Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu của vacxin nhược độc gumboro sản xuất tại xí nghiệp thuốc thu y trung ương

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NHƯỢC ðỘC GUMBORO SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.64.0101 Người hướng dẫn khoa học: TS. TRẦN THỊ LAN HƯƠNG HÀ NỘI - 2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu do chính tôi thực hiện. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược công bố trong bất kì công trình nào khác. Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Mọi sự giúp ñỡ cho việc thực hiện luận văn này ñã ñược cảm ơn. Hà Nội, tháng 12 năm 2012 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Phương Thảo Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CÁM ƠN ðể hoàn thành luận văn này ngoài sự cố gắng của bản thân tôi luôn nhận ñược sự quan tâm và giúp ñỡ của nhà trường, bạn bè ñồng nghiệp. Trước tiên tôi xin chân thành cám ơn sự giúp ñỡ quý báu của các thầy cô giáo bộ môn Vi sinh vật Truyền nhiễm, các thầy cô giáo khoa Thú y, khoa Sau ðại học - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội ñã dành nhiều thời gian và công sức giúp ñỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện ñề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Trần Thị Lan Hương, người ñã tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn cho tôi trong quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn. Nhân ñây cho tôi gửi lời cảm ơn tới Ban lãnh ñạo Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương, tập thể các ñồng nghiệp Phòng Kiểm nghiệm siêu vi trùng - là nơi tôi công tác, cùng gia ñình và bạn bè ñã tạo ñiều kiện giúp ñỡ ñộng viên tôi hoàn thành chương trình học tập cao học và hoàn thành Luận văn tốt nghiệp. Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng12 năm 2012 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Phương Thảo Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các từ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii 1 MỞ ðẦU 1 1.1 Tính cấp thiết của ñề tài . 1 1.2 Mục ñích của ñề tài 2 1.3 Ý nghĩa thực tiễn của ñề tài: 2 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Giới thiệu chung về bệnh Gumboro 3 2.2 Miễn dịch chống bệnh Gumboro 20 2.3 Vacxin và vacxin phòng bệnh Gumboro 26 3 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 3.1 ðối tượng nghiên cứu 35 3.2 Nội dung nghiên cứu 35 3.3 Nguyên liệu 35 3.4 Phương pháp nghiên cứu 36 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 44 4.1 Kết quả kiểm tra một số chỉ tiêu kỹ thuật của vacxin nhược ñộc Gumboro sản xuất tại Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương 44 4.2 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu thuần khiết của vacxin nhược ñộc Gumboro sản xuất tại Xi nghiệp thuốc thú y trung ương 44 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 4.2.1 Kết quả kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn, nấm của vacxin nhược ñộc Gumboro 44 4.2.2 Kết quả kiểm tra tạp nhiễm virus Newcastle với vacxin nhược ñộc Gumboro 46 4.3 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhược ñộc Gumboro 48 4.4 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin nhược ñộc Gumboro (bằng xác ñịnh hiệu giá virus TCID50/liều vacxin). 