1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

BÙI THỊ NGÂN nghiên cứu phân lập và tinh chế ginsenosid re từ nguyên liệu saponin toàn phần của tam thất làm chuẩn phục vụ công tác kiểm nghiệm KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

117 11 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 117
Dung lượng 4 MB

Nội dung

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ NGÂN Nghiên cứu phân lập tinh chế Ginsenosid Re từ nguyên liệu saponin toàn phần Tam thất làm chuẩn phục vụ cơng tác kiểm nghiệm KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ NGÂN Mã sinh viên: 1701403 Nghiên cứu phân lập tinh chế Ginsenosid Re từ nguyên liệu saponin toàn phần Tam thất làm chuẩn phục vụ công tác kiểm nghiệm KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh Ths Nguyễn Việt Thúy Nơi thực hiện: Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương HÀ NỘI – 2022 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin cảm ơn TS Hà Vân Oanh – Bộ môn Dược học cổ truyển, trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy dành nhiều thời gian tâm huyết giúp tơi hồn thành khóa luận Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu, phịng Đào tạo, Bộ mơn Dược học cổ truyền trường Đại học Dược Hà Nội thầy cô trực tiếp giảng dạy giúp đỡ tơi q trình học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn Ths Nguyễn Việt Thúy cán Khoa Kiểm nghiệm Đông dược Dược liệu – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè ủng hộ động viên tơi suốt q trình học tập vừa qua Hà Nội, ngày 14 tháng năm 2022 Sinh viên Bùi Thị Ngân MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG VÀ HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ…………………………………………………………………… Chương I: TỔNG QUAN………………………………………………………… 1.1 Vài nét chất đối chiếu (chất chuẩn)…………………………………… 1.2 Tổng quan đối tượng nghiên cứu……………………………………… 1.2.1.Dược liệu Tam thất…………………………………………………… 1.2.2 Nguyên liệu Saponin toàn phần tam thất………………………… 1.2.3 Tổng quan nhóm hoạt chất saponin triterpenoid nhóm Dammaran………………………………………………………………………… 1.2.4 Tổng quan Re……………………………………………………… 1.2.4.1 Đặc điểm tính chất……………………………………………… 1.2.4.2 Tác dụng dược lý Re…………………………………………… 1.3 Tổng quan phương pháp phân lập, tinh chế………………………… 1.4 Tổng quan số phương pháp hoá lý sử dụng nghiên cứu đề tài 1.4.1 Sắc ký cột……………………………………………………………… 1.4.1.1 Nguyên tắc………………………………………………………… 1.4.1.2 Cột…………………………………………………………………… 1.4.1.3 Hóa chất dùng làm cột……………………………………………… 1.4.1.4 Dung môi…………………………………………………………… 1.4.1.5 Ứng dụng…………………………………………………………… 1.4.2 Sắc ký lớp mỏng……………………………………………………… 1.4.2.1 Nguyên tắc………………………………………………………… 1.4.2.2 Các đại lượng đặc trưng…………………………………………… 1.4.2.3 Ứng dụng…………………………………………………………… 1.4.3 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) …………………………………… 1.4.3.1 Nguyên tắc………………………………………………………… 1.4.3.2 Một số đại lượng đặc trưng trình sắc ký…………………… 1.4.3.3 Ứng dụng…………………………………………………………… 1.4.4 Phổ khối (MS)………………………………………………………… 10 1.4.4.1 Nguyên tắc…………………………………………………………… 10 1.4.4.2 Ứng dụng…………………………………………………………… 10 1.4.5 Phương pháp đo phổ hồng ngoại (phổ IR)…………………………… 11 1.4.5.1 Nguyên tắc…………………………………………………………… 11 1.4.5.2 Ứng dụng…………………………………………………………… 11 1.5 Tình hình chiết xuất, phân lập tinh chế Re…………………………… 12 1.5.1 Tình hình nghiên cứu nước…………………………………… 12 1.5.