LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới: TS. Nguyễn Trần Linh DS. Đặng Thị Hiền là những người thầy đã dìu dắt tôi từ những ngày đầu làm nghiên cứu khoa học và cũng là những người trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo, giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Bào chế, bộ môn Vật lý – Hóa lý và bộ môn Công nghiệp Dược đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này. Tôi cũng xin cảm ơn Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội – những người đã dạy bảo và giúp đỡ tôi trong suốt 5 năm học tập tại trường. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, anh chị em đã dành cho tôi sự giúp đỡ và động viên quý báu trong suốt thời gian qua. Hà Nội, ngày 14 tháng 5 năm 2015 Sinh viên An Phương Hà
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI AN PHƯƠNG HÀ NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG QUAN IN VITRO – IN VIVO CỦA NHŨ TƯƠNG NANO DICLOFENAC DÙNG TRONG NHÃN KHOA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI AN PHƯƠNG HÀ NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG QUAN IN VITRO – IN VIVO CỦA NHŨ TƯƠNG NANO DICLOFENAC DÙNG TRONG NHÃN KHOA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. TS. Nguyễn Trần Linh 2. DS. Đặng Thị Hiền Nơi thực hiện: Bộ môn Bào chế HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới: TS. Nguyễn Trần Linh DS. Đặng Thị Hiền là những người thầy đã dìu dắt tôi từ những ngày đầu làm nghiên cứu khoa học và cũng là những người trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo, giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Bào chế, bộ môn Vật lý – Hóa lý và bộ môn Công nghiệp Dược đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này. Tôi cũng xin cảm ơn Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo và cán bộ nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội – những người đã dạy bảo và giúp đỡ tôi trong suốt 5 năm học tập tại trường. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, anh chị em đã dành cho tôi sự giúp đỡ và động viên quý báu trong suốt thời gian qua. Hà Nội, ngày 14 tháng 5 năm 2015 Sinh viên An Phương Hà MỤC LỤC Danh mục các kí hiệu, các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, đồ thị ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 1 1.1. Thông tin về dược chất diclofenac 2 1.1.1. Công thức hóa học 2 1.1.2. Đặc tính lý hóa 2 1.1.3. Tác dụng dược lí 3 1.2. Thuốc nhỏ mắt Error! Bookmark not defined. 1.2.1. Định nghĩa Error! Bookmark not defined. 1.2.2. Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt và biện pháp tăng sinh khả dụng của thuốc nhãn khoa 3 1.3. Nhũ tương nano 4 1.3.1. Định nghĩa 4 1.3.2. Một số ưu điểm của nhũ tương nano 4 1.3.4. Các nghiên cứu nhũ tương nano diclofenac đã thực hiện 5 1.4. Sinh khả dụng và tương quan in vitro – in vivo 6 1.4.1. Định nghĩa 6 1.4.2. Sinh khả dụng in vitro và phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vitro cho thuốc dùng trong nhãn khoa 6 1.4.2.1. Định nghĩa 6 1.4.2.2. Phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vitro cho thuốc dùng trong nhãn khoa 7 1.4.3. Sinh khả dụng in vivo và phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vivo cho thuốc dùng trong nhãn khoa 8 1.4.3.1. Định nghĩa 8 1.4.3.2. Phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vivo cho thuốc