chức năng giảm béo
Chúng tôi đã tiến hành thu thập ngẫu nhiên 34 sản phẩm thực phẩm chức năng giảm béo trên thị trường. Mẫu được xử lý theo quy trình phân tích và xác định hàm lượng sibutramine theo phương pháp đã tối ưu trên, thu được kết quả như ở bảng 3.15.
Bảng 3.15 Kết quả phân tích sibutramine trong một số mẫu thực phẩm chức năng giảm béo
STT Mã hóa Tên mẫu Tình trạng mẫu, nhà sản xuất Hàm lượng sibutramine (mg/viên) 1 NM01 Thực phẩm chức năng giảm béo không nhãn mác
Đựng trong lọ nhựa, không
2 NC01 COMPLEBIOL SLIM 8+ - Breakthrough Slimming Formula Nguyên lọ, NSX: 5/2014 – HSD: 4/2017. Xuất xứ: Mỹ KPH
3 NC02 Nang cứng Trong lọ nhựa, Không rõ
xuất xứ 11,0
4 NC03 Nang cứng
Nguyên hộp, nhà sản xuất: Yunan Baian Medicinal Science& Technology co.,ltd
KPH
5 NM02 Nang mềm Nguyên lọ, Không rõ nguồn
gốc 13,7
6 NC04 Viên nang cứng Nguyên hộp , nhà sản xuất
USA O&K trading KPH 7 NM03 Viên nang Lọ nhựa không nhãn mác 20,8
8 NC05 TPCN Best slim
Nguyên lọ 40 viên, số lô
108200 17,5
9 NC06 Nang cứng Trong lọ nhựa, Không rõ
xuất xứ 28,2
10 NM04 TPCN giảm béo
Trong lọ nhựa, nhà sản xuất:
Arkopharma KPH
11 NM05 Nang mềm Trong lọ nhựa, Không rõ
xuất xứ KPH
12 NC07 Viên nang giảm
béo Nguyên lọ, không nhãn mác 26,6 13 NM06 Nang mềm NKH Laboratories (USA) KPH
14 NM07 Nang mềm Trong lọ nhựa, không xuất
15 NC08 Viên nang giảm béo Phục Linh
Nguyên hộp 36 viên, số lô:
20120901 19,6
16 NC09 TPCN Green
Oake Nguyên lọ 60 viên KPH
17 NC10
TPCN Doctor’s Choice Slim &
Slim
Nguyên lọ 40 viên, nhà sản
xuất: Dramerico group llc KPH
18 NC11 Beautiful Slim body
Nguyên lọ 36 viên, số lô
20100126 KPH 19 NC12 Cellifore brule graisse Laboratoires JuVa Sante Ngyên hộp, Số lô: 250161315113. HSD: 01/5/2016 KPH
20 NC13 Best Slim Nguyên lọ 60 viên, HSD:
01/06/2016 KPH 21 NC14 TPCN không nhãn mác Lọ nhựa không nhãn mác 19,7 22 NC15 Fat Burner (AVALON) Nguyên hộp, HSD: 6/2016 KPH 23 NC16 Resyze curve sculptor Nguyên hộp, HSD: 02/2016 KPH 24 NC17 TrῡAge Body Sugar Stop Nguyên hộp, NSX-HSD: Không có KPH 25 NC18 TPCN Viên nang giảm béo
Phục Linh
Nguyên hộp, NSX: 01/7/2013 – HSD: 30/6/2015. số lô: 20130701
KPH
26 NC19 TPCN S Slim Nguyên lọ 40 viên, HSD:
31/12/2017 KPH 27 NC20 Perfect Slim Trong túi nilon không nhãn 34,6
USA mác 28 NC21 Thực phẩm chức năng niên nang LIC Nguyên lọ 60 viên. NSX: 30/4/2014 – HSD: 29/9/2017 KPH 29 NC22 Thực phẩm chức năng FIX Nguyên lọ, số lô: 13360. HSD: 12/2015 KPH 30 Dạng bột TPCN trà Tam Thanh Hộp 20 gói x 2,2 gr NSX: 20/5/2014 – HSD: 20/5/2016 KPH
31 NC23 Viên nang màu xanh
Mẫu đựng trong lọ nhựa
không nhãn mác KPH
32 NC24 Viên nang màu đỏ
Nguyên lọ. Số lô: DRC
409011 KPH
33 NC25 Viên giảm cân ô mai
Nguyên lọ, số lô: 140618 NSX: 18/6/2014 – HSD:
17/6/2016
24,4
34 NC26 Vita Helth Slim QQ Nguyên lọ, NSX-HSD: Không có KPH Trong đó: VN: Viên nén NC: Nang cứng NM: Năng mềm
KPH: Không phát hiện (dưới LOD của phương pháp).
