Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau của bài thuốc quyên tý thang gia giảm trên thực nghiêm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM THU THỦY ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA BÀI THUỐC QUYÊN TÝ THANG GIA GIẢM TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN CHUYÊN KHOA CẤP II CẦN THƠ – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÂM THU THỦY ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM, GIẢM ĐAU CỦA BÀI THUỐC QUYÊN TÝ THANG GIA GIẢM TRÊN THỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Y học cổ truyền Mã số: 8720113.CK LUẬN VĂN CHUYÊN KHOA CẤP II Người hướng dẫn khoa học: Hướng dẫn 1: PGS.TS.Phan Anh Tuấn Hướng dẫn 2: BS.CKII.Phạm Gia Nhâm CẦN THƠ – 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi Lâm Thu Thủy, học viên lớp CKII – Trường Đại học Y dược Cần Thơ, chuyên ngành Y học cổ truyền, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS.TS.Phan Anh Tuấn BS.CKII.Phạm Gia Nhâm Cơng trình khơng trùng lắp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu, thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp nhận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Cần Thơ, ngày 22 tháng 09 năm 2022 Tác giả Lâm Thu Thủy LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành luận văn chuyên khoa II, chuyên ngành Y học cổ truyền khóa học 2020-2022, bên cạnh nỗ lực thân, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất quý thầy cô Bộ môn Y học cổ truyền, Bộ môn Dược Trường Đại học Y Dược Cần thơ, Bộ môn Dược lý Học viện Qn Y – Bộ Quốc phịng Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến thầy PGS TS.Phan Anh Tuấn, BS CKII.Phạm Gia Nhâm tận tình hướng dẫn giúp đỡ, động viên, cho nhiều ý kiến quý báu sát thực học tập nghiên cứu để tơi hồn thành luận văn Tiếp theo, xin chân thành cảm ơn Thầy TS.Lê Minh Hồng, Trưởng Bộ mơn Y học cổ truyền Trường Đại học Y Dược Cần Thơ tạo điều kiện tốt để học tập nghiên cứu thực nghiệm đạt kết tốt, Thầy theo sát hỗ trợ, giúp đỡ trình thực hiện, thu thập số liệu liên quan đến q trình làm luận văn tốt nghiệp trường Tơi xin gửi lời cám ơn Thầy PGS.TS.Nguyễn Hoàng Ngân hướng dẫn tơi q trình thực thực nghiệm Sau xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, anh chị đồng nghiệp, bạn bè đồng hành, động viên, chia sẻ với trình học tập nghiên cứu Luận văn tốt nghiệp tránh hạn chế, thiếu sót Tơi mong nhận nhận xét góp ý từ q thầy cơ, anh chị đồng nghiệp bạn học lớp giúp luận văn tốt nghiệp tơi hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Tác giả luận văn Lâm Thu Thủy MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Lời cám ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình đồ thị MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tổng quan đau viêm theo Y học đại 1.2 Tổng quan viêm đau theo Y học cổ truyền 1.3 Tổng quan thuốc “Quyên Tý thang gia giảm” 16 1.4 Một số mơ hình thực nghiệm nghiên cứu tác dụng chống viêm giảm đau động vật thực nghiệm 22 1.5 Tổng quan số nghiên cứu điều trị thuốc Quyên tý thang gia giảm nước giới 25 Chương CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Chất liệu, phương tiện nghiên cứu 28 2.2 Phương pháp nghiên cứu 33 2.3 Đạo đức nghiên cứu 41 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 42 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 42 3.2 Kết nghiên cứu tác dụng giảm đau trung ương ngoại biên 42 3.3 Kết nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp mạn 48 Chương BÀN LUẬN 57 4.