dùng trong nhãn khoa 8 1.4.3.3. Tính toán mức độ và tốc độ hấp thu thuốc bằng phương pháp giải tích chập10 1.5. Tương quan in vitro – in vivo Error! Bookmark not defined.1 1.5.1. Định nghĩa Error! Bookmark not defined.1 1.5.2. Phân loại mức tương quan in vitro – in vivo . Error! Bookmark not defined.1 1.5.4. Thiết lập mối tương quan in vitro – in vivo Error! Bookmark not defined.2 1.5.4.1. Yêu cầu chung Error! Bookmark not defined.2 1.5.4.2. Thiết lập tương quan mức A Error! Bookmark not defined.4 1.5.5. Ứng dụng của tương quan in vitro – in vivo . Error! Bookmark not defined.4 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1. Nguyên liệu, thiết bị, động vật thí nghiệm 15 2.1.1. Hóa chất và nguyên liệu sử dụng 15 2.1.2. Thiết bị 15 2.1.3. Động vật thí nghiệm 16 2.2. Nội dung nghiên cứu 16 2.3. Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1. Phương pháp bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac 16 2.3.2. Phương pháp bào chế dung dịch nhỏ mắt diclofenac so sánh 17 2.3.3. Phương pháp đánh giá một số đặc tính của hệ 18 2.3.3.1. Xác định kích thước tiểu phân và phân bố kích thước tiểu phân 18 2.3.3.2. Đo thế zeta 18 2.3.4. Phương pháp định lượng dược chất 18 2.3.5. Đánh giá sinh khả dụng 19 2.3.5.1. Các bước tiến hành thí nghiệm 19 2.3.5.2. Tính toán các thông số dược động học 22 2.3.5.3. Mức độ giải phóng dược chất in vivo 22 2.3.6. Phương pháp xây dựng tương quan in vitro – in vivo 22 2.3.6.1. Đánh giá giải phóng dược chất in vitro 22 2.3.6.2. Xác định các điều kiện thử giải phóng dược chất in vitro (phương pháp mô hình hóa đồ thị giải phóng) 24 2.3.6.3. Thiết lập mô hình tương quan phù hợp 25 2.3.7. Ứng dụng tương quan lựa chọn công thức bao chế thích hợp 25 CHƯƠNG 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1. Đánh giá sinh khả dụng và các thông số dược động học của nhũ tương nano diclofenac trên mắt thỏ 26 3.1.1. So sánh nồng độ diclofenac trong dịch tiền phòng của nhũ tương nano và dạng dung dịch 27 3.1.2. Xây dựng đường biểu diễn mức độ giải phóng in vivo của nhũ tương nano so với dung dịch 27 3.1.3. Các thông số dược động học của nhũ tương nano diclofenac trên mắt thỏ 27 3.2. Xây dựng tương quan in vitro – in vivo 28 3.2.1. Đánh giá giải phóng dược chất in vitro 28 3.2.2. Mô hình hóa đồ thị giải phóng 30 3.2.3. Thiết lập tương quan 32 3.3. Ứng dụng tương quan lựa chọn công thức bào chế thích hợp 33 3.3.1. Thiết kế công thức 33 3.3.1.1. Lựa chọn thành phần 33 3.3.1.2. Xác định tỷ lệ các thành phần 34 3.3.2. Thiết kế thí nghiệm và kết quả 34 3.3.2.1. Các biến đầu ra 34 3.3.2.2. Các biến độc lập 35 3.3.2.3. Bố trí thí nghiệm và kết quả 35 3.3.2.4. Phân tích một số yếu tố ảnh hưởng đến tỷ lệ giải phóng in vivo của NTN so với mức độ giải phóng in vivo tối đa của dung dịch (F vivo ) 36 3.3.3. Lựa chọn công thức 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AD Diclofenac AIC Tiêu chuẩn thông tin Akaike (Akaike information criterion) AUC Diện tích dưới đường cong (Area under curve) CDH Chất diện hoạt CTTƯ Công thức bào chế thích hợp DAD Detector mảng diod (Diode Array Detector) DC Dược chất ĐDH Chất đồng diện hoạt ĐNH Đồng nhất hóa FDA Cơ quan quản lý thực phẩm dược phẩm Mỹ (Food and Drug Administration) HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High performance liquid chromatography) IPM Isopropyl myristat