bước đầu nghiên cứu sinh khả dụng và tương đương sinh học viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN PARACETAMOL 500 MG GIẢI PHÓNG NHANH LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN PARACETAMOL 500 MG GIẢI PHÓNG NHANH LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Đoàn Cao Sơn TS Tạ Mạnh Hùng HÀ NỘI 2020 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đoàn Cao Sơn TS Tạ Mạnh Hùng - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tận tình hướng dẫn quan tâm giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn thầy cơng tác Bộ mơn Hóa Phân tích độc chất giúp đỡ tơi thời gian học tập trường Tôi xin cảm ơn Ban giám đốc - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn tới tồn thể cán khoa Thiết lập Chất Chuẩn & Chất Đối Chiếu Trung tâm đánh giá Tương đương sinh học - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương chia sẻ giúp đỡ tơi q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ động viên để tơi có đủ nghị lực, tâm hoàn thành luận văn Hà nội, ngày 03 tháng 05 năm 2020 Học viên: Nguyễn Thị Hồng MỤC LỤC Trang Danh mục chữ, ký hiệu viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Sinh khả dụng tương đương sinh học 3 1.1.1 Khái niệm sinh khả dụng tương đương sinh học 1.1.2 Đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học 1.1.3 Quy định đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học 1.2 Tổng quan paracetamol 1.2.1 Công thức cấu tạo tính chất hóa lý 1.2.2 Tác dụng dược lý dược động học 7 1.2.3 Chỉ định chống định 1.2.4 Phương pháp định lượng PARA huyết tương thông số dược động học PARA số nghiên cứu 1.3 Phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học 14 1.3.1 Kỹ thuật xử lý mẫu 14 1.3.2 Lựa chọn phương pháp phân tích 16 1.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích dịch sinh học 17 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.1 Thuốc nghiên cứu 18 2.1.2 Mẫu huyết tương 18 2.2 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 18 2.2.1 Nguyên liệu, hóa chất, dung môi 18 2.2.2 dụng cụ, thiết bị 18 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 So sánh độ hòa tan in vitro viên nén Para 500 mg giải phóng nhanh so với thuốc đối chứng Panadol ActiFast 19 2.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích HPLC định lượng paracetamol huyết tương người 2.3.3 Đánh giá SKD TĐSH viên nén paracetamol 500mg giải phóng nhanh 2.4 Thơng qua hội đồng đạo đức 21 23 26 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 So sánh độ hòa tan in vitro viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh so với thuốc đối chứng 3.1.1 Thẩm định phương pháp HPLC xác định độ hòa tan PARA 27 27 3.1.2 So sánh độ hòa tan in vitro viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích paracetamol huyết tương người 3.2.1 Khảo sát phương pháp phân tích định lượng paracetamol huyết tương 3.2.2 Quy trình xử lý mẫu 3.2.3 Thẩm định phương pháp phân tích PARA huyết tương người 30 35 35 38 39 3.3 Đánh giá SKD TĐSH viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh 56 3.3.1 Tuyển chọn người tình nguyện 56 3.3.2 Uống thuốc lấy mẫu máu 56 3.3.3 Định lượng nồng độ PARA máu người tình nguyện sau uống thuốc thử thuốc chứng 56 3.3.4 Thống kê sinh học đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học 57 Chương BÀN LUẬN 63 4.1 Đánh giá thử nghiệm in vitro thử độ hòa tan 63 4.1.1 Thẩm định phương pháp định lượng PARA phép thử độ hòa tan 63 4.1.2 Kết thử độ hòa tan in vitro 63 4.2 Phương pháp phân tích paracetamol huyết tương 4.2.1 Kết xây dựng phương pháp phân tích 63 63 4.2.2 Kết thẩm định phương pháp 64 4.3 ĐÁnh giá sinh khả dụng tương đương sinh học 4.3.1 Thiết kế nghiên cứu 65 65 4.3.2 Định lượng nồng độ paracetamol huyết tương NTN xác định thông số dược động học 65 4.3.3 Kết đánh giá tương đương sịnh học viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh 66 4.3.4 Đảm bảo chất lượng kết thử nghiệm nghiên cứu đánh giá SKD TĐSH 66 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ, KÝ HIỆU VIẾT TẮT TT Phần viết tắt ASEAN Phần viết đầy đủ Association of South East Asian Nations (Hiệp hội quốc gia Đơng Nam Á) AUC Diện tích đường cong nồng độ - thời gian BCS Biopharmaceutics Classification System (Hệ thống phân loại sinh dược học) Cmax Nồng độ dược chất tối đa máu CV Coefficient of variation (Hệ số biến thiên) FDA Food and Drug Administration (Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ) GCP Good clinical practice (Thực hành lâm sàng tốt) GLP Good laboratory practice (Thực hành tốt phịng thí nghiệm) HD Hạn dùng 10 HQC High quanlity control (Mẫu kiểm chứng nồng độ cao) 11 HPLC High performance liquid chromatography 12 LC-MS/MS Liquid chromatography - Mass spectrometry/ Mass spectrometry (Sắc ký lỏng – khối phổ) 13 LLOQ Lower limit of quantification (Giới hạn định lượng dưới) 15 LQC Low quanlity control (Mẫu kiểm chứng nồng độ thấp) 16 MQC Middle quanlity control (Mẫu kiểm chứng nồng độ trung bình) 14 NSX Ngày sản xuất 17 PARA Paracetamol 18 SKD Sinh khả dụng 19 TB Trung bình 20 TĐSH Tương đương sinh học 21 Tmax Thời gian đạt nồng độ dược chất tối đa máu 22 WHO Tổ chức y tế giới DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Trang Bảng 1.1: Tóm tắt phương pháp định lượng PARA huyết tương thông số dược động học PARA số nghiên cứu 10 Bảng 3.2: Kết thẩm định độ thích hợp hệ thống 28 Bảng 3.3 : Kết thẩm định độ xác 29 Bảng 3.4: Kết khảo sát độ phương pháp định lượng PARA thử độ hịa tan 30 Bảng 3.5: Điều kiện phân tích PARA phép thử độ hòa tan 30 Bảng 3.6: Kết thử độ hòa tan viên thử viên chứng Panadol ActiFast môi trường pH 1,2 Bảng 3.7: Kết thử độ hòa tan viên thử viên chứng Panadol ActiFast môi trường pH 4,5 Bảng 3.8: Kết thử độ hòa tan viên thử viên chứng Panadol ActiFast môi trường pH 6,8 31 32 34 Bảng 3.9: Điều kiện khảo sát sắc ký ban đầu phân tích PARA huyết tương 35 Bảng 3.10: Các điều kiện sắc ký định lượng PARA IS Bảng 3.11: Cách chuẩn bị đường chuẩn huyết tương 38 Bảng 3.12: Cách chuẩn bị mẫu LLOQ huyết tương 39 Bảng 3.13: Cách chuẩn bị mẫu QC huyết tương 39 Bảng 3.14: Ảnh hưởng mẫu trắng thời điểm trùng với Rt PARA IS 40 Bảng 3.15: Kết đánh giá phù hợp hệ thống Bảng 3.16: Kết khảo sát đường chuẩn PARA theo mơ hình weighting 1/x2 Bảng 3.17: Giới hạn LLOQ PARA Bảng 3.18: Kết khảo sát độ đúng- độ xác ngày 41 Bảng 3.19: Kết khảo sát độ xác khác ngày (n=3) 45 Bảng 3.20: Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi IS 47 Bảng 3.21: Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi PARA 47 Bảng 3.22: Kết độ ổn định dung dịch IS- thời gian ngắn, nhiệt độ phòng 48 39 42 43 44 Bảng 3.23: Kết độ ổn định dung dịch IS- thời gian dài, nhiệt độ 2ºC - 8ºC Bảng 3.24: Kết độ ổn định dung dịch chuẩn PARA gốc- thời gian ngắn, nhiệt độ phòng Bảng 3.25: Kết độ ổn định dung dịch chuẩn PARA gốc- thời gian dài, nhiệt độ 2-80C 49 49 50 Bảng 3.26: Kết độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông– rã 51 Bảng 3.27: Kết độ ổn định mẫu huyết tương- thời gian ngắn, nhiệt độ phòng 51 Bảng 3.28: Kết độ ổn định mẫu huyết tương thời gian dài (LQC) 53 Bảng 3.29: Kết độ ổn định mẫu huyết tương thời gian dài (HQC) 53 Bảng 3.30: Kết độ ổn định mẫu sau xử lý- bảo quản autosampler 54 Bảng 3.31: Kết đánh giá độ nhiễm chéo 55 Bảng 3.32: Các thông số dược động học NTN sau uống thuốc thử 57 Bảng 3.33: Các thông số dược động học NTN sau uống thuốc chứng 58 Bảng 3.34: Tóm tắt số liệu sinh khả dụng thuốc thử thuốc chứng 59 Bảng 3.35: Phân tích phương sai giá trị Cmax, AUClast, AUCinf 60 Bảng 3.36: Tóm tắt số liệu so sánh sinh khả dụng test ANOVA 61 Bảng 3.37: So sánh giá trị Tmax theo phương pháp thống kê phi tham số 61 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang H nh 3.1- SKĐ mẫu chuẩn, thử PARA mẫu trắng, placebo 27 …………………………………… Hình 3.2- Đồ thị tuyến tính PARA 29 Hình 3.3 - Đồ thị biểu diễn độ hịa tan trung bình viên thử viên chứng mơi trường pH 1,2 31 Hình 3.4 - Đồ thị biểu diễn độ hịa tan trung bình viên thử viên chứng mơi trường pH 4,5 33 Hình 3.5 - Đồ thị biểu diễn độ hịa tan trung bình viên thử viên chứng môi trường pH 6,8 34 Hình 3.6- SKĐ PARA IS sử dụng thành phần pha động khác 36 H nh 7- SKĐ mẫu huyết tương xử lý phương pháp tủa protein với điều kiện khác 37 …………………………………………………………………………………… H nh 8- SKĐ mẫu huyết tương trắng, mẫu trắng thêm IS mẫu trắng thêm PARA (0,2 µg/ml) IS H nh 9- SKĐ mẫu huyết tương trắng có pha IS chuẩn PARA nồng độ MQC Hình 3.10- Đường cong trung bình nồng độ Paracetamol theo thời gian 18 NTN ………………………………………………………………………………… ………………………………………………… 40 41 57 KẾT LUẬN Đã nghiên cứu so sánh độ hòa tan viên nén Paracetamol 500 mg giải phóng nhanh (viên thử) viên nén Panadol ActiFast (viên chứng) Độ hòa tan viên tương đương Nghiên cứu thẩm định phương pháp định lượng paracetamol huyết tương người HPLC Qui trình xử lý mẫu có tỷ lệ thu hồi cao ổn định, 90% khoảng nồng độ thấp, trung bình cao Quá trình xử lý mẫu đơn giản, kinh tế phù hợp với điều kiện trang thiết bị phịng thí nghiệm có Việt Nam, triển khai phương pháp chiết để xử lý hàng loạt mẫu nghiên cứu SKD/TĐSH Phương pháp phân tích thẩm định đầy đủ theo hướng dẫn US-FDA EMA thẩm định phương pháp phân tích dịch sinh học: Phương pháp phân tích có độ đặc hiệu – chọn lọc với PARA; khoảng tuyến tính rộng (từ 0,2 µg/ml đến 12 µg/ml); giới hạn định lượng (LLOQ) thấp khoảng 0,2 µg/ml; mẫu không bị nhiễm chéo; phương pháp không bị ảnh hưởng mẫu; độ đúng, độ xác trung bình ngày khác ngày nằm khoảng cho phép; tỷ lệ thu hồi hoạt chất cao (trên 90 %); độ ổn định hoạt chất phân tích điều kiện bảo quản khác (4 nhiệt độ phòng; 1, 10 ngày nhiệt độ – C, 24 autosampler, sau chu kì đơng - rã 50 ngày nhiệt độ -35 ± 5°C) Ứng dụng phương pháp định lượng paracetamol huyết tương người để đánh giá SKD TĐSH chế phẩm paracetamol 500 mg giải phóng nhanh Panadol ActiFast (paracetamol 500 mg) Kết cho thấy với thiết kế nghiên cứu chéo, ngẫu nhiên, đơn liều, hai chế phẩm đạt tương đương sinh học in vitro in vivo theo hướng dẫn ASEAN Khoảng tin cậy 90% thông số Cmax, AUClast, AUCinf thuộc khoảng 80 – 125%, giá trị Tmax thưốc thử thưốc chứng khác khơng có ý nghĩa thống kê, kết luận hai thuốc tương đương sinh học 68 KIẾN NGH Sau thực đề tài này, chúng tơi có số kiến nghị sau: - Kết đề tài ứng dụng phương pháp HPLC xây dựng để đánh giá SKD TĐSH dạng bào chế chứa paracetamol - Từ kết nghiên cứu, tiến hành đăng ký lưu hành sản phẩm viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh bào chế thành công 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y Tế (2017), Dược điển Việt Nam V, NXB Y học Bộ Y Tế (2017), Hướng dẫn ghi nhận, xử lý báo cáo biến cố bất lợi nghiêm trọng thử nghiệm lâm sàng tiến hành Việt Nam, ban hành kèm theo định số 62/QĐ-K2ĐT ngày 02/06/2017 Bộ Y Tế (2015), Dược thư quốc gia Việt Nam 2015, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Bộ Y Tế (2014), "Hướng dẫn ASEAN thực nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học", Thông tư việc đăng ký thuốc, số 44/2014/TT-BYT ban hành ngày 25 tháng 11 năm 2014 Bộ Y Tế (2014), Thông tư việc đăng ký thuốc, số 44/2014/TT-BYT ban hành ngày 25 tháng 11 năm 2014 Bộ Y Tế (2013), Kỹ thuật bào chế sinh dược học dạng thuốc, Tập 1, NXB Y học Bộ Y Tế (2018), Hướng dẫn thử thuốc lâm sàng, thông tư 29/2018/TT/BYT ban hành ngày 29/10/2018 Bộ Y Tế (2010), Hướng dẫn báo cáo số liệu nghiên cứu sinh khả dụng/ tương đương sinh học đăng ký thuốc, thông tư 08/2010/TT/BYT ban hành ngày 26/04/2010 Bộ Y Tế (2008), Hướng dẫn thực hành tốt thử thuốc lâm sàng, ban hành kèm theo Quyết định số 799/2008/QĐ-BYT ngày 07 tháng 03 năm 2008 Bộ trưởng Bộ Y Tế 10 Mai Tất Tố, Vũ Thị Trâm (2012), Dược lý học, tập 2, NXB Y học, pp 290-291 11 Trần Tử An (2016), Hóa phân tích, tập 2, NXB Y học (2016) 12 Nguyễn Thị Hồng Hà (2011), Nghiên cứu xây bào chế sinh khả dụngviên nén paracetamol giải phóng nhanh, Luận án Tiến sỹ, Trường Đại học Dược Hà Nội 70 TIẾNG ANH 13 Adriana Domı´nguez R.,* Rau´l Medina L., and Marcela Hurtado P (2000), "Bioequivalence Study of Paracetamol Tablets: In Vitro–In Vivo Correlation", Drug Development and Industrial Pharmacy 14 Bayan Alkhawaja, Tawfiq Arafat, Eyad Mallah, Nidal Qinna, Naser Idkaidek, Wael Abu Dayyih, Hamza Alhroub, Adnan Badwan (2014) “Simultaneous Determination of Paracetamol and its Metabolites in Rat Serum by HPLC Method and its Application Supplement-Drug Pharmacokinetic Interaction” Faculty of Pharmacy and Medical Sciences, University of Petra, Amman, Jordan 15 Daniel C Harris, Quantitative Chemical Analysis seventh edition (2007), W H Freeman and Copany, New York 16 European Medicines Agency, Committee for Medicinal Products for Human Use (2012): Guideline on Validation of Bioanalytical Menthods 17 European Medicines Agency, Committee for Medicinal Products for Human Use (2012): Guideline on the investigation of Bioequivalence 18 Jaemin Cha1 , Bo Kyung Kim1 , Mi-Ri Gwon1 , Joomi Lee1 , Boram Ohk1 , Woo Youl Kang1 , Mi-sun Lim2 , Sook Jin Seong1 , Hyun-Ju Kim1 , Hae Won Lee1 and Young-Ran Yoon1 (2016) “Development and validation of a UPLC-MS/MS method for the quantification of acetaminophen in human plasma and its application to harmacokinetic studies” 19 Karalis V., Macheras P., (2013) : "An insight into the properties of a two-stage design in bioequivalence studies" Pharm Res 30(7) : 1824-35 20 K.Zech and R.W.Frei "Selective sample handling and detection in highperformance liquid chromatography", Elservier science publishing company INC 71 21 Lawrence X Yu, et al (2014), FDA Bioequivalence Standards, Springer Verlag New York 22 ichard Kin-Ting Kam*, Michael Ho-Ming Chan, Hiu-Ting Wong, Aniruddha Ghose, Arjen M Dondorp, Katherine Plewes & Joel Tarning (2018) " Quantitation of paracetamol by liquid chromatography–mass spectrometry in human plasma in support of clinical trial", Future Science OA, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6153454/ 23 S A Helmy , H M El-Bedaiwy (2013) “Simultaneous Determination of Paracetamol and Methocarbamol in Human Plasma By HPLC Using UV Detection with Time Programming: Application to Pharmacokinetic Study” 24 U.S Deparment of Helth and Human Services Food and Drug Administration (2018): Bioanalytical Method Validation – Guidance for Industry (16) 25 US-FDA- Guidance for Industry (2003): Bioavailability and Bioequivalence Studies for Orally Administered Drug Products-General Considerrations 26 USP 40 72 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP HPLC ĐỊNH LƯỢNG PARACETAMOL TRONG THỬ ĐỘ HÒA TAN Phụ lục 1.1 Các giá trị khảo sát độ tuyến tính Bảng 1: Kết khảo sát độ tuyến tính % so với Nồng độ Diện tích pic dung dịch chuẩn paracetamol (mg/ml) paracetamol (mAU.s) 30 0,00315 132659 50 0,00526 221883 80 0,00841 355222 100 0,01051 445633 120 0,01261 535473 150 0,01577 670486 STT Phương trình hồi quy: y = 42644562x - 2360 Hệ số tương quan r  1,0000 Phụ lục 1.2 Kết khảo sát độ xác Bảng 2: Kết khảo sát độ xác Hàm lượng viên thử (%) Mẫu thử Ngày 1: mchuẩn = 26,20 mg Ngày 2: mchuẩn = 25,27 mg Schuẩn = 447240 (mAU.s) Schuẩn = 424824 (mAU.s) m (mg) Diện tích Hàm (mAU.s) lượng (%) m (mg) Diện tích Hàm (mAU.s) lượng (%) 77,5 460039 107,3 78,8 459671 107,0 79,0 471109 107,8 80,3 470663 107,6 76,6 459674 108,4 77,9 456103 107,4 77,4 461235 107,7 78,9 461666 107,4 78,2 465430 107,6 80,3 465365 106,3 76,4 454131 107,4 78,2 454160 106,6 Trung 107,7 (CV = 0,4 %) bình TB ngày 107,1 (CV = 0,5 %) 107,4 % (CV = 0,5 %) (n = 12) Phụ lục 1.3 Kết khảo sát độ Bảng 3: Kết khảo sát độ MPara chuẩn = 26,20 mg; SPara chuẩn = 447240 % so với Lượng Diện tích pic Lượng dung dịch paracetamol paracetamol paracetamol chuẩn thêm vào (mAU.s) tìm lại 50 25,45 213475 25,08 98,5 50 25,54 214492 25,20 98,7 50 26,82 226392 26,60 99,2 100 51,01 433593 50,95 99,9 100 51,05 433603 50,95 99,8 100 54,29 459648 54,01 99,5 120 61,76 522793 61,43 99,5 120 60,33 509316 59,85 99,2 120 64,46 543955 63,92 99,2 STT % thu hồi TB (%) 99,3 RSD (%) 0,5 PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PARACETAMOL TRONG DỊCH SINH HỌC Phụ lục 2.1 Kết khảo sát độ tuyến tính Bảng 5: Kết khảo sát đường chuẩn CC1 theo mơ hình weighting 1/x2 Mẫu S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 độ Nồng 0,200 0,501 1,002 2,005 3,007 PARA 30465 78765 155898 315632 472757 792345 1280505 1887303 IS 422910 427201 450105 431064 432353 433785 446357 441126 0,072 0,184 0,346 0,732 1,093 1,827 2,869 4,278 99,7 102,2 96,0 101,5 101,1 101,3 99,4 98,9 (µg/ml) PARA/IS Độ 5,012 8,019 12,029 (%) PTHQ y = 0,360x + 0,000; r = 0,9997 Bảng 6: Kết khảo sát đường chuẩn CC2 theo mơ hình weighting 1/x2 Mẫu S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 độ Nồng 0,200 0,499 0,998 1,997 2,995 PARA 28366 77301 147453 305908 470859 797775 1278032 1905068 IS 432543 443077 440620 438972 435364 434283 435205 430125 0,066 0,174 0,335 0,697 1,082 1,837 2,937 4,429 100,9 91,0 90,6 96,3 100,2 102,7 102,8 103,6 (µg/ml) PARA/IS Độ (%) PTHQ 4,992 7,987 11,981 y = 0,362x - 0,007; r = 0,9995 Bảng 7: Kết khảo sát đường chuẩn CC3 theo mơ hình weighting 1/x2 Mẫu S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 độ Nồng 0.204 0.510 1.020 2.041 3.061 PARA 40718 87127 162757 320290 508553 822023 1275565 1887803 IS 373313 368295 378683 377785 379230 380161 382722 382288 0.109 0.237 0.430 0.848 1.341 2.162 3.333 4.938 100.1 101.0 96.7 98.3 104.9 102.2 98.9 97.9 (µg/ml) PARA/IS Độ 5.102 8.163 12.245 (%) PTHQ y = 0,410x + 0,025; r = 0,9995 Bảng 8: Kết khảo sát đường chuẩn CC4 theo mơ hình weighting 1/x2 Mẫu S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 độ Nồng 0.200 0.499 0.998 1.997 2.995 PARA 34459 80624 159014 316478 480038 803543 1315523 1945209 IS 406728 433946 440259 443724 437215 445025 453593 453158 0.085 0.186 0.361 0.713 1.098 1.806 2.900 4.293 101.4 97.4 98.1 98.6 101.8 100.9 101.6 100.4 (µg/ml) PARA/IS Độ 4.992 7.987 11.981 (%) PTHQ y = 0,356x + 0,013; r = 0,9998 Bảng 9: Kết khảo sát đường chuẩn CC5 theo mô hình weighting 1/x2 Mẫu Nồng (µg/ml) PARA S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 độ 0.204 0.510 1.020 2.041 3.061 29726 76467 152252 302162 451334 5.102 8.163 12.245 750801 1217647 1823435 IS PARA/IS Độ 409322 404960 394143 400383 396723 397618 401667 402713 0.073 0.189 0.386 0.755 1.138 1.888 3.031 4.528 99.3 100.8 102.3 99.5 99.9 99.4 99.6 99.2 (%) PTHQ y = 0,373x - 0,003; r = 0,9999 Phụ lục 2.2 Kết khảo sát LLOQ Bảng 10: kết khảo sát LLOQ Mẫu LLOQ chuẩn: 0,204 µg/ml STT Mẫu trắng (tại thời PTHQ: y = 0,348x – 0,004; r = 0,9999 gian lưu Diện tích Diện tích Nồng độ PARA) (µg/ml) pic PARA pic IS Độ (%) Kết luận 690 30918 449268 0,210 103,3 Đạt 1194 32543 459915 0,216 106,0 Đạt 32286 450889 0,218 107,1 Đạt 30535 450864 0,207 101,8 Đạt 33113 479149 0,211 103,7 Đạt 31296 505759 0,191 93,9 Đạt Trung bình 314 31782 0,209 102,6 Đạt 4,6 Đạt CV (%) Tỉ lệ đáp ứng pic mẫu chuẩn/mẫu trắng thời gian lưu PARA 101,2 Đạt Phụ lục 2.3 Kết khảo sát độ – độ xác ngày Bảng 11: Kết khảo sát độ – độ xác ngày (mẫu LQC) Mẫu LQC = 0,740 µg/mL PTHQ: y = 0,353x - 0,011; r= 0,9999 STT Nồng độ Độ (µg/mL) (%) 0,245 0,725 98,0 494432 0,243 0,721 97,4 121148 492380 0,246 0,729 98,5 122676 499503 0,246 0,728 98,4 129505 493138 0,263 0,776 104,9 0,736 99,4 3,1 3,1 PARA IS PARA/IS 119267 487641 120212 TB CV (%) Bảng 12: Kết khảo sát độ đúng- độ xác ngày (mẫu MQC) Mẫu MQC = 3,946 µg/mL PTHQ: y = 0,353x - 0,011; r= 0,9999 STT PARA IS 638266 646726 643034 648210 646284 642746 476418 476934 460938 474257 470265 456437 Nồng độ Độ (µg/mL) (%) 1,340 1,356 1,395 1,367 1,374 1,408 TB 3,830 3,876 3,987 3,907 3,928 4,024 3,925 97,1 98,2 101,0 99,0 99,6 102,0 99,5 CV (%) 1,8 1,8 PARA/IS Bảng 13: Kết khảo sát độ đúng- độ xác ngày (mẫu HQC) Mẫu HQC = 10,224 µg/mL PTHQ: y = 0,353x - 0,011; r= 0,9999 STT Nồng độ PARA IS (µg/mL) Độ (%) PARA/IS 1600444 474568 3,372 9,876 96,6 1598601 466451 3,427 10,037 98,2 1610241 467730 3,443 10,082 98,6 1609800 480195 3,352 9,817 96,0 1592523 485820 3,278 9,599 93,9 1606461 468518 3,429 10,041 98,2 9,909 96,9 1,9 1,9 TB CV (%) Phụ lục 2.4 Kết khảo sát độ – độ xác khác ngày Bảng 14: Kết khảo sát độ xác khác ngày (n=3) STT Ngày I LQC (≈ 0,75 µg/ml) MQC (≈ 4,0 µg/ml ) HQC (≈ 10 µg/ml ) Nồng độ ( µg/ml ) Độ (%) Nồng độ ( µg/ml ) Độ (%) Nồng độ ( µg/ml ) Độ (%) 0,725 98,0 3,830 97,1 9,876 96,6 0,721 97,4 3,876 98,2 10,037 98,2 0,729 98,5 3,987 101,0 10,082 98,6 0,728 98,4 3,907 99,0 9,817 96,0 0,776 104,9 3,928 99,6 9,599 93,9 - - 4,024 102,0 10,041 98,2 0,748 96,8 4,147 100,6 10,578 103,9 0,790 102,2 4,214 102,2 10,345 101,6 0,780 100,9 4,142 100,5 10,372 101,9 10 0,774 100,1 4,155 100,8 10,393 102,1 11 0,776 100,4 4,034 97,9 10,578 103,9 12 0,793 102,6 4,010 97,3 10,382 101,9 13 0,870 103,4 4,185 99,6 10,040 99,0 14 0,862 102,6 4,317 102,7 10,704 105,5 0,877 104,4 4,304 102,4 10,393 102,5 16 0,861 102,4 4,307 102,5 10,732 105,8 17 0,857 102,0 4,270 101,6 10,407 102,6 18 0,886 105,4 4,232 100,7 10,563 104,1 II 15 III TB 101,2 100,3 100,9 CV (%) 2,6 1,8 3,4 Mã NTN A01 A02 A03 A04 A05 A06 A07 A08 A09 A10 A11 A12 A13 A14 A15 A16 A17 A18 TB SD CV (%) Bảng 3.28: Nồng độ Paracetamol huyết tương NTN sau uống thuốc Thử (µg/ml) Thời điểm lấy mẫu (h) 0,0 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,33 0,50 0,75 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 - 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,00 0,00 - 0,901 0,806 0,446 0,000 0,000 0,000 0,673 0,000 0,218 0,000 0,000 0,412 0,412 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 4,040 5,745 6,766 0,385 1,244 1,362 5,762 2,677 1,978 0,000 0,000 3,105 2,749 0,000 0,836 0,770 0,593 0,000 5,985 13,329 5,035 1,119 7,676 7,058 10,701 11,629 3,878 0,452 0,000 7,344 5,799 0,211 4,869 1,132 3,576 0,000 7,351 11,966 6,297 4,434 10,033 9,289 14,676 14,915 9,799 0,527 0,222 8,091 9,400 0,578 5,754 1,406 5,905 0,355 10,380 11,349 7,694 13,841 12,856 9,838 12,575 11,446 10,219 0,882 0,619 9,044 11,408 1,692 8,056 4,963 10,556 1,903 8,777 10,086 12,022 13,814 11,414 8,901 9,653 8,549 10,054 1,682 1,968 8,937 11,609 2,477 7,544 8,398 9,079 5,594 7,878 9,184 8,885 11,560 10,235 7,240 8,683 7,302 9,726 4,030 3,752 8,180 10,658 3,902 6,571 8,600 8,852 5,325 6,790 7,761 7,595 10,420 9,242 6,326 7,579 5,214 9,065 3,956 4,557 7,202 9,808 3,574 6,167 6,563 9,187 6,170 4,696 4,927 5,787 7,250 6,339 4,063 5,098 3,750 6,209 3,241 5,876 5,185 7,191 4,058 4,913 4,865 6,258 4,221 2,830 2,198 3,878 4,232 3,077 2,560 2,590 1,988 3,157 1,636 5,249 3,045 3,420 2,488 2,540 2,374 3,192 2,170 1,444 0,994 2,427 1,543 1,564 1,546 1,171 1,034 1,649 0,819 2,521 1,746 1,510 1,118 1,180 1,034 1,394 1,005 0,795 0,445 1,571 0,824 0,931 0,756 0,648 0,503 0,920 0,477 1,249 1,029 0,751 0,621 0,635 0,627 0,746 0,532 0,215 0,313 2,112 2,190 4,989 4,139 6,722 4,781 8,296 4,371 8,364 3,432 7,809 2,323 7,065 1,987 5,218 1,149 2,924 0,873 1,428 0,465 0,781 0,285 145,8 103,7 83,0 71,1 52,7 41,0 29,7 28,1 22,0 29,9 32,5 36,5 Mã NTN A01 A02 A03 A04 A05 A06 A07 A08 A09 A10 A11 A12 A13 A14 A15 A16 A17 A18 TB SD CV (%) Bảng 3.29: Nồng độ Paracetamol huyết tương NTN sau uống thuốc Chứng (µg/ml) Thời điểm lấy mẫu (h) 0,0 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,33 0,50 0,75 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,400 0,000 0,000 0,000 0,022 0,094 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,336 0,000 0,000 0,000 0,019 0,079 0,530 0,584 0,000 0,435 0,000 0,355 0,000 0,428 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,551 0,000 0,000 0,000 0,160 0,238 3,651 6,741 9,505 0,896 0,000 2,796 0,000 1,661 0,000 0,000 0,288 17,417 2,201 0,000 4,188 0,000 0,258 0,000 2,756 4,535 7,007 11,629 10,633 2,723 0,370 5,902 1,526 2,731 0,000 0,000 0,999 17,248 7,540 0,000 14,227 9,523 2,195 0,422 5,260 5,450 7,857 12,538 11,086 4,942 1,004 7,015 8,910 3,036 0,361 0,000 2,710 13,174 10,788 1,879 14,472 7,983 6,136 0,991 6,382 4,756 10,962 11,639 9,945 7,623 3,091 7,609 10,533 6,359 1,998 3,835 4,866 10,591 11,775 6,487 14,115 9,057 10,931 3,200 8,034 3,563 9,806 11,326 7,883 8,376 6,471 8,202 8,687 11,565 4,699 4,831 8,283 8,877 12,131 6,078 11,111 8,083 11,143 6,854 8,578 2,268 8,376 8,630 6,740 10,467 6,605 7,210 8,651 8,653 5,714 4,679 9,385 7,705 11,854 5,220 8,287 7,756 10,456 5,331 7,873 1,963 7,024 7,207 6,709 11,147 7,233 5,972 7,694 5,834 6,202 4,523 8,588 6,952 10,524 4,745 6,224 6,586 10,027 4,942 7,119 1,894 4,943 4,920 4,996 7,666 7,356 4,275 6,411 3,311 6,733 3,008 7,061 5,145 7,156 3,605 4,515 4,415 6,950 3,750 5,345 1,528 2,815 2,137 3,622 3,773 3,651 2,515 3,185 2,092 3,757 1,597 3,642 2,868 3,447 1,925 2,412 2,070 3,772 1,888 2,843 0,775 1,486 0,981 2,002 1,912 1,761 1,266 1,441 1,002 1,955 0,771 1,663 1,573 1,654 0,846 1,197 1,202 1,599 0,831 1,397 0,401 0,958 0,472 1,195 1,072 0,961 0,768 0,795 0,561 1,083 0,422 0,898 0,857 0,944 0,428 0,710 0,642 0,951 0,426 0,786 0,247 424,3 424,3 148,5 164,6 103,6 74,5 44,4 26,4 24,9 26,6 28,6 27,3 28,7 31,4 ... ? ?Bước đầu nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học viên nén paracetamol 500 mg giải phóng nhanh? ?? với mục tiêu nghiên cứu sinh khả dụng, tương đương sinh học viên nén paracetamol 500 mg giải. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HỒNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN PARACETAMOL 500 MG GIẢI PHÓNG NHANH LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC... Ngoài nội dung nghiên cứu cơng thức, quy trình bào chế viên nén PARA 500 mg giải phóng nhanh cần phải nghiên cứu so sánh sinh khả dụng tương đương sinh học với thuốc đối chứng tương đương bào chế