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nước…………………………………… 13 1.6.Vài nét phân tích định lượng ginsenosid Re…………………………… 16 1.7 Quy trình thiết lập chuẩn đối chiếu DĐVN 17 1.7.1 Xây dựng thường qui kỹ thuật thiết lập chất chuẩn đối chiếu 17 1.7.2 Đánh giá nguyên liệu 17 1.7.3 Đóng gói chất chuẩn đối chiếu 17 1.7.4 Kiểm tra độ đồng trình đóng gói 17 1.7.5 Kiểm tra thành phẩm ………………………………………………… 17 1.7.6 Xử lí số liệu 17 CHƯƠNG II: NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………………………………………………………… 19 2.1 Đối tượng…………………………………………………………………… 19 2.1.1 Nguyên liệu…………………………………………………………… 19 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất………………………………………… 19 2.1.2.1 Thiết bị, dụng cụ…………………………………………………… 19 2.1.2.2 Dung mơi, hóa chất………………………………………………… 20 2.1.2.3 Chất chuẩn………………………………………………………… 20 2.2 Nội dung nghiên cứu……………………………………………………… 20 2.2.1 Phân lập tinh chế ginsenosid Re từ nguyên liệu saponin toàn phần tam thất………………………………………………………………… 20 2.2.2 Định tính, định lượng đánh giá độ tinh khiết xác định sơ cấu trúc chất chiết được…………………………………………………………… 20 2.3 Phương pháp nghiên cứu………………………………………………… 20 2.3.1 Phương pháp phân lập tinh chế Re từ nguyên liệu saponin toàn phần tam thất………………………………………………………………… 20 2.3.1.1.Phân lập……………………………………………………………… 20 2.3.1.2 Tinh chế……………………………………………………………… 20 2.3.2 Định tính, định lượng đánh giá độ tinh khiết xác định sơ cấu trúc chất chiết được…………………………………………………………… Chương III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU………………………………………… 22 23 3.1 Xây dựng quy trình thực nghiệm phân lập tinh chế Re từ Saponin toàn phần tam thất………………………………………………………… 23 3.1.1 Định tính, Định lượng hàm lượng ginsenosid Re nguyên liệu Saponin toàn phần tam thất………………………………………………… 23 3.1.1.1 Định tính…………………………………………………………… 23 3.1.1.2 Định lượng………………………………………………………… 23 3.1.2 Xây dựng quy trình thực nghiệm phân lập ginsenosid Re………… 25 3.1.2.1 Nghiên cứu lựa chọn phương pháp phân lập……………………… 25 3.1.2.2 Quy trình thực nghiệm phân lập ginsenosid Re cột silica gel… 27 3.1.3 Tinh chế………………………………………………………………… 37 3.1.3.1 Nghiên cứu lựa chọn phương pháp tinh chế………………………… 37 3.1.3.2: Quy trình thực nghiệm tinh chế……………………………………… 38 3.2 Xác định cấu trúc, đánh giá độ tinh khiết xác định hàm lượng chất chiết được…………………………………………………………………… 42 3.2.1 Tính chất……………………………………………………………… 43 3.2.2 Phổ khối………………………………………………………………… 43 3.2.3 Phổ hồng ngoại………………………………………………………… 43 3.2.4 Định lượng xác định giới hạn tổng cộng tạp chất liên quan ginsenosid Re tinh chế HPLC với detector DAD……………… CHƯƠNG IV: BÀN LUẬN……………………………………………………… 44 47 4.1 Về quy trình thực nghiệm phân lập tinh chế ginsenosid Re từ nguyên liệu Saponin toàn phần tam thất…………………………………… 47 4.2 Về xác định cấu trúc nhận dạng chất tinh chế được………………… 47 4.3 Về định lượng hàm lượng G-Re định lượng tạp chất liên quan G-Re tinh chế HPLC………………………………………………… KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…………………………………………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 47 48 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DAD Diod Array Detector DĐVN Dược điển Việt Nam DĐTQ Dược điển Trung Quốc DMSO Dimethyl sulfoxide ESI Ion phun hóa điện tử G-Rg1, G-Rb1, G-Re, G-Rd, N- G= Ginsenosid, Gy: gypenosid, N= notoginsenosid R1, Gy-XVII, GR HLPC IR Glucocorticoid High Performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) Infrared Spectrophotometry (Phổ hấp thụ hồng ngoại) LC-MS Sắc ký lỏng – khối phổ MeOH Methanol NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NP Normal phase (pha thuận) PNS Panax notoginseng RP Reversed phase (Pha đảo) RSD Realative Standard Deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) SKĐ Sắc ký đồ SKLM TLC UV-VIS Sắc ký lớp mỏng Thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng) Ultraviolet