IVIVC Tương quan in vitro – in vivo KLPT Khối lượng phân tử kl/tt Khối lượng/thể tích KTTP Kích thước tiểu phân MRT Thời gian lưu trung bình (Mean residence time) NSAIDs Nhóm thuốc chống viêm không steroid (Nonsteroidal anti-inflammatory drugs) NTN Nhũ tương nano PdI Chỉ số đa phân tán (Polydispersity index) PE Phần trăm sai số dự đoán PG Propylen glycol PL Phụ lục PT Phương trình SD Độ lệch chuẩn (Standard deviation) SKD Sinh khả dụng USP Dược điển Mỹ (The United States Pharmacopeia) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1. Hóa chất và nguyên liệu sử dụng 15 Bảng 2.2. Các mô hình giải phóng khác nhau phù hợp với mô hình phân tích dữ liệu in vitro 24 Bảng 3.1. Mức độ giải phóng in vivo của NTN so với dung dịch 27 Bảng 3.2. Các thông số dược động học của nhũ tương nano diclofenac trên mắt thỏ 28 Bảng 3.3. Kết quả AIC của các môi trường giải phóng với các mô hình giải phóng khác nhau 30 Bảng 3.4. Giá trị AIC theo tương quan giữa mức độ giải phóng in vitro trong các điều kiện thử giải phóng và mức độ giải phóng in vivo của dược chất 32 Bảng 3.5. Các thành phần trong công thức NTN AD 34 Bảng 3.6. Các biến định tính 35 Bảng 3.7. Các biến định lượng 35 Bảng 3.8. Ảnh hưởng của các biến độc lập đến các biến phụ thuộc 36 Bảng 3.9. Kết quả luyện mạng neuron nhân tạo 37 Bảng 3.10. Thành phần công thức NTN AD lựa chọn 39 Bảng 3.11. Kết quả F vivo – tỷ lệ giải phóng in vivo của CTTƯ so với dung dịch 39 Bảng P1. Kết quả thí nghiệm và tính toán trung bình 6 lô (n=6) PL1 Bảng P2. Phần trăm dược chất giải phóng tại các thời điểm trong các môi trường đệm phosphat pH khác nhau PL2 Bảng P3. Phần trăm dược chất giải phóng tại các thời điểm trong các môi trường đệm phosphat pH 7,4 có chứa Tween 80 và ethanol hàm lượng khác nhau PL2 Bảng P4. Các biến phụ thuộc PL3 Bảng P5. Thiết kế thí nghiệm cho NTN AD PL3 Bảng P6. Một số đặc tính của 20 công thức thiết kế PL3 Bảng P7. Phần trăm dược chất giải phóng tại các thời điểm của 20 công thức thiết kế PL3 [...]... vitro in vivo 1.4.1 nh ngha Sinh kh dng l i lng ch tc v mc hp thu dc cht t mt ch phm bo ch vo vũng tun hon chung ca c th dng cũn hot tớnh v a n ni tỏc dng Tựy thuc phng phỏp ỏnh giỏ, sinh kh dng c phõn thnh hai loi l sinh kh dng in vitro v sinh kh dng in vivo [4] 1.4.2 Sinh kh dng in vitro v phng phỏp ỏnh giỏ sinh kh dng in vitro cho thuc dựng trong nhón khoa 1.4.2.1 nh ngha 7 Sinh kh dng in vitro. .. thuc Trong giai on u ca s thit lp tng quan, iu kin gii phúng cú th c thay i to c tng quan im im gia d liu hũa tan in vitro v d liu hũa tan in vivo i vi tng quan in vitro in vivo, phộp th in vitro c xut l mt thay th cho sinh kh dng ca thuc Do vy, iu kin gii phúng in vitro nờn ging nhau cho tt c cỏc cụng thc th nghim trong nghiờn cu tng ng sinh hc Phộp th in vitro cú th c thay i cho t mi tng quan. .. mụ hỡnh Wagner-Nelson) 4 Thit lp tng quan da vo cỏc d liu in vitro v in vivo thu c 5 Thm nh phng phỏp 1.5.5 ng dng ca tng quan in vitro in vivo Nghiờn cu tng quan in vitro in vivo l xỏc nh cú hay khụng mt tng quan nh lng in vitro in vivo, m nu cú thỡ cú th s dng nhng thụng s thu c t kt qu nghiờn cu in vitro thay th cho nhng nghiờn cu in vivo vn tiờu tn rt nhiu tin ca, thi gian, nhõn lc v lm tng giỏ... ngi s dng Hin ti, cụng thc c bn cho ch phm cng nh phng phỏp bo ch ó c xỏc nh [8], [9], [11], [12] v bc u ó ỏnh giỏ sinh kh dng