Chứng sinh lý (1) 160,39 ± 21,13 160,10 ± 22,06 158,51 ± 23,90 Chứng bệnh lý (2) 310,32 ± 29,71 314,91 ± 37,50 310,82 ± 40,55 Allopurinol (3) 211,02 ± 27,68 212,72 ± 28,92 210,91 ± 26,26 Cao lỏng liều 40 g/kg (4) 224,15 ± 25,41 225,25 ± 26,38 222,18 ± 29,69 Cao lỏng liều 80 g/kg (5) 211,80 ± 22,48 213,11 ± 24,12 208,89 ± 23,39 p2-1 < 0,001; p3,4,5-1 < 0,01; p3,4,5-2 < 0,01; p4,5-3 > 0,05; p5-4 > 0,05 Lô chứng bệnh lý tiêm kali oxonat có nồng độ axít uric máu tăng 96,37% (ngày 1), 99,27% ngày 96,68% ngày 14 đạt ý nghĩa thống kê (p2-1 < 0,001) so với lô chứng sinh lý, chứng tỏ kali oxonat tiêm cách nhật - 14 ngày có tác dụng ức chế enzym uricase, làm tăng nồng độ axít uric máu thực nghiệm Cao lỏng TPK liều 40 g/kg, liều 80 g/kg cho uống 1, ngày kéo dài đến 14 ngày làm giảm nồng độ axít uric máu có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p3,4,5-2 < 0,01) So với lô dùng allopurinol liều 10 mg/kg/24 giờ, thời điểm xét nghiệm (ngày 1, 7, 14), cao lỏng TPK (ở mức liều dùng) có tác dụng hạ axít uric máu tƣơng đƣơng (p4,5-3 > 0,05) Nhƣ vậy, cao lỏng TPK có tác dụng rõ rệt làm hạ axít uric máu mơ hình gây tăng axít uric mạn, tác dụng tƣơng đƣơng với thuốc tham chiếu allopurinol So sánh lô dùng TPK, lô dùng liều cao có nồng độ axít uric máu giảm rõ so với lô dùng liều thấp, nhƣng khác biệt chƣa có ý nghĩa thống kê BÀN LUẬN Kali oxonat chất ức chế enzym uricase đƣợc sử dụng rộng rãi để gây tăng axít uric máu động vật thực nghiệm Trên mơ hình gây tăng axít uric máu cấp mạn, lơ chứng bệnh lý có nồng độ axít uric máu tăng cao rõ rệt (96,37 - 99,27%), có ý nghĩa thống kê với p2-1 < 0,001 so với lô chứng sinh lý Kết thực nghiệm cho thấy tính ổn định mơ hình, kết phù hợp với nghiên cứu tác giả nƣớc sử dụng mơ hình để đánh giá tác dụng hạ axít uric thuốc Cao lỏng TPK có tác dụng hạ axít uric máu mơ hình gây tăng axít uric 15 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QN SỰ SỐ 8-2015 máu cấp mạn, phác đồ dự phòng (dùng trƣớc ngày) điều trị cấp (chỉ dùng lần) Trong tất thử nghiệm trên, chế phẩm có tác dụng hạ axít uric máu tốt, tƣơng đƣơng với thuốc tham chiếu allopurinol TPK chế phẩm bào chế hoàn toàn từ dƣợc liệu tự nhiên, có ƣu điểm allopurinol hạn chế đƣợc tác dụng không mong muốn tƣơng tác thuốc điều trị Allopurinol làm bùng phát bệnh viêm khớp, gout, mức axít uric máu bƣớc đầu đƣợc điều chỉnh, khơng thể dùng allopurinol viêm hoạt động, thuốc làm nặng kéo dài viêm khớp gout cấp [4] Allopurinol gây nhiễm độc gan, gây số bệnh lý thận tƣơng tác với số kháng sinh Với tác dụng làm giảm axít uric máu có nguồn gốc hồn tồn từ dƣợc liệu tự nhiên, cao lỏng TPK hứa hẹn chế phẩm có tác dụng tốt điều trị tăng axít uric máu tác dụng khơng mong muốn KẾT LUẬN Với mức liều 40 g 80 g/kg/24 giờ, cao lỏng TPK có tác dụng hạ axít uric máu tốt mơ hình gây tăng axít uric máu cấp mạn kali oxonat chuột nhắt trắng, dùng dự phòng dùng điều trị cấp với liều Tác dụng chế phẩm tƣơng đƣơng với thuốc allopurinol liều 10 mg/kg/24 dùng làm tham chiếu 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế Quyết định số 01/2007/ QĐBYT việc ban hành “Quy định thử thuốc lâm sàng” 2007 Lê Thị Ming Dung, Nguy n Thị Thu Hương Nghiên cứu tác dụng hạ axít uric máu cao chiết từ đại bi (Blumea Balsamifera L, Asteraceae) thực nghiệm Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh 2012, tập 16, phụ số A L Ariev, N A Kunitskaya, L S Kozina New data on gout and hyperuricemia: Incidence rates, risk factors and aging-associated manifestations Advances in Gerontology 2013, Vol 3, Issue 2, pp.138-141 David Gustafsson and Robert Unwin The pathophysiology of hyperuricaemia and its possible relationship to cardiovascular disease, morbidity and mortality BMC Nephrology 2013, 14, p.164 Dalbeth N, So A Hyperuricaemia and gout: state of the art and future perspectives Annals of the Rheumatic diseases 2010, 69, pp.1738-1743 Maıra Ribeiro de Souza, Carmen Aparecida de Paula, Michelle Luciane Pereira de Resende, Andrea Grabe-Guimaraes, Jose Dias de Souza Filho, Denia Antunes Saude-Guimaraes Pharmacological basis for use of lychnophora trichocarpha in gouty arthritis: Anti-hyperuricemic and anti-inflammatory effects of its extract, fraction and constituents Journal of Ethnopharmacology 2012, 142, pp.845-850 WHO Research guidelines for evaluating the safety and efficacy of herbal medicines, ROWP, Manila, Philippines 1993 ... tác giả nƣớc sử dụng mơ hình để đánh giá tác dụng hạ axít uric thuốc Cao lỏng TPK có tác dụng hạ axít uric máu mơ hình gây tăng axít uric 15 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 8-2015 máu cấp mạn, phác... nghĩa thống kê (p4-5 > 0,05) Kết đánh giá tác dụng mơ hình gây tăng axít uric mạn Bảng 2: Nồng độ axít uric máu lô nghiên cứu đánh giá tác dụng mơ hình gây tăng axít uric mạn (XTB ± SD) NỒNG ĐỘ AXÍT... thời điểm xét nghiệm (ngày 1, 7, 14), cao lỏng TPK (ở mức liều dùng) có tác dụng hạ axít uric máu tƣơng đƣơng (p4,5-3 > 0,05) Nhƣ vậy, cao lỏng TPK có tác dụng rõ rệt làm hạ axít uric máu mơ hình