KIỀU THỊ HOÀI NGHIÊN cứu đặc điểm HIỂN VI và THÀNH PHẦN hóa học cây sơn DỊCH PETELOT (aristolochia petelotii o c schmidt) KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KIỀU THỊ HOÀI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HIỂN VI VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY SƠN DỊCH PETELOT (Aristolochia petelotii O.C.Schmidt) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2022 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KIỀU THỊ HOÀI Mã sinh viên: 1701206 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM HIỂN VI VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY SƠN DỊCH PETELOT (Aristolochia petelotii O.C.Schmidt) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu Viện hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực khóa luận tốt nghiệp Bộ môn Dược liệu – Trường Đại học Dược Hà Nội nhận nhiều hỗ trợ, giúp đỡ, động viên từ thầy cô, bạn bè gia đình Lời tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng, người thầy dìu dắt tơi từ ngày đầu nghiên cứu khoa học đến hoàn thành đề tài Thầy bảo tận tình, giúp đỡ nhiều Thầy không truyền cho niềm đam mê nghiên cứu khoa học mà truyền cho động lực cố gắng học tập cống hiến chút sức lực nhỏ bé cho khoa học Việt Nam Tôi xin bày tỏ lời biết ơn tha thiết tới tồn thể thầy Trường Đại học Dược Hà Nội, thầy dìu dắt qua năm với nhiều học ý nghĩa để thực đề tài Tôi xin cảm ơn tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu – Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện tốt cho tơi q trình thực nghiên cứu Xin cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Quốc Bình, TS Nguyễn Phương Hạnh nhóm nghiên cứu tạo điều kiện, giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu thực khóa luận tốt nghiệp thơng qua đề tài mã số: VAST 04.02/20-21 Tôi xin cảm ơn bạn, em, anh chị nghiên cứu sinh nghiên cứu Bộ môn Dược liệu giúp đỡ động viên tinh thần cho tơi suốt q trình thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè ln bên, đồng hành, giúp đỡ, ủng hộ chỗ dựa vững cho học tập Cảm ơn bố mẹ anh trai động viên tinh thần vật chất để tơi hồn thành chặng đường học tập nghiên cứu trường Đại học Dược Hà Nội Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 16 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Kiều Thị Hoài MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố khóa phân loại chi Aristolochia L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Aristolochia L 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Aristolochia L 1.2 Đặc điểm thực vật phân bố số loài thuộc chi Aristolochia L Việt Nam .2 1.3 Thành phần hóa học chi Aristolochia L .6 1.3.1 Thành phần hóa học ngồi tinh dầu 1.3.2 Thành phần hóa học tinh dầu 1.4 Tác dụng sinh học cơng dụng lồi thuộc chi Aristolochia L 1.4.1 Cơng dụng lồi thuộc chi Aristolochia L 1.4.2 Tác dụng sinh học loài thuộc chi Aristolochia L 11 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .15 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 15 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.2 Thiết bị hóa chất .16 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi 16 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học .16 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Nghiên cứu đặc điểm hiển vi 17 2.3.2 Định tính phản ứng hóa học 17 2.3.3 Định tính thành phần hóa học sắc ký lớp mỏng 21 2.3.4 Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu .22 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .26 3.1 Kết thực nghiệm 26 3.1.1 Đặc điểm hiển vi Sơn dịch .26 3.1.