ca nh tng nano nh mt diclofenac [10] Tip theo nhng nghiờn cu trờn, chỳng tụi tin hnh ti: Nghiờn cu sinh kh dng v tng quan in vitro in vivo ca nh tng nano diclofenac dựng trong nhón khoa vi cỏc mc tiờu: 1 ỏnh giỏ sinh kh dng ca nh tng nano diclofenac dựng trong nhón khoa 2 Xõy... nng diclofenac trong dch tin phũng cao hn so vi dng dung dch a s cỏc thi im ly mu, NTN cú mc gii phúng in vivo gp khong 1,34 ln so vi dng dung dch [10] Vi nhng kt qu ó t c, nghiờn cu hon thin ỏnh giỏ sinh kh dng in vivo giai on tip theo l cn thit cú nhng ỏnh giỏ, la chn giỏ tr hn trong vic xõy dng tng quan in vivo in vitro ng dng tỡm ra cụng thc bo ch thớch hp 1.4 Sinh kh dng v tng quan in vitro. .. 1.5.2 Phõn loi mc tng quan in vitro in vivo Cú bn mc tng quan ó c mụ t trong FDA guideline, trong ú bao gm mc A, B, C v a mc C [46] Khỏi nim cỏc mc tng quan c da trờn kh nng ca cỏc mi tng quan phn ỏnh nng thuc trong huyt tng theo thi gian qun lý cỏc hỡnh thc liu lng nht nh [46] Tng quan mc A L mc tng quan cao nht, th hin quan h tng im gia tc hũa tan in vitro v tc hp thu in vivo ca thuc t dng bo... lng thuc c hũa tan in vitro ti mt vi thi im khỏc nhau [26], [46] 1.5.3 Thit lp mi tng quan in vitro in vivo 1.5.3.1 Yờu cu chung [46] 13 thit lp mt IVIVC cn phi cú y cỏc d liu hũa tan in vitro v d liu hp thu in vivo ca cựng lụ thuc D liu hũa tan in vitro úng vai trũ quan trng trong vic thit lp tng quan Mc ớch ca nghiờn cu gii phúng in vitro trong giai on u ca nghiờn cu phỏt trin thuc l la chn cụng... 1.5 Tng quan in vitro in vivo 1.5.1 nh ngha Theo FDA: Mi tng quan in vitro in vivo l mt mụ hỡnh toỏn hc mụ t mi quan h gia c tớnh in vitro ca mt dng bo ch v ỏp ng in vivo tng ng Thụng thng, c tớnh in vitro chớnh l tc hoc, v mc gii phúng dc cht v ỏp ng in vivo l nng thuc trong mỏu hay lng thuc c hp thu [46] Dc in M nh ngha IVIVC l s thit lp mt mi liờn h hp lý gia mt c tớnh sinh hc hoc mt thụng s ca... 340,5oC, tc khuy l 50 vũng/phỳt, tin hnh th nghim trong 6 gi, NTN c cha trong tỳi thm tớch vi 2 u c kp cht Ti nhng thi im nht nh, ly 5 mL mu t mụi trng khuch tỏn (b sung th tớch mụi trng tng ng) v nh lng DC bng phng phỏp o quang ti bc súng 252,6 nm [14] 1.4.3 Sinh kh dng in vivo v phng phỏp ỏnh giỏ sinh kh dng in vivo cho thuc dựng trong nhón khoa 1.4.3.1 nh ngha Sinh kh dng in vivo ỏnh giỏ giai on hp thu... trong nhón khoa 2 Xõy dng tng quan in vitro in vivo v ng dng tng quan ti u húa cụng thc nh tng nano diclofenac dựng trong nhón khoa 2 CHNG 1 TNG QUAN 1.1 Thụng tin v dc cht diclofenac 1.1.1 Cụng thc húa hc Hỡnh 1.1 Cụng thc cu to acid diclofenac [36] 1.1.2 c tớnh lý húa Tớnh cht vt lý Cm quan: Bt kt tinh mu trng hoc gn trng, hi hỳt m [7] tan: Rt ớt tan trong nc, tan trong nc 25oC thay i tựy theo . sinh khả dụng in vitro và sinh khả dụng in vivo [4]. 1.4.2. Sinh khả dụng in vitro và phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vitro cho thuốc dùng trong nhãn khoa 1.4.2.1. Định nghĩa 7 Sinh. vitro – in vivo của nhũ tương nano diclofenac dùng trong nhãn khoa với các mục tiêu: 1. Đánh giá sinh khả dụng của nhũ tương nano diclofenac dùng trong nhãn khoa. 2. Xây dựng tương quan in vitro. cứu nhũ tương nano diclofenac đã thực hiện 5 1.4. Sinh khả dụng và tương quan in vitro – in vivo 6 1.4.1. Định nghĩa 6 1.4.2. Sinh khả dụng in vitro và phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vitro