Tía tô là một loại rau phổ biến, đồng thời cũng là một dược liệu với các tác dụng như: Kháng dị ứng, kháng viêm, kháng oxy hóa, kháng ung thư, kháng khuẩn, chống trầm cảm và trị ho. Tuy nhiên, tại Việt Nam hiện vẫn chưa có các công trình nghiên cứu thực nghiệm chứng minh các tác dụng này của Tía tô. Mục tiêu của nghiên cứu này là khảo sát một số tác dụng dược lý của cao chiết cồn 70% từ lá Tía tô (cao Tía tô).
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN, TRỊ HO VÀ LONG ĐÀM CỦA CAO CHIẾT CỒN TỪ LÁ TÍA TƠ Nguyễn Thị Thu Hương*, Nguyễn Mai Trúc Tiên* TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Tía tơ loại rau phổ biến, đồng thời dược liệu với tác dụng như: kháng dị ứng, kháng viêm, kháng oxy hóa, kháng ung thư, kháng khuẩn, chống trầm cảm trị ho Tuy nhiên, Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu thực nghiệm chứng minh tác dụng Tía tơ Mục tiêu nghiên cứu khảo sát số tác dụng dược lý cao chiết cồn 70% từ Tía tơ (cao Tía tơ) Phương pháp nghiên cứu: Chuột nhắt trắng đực chủng Swiss albino chia ngẫu nhiên thành lô chứng (uống nước cất), lô thử (uống cao Tía tơ liều 0,95 g/kg 1,9 g/kg trọng lượng chuột, tương đương với 2,5 g g dược liệu khô/kg) lô đối chiếu (uống viên Neo-codion® hay Ambroxol) Phương pháp pha lỗng đĩa thạch, thực nghiệm gây ho capsaicin thực nghiệm đỏ phenol áp dụng để chứng minh tác dụng kháng khuẩn, giảm ho long đàm cao Tía tơ Kết quả: Cao Tía tơ thể hoạt tính kháng khuẩn hai chủng vi khuẩn Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae với nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 1,56 mg/ml Cao Tía tơ liều 1,9 g/kg sau ngày uống có tác dụng kéo dài tiềm thời xuất ho, làm giảm kích thích ho làm tăng tiết dung dịch đỏ phenol khí quản chuột bị gây ho capsaicin Kết luận: Cao chiết cồn Tía tơ thể hoạt tính kháng khuẩn, giảm ho làm long đàm Từ khóa: Lá Tía tơ, kháng khuẩn, giảm ho, long đàm ABSTRACT EXPERIMENTAL STUDY ON THE ANTIBACTERIAL, ANTITUSSIVE AND EXPECTORANT EFFECTS OF ETHANOL EXTRACT FROM PERILLA FRUTESCENS LEAVES Nguyen Thi Thu Hương, Nguyen Mai Truc Tien * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 22 - No 5- 2018: 34- 39 Objectives: Perilla frutescens (L.) Britt is widely used as human food and also commonly known for its medical benefits such as anti-allergic, anti-inflammatory, antioxidant, anticancer, antibacterial, anti-depressive and anti-cough effects However, a little scientific data has been demonstrated in Vietnam The aim of the study is to investigate such effects of 70% ethanol extract from Perilla frutescens leaves (Perilla extract) Methods: Male Swiss albino mice were randomly divided into control groups (distilled water), test groups (Perilla extract, at the oral doses of 0.95 g/kg and 1.9 g/kg mouse body weight, equivalent to 2.5 g and g of dry raw materials/kg) or positive control groups (Neo-codion® and Ambroxol) Agar dilution test, capsaicin-induced cough model and red phenol test were applied to investigate the antibacterial, antitussive and expectorant effects Results: Perilla extract exerted antibacterial activity against to