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học Sơn dịch 31 3.2 Bàn luận .41 3.2.1 Đặc điểm hiển vi Sơn dịch .41 3.2.2 Định tính thành phần hóa học ngồi tinh dầu .41 3.2.3 Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu .42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .44 Kết luân .44 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT A.: Aristolochia DĐVN: Dược điển Việt Nam FID: Flame ionization detector (Detetor ion hóa lửa) GC: Gas Chromatography (Sắc ký khí) MS: Mass spectrometry (Khối phổ) NP/PEG: Natural products/Polyethylenglycol NXB: Nhà xuất Rf : Chỉ số lưu giữ SKLM: Sắc ký lớp mỏng STT: Số thứ tự TPHH: Thành phần hóa học TT: Thuốc thử UPGMA: Unweighted Pair Group Method using arithmetic Averages (Phương pháp gom cụm khơng có trọng số dùng trung bình số học) UV: Ultra Violet (Tử ngoại) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 Thành phần tinh dầu thân A indica 1.2 Thành phần tinh dầu A kwangsiensis C 1.3 Công dụng loài thuộc chi Aristolochia L Việt Nam 3.1 Kết định tính nhóm chất rễ, thân Sơn dịch 31 3.2 Kết thành phần tinh dầu rễ, thân, Sơn dịch 36 DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình STT Trang 1.1 Cấu trúc hóa học số hợp chất thường gặp lồi thuộc chi Aristolochia L có Việt Nam 2.1 Đặc điểm hình thái Sơn dịch (A petelotii) 15 2.2 Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu theo quy định DĐVN V 23 3.1 Đặc điểm vi phẫu rễ Sơn dịch 26 3.2 Đặc điểm vi phẫu thân Sơn dịch 27 3.3 Đặc điểm vi phẫu Sơn dịch 28 3.4 Đặc điểm bột rễ Sơn dịch 29 3.5 Đặc điểm bột thân Sơn dịch 30 3.6 Đặc điểm bột Sơn dịch 30 Sắc ký đồ dịch chiết methanol mẫu rễ, thân, Sơn dịch 3.7 quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm trước phun ánh sáng tử ngoại bước sóng 366 nm trước sau phun thuốc thử 33 3.8 Sắc ký đồ dịch chiết methanol mẫu rễ, thân, Sơn dịch quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm 366 nm 34 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu rễ, thân, Sơn dịch quan sát ánh 3.9 sáng tử ngoại bước sóng 254 nm, 366 nm ánh sáng trắng, ánh sáng tử ngoại bước sóng 366 nm sau phun thuốc thử màu 35 3.10 Phân tích cụm UPGMA dựa khoảng cách Pearson hợp chất mẫu tinh dầu rễ, thân, Sơn dịch 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Họ Aristolochiaceae Jussieu có 600 lồi giới Trong chi Aristolochia L có khoảng 550 lồi, phân bố Châu Á, Châu Phi, Bắc Mỹ, Nam Mỹ Châu Úc phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới Châu Á [43] Việc sử dụng loài thuộc chi Aristolochia L y học cổ truyền Việt Nam giới đa dạng cơng dụng phận dùng Các lồi thuộc chi Aristolochia L Việt Nam thường dùng để chữa rắn cắn, ăn uống khó tiêu, chữa lỵ, bí tiểu tiện, thấp khớp, đau dày, sốt, thủy thũng, nhọt độc, thấp sang… Loài Aristolochia petelotii O.C.Schmidt loài ghi nhận Việt Nam Trong y học cổ truyền Trung Quốc, loài người dân Quảng Tây dùng rễ để làm thuốc tiêu viêm, trị viêm dày – ruột, viêm gan, dùng để trị thấp sang [6] Mặc dù sử dụng lâu y học cổ truyền loài Aristolochia petelotii chưa nghiên cứu đặc điểm hiển vi thành phần hóa học cách rõ ràng đầy đủ Việt Nam giới Hiện nay, có nhiều nghiên cứu ghi nhận có mặt acid aristolochic dẫn chất loài thuộc chi Aristolochia L Thành phần biết gây độc thận gây tử vong [25][37][49] Năm 2011, Cục quản lý dược Việt Nam có cơng văn số 3887/QLD-ĐK việc thu hồi dược liệu dương tính với acid aristolochic-I [4] Vì lý loài Aristolochia petelotii cần nghiên cứu cách hệ thống bao gồm đặc điểm hiển vi thành phần hóa học để có sở khai thác, sử dụng hợp lý an toàn nguồn dược liệu Do đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm hiển vi thành phần hóa học Sơn dịch petelot (Aristolochia petelotii O.C.Schmidt)” Đề tài thực với mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm hiển vi Sơn dịch petelot - Xác định thành phần hóa học Sơn dịch petelot - Phân tích thành phần