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 57 4.2 Về đánh giá tác dụng giảm đau trung ương ngoại vi thuốc quyên tý thang gia giảm chuột thực nghiệm 61 4.3 Về tác dụng chống viêm cấp mạn thuốc Quyên tý thang gia giảm chuột thực nghiệm 66 KẾT LUẬN 72 KIẾN NGHỊ 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ Nguyên Nghĩa BYT Bộ Y tế DĐVN Dược điển Việt Nam ĐHYDCT Đại học Y Dược Cần Thơ HCT Hematocrit LT Leucotrien MTX Methotrexate Nhà xuất NXB NSAID Non Steroidal Antiinflamatory Thuốc chống viêm không Drug steroid PAF Platelet Aggregation Factor Yếu tố kết tụ tiểu cầu PG Prostaglandin QTT Quyên tý thang QTTGG Quyên tý thang gia giảm SD Tính độ lệch chuẩn TNF Tumor Necrosis Factor Yếu tố hoại tử khối u TCYTTG Tổ chức Y tế giới YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Mơ hình gây phù chân chuột Carageenin……………… 22 Bảng 1.2 Mơ hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng………… 23 Bảng 1.3 Mơ hình gây u hạt chuột cống trắng ………………………23 Bảng 1.4 Mơ hình gây đau phiến nóng Hot Plate…………………….24 Bảng 1.5 Mơ hình gây đau quặn sử dụng acid acetic…………………… 24 Bảng Thành phần Quyên tý thang gia giảm… ………………… 28 Bảng 3.1 Ảnh hưởng QTTGG đến thời gian xuất đáp ứng đau 42 Bảng 3.2 Ảnh hưởng QTTGG đến thời gian xuất đau quặn .45 Bảng 3.3 Ảnh hưởng QTTGG đến tổng số đau quặn 25 phút sau tiêm acid acetic 47 Bảng 3.4 Ảnh hưởng QTTGG đến trung bình tỷ lệ % tăng thể tích bàn chân chuột thời điểm sau gây viêm 48 Bảng 3.5 Tỷ lệ % ức chế (I%) phù viêm cấp bàn chân chuột 50 Bảng 3.6 Tác dụng QTTGG lên thể tích dịch rỉ viêm 52 Bảng 3.7 Tác dụng QTTGG lên hàm lượng protein dịch rỉ viêm 52 Bảng 3.8 Tác dụng QTTGG lên số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm 53 Bảng 3.9 Tác dụng QTTGG lên độ hấp thụ quang đo bước sóng 610nm để đánh giá nồng độ xanh evans 53 Bảng 3.10 Tác dụng giảm khối lượng u hạt cân tươi (mg/100g) QTTGG 54 Bảng 3.11 Tác dụng giảm khối lượng u hạt sấy khô QTTGG…….… 55 DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Cơ chế tác dụng thuốc giảm đau Hình 1.2 Nấc thang điều trị đau theo Tổ chức Y tế Thế giới Hình 2.1 Khương hoạt 29 Hình 2.2 Hoàng kỳ 29 Hình 2.3 Khương hồng 29 Hình 2.4 Phòng phong 29 Hình 2.5 Đương qui 29 Hình 2.6 Xích thược 29 Hình 2.7 Cam thảo 30 Hình 2.8 Quế chi 30 Hình 2.9 Đại táo 30 Hình 2.10 Tạo giác thích 30 Sơ đồ 2.1 Quy trình bào chế cao lỏng thuốc QTTGG 31 Hình 2.11 Máy đo thể tích bàn chân chuột 32 Hình 2.12 Máy gây đau phiến nóng Hot Cold Plate 33 Sơ đồ 2.2 Đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm thực nghiệm .40 Hình 3.1 Đánh giá ngưỡng đau chuột phiến nóng 43 Hình 3.2 Đánh giá đau quặn chuột sau tiêm acid acetic………….44 Biểu đồ 3.1 Số đau quặn lô nghiên cứu đo khoảng thời gian phút sau tiêm acid aceti 46 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng QTTGG đến trung bình độ tăng thể tích bàn chân chuột (tỷ lệ %) thời điểm sau gây viêm 49 Biểu đồ 3.3 Tỷ lệ % ức chế phù viêm cấp bàn chân chuột 51 Hình 3.3 Kết giải phẩu bệnh u hạt viêm mạn………………… 56 Hình 3.4 Hình ảnh nghiên cứu u hạt viêm mạn…………………… 56 69 15mg/kg tương đương (p>0,05) So với lô chứng sinh lý hai lô uống quyên tý thang gia giảm liều 23,6g dược liệu/kg/ngày Diclofenac sodium liều 15mg/kg làm giảm rõ rệt số lượng bạch cầu hàm lượng protein dịch rỉ viêm Lơ uống liều 11,8g dược liệu/kg/ngày có tác dụng làm giảm số lượng bạch cầu hàm lượng protein dịch rỉ viêm Như mơ hình gây viêm màng bụng Quyên tý thang gia giảm làm ức chế rõ rệt số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm, có tác dụng thuốc ức chế q trình viêm thơng qua chế làm giảm tính thấm thành mạch dẫn đến giảm số lượng dịch rỉ viêm, làm giảm tính xuyên mạch bạch cầu nên làm giảm số lượng bạch cầu Trên mơ hình gây phù chân chuột, qun tý thang gia giảm làm giảm phù có ý nghĩa thống kê tất thời điểm đó, chứng tỏ có tác dụng ức chế nhiều loại chất trung gian autacoid Trên mơ hình gây viêm màng bụng, Qun tý thang gia giảm làm giảm lượng dịch tiết, giảm hàm lượng protein số lượng bạch cầu dịch chiết Cả mơ hình cho thấy Qun tý thang gia giảm liều 11,8g/kg/ngày liều 23,6g/kg/ngày có tác dụng ức chế phù bàn chân chuột tương đương tương đương với lô dùng Diclofenac liều 15mg/kg thể trọng (p>0,05) Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu trước công bố tác dụng vị thuốc thành phần thuốc, tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột carrageenin, tác dụng Quế chi, Tạo giác thích Trên mơ hình gây u hạt thực nghiệm, chất gây kích thích viêm amiant, loại kháng nguyên phụ thuộc tuyến ức Với loại kháng nguyên này, lympho bào B cần hỗ trợ cytokin (IL-4,5,6,10) tế bào Th (T hỗ trợ) hoạt hóa tiết sản xuất kháng thể Mặt khác kháng nguyên amiant khởi động trình đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào phương thức miễn dịch thứ hai bên cạnh đáp ứng miễn dịch 70 dịch thể nhằm loại trừ kháng nguyên nguyên lạ, lympho bào T phụ trách Mô hình gây u hạt thực nghiệm xem mơ hình tin cậy để đánh giá tác dụng suy giảm chức đại thực bào hình thành u hạt, dùng cho đánh giá tác dụng thuốc ức chế chống lại hoạt hóa (activation), thâm nhiễm (infitration) kết tập (aggregation) đại thực bào, chống lại trình hình thành tổ chức u hạt viêm mạn Đây vấn đề có vai trị trung tâm việc hình thành, trì phát triển u hạt nhiều tình trạng bệnh Prednisolon thuốc chống viêm steroid kinh điển, tác dụng chủ yếu chống viêm mãn tính ức chế đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào lympho bào T đảm nhận, nên dùng làm thuốc tham chiếu mơ hình gây viêm mạn tính Cả prednisolon quyên tý thang gia giảm mức liều làm giảm khối lượng u hạt so với lơ chứng (p< 0,01) Trên mơ hình u hạt thực nghiệm cấy, thực nghiệm cho thấy, chế tác dụng kháng viêm Quế chi ức chế tổng hợp histamin, ức chế tổng hợp giải phóng PGE, dọn gốc tự Quế chi có khả ức chế IgE, làm bền tế bào mast, ức chế giải phóng chất trung gian gây viêm, ức chế hoạt tính bổ thể Cam thảo có tác dụng chống viêm kiểu corticoid với mức độ khác nhau, thành phần tác dụng chống viêm cam thảo muối glycyrrhetat acid glycyrrhretinic, flavonoid licorzince Tác dụng chống viêm Quyên tý thang gia giảm kết phối hợp tác dụng vị thuốc thuốc gia giảm thêm vị thuốc Quế chi, Tạo giác thích Nghiên cứu số tác giả ngồi nước chứng minh tính kháng viêm, giảm đau Tạo giác thích Dịch chiết tạo giác thích làm giảm biểu Cyclooxygennase (Cox-2) giảm đáng kể PGE2 71 Như qua thực nghiên cứu thực nghiệm mơ hình gây phù chân chuột Carrageenin, mơ hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng, ức chế tính thấm thành mạch, mơ hình gây u hạt cho thấy quyên tý thang gia giảm có tác dụng chống viêm, giảm đau tốt mô hình thực nghiệm, tương đương với thuốc NSAIDS (Diclofenac, prednisolon, aspirin) dùng làm tham chiếu 72 KẾT LUẬN Tác dụng giảm đau thuốc QTTGG động vật thực nghiệm - Tác dụng giảm đau trung ương thuốc QTTGG động vật thực nghiệm: Quyên tý thang gia giảm dùng liều 21,4g/kg/ngày 42,8g/kg/ngày có tác dụng giảm đau tốt thử theo phương pháp mâm nóng (Hotplate), có ý nghĩa thống kê (p0,05); Trên mơ hình gây viêm màng bụng chuột cống trắng, mơ hình đánh giá tác dụng ức chế tính thấm thành mạch thể tích dịch rỉ viêm, hàm lượng protein dịch rỉ viêm, Bạch cầu giảm có ý nghĩa thống kê p