Từ bảng kết quả trên nhận thấy: Trong 34 mẫu phân tích được đánh giá phát hiện 11 mẫu (32%) chứa chất cấm sibutramin với hàm lượng từ 11,0 – 34,6mg/viên. Các mẫu dương tính tập chung chủ yếu ở dạng viên nang cứng, không có nhãn mác, xuất xứ. Các sản phẩm này có thể bị làm nhái hoặc bị làm giả. Vì vậy, khuyến cáo người tiêu dùng nên sử dụng các sản phẩm có nguồn gốc xuất xứ rõ ràng, mua tại các nhà thuốc uy tín. Qua đây cũng kiến
nghị các đơn vị quản lý nên thắt chặt thanh kiểm tra mặt hàng thực phẩm chức năng giảm béo lưu thông trên thị trường.
32%
68%
Mẫu không chứa sinutramine
Mẫu chứa sinutramine
Chương 4. KẾT LUẬN
Sau khi hoàn thành nghiên cứu này, trên cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, với mục đích ứng dụng phương pháp HPLC để xác hàm lượng sibutramine trong mẫu thực phẩm chức năng giảm béo, chúng tôi thu được kết quả như sau:
- Tối ưu được các điều kiện xác định sibutramine trên hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC với detector PDA:
Pha tĩnh: Cột C18 Symmetry Waters (250 mm x 4,6 mm; 5 µm)
Bước sóng phát hiện là 225 nm
Pha động: chạy theo chương trình gradient nồng độ Kênh A: Kali dihydrophosphat 0,05M; pH = 4,0 Kênh B: Acetonitril
Nhiệt độ cột: 300C
Tốc độ dòng: 1 ml/phút
Thể tích nạp cột: 50 µl
- Xây dựng được quy trình xử lý mẫu xác định sibutramine trong mẫu thực phẩm chức năng giảm béo:
+ Sử dụng dung môi chiết là methanol + Thời gian chiết mẫu là 20 phút
+ Loại béo bằng dung môi n-hexan (acid hoá bằng HCl) - Phương pháp xây dựng đã được thẩm định qua các thông số:
+ Độ đặc hiệu, độ chọn lọc đáp ứng tốt + Giới hạn phát hiện LOD = 0,2 µg/ml + Giới hạn định lượng LOQ là 0,5 µg/ml
+ Độ lặp lại và độ thu hồi đáp ứng yêu cầu của AOAC.
- Phân tích 34 mẫu thực phẩm chức năng giảm béo, phát hiện 11 mẫu có chứa chất cấm sibutramine.
Từ các kết quả thu được cho thấy phương pháp HPLC là phù hợp để xác định sibutramine trong mẫu thực phẩm chức năng giảm béo.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt
1. Trần Tử An và cộng sự. (2007), Hóa phân tích- tập 2- Phân tích dụng cụ,
Nhà xuất bản Y học, Hà Nội.
2. Trần Tử An và cộng sự. (2010), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất bản Y
học, Hà Nội.
3. Trần Cao Sơn và cộng sự. (2010), Thẩm định phương pháp trong phân
tích hóa học & vi sinh vật, Nxb Khoa Học và Kỹ Thuật.
4. Bộ Y Tế, Quyết định số 120/QĐ-QLD: Quyết định về việc rút số đăng ký thuốc do thông tin về phản ứng có hại.
Tài liệu tiếng Anh
5. Aceves-Hernández Juan M., Inés Nicolás Vázquez , Jaime Hinojosa- Torres, Guillermo Penieres Carrillo , Gabriel Arroyo Razo, René Miranda Ruvalcaba (2013), “Sibutramine characterization and solubility, a
theoretical study”, Journal of Molecular Structure 1038, 163–169.
6. Ancuceanu R., Mihaela Dinu, Corina arama, “Weight loss food supplements: Adulteration and multiple quality issus in two products of
Chinese origin”, Farmacia (2013), Vol.61(1), 28-42.
7. Ariburnu Etil, Mehmet Fazli Uludag, Huseyin Yalcinkaya, Erdem Yesilada (2012), “Comparative determination of sibutramine as an adulterant in natural slimming products by HPLC and HPTLC
densitometry ”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 64–
65 (2012) 77– 81.