tinh dầu phận rễ, thân, Sơn dịch petelot Để thực mục tiêu trên, đề tài tiến hành nội dung sau: - Nghiên cứu đặc điểm hiển vi gồm: + Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu phận rễ, thân, + Nghiên cứu đặc điểm bột phận rễ, thân, - Nghiên cứu thành phần hóa học gồm: + Nghiên cứu thành phần hóa học phận phản ứng thường quy sắc ký lớp mỏng + Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu phận rễ, thân, sắc ký lớp mỏng sắc ký khí CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố khóa phân loại chi Aristolochia L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Aristolochia L Chi Aristolochia L tên thường gọi Mã đậu linh chi thực vật nằm họ Aristolochiaceae Jussieu Vị trí phân loại chi Aristolochia L theo hệ thống phân loại thực vật Takhtajan (2009) sau: Ngành Ngọc lan Magnoliophyta Lớp Ngọc lan Magnoliopsida Phân lớp Ngọc lan Magnoliidae Liên Hồ tiêu Piperanae Bộ Hồ tiêu Piperales Họ Nam mộc hương Aristolochiaceae Chi Aristolochia L [19] 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Aristolochia L Đặc điểm thực vật: Cây bụi, thảo dây leo Thường mọc xoắn leo Rễ thường dạng củ Thân gỗ hay thân thảo Lá mọc so le, gân hình lơng chim chân vịt, mép nguyên khía tai bèo Hoa mọc đơn độc thành chùm nách lá, từ thân gỗ Hoa đơn tính lưỡng tính Đài hoa tràng hoa hợp nhất, hình ống thường mở rộng tạo thành hình trụ hình phễu, thẳng cong Bộ nhị bó gồm nhị, đính vào nhụy tạo thành trụ nhị Bao phấn hướng ngồi Bầu nhụy thấp hơn, ơ, góc, đính nỗn trung trụ Quả nang, có cạnh Hạt phẳng hình cầu lồi, có khơng có cánh [41] Phân bố: Chi Aristolochia L có khoảng 550 lồi, phân bố Châu Á, Châu Phi, Bắc Mỹ, Nam Mỹ Châu Úc phân bố rộng rãi vùng nhiệt đới Châu Á [43] 1.2 Đặc điểm thực vật phân bố số loài thuộc chi Aristolochia L Việt Nam 1.2.1 Loài Aristolochia indica L Tên tiếng Việt: Khoai ca, Sơn dịch [8] Nhóm Apophin Cơng thức Tên hợp chất Magloflorin Cepharadion A Tuberosinon (-)-Isocyridin Salsolinol 6,7-Dihydroxy-1,1dimethyl-1,2,3,4tetrahydroisoquinolin Pericampylinon-B n-Methyl-6,7dimethoxyisoquinolon Amid 3,4-Dimethoxy-N,Ndimethylbenzamid Aurantiamid acetat Cinnamamid N-p-transCoumaroyltyramin Pyridine-3,5-dicarbozamid Phenanthren Aristolophenanlactone I Aristolamide Aristololid Lignan (-)-Cubebin (-)-Hinokinin Savinin Fargesin Sesamin Phụ lục 2.1 Phiếu giám định tên khoa học Phụ lục 2.2 Mẫu tiêu SH 1191 Phụ lục 3.1 Kết phân tích sắc ký đồ phần mềm VisionCATs dịch chiết mẫu rễ, thân, hệ dung môi I: Toluen – Ethylacetat – Acid formic (5:4:1) Track - Mẫu rễ: Track - Mẫu thân: Track - Mẫu lá: Phụ lục 3.2 Kết phân tích sắc ký đồ phần mềm VisionCATs dịch chiết mẫu rễ, thân, hệ dung môi II: Toluen – Ethylacetat – Acid formic – Nước (20:10:1:1) Track1 – Mẫu rê: Track – Mẫu thân: Track – Mẫu lá: Phụ lục 3.3 Kết phân tích sắc ký đồ phần mềm VisionCATs tinh dầu mẫu rễ, thân, Track – Mẫu rễ: Track – Mẫu thân: Track – Mẫu lá: Phụ lục 4.1 Kết phân tích thành phần tinh dầu phương pháp sắc ký khí kết nối khối phổ GC/MS mẫu tinh dầu rễ, thân, Mẫu rễ: Mẫu thân: Mẫu lá: ... ĐẠI H? ?C DƯ? ?C HÀ NỘI KIỀU THỊ HOÀI Mã sinh vi? ?n: 1701206 NGHIÊN C? ??U Đ? ?C ĐIỂM HIỂN VI VÀ THÀNH PHẦN HÓA H? ?C CÂY SƠN DỊCH PETELOT (Aristolochia petelotii O. C. Schmidt) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯ? ?C SĨ... chúng tơi tiến hành đề tài: ? ?Nghiên c? ??u đ? ?c điểm hiển vi thành phần hóa h? ?c Sơn dịch petelot (Aristolochia petelotii O. C. Schmidt)? ?? Đề tài th? ?c với m? ?c tiêu sau: - Mô tả đ? ?c điểm hiển vi Sơn dịch. .. dung dịch Pb(CH3COO)2 đến kiểm tra dịch l? ?c khơng c? ??n tủa dừng Chuyển tồn dịch l? ?c v? ?o bình gạn 50 ml Chiết glycosid tim c? ?ch l? ?c dịch l? ?c với cloroform lần, lần ml Gạn lớp cloroform Chia dịch chiết