53 4.5 Kết quả kiểm tra thời gian bảo quản vacxin nhược ñộc Gumboro sau khi lưu kho ở nhiệt ñộ 2oC ñến 8oC. 56 4.6 Kết quả ñánh giá khả năng miễn dịch của gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro 60 4.6.1 Kết quả xác ñịnh hàm lượng kháng thể Gumboro của gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro lần 1 60 4.6.2 Kết quả xác ñịnh hàm lượng kháng thể Gumboro của gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro lần 2 62 5 KẾT LUẬN 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ARN : Axit Ribonucleic CPE : Cytopathic pathogene effect ðC : ðối chứng EID 50 : 50 percent Embryo Infective Dose ELISA : Enzyme linked immunosorbent assay HA : Hemagglutination test HI : Hemagglutination Inhibition HGKT : Hiệu giá kháng thể IBDV : Infectious Bursal Disease virus NXB : Nhà xuất bản OIE : World Organisation for Animal Health TN : Thí nghiệm TCID 50 : Tissue Culture Infectious Dose 50 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu thuần khiết của vacxin nhược ñộc Gumboro 45 4.2 Kết quả kiểm tra vacxin nhược ñộc Gumboro tạp nhiễm virus Newcastle 47 4.3 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhược ñộc Gumboro bằng xác ñịnh ñáp ứng miễn dịch của gà sau khi sử dụng vacxin Lasota 49 4.4 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhược ñộc Gumboro qua biểu hiện bệnh lý của bệnh Gumboro trên gà 52 4.5 Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin nhược ñộc Gumboro bằng xác ñịnh hiệu giá virus TCID50/liều vacxin 55 4.6 Kết quả kiểm tra thời gian bảo quản vacxin nhược ñộc Gumboro sau khi lưu kho ở nhiệt ñộ 2oC – 8oC 57 4.7 Kết quả kiểm tra lượng kháng thể Gumboro của ñàn gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro lần ñầu 61 4.8 Kết quả kiểm tra lượng kháng thể Gumboro của ñàn gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro lần 2 63 4.9 Kết quả kiểm tra lượng kháng thể Gumboro của ñàn gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro lần 2 ñược 7 tuần 64 4.10 Tổng hợp kết quả kiểm tra lượng kháng thể Gumboro của ñàn gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro lần 1 và 2 65 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 4.1 Kết quả kiểm tra hàm lượng kháng thể Newcastle của gà sau khi sử dụng vacxin Lasota 51 4.2 Kết quả kiểm tra hiệu giá virus nhược ñộc Gumboro TCID 50 /liều vacxin sau khi lưu kho ở nhiệt ñộ 2 o C – 8 o C 59 4.3 Hiệu giá kháng thể Gumboro của ñàn gà sau khi dùng vacxin nhược ñộc Gumboro lần 1 và 2 66 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 1 1. MỞ ðẦU 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài . Trong cơ chế thị trường hiện nay, ngành chăn nuôi gia cầm, ñặc biệt là chăn nuôi gà phát triển ñáng kể. Nhiều giống gà mới cho năng suất trứng, thịt cao với chất lượng thơm ngon, bổ dưỡng ñã ñược nhập vào nước ta nhằm ñáp ứng nhu cầu và thị hiếu của người tiêu dùng. Tuy nhiên công tác thú y và chăm sóc sức khoẻ ñàn gà lại phải ñối mặt với nhiều thách thức mới. Nhiều bệnh truyền nhiễm gia cầm ñã xuất hiện, một trong những bệnh thường xảy ra gây thiệt hại không nhỏ cho người chăn nuôi phải kể ñến ñó là bệnh Gumboro. Những năm của thập kỷ 80, bệnh Gumboro xảy ra nhiều ở gà 3 - 6 tuần tuổi với những triệu chứng lâm sàng và bệnh tích ñiển hình, nhưng sang