8. Bailey C.J., Turner S.H., Jones R.B (2000). “Sibutramine metabolites
increase glucose transport by cultured rat muscle cells”, International
Journal of Obesity (2001), 25, 478-485.
9. Blachut D., A.Siwinska-Ziolkowska, B.Szukalski, K.Wojtassiewicz, Z. Czarnocki, A.Kobylecka, M. Bykas-Strekowska (2007), “Identification of N-desmethylsibutramine as a new ingredient in Chinese herbal dietary
supplements”, Problems of Forensic Sciences LXX , 225–235.
10.Jun Chen, Wei Lu, Qizhi Zhang, Xinguo Jiang (2002), “Determination of the active metabolite of sibutramine by liquid chromatography-
electrospray ionization tandem mass spectrometry”, Journal of
Chromatography B, 785(2003) 197-203.
11.Colectta D.K, Bates S.H., Jones R.B., Bailey C.J. “The sibutramine metabolite M2 improves muscle glucose uptake and reduces hepatic
glucose output: preliminary data”, Diabetes Vasc Dis Res (2006), 3, 186-
188.
12.European Medicines Agency (EMEA), EMEA recommends suspension of marketing authorizations for sibutramine.
(http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Press release/2010/01/WC500069995.pdf).
13.FDA,http://www.fda.gov/downloads/Drugs/DrugSafety/PublicHealthAdvi sories/UCM130745.pdf
14.FDA, Phenylpropanolamin information page.
(http://www.fda.gov/drugs/drugsafety/informationbydrugclass/ucm150738 .htm)
15. FDA announces withdrawal of fenfluramine and dexfenfluramine.
(http://www.fda.gov/Drugs/DrugSafety/PostmarketDrugSafetyInformation forPatientsandProviders/ucm179871.htm).
16. FDA, Meridia (sibutramine): Market Withdrawal Due to Risk of Serious Cardiovascular Events.
(http://www.fda.gov/safety/medwatch/safetyinformation/safetyalertsforhu manmedicalproducts/ucm228830.htm).
17.The FDA August 2010 drugs safety update.
(http://www.fda.gov/Safety/MedWatch/SafetyInformation/ucm225956.ht m).
18.Lu Feng, Li Shu, Le Jian, Chen Guiliang, Cao Yan, Qi Yunpeng, Chai Yifeng, Wu Yutian (2007), “A new method for testing synthetic drugs
adulterated in herbal medicines based on infrared spectroscopy”, Analytica
Chimica Acta 589, 200-207.
19.Guyton A.C., Hall J.E. (2006), Textbook of Medical Physiology, eleventh
20.Julia Jung, Maren Hermanns-Clausen, Wolfgang Weinmann (2006), “Anorectic sibutramine detected in Chinese herbal drug for weight loss”,
Forensic Science International 161 (2006) 221-222.
21.Luque Carla A., Rey Jose A., (2001), “The discovery and status of
sibutramine as an anti-obesity drug”, European Journal of Pharmacology,
440 (2002) 119-128.
22.Sabina Strano-Rossi, Cristiana Colamonici and Francesco Botre (2006), “Detection of sibutramine administration: a gas chromatography/ mass spectrometry study of the main urinary metabolite”, Rapid communications in Mass spectrometry (2007) 79-88.
23.Suthar A.P., Dubey S.A. and Patel S.R., “A validated Specific Reverse Phase Liquid Chromatographic Method for the estimation of Sibutramine Hydrochloride Monojydrate in bulk drug and capsule dosage forms”,
International Journal of Chemtech Research, Vol.1, No.4, 793-801.
24.Scheen André j. et al, “Sibutramine on Cardiovascular Outcome”,
Diabetes Care vol. 34, 114-119.
25.World Health Organization (WHO), 2010. Obesity and overweight (http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs311/en/index.html).
26.Zhou Yu, Qiang Wei, Qingsheng Fan, and Chunhua Wan (2010), “A simple and convenient method for simultaneous determination of four
major species of illegal additives in slimming health food”, Journal of
Liquid Chromatography & Related Technologies 33, 452–461.