visble (Tử ngoại – khả kiến) DANH MỤC HÌNH Tên hình Trang Hình 1.1: Cơng thức cấu tạo genin 20(S) Hình 1.2: Cơng thức cấu tạo Re Hình 1.3: Sơ đồ cấu tạo hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao Hình 1.4: Sơ đồ dự kiến phân lập tinh chế G-Re từ Saponin toàn phần tam thất Hình 3.1: Sắc ký đồ mỏng phân tích ngun liệu ban đầu Hình 3.2: Sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thử phân tích G-Re nguyên liệu Hình 3.3: Sắc ký đồ mỏng khảo sát hai hệ dung mơi CH2Cl2:MeOH:H2O CHCl3:MeOH:H2O Hình 3.4: Sắc ký đồ mỏng pha thuận tỉ lệ dung mơi hệ CH2Cl2: MeOH: H2O Hình 3.5: Sắc ký đồ mỏng pha đảo tỉ lệ dung mơi hệ aceton : nước Hình 3.6: Sắc ký đồ mỏng pha đảo tỉ lệ dung mơi hệ methanol : nước Hình 3.7: SKĐ phát có mặt Re bình hứng bước phân lập thơ Hình 3.8: Sắc ký đồ so sánh nguyên liệu ban đầu cắn A sau phân lập Hình 3.9: Sắc ký đồ định lượng mẫu chuẩn Re mẫu thử (cắn A) Hình 3.10: SKĐ phát có mặt G-Re bình hứng bước phân lập tinh, giai đoạn Hình 3.11: Sắc ký đồ so sánh nguyên liệu ban đầu cắn B sau phân lập Hình 3.12: Sắc ký đồ định lượng mẫu chuẩn Re mẫu thử (cắn B) Hình 3.13: Sắc ký đồ phát có mặt G-Re bình hứng bước phân lập tinh, giai đoạn Hình 3.14: Sắc ký đồ so sánh nguyên liệu ban đầu cắn C sau phân lập Hình 3.15: Sắc ký đồ mẫu định lượng chuẩn Re mẫu thử (cắn C) Hình 3.16: Sắc ký đồ mỏng pha đảo tỷ lệ dung mơi hệ acetonitril – nước Hình 3.17: SKĐ phát có mặt Re bình hứng bước tinh chế Hình 3.18: Sắc ký đồ so sánh nguyên liệu ban đầu cắn D sau tinh chế Hình 3.19: Sắc ký đồ mẫu định lượng chuẩn Re mẫu thử (cắn D) Hình 3.20: Sơ đồ tóm tắt q trình phân lập tinh chế G-Re đề tài Hình 3.21: Phổ khối mẫu thử (cắn D) mẫu chuẩn G-Re 14 Hình 3.22: So sánh phổ hơng ngoại Re tinh chế với chuẩn Re Hình 3.23: Sắc ký đồ định lượng tạp mẫu thử (cắn D) 23 24 25 26 27 27 29-30 30 31 32 33 33 35 36 37 37 39-40 41 41 42 43 44 46 DANH MỤC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1: Một số điều kiện phân tích Re 16 Bảng 2.1: Dung mơi, hóa chất sử dụng cho đề tài 20 Bảng 2.2: Chất chuẩn sử dụng cho đề tài 20 Bảng 2.3: Các phương pháp phân tích G-Re sử dụng đề tài 21 Bảng 3.1: Kết định lượng G-Re nguyên liệu 25 Bảng 3.2: Tóm tắt quy trình thực nghiệm phân lập ginsenosid Re cột silica gel 27 Bảng 3.3: Kết định lượng G-Re cắn A 31 Bảng 3.4: Kết định lượng G-Re cắn B 34 Bảng 3.5: Kết định lượng G-Re cắn C 37 Bảng 3.6: Sắc ký đồ mẫu thử với pha động đẳng dòng hệ dung môi acetonitril – nước tỷ lệ Bảng 3.7: Kết định lượng G-Re bình hứng giai đoạn tinh chế 38 Bảng 3.8: Kết định lượng G-Re cắn D 41 Bảng 3.9: Kết khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký định lượng GRe 45 Bảng 3.10: Kết định lượng tạp chất liên quan G-Re tinh chế 46 40 Phụ lục VIII: Sắc ký đồ định lượng tạp Phụ lục IX: Phổ hồng ngoại Phụ lục X: Phổ khối Phụ lục XI: Chứng nhận phân tích chuẩn G-Re ... Phân lập tinh chế ginsenosid Re từ nguyên liệu saponin toàn phần tam thất - Nghiên cứu tìm quy trình phân lập tinh chế G -Re từ nguyên liệu Saponin toàn phần tam thất - Phân lập tinh chế G -Re 2.2.2... HỌC DƯỢC HÀ NỘI BÙI THỊ NGÂN Mã sinh viên: 1701403 Nghiên cứu phân lập tinh chế Ginsenosid Re từ nguyên liệu saponin toàn phần Tam thất làm chuẩn phục vụ công tác kiểm nghiệm KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP... tinh chế Ginsenosid Re từ nguyên liệu saponin toàn phần Tam thất làm chuẩn phục vụ công tác kiểm nghiệm? ?? với mục tiêu: - Phân lập tinh chế ginsenosid Re để làm nguyên liệu thiết lập chất chuẩn -

Ngày đăng: 19/08/2022, 18:17

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN