Xác định chất cấm Sibutramine trong thực phẩm chức năng giảm béo bằng phương pháp HPLC

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN * NGUYỄN TIẾN LUYỆN XÁC ĐỊNH CHẤT CẤM SIBUTRAMINE TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG GIẢM BÉO BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC HÀ NỘI – 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN * NGUYỄN TIẾN LUYỆN XÁC ĐỊNH CHẤT CẤM SIBUTRAMINE TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG GIẢM BÉO BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Chuyên ngành : Hóa phân tích Mã số : 60440118 Người hướng dẫn : TS. Lê Thị Hồng Hảo HÀ NỘI – 2014 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên cho em gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS. Lê Thị Hồng Hảo, Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia – Bộ Y tế, đã giao đề tài, hướng dẫn, đóng góp những ý kiến và tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới các thầy cô giáo giảng dạy tại khoa Hoá học, đặc biệt là các thầy cô trong bộ môn Hoá phân tích, đã cho em những kiến thức quý giá, tạo điều kiện cho em được học tập và nghiên cứu trong thời gian vừa qua. Tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia đã tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi được học tập và hoàn thành đề tài này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các anh, chị và các bạn đồng nghiệp tại labo Hóa – Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình làm thực nghiệm. Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình và bạn bè đã luôn động viên, chia sẻ mọi khó khăn cùng tôi. Hà Nội, năm 2014 Học viên Nguyễn Tiến Luyện MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU – TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1. TỔNG QUAN 2 1.1. Giới thiệu về thực phẩm chức năng giảm béo 2 1.2. Thực trạng sử dụng thực phẩm chức năng giảm béo chứa sibutramine 3 1.3. Tổng quan về Sibutramine 4 1.3.1 Tính chất lý hóa của Sibutramine 4 1.3.2 Tính chất dược lý của Sibutramine 5 1.3.3 Một số phương pháp xác định sibutramine 7 1.3.3.1 Phương pháp sắc ký khí khối phổ GC-MS 7 1.3.3.2 Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC-MS/MS 8 1.3.3.3 Phương pháp điện di mao quản CE 10 1.3.3.4 Phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao HPTLC 11 1.3.3.5 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC 12 1.4 Tổng quan về HPLC 14 Chương 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng và mục tiêu nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Mục tiêu nghiên cứu 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu 17 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 18 2.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích 19 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 23 2.5 Hóa chất, thiết bị 23 2.5.1 Hóa chất 23 2.5.2 Thiết bị, dụng cụ 24 Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN. 25 3.1 Tối ưu điều kiện tách và xác định Sibutramine bằng HPLC 26 3.1.1 Lựa chọn bước song hấp thụ ánh sáng 26 3.1.2 Lựa chọn một số điều kiện sắc ký 27 3.1.3 Khảo sát pha động 27 3.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu 33 3.2.1 Khảo sát dung môi chiết với viên nang cứng 34 3.2.2 Khảo sát dung môi chiết với viên nang mềm 35 3.2.3 Khảo sát thời gian chiết mẫu 36 3.2.4 Khảo sát quy trình loại béo trong mẫu thực phẩm chức năng 39 3.3 Thẩm định phương pháp phân tích 41 3.3.1 Độ đặc hiệu, độ chọn lọc 41 3.3.2 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng 43 3.3.3 Khoảng tuyến tính 44 3.3.4 Độ lặp lại của hệ thống 46 3.3.5 Độ đúng của phương pháp 47 3.3.6 Độ lặp lại của phương pháp 49 3.4 Kết quả xác định sibutramine trong một số sản phẩm thực phẩm chức năng giảm béo 51 Chương 4. KẾT LUẬN 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO… 57 PHỤ LỤC 61 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU- TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng anh Tiếng việt AOAC Association of Official Analytical Community Hiệp hội cộng đồng phân tích chính thức CE Capillary Electrophoresis Điện di mao quản ESI Electrospray Ionization Ion hóa phun điện tử FDA Food and Drug Adminstration Cục quản lý thực phẩm và dược phẩm Hoa Kỳ GC-MS Gas Chromatography Mass Spectrometry Sắc ký khí khối phổ HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu năng cao HPTLC High Performance Thin Layer Chromatography Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao KN ATVSTPQG National institute for food control Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia LC-MS/MS Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry Sắc ký lỏng ghép khối phổ hai lần LOD Limit of Detection Giới hạn phát hiện LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng R(%) Recovery Hiệu suất thu hồi SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Thử nghiệm lâm sàng dài hạn với sibutramine 4 Bảng 3.1 Thành phần hệ dung môi pha động 27 Bảng 3.2 Chương trình gradient của hệ pha động amoni acetat - methanol 28 Bảng 3.3 Chương trình gradient của hệ pha động đệm phosphate - methanol 30 Bảng 3.4 Kết quả khảo sát dung môi chiết sibutramine cho mẫu viên nang cứng 34 Bảng 3.5 Kết quả khảo sát dung môi chiết sibutramine cho mẫu viên nang mềm 35 Bảng 3.6 Kết quả khảo sát thời gian chiết mẫu 37 Bảng 3.7 Kết quả khảo sát dung môi loại béo 39 Bảng 3.8 Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính 44 Bảng 3.9 Độ lệch của từng điểm chuẩn dùng xây dựng đường chuẩn 46 Bảng 3.10 Kết quả khảo sát độ lặp lại của hệ thống 47 Bảng 3.11 Độ thu hồi của phương pháp với viên nang mềm 47 Bảng 3.12 Độ thu hồi của phương pháp với viên nang cứng 48 Bảng 3.13 Độ lặp lại của phương pháp với viên nang cứng 50 Bảng 3.14 Độ lặp lại của phương pháp với viên nang mềm 50 Bảng 3.15 Kết quả phân tích sibutramine trong một số mẫu thực phẩm chức năng giảm béo. 51 DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Trang Hình 1.1 Công thức cấu tạo của sibutramine 4 Hình 1.2 Sơ đồ khối của một máy sắc ký lỏng hiệu năng cao. 14 Hình 2.1 Quy trình phân tích mẫu dự kiến 19 Hình 2.2 Thiết bị HPLC Shimadzu (LC 20AD) 25 Hình 3.1 Sắc ký đồ PDA của sibutramine 26 Hình 3.2 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn sibutramine với pha động 1 28 Hình 3.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp với pha động 1 29 Hình 3.4 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn sibutramine với pha động 2 29 Hình 3.5 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp với pha động 2 30 Hình 3.6 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn sibutramine với pha động 3 31 Hình 3.7 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp với pha động 3 31 Hình 3.8 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn sibutramine với pha động 4 32 Hình 3.9 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp với pha động 4 32 Hình 3.10 Biểu đồ biểu diễn diệu quả chiết sibutramine trong mẫu viên nang cứng 34 Hình 3.11 Biểu đồ biểu diễn diệu quả chiết sibutramine trong mẫu viên nang mềm 36 Hình 3.12 Sắc ký đồ phân tích mẫu trắng TPCN them chuẩn siêu âm trong 5 phút 37 Hình 3.13 Sắc ký đồ phân tích mẫu trắng TPCN them chuẩn siêu âm trong 10 phút 38 Hình 3.14 Sắc ký đồ phân tích mẫu trắng TPCN them chuẩn siêu âm trong 15 phút 38 Hình 3.15 Sắc ký đồ phân tích mẫu trắng TPCN them chuẩn siêu âm trong 20 phút 38 Hình 3.16 Sắc ký đồ phân tích mẫu trắng TPCN them chuẩn siêu âm trong 25 phút 39 Hình 3.17 Sắc ký đồ phân tích mẫu TPCN nang mềm chưa loại béo 40 Hình 3.18 Sắc ký đồ phân tích mẫu TPCN nang mềm đã loại béo 40 Hình 3.19 Sắc ký đồ phân tích mẫu TPCN nang mềm thêm chuẩn 200µg/ml loại béo bằng n-Hexan (H + ) 41 Hình 3.20 Sắc ký đồ dung dịch đánh giá độ phân giải 42 Hình 3.21 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn sibutramine 200µg/ml 42 Hình 3.22 Sắc ký đồ của dung dịch mẫu trắng TPCN giảm béo 43 Hình 3.23 Sắc ký đồ của dung dịch mẫu trắng TPCN thêm chuẩn sibutramine 200µg/ml 43 Hình 3.24 Sắc ký đồ của dung dịch mẫu trắng TPCN thêm chuẩn sibutramine 0,5 µg/ml 44 Hình 3.25 Sắc ký đồ của dung dịch mẫu trắng TPCN thêm chuẩn sibutramine 0,2 µg/ml 44 Hình 3.26 Khoảng tuyến tính sự phụ thuộc giữa diện tích pic vào nồng độ của sibutramine 45 Hình 3.27 Đường chuẩn sự phụ thuộc giữa diện tích pic vào nồng độ của sibutramine 45 Hình 3.28 Biểu đồ phân tích mẫu thực tế 55 [...]