Streptococcus pyogenes and Streptococcus pneumoniae with MIC of 1.56 mg/ml Perilla extract at the oral dose of 1.9 g/kg prolonged the latency of cough reflex, attenuating cough stimulation, and increasing the red phenol secretion of trachea in capsaicin-induced coughing mice Conclusions: Perilla extract had antibacterial activity, antitussive and expectorant effects * Trung Tâm Sâm Dược liệu TP Hồ Chí Minh - Viện Dược liệu Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương ĐT: 02838274377 34 Email: huongsam@hotmail.com Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Keywords: Perilla frutescens leaves, antibacterial activity, antitussive effect, expectorant effect tô) với độ ẩm đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt ĐẶT VẤN ĐỀ Nam IV Tình trạng nhiễm mơi trường ngày Động vật thí nghiệm tăng dẫn đến tỉ lệ mắc bệnh đường hô hấp Chuột nhắt trắng đực, chủng Swiss abino tăng theo(6) Tổ chức Y tế giới (WHO) (Mus musculus var albino), – tuần tuổi, xếp bệnh dị ứng đường hô hấp đứng hàng cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm thứ số bệnh lý mạn tính(6) Tại Việt y tế Nha Trang Chuột nuôi thực Nam, số bệnh nhân bị bệnh liên quan đến ô phẩm dạng viên (Viện Vắc xin Sinh phẩm y nhiễm khơng khí ngày tăng, theo thống kê tế Nha Trang), nước uống đầy đủ để Hội Hơ hấp TP Hồ Chí Minh số lượng trẻ ổn định tuần trước thử em nhập viện điều trị bệnh hen suyễn, nhiễm nghiệm Thể tích cho uống hay tiêm 10 khuẩn hô hấp, ho số bệnh viện ml/kg trọng lượng chuột thành phố lớn Hà Nội TP Hồ Chí Minh Hóa chất - Thuốc đối chiếu tăng gấp nhiều lần Capsaicin đỏ phenol cung cấp Ngày nay, việc sử dụng thảo dược từ thiên công ty Sigma-Aldrich (USA) Các thuốc đối nhiên trở nên phổ biến nhằm giảm tác dụng chiếu Neo-codion® (viên nén, số lô 1768, không mong muốn tân dược Một số Bouchara, Pháp) Ambroxol (viên nang, số lơ phải kể đến Tía tơ Tía tơ (Perilla frutescens (L.) Britt), có tên É tía, Tử tơ, Xích tơ có màu tím) loại dễ trồng, loại rau phổ biến người dân Việt Nam Tía tơ dược liệu dùng chữa bệnh phòng bệnh theo y học cổ truyền, đặc biệt giải cảm dựa tính giải biểu phát tán phong hàn Tía tơ sử dụng dược liệu trị hen y học cổ truyền Trung Quốc (Zisu) hay Nhật Bản (Saibokuto)(2) Kinh nghiệm sử dụng dân gian cho thấy hạt Tía tơ sử dụng để điều trị ho, hen suyễn, dị ứng Tuy nhiên, Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu chứng minh tác dụng Tía tô điều trị bệnh lý đường hô hấp ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Lá Tía tơ thu hái xã Tam Hiệp, huyện Châu Thành, tỉnh Tiền Giang vào tháng 3/2017 Lá rửa sạch, phơi khô xay thành bột (đạt kích thước qua rây số cho chiết xuất cao) Bột Tía tơ chiết ngấm kiệt với dung môi cồn 70% (tỷ lệ 1:15) cô giảm áp cho cao chiết cồn (hiệu suất 35%, gọi tắt cao Tía 0050316, hạn dùng 05/03/2019, Công ty Cổ phần Dược phẩm DOMESCO, Việt Nam) Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn in vitro Các chủng vi khuẩn lựa chọn là: Streptoccocus pyogenes ATCC®12384 (liên cầu tan máu beta nhóm A), Streptococcus pneumoniae ATCC® 6306 (phế cầu khuẩn), Klebsiella pneumoniae ATCC®-BAA 2342 (phế trực khuẩn Friedlander) Khảo sát lập lại lần, pha lỗng mẫu cao thử nghiệm mơi trường thạch theo độ pha loãng 1/2 hộp petri Sau chấm µL vi khuẩn nồng độ 108 vi khuẩn/ ml lên thạch chứa chất thử nghiệm Ấp hộp thạch 37oC sau 24 quan sát kết MIC (Minimum Inhibitory Concentration: Nồng độ ức chế tối thiểu) nồng độ chất thử nghiệm nhỏ ngăn cản phát triển vi khuẩn thạch quan sát mắt thường(9) Thực nghiệm gây ho capsaicin Thiết kế nghiên cứu ngẫu nhiên, đánh giá biểu hành vi chuột bị gây ho capsaicin Tác dụng cao chiết so sánh thống kê với lô chứng (không điều trị) 35 Nghiên cứu Y học với lô thuốc đối chiếu (thuốc ho Neocodion® thuốc long đàm ambroxol) Chuột chia ngẫu nhiên thành lô (n = 10) sau: lô chứng (uống nước cất), lô thử cho uống cao Tía tơ liều tương đương 2,5 g g dược liệu/kg trọng lượng chuột lơ đối chiếu uống viên Neo-codion® liều viên/kg (được ngoại suy từ liều sử dụng người - viên/ngày) hay ambroxol liều 240 mg/kg Các mẫu thử chứng dương hòa nước cất cho chuột uống ngày lần (vào buổi sáng), liên tục ngày Hai sau lần uống cuối cùng, chuột đặt vào bình thủy tinh có thơng khí cho tiếp xúc với capsaicin dạng khí dung nồng độ 100 mM 10 phút Xác định tiềm thời xuất ho (chuột có hành vi quặn bụng vươn cao đầu) biểu hành vi chuột bị kích thích (khịt mũi, chải lơng-gãi mõm, nhảy lên) 10 phút sau đó(3,11) Tách khí quản chuột thực thực nghiệm đỏ phenol để khảo sát tác dụng long đàm Khảo sát tác dụng long đàm Thực nghiệm đỏ phenol phương pháp đơn giản để khảo sát tác động mẫu thử tiết dịch khí –phế quản Sau liều tiêm phúc mạc dung dịch đỏ phenol, phần phẩm màu tiết vào xoang khí quản Sự tiết dịch kích thích hệ giao cảm đối giao cảm Những chất long đàm làm tăng tiết đỏ phenol khí quản(4) Thiết kế nghiên cứu ngẫu nhiên tác dụng cao chiết so sánh thống kê với lô chứng (không điều trị) với lô thuốc đối chiếu (thuốc ho Neo-codion® thuốc long đàm ambroxol) Chuột chia ngẫu nhiên thành lô (n = 8) sau: lô chứng (uống nước cất), lô thử cho uống cao Tía tơ liều tương đương 2,5 g g dược liệu/kg trọng lượng chuột lô đối chiếu uống viên Neo- 36 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 codion® liều viên/kg (được ngoại suy từ liều sử dụng người - viên/ngày) hay ambroxol liều 240 mg/kg Các mẫu thử chứng dương hòa nước cất cho chuột uống ngày lần (vào buổi sáng), liên tục ngày Một sau lần uống cuối cùng, chuột tiêm phúc mạc dung dịch đỏ phenol 2,5% pha nước muối sinh lý 30 phút sau tiêm đỏ phenol, chuột gây chết đột ngột đá CO2 khí quản tách ra, đặt vào ống nghiệm chứa ml nước muối sinh lý đặt vào bể siêu âm nhiệt độ phòng 15 phút Sau ml dung dịch natri bicarbonat 5% thêm vào hỗn hợp đem đo quang bước sóng 558 nm Tác động long đàm (Expectorant effect) đánh giá tăng mật độ quang lô thử lô đối chiếu so với lô chứng theo công thức: Phần trăm tăng tiết đỏ phenol (%) = [(Dt ˗ D0)/D0 x 100)], ODt mật độ quang đo lô thử, OD0 mật độ quang đo lô chứng (4) Đánh giá kết Các kết thu biểu thị số trung bình M ± SEM (Standar Error of The Mean: sai số chuẩn giá trị trung bình) Xử lý kết thống kê dựa vào phép kiểm One-way ANOVA hậu kiểm Student-Newman-Keuls