27.Ying Shi, Chengjun Sun, Bo Gao, Aimin Sun (2011) “Development of a
liquid chromatography tandem mass spectrometry method for simultaneous determination of eight adulterants in slimming functional foods” Advanced Food Analysis, Pages 7655–7662
28. Sabina Strano-Rossi, Sara Odoardi, Erika Castrignanò, Giovanni
Serpelloni, Marcello Chiarotti (2014) “Liquid chromatography–high
resolution mass spectrometry (LC–HRMS) determination of stimulants, anorectic drugs and phosphodiesterase 5 inhibitors (PDE5I) in food supplements” Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis
PHỤ LỤC
Phụ lục A: Quy định của AOAC về độ lặp lại và độ thu hồi
Phụ lục A1. Độ lặp lại tối đa chấp nhận tại các nồng độ khác nhau
TT Hàm lượng % Tỷ lệ chất Đơn vị RSD (%) 1 100 1 100% 1,3 2 10 10-1 10% 1,8 3 1 10-2 1% 2,7 4 0,1 10-3 0,1% 3,7 5 0,01 10-4 100ppm 5,3 6 0,001 10-5 10ppm 7,3 7 0,0001 10-6 1 ppm 11 8 0,00001 10-7 100ppb 15 9 0,000001 10-8 10ppb 21 10 0,0000001 10-9 1ppb 30
Phụ lục A2. Độ thu hồi chấp nhận ở các nồng độ khác nhau theo AOAC
TT Hàm lượng (%) Tỷ lệ chất Đơn vị Độ thu hồi (R%)
1 100 1 100% 98-102 2 10 10-1 10% 98-102 3 1 10-2 1% 97-103 4 0,1 10-3 0,1% 95-105 5 0,01 10-4 100ppm 90-107 6 0,001 10-5 10ppm 80-110 7 0,0001 10-6 1 ppm 80-110 8 0,00001 10-7 100ppb 80-110 9 0,000001 10-8 10ppb 60-115 10 0,0000001 10-9 1ppb 40-120
Phụ lục B: Sắc ký đồ khảo sát loại béo mẫu thực phẩm chức năng
Sắc ký đồ phân tích mẫu trắng TPCN nang mềm chưa loại béo
Hình 3.18. Sắc ký đồ phân tích mẫu trắng TPCN nang mềm đã loại béo
Hình 3.17. Sắc đồ mẫu trắng TPCN nang mềm thêm chuẩn sibutramine 200 µg/ml loại béo bằng n-Hexan
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 m in -500 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000m AU225nm ,4nm (1.00) 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 m in -500 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 m AU 225nm ,4nm (1.00) 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 min -20 -10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 mAU 225nm,4nm (1.00) /1 4. 61 9/ 84 17 11
Hình 3.19. Sắc ký đồ mẫu trắng TPCN nang mềm thêm chuẩn sibutramine 200 µg/ml loại béo bằng n-Hexan (H+)
Hình 3.18. Sắc đồ mẫu trắng TPCN nang mềm thêm chuẩn sibutramine 200 µg/ml loại béo bằng diethyl ether
Hình 3.20. Sắc đồ mẫu trắng TPCN nang mềm thêm chuẩn sibutramine 200 µg/ml loại béo bằng diethyl ether (H+)
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 min -25 0 25 50 75 100 125 150 175 200 mAU 225nm,4nm (1.00) /15 .10 2/1 01 17 87 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 m in -25 0 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 m AU 225nm ,4nm (1.00) /15 .24 9/1 04 82 46 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 m in -25 0 25 50 75 100 125 150 175 m AU 225nm ,4nm (1.00) /14 .77 8/8 53 92 4
Phụ lục C: Sắc ký đồ của một số mẫu thực tế 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 min -500 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000m AU225nm,4nm (1.00)
Sắc ký đồ mẫu thực phẩm chức năng giảm béo NM01 không chứa sibutramine 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 min -25 0 25 50 75 100 125 150 175 200 mAU 225nm ,4nm (1.00) /1 5. 10 2/ 10 11 78 7
Sắc ký đồ mẫu thực phẩm chức năng giảm béo NM01 thêm chuẩn sibutramine 200µg/ml 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 m in -25 0 25 50 75 100 125 150 175 200 mAU 225nm ,4nm (1.00) /14 .03 2/8 26 82 9
Sắc ký đồ mẫu thực phẩm chức năng giảm béo NC01 thêm chuẩn sibutramine 200µg/ml
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 m in 0 250 500 750 1000 1250 mAU 225nm ,4nm (1.00)
Sắc ký đồ mẫu thực phẩm chức năng giảm béo NC04
Sắc ký đồ mẫu thực phẩm chức năng giảm béo NC07
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min 0 50 100 150 mAU 225nm,4nm (1.00) /1 4 .2 9 0 /2 5 0 1 2 9 3