... nghiên cứu chọn đề tài Xác định hàm lượng chất cấm sibutramine trong thực phẩm chức năng giảm béo bằng phương pháp HPLC Đây là phương pháp phân tích hiện đại, có độ chính xác cao và có khả năng ứng dụng rộng rãi tại Việt Nam Chương 1 TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu về thực phẩm chức năng giảm béo Thực phẩm chức năng giảm béo là những sản phẩm của quá trình chế biến thực phẩm hay thảo dược đã được các nhà sản... Giới hạn định lượng (Limit of Quatification – LOQ) + Khoảng tuyến tính và đường chuẩn (Linearity and Calibration) + Độ lặp lại (Repeatability) + Độ thu hồi (Recovery) - Áp dụng quy trình đã xây dựng để xác định chất cấm sibutramine trong một số sản phẩm thực phẩm chức năng giảm béo bán trên thị trường Hà Nội 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu - Mẫu thực phẩm chức năng giảm béo được... phương pháp xác định sibutramine trong mẫu thực phẩm chức năng giảm béo tại PTN với các thông số: a Tính chọn lọc, đặc hiệu Tính chọn lọc nói lên khả năng xác định đúng chất phân tích khi có mặt các tạp chất hoặc các chất khác tiến hành như sau Để xác định tính đặc hiệu/chọn lọc đối với sắc ký chúng tôi đã tiến hành phân tích các mẫu trắng phải không cho tín hiệu phân tích, mẫu trắng có thêm chất chuẩn... 14/4/2011 của Cục quản lý Dược – Bộ Y tế [4] Tuy nhiên, do nhu cầu giảm béo của những người thừa cân nên hiện nay, nhiều loại thuốc giảm béo dưới mác thực phẩm chức năng có chứa sibutramine vẫn được bán tràn lan trên thị trường 1.3.3 Một số phương pháp xác định Sibutramine Trên thế giới, đã có rất nhiều nghiên cứu đưa ra các phương pháp xác định sibutramine với nhiều kỹ thuật phân tích khác nhau như: Sắc... Gạn lấy phần dịch, định mức 25 mL bằng cùng dung môi và lọc qua màng lọc 0,45 µm Tiêm vào hệ sắc ký HPLC (pha loãng nếu cần) - Sibutramine được chiết ra khỏi nền mẫu bằng các dung môi khác nhau - Quy trình chiết sibutramine trong mẫu thực phẩm chức năng giảm béo dưới dạng viên nang cứng và viên nang mềm dự kiến gồm các bước sau: cho đối tượng phân tích là thực phẩm chức năng giảm béo dạng viên nén,... độ thu hồi trung bình trong khoảng 79,6% -112,0% Các giới hạn phát hiện (S/N = 3) nằm trong khoảng 0,16 và 0,65 mg/l Phương pháp phân tích tương đối đơn giản, nhanh chóng, chọn lọc và chính xác Phương pháp đã được áp dụng thành công cho việc xác định 7 hoạt chất trong mẫu thực phẩm chức năng 1.3.3.4 Phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao HPTLC Đây là một kỹ thuật tách các chất được tiến hành khi... noradrenalin trong não, từ đó tạo cảm giác no và không thèm ăn Chất này đã bị cấm sử dụng ở nhiều nước trên thế giới, trong đó có Việt Nam [4], [12], [16] Do đó việc phát hiện được sibutramine có mặt trái phép trong thực phẩm chức năng giúp giảm béo là một yêu cầu thực tiễn trong kiểm soát tính an toàn của loại sản phẩm này Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn kể trên, chúng tôi đã nghiên cứu chọn đề tài Xác định. .. loại thực phẩm chức năng giảm béo đa số được sản xuất dưới dạng viên nén, viên nang, dạng bột, dạng cao hay dạng trà nhưng không được coi như một loại thuốc chữa bệnh, đây có thể coi là một dạng thực phẩm giảm cân nhanh Hiện nay trên thị trường có rất nhiều loại thực phẩm chức năng giảm béo giúp người béo phì lấy lại vóc dáng cân đối Để tăng tác dụng của sản phẩm, các công ty sản xuất đã đưa vào sản phẩm. .. chuẩn HPLC trong khoảng 5-200µg/ml Cả 2 phương pháp đều được thẩm định về độ đúng, độ chụm, khoảng tuyến tính, độ thu hồi và độ ổn định giữa các ngày Các phương pháp đều hiệu quả cho phân tích hàng ngày trong các sản phẩm bổ sung trái phép sibutramine Nhóm nghiên cứu thuộc trường đại học Dược, Bucharest, Rumani [6] đã phát triển phương pháp HPLC để xác định đồng thời sibutramine và phenolphthalein trong. .. phương pháp - Phân tích một số mẫu thực phẩm chức năng giảm béo trên thị trường Hà Nội; 2.2 Nội dung nghiên cứu - Khảo sát lựa chọn các điều kiện tiến hành chạy máy HPLC trong phân tích sibutramine - Khảo sát xây dựng quy trình xử lý mẫu để tách chiết sibutramine trong thực phẩm chức năng - Đánh giá quy trình phân tích và xử lý mẫu + Tính đặc hiệu và chọn lọc của phương pháp (Specifility/Selectivity) + . Giới thiệu về thực phẩm chức năng giảm béo 2 1.2. Thực trạng sử dụng thực phẩm chức năng giảm béo chứa sibutramine 3 1.3. Tổng quan về Sibutramine 4 1.3.1 Tính chất lý hóa của Sibutramine 4. ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN * NGUYỄN TIẾN LUYỆN XÁC ĐỊNH CHẤT CẤM SIBUTRAMINE TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG GIẢM BÉO BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Chuyên ngành : Hóa. HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN * NGUYỄN TIẾN LUYỆN XÁC ĐỊNH CHẤT CẤM SIBUTRAMINE TRONG THỰC PHẨM CHỨC NĂNG GIẢM BÉO BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC HÀ NỘI – 2014