test, với độ tin cậy 95% (p < 0,05) phần mềm SigmaStat® ver 3.5 (SYSTAT Software Inc., Richmond, CA, USA) KẾT QUẢ Hoạt tính kháng khuẩn cao Tía tơ Kết Bảng cho thấy cao Tía tơ có hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn có liên quan đến bệnh lý nhiễm trùng đường hô hấp lâm sàng Tác động cao Tía tơ lên vi khuẩn Gram dương rõ lên vi khuẩn Gram âm Cao Tía tơ ức chế chủng vi khuẩn Gram dương Streptococcus pyogenes Streptococcus peumoniae với MIC 1,56 mg/ml; ức chế chủng Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 22 * Số * 2018 vi khuẩn Gram âm Klebsiella pneumoniae với MIC 50 mg/ml Bảng Kết nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) chủng vi khuẩn Chủng vi khuẩn MIC (mg/ml) Streptococcus pyogenes 1,56 Streptococcus pneumoniae 1,56 Klebsiella pneumoniae 50 Tác dụng giảm ho cao Tía tơ Bảng Khảo sát tác dụng cao Tía tơ hành vi chuột thực nghiệm ho gây capsaicin Lô thử nghiệm (n=10) Chứng Cao Tía tơ Tiềm thời Số lần Số lần Liều xuất khịt mũi, nhảy (g/kg) ho (giây) chải lơng kích thích 1,44 ± 0,18 124 ± 12 28 ± 0,95 2,11 ± 0,26 110 ± 6* 20 ± 1,9 2,67 ± 0,29* 119 ± 7* 14 ± 3* 0,24 2,50 ± 0,22* 91 ± 4* 31 ± Ambroxol Neo– viên/kg 2,44 ± 0,38* codion® 80 ± 7* ± 2* *p < 0,05 so với lô chứng Kết Bảng cho thấy lơ chuột bị gây kích thích ho capsaicin cho uống cao Tía tơ liều 1,9 g/kg hay uống thuốc đối chiếu Ambroxol Neo-codion® có tiềm thời xuất ho tăng đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng không điều trị Tiềm thời xuất Nghiên cứu Y học ho chuột uống cao Tía tơ liều 0,95 g/kg có tăng nhiên khơng khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Tương tự, lô chuột bị gây kích thích ho capsaicin cho uống cao Tía tơ liều 0,95 g/kg 1,9 g/kg hay uống thuốc đối chiếu Ambroxol Neocodion® có số lần khịt mũi chải lơng (grooming) giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng không điều trị Số lần nhảy bị kích thích lơ chuột bị gây kích thích ho capsaicin cho uống cao Tía tơ liều 1,9 g/kg hay uống thuốc đối chiếu Neo-codion® giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng không điều trị Số lần nhảy kích thích lơ chuột bị gây kích thích ho capsaicin cho uống cao Tía tơ liều 0,95 g/kg hay uống thuốc đối chiếu Ambroxol chưa có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Tác dụng long đàm cao Tía tơ Kết Bảng cho thấy chuột bình thường, Ambroxol liều 240 mg/kg có mật độ quang tăng khác biệt đạt ý nghĩa thống kê với lô chứng sinh lý với tỷ lệ % tăng tiết đỏ phenol 34,63% Các lơ uống cao Tía tơ uống Neocodion® khơng ảnh hưởng tiết đỏ phenol khí quản chuột bình thường Bảng Kết khảo sát tác dụng long đàm cao chiết cồn Tía tơ thực nghiệm gây ho capsaicin (n = 8) Nhóm Bình thường Lơ thử nghiệm Chứng sinh lý Cao Tía tơ Ambroxol® Neo–codion® Chứng bệnh lý Capsaicin Cao Tía tơ Ambroxol® Neo–codion® Liều thử (g/kg) 0,95 1,90 0,24 viên/kg 0,95 1,90 0,24 viên/kg OD 0,068 ± 0,004 0,050 ± 0,009 0,059 ± 0,011 # 0,091 ± 0,008 (34,63%) 0,061 ± 0,003 # 0,041 ± 0,005 0,059 ± 0,009 (44,92%) 0,084 ± 0,015*(105,54%) 0,066 ± 0,005*(62,77%) * 0,073 ± 0,005 (78,46%) p 0,086 0,495 0,024 0,210