thập kỷ 90 bệnh Gumboro ở nước ta lại diễn biến phức tạp hơn, gà dưới 2 tuần tuổi và sau 9 tuần tuổi cũng mắc bệnh, ñồng thời bệnh xảy ra ở những ñàn gà chăn nuôi theo lối công nghiệp cũng như các ñàn gà nuôi trong các hộ gia ñình. Gumboro là một bệnh truyền nhiễm cấp tính của gà, do virus gây ra. Bệnh gây thiệt hại không chỉ ở tỷ lệ chết mà ñặc biệt là gây ra tình trạng suy giảm miễn dịch. Sự suy giảm miễn dịch chủ yếu là do mầm bệnh tấn công trực tiếp vào túi Fabricius - cơ quan sản sinh miễn dịch dịch thể ở gia cầm, từ ñó làm cho gia cầm giảm hoặc mất khả năng ñáp ứng miễn dịch ñối với nhiều loại vacxin phòng bệnh khác như: Newcastle, Marek Cho tới nay chưa có thuốc ñiều trị ñặc hiệu. Tiêm phòng bằng vacxin là một trong những biện pháp phòng bệnh có hiệu quả. Hiện nay có rất nhiều loại vacxin phòng bệnh Gumboro ñược sản xuất và lưu hành trên thị trường Việt Nam. Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương cũng ñã và ñang sản xuất vacxin nhược ñộc Gumboro cho kết quả phòng bệnh tốt. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 2 Theo quy ñịnh, bất cứ một loại vacxin nào trước khi xuất xưởng lưu hành trên thị trường ñều phải tiến hành kiểm tra các chỉ tiêu: an toàn, vô trùng, hiệu lực. Ngoài ra việc phải xác ñịnh ñược thời gian bảo quản thích hợp và xây dựng ñược lịch tiêm phòng cho gia cầm hợp lý là việc rất cần thiết. Do vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu của vacxin nhược ñộc Gumboro sản xuất tại Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương”. 1.2. Mục ñích của ñề tài - Xác ñịnh ñược một số chỉ tiêu của vacxin nhược ñộc Gumboro sản xuất tại Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương về: thuần khiết, an toàn, hiệu lực, thời gian bảo quản và khả năng miễn dịch của ñàn gà với vacxin. 1.3. Ý nghĩa thực tiễn của ñề tài: Kết quả nghiên cứu của ñề tài ñưa ra ñược các thông tin cần thiết trong sản xuất và bảo quản vacxin nhược ñộc Gumboro và là cơ sở khoa học trong việc lựa chọn vacxin dùng phòng bệnh Gumboro cho ñàn gà con ñạt hiệu quả cao. [...]... nguyên ñ c hi u type (TS =Type Specific) +/ Kháng nguyên trung hoà: Kháng nguyên trung hoà n m v b c virus và tham gia vào ph n ng trung hoà Kháng nguyên trung hoà ch y u do lo i protein ñ c hi u type (TS =Type Specific ) ñ m nhi m Kháng nguyên ñ c hi u type là m t ph c h p bao g m nhi u protein k t h p, trong ñó có protein quy t ñ nh tính g y b nh c a virus, do v y trong mi n d ch b o h , quá trình trung. .. nguyên khác nhau, nên trong bào ch vacxin trư c tiên ph i làm sao cho ñáp ng mi n d ch ch ng l i nh ng nhóm quy ñ nh kháng nguyên thi t y u, nghĩa là n u ñánh vào ñó thì y u t g y b nh b tiêu di t ho c ít ra cũng không còn kh năng g y h i n a Vì th , trong nghiên c u s n xu t vacxin hi n nay ngư i ta ñang có nh ng c g ng phân l p nh ng kháng nguyên hay nhóm quy ñ nh kháng nguyên thi t y u ñ làm cho vacxin. .. quy t ñ nh kháng nguyên c a y u t g y b nh, cơ th s d ng vacxin xu t hi n tr ng thái mi n d ch thu ñư c ch ñ ng nhân t o có kh năng ch ng l i s xâm nhi m c a y u t g y b nh tương ng * ð c tính cơ b n c a vacxin Vacxin ph i ñ m b o 4 ñ c tính cơ b n sau: - Tính sinh mi n d ch hay tính m n c m ðó là kh năng g y ra ñáp ng mi n d ch d ch th ho c t bào hay c hai Tính sinh mi n d ch ph thu c vào kháng nguyên... là Serotype 1 và Serotype 2 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 10 Serotype 1 thư ng g y b nh cho gà nhà, Serotype 2 thư ng g y b nh cho gà t y Gi a 2 Serotype cũng có s khác bi t v tính kháng nguyên và ngay trong cùng m t Serotype thì tính kháng nguyên cũng khác nhau Gi a các bi n ch ng c a Serotype 1 và các ch ng g c trong Serotype n y ch có tương ñ ng... quan lympho trung tâm (túi Fabricius) T i ñ y chúng ñư c bi t hoá thành các t bào lympho B Sau ñó chúng di t n ñ n các cơ quan ngo i biên như lách, th n, gan Các t bào lympho B khi b kháng nguyên kích thích l n ñ u, chúng phân chia bi t hoá thành các nguyên bào lympho B và ti p t c chuy n hoá thành các nguyên tương bào lympho B (plasmoblaste) và cu i cùng thành các tương bào (plasmocyt) Các tương... Gi i thi u chung v b nh Gumboro B nh Gumboro (b nh viêm túi huy t truy n nhi m - Infectious Bursal Disease-IBD) là m t b nh truy n nhi m c p tính gà nhưng ch y u là gà con 3-6 tu n tu i và gà t y B nh Gumboro do Birnavirus thu c h Birnaviridae g y ra Virus cư ng ñ c Gumboro t n công vào túi Fabricius và các cơ quan có th m quy n mi n d ch, g y hu ho i t bào lympho B, làm suy gi m mi n d ch gà B nh... ng n y sau khi g y nhi m virus 48-96 gi , virus g y h y ho i t bào: t bào co c m, bi n d ng ( Nguy n Như Thanh và c ng s , 2001) 2.1.2.4 C u trúc kháng nguyên: * Các ch ng virus Gumboro: Mc.Ferran và c ng s (1980) là ngư i ñ u tiên công b v các ch ng virus Gumboro phân l p châu Âu Theo tác gi thì t t c các lo i virus Gumboro ñ u thu c 2 Serotype ñó là Serotype 1 và Serotype 2 K t qu n y cũng tương... b o h qu n th Vacxin có hi u l c là vacxin g y ñư c mi n d ch m c ñ cao, di t ñư c m m b nh tương ng và b o v cơ th ñ ng v t b n v ng Tuy nhiên, hi u l c c a m t vacxin ph thu c vào nhi u y u t như b o qu n, v n chuy n và k thu t tiêm phòng Vì v y, ngư i ta ñã x y d ng m t môn khoa h c m i g i là Vacxin h c (Vaccinology) mà m c ñích là nghiên c u m i bi n pháp t lúc s n xu t ñ n lúc tiêu dùng ñ tăng... hi n kh năng g y suy gi m mi n d ch c a b nh Gumboro ñã làm tăng s quan tâm ñ n vi c kh ng ch b nh n y (Anderson, 1978), (Ajinkya, 1980) Năm 1980 Mc Ferran và c ng s ñã phát hi n ngoài virus Gumboro thu c Serotype 1 còn có virus Gumboro thu c Serotype 2, t ñó vi c phòng ch ng b nh Gumboro càng tr nên ph c t p hơn M t khác ngư i ta phát hi n thêm nh ng bi n ch ng c a virus Gumboro Serotype 1 trong vùng... quá trình trung hoà x y ra gi a kháng th v i kháng nguyên trung hoà ñ c hi u s vô hi u hoá tính g y b nh n y M t ñi u quan tr ng là hai lo i kháng nguyên ñ c hi u type và ñ c hi u nhóm cùng ñư c s n xu t như nhau và do v y khi ti p xúc v i h mi n d ch, chúng ñ u kích thích s n sinh kháng th trung hoà và k t t a theo m t t l thu n Như v y, c u trúc kháng nguyên c a virus Gumboro t p trung ph n capsid Các . kiểm tra một số chỉ tiêu kỹ thu t của vacxin nhược ñộc Gumboro sản xuất tại Xí nghiệp thu c thú y Trung ương 44 4.2 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu thu n khiết của vacxin nhược ñộc Gumboro sản xuất. xuất tại Xí nghiệp thu c thú y Trung ương . 1.2. Mục ñích của ñề tài - Xác ñịnh ñược một số chỉ tiêu của vacxin nhược ñộc Gumboro sản xuất tại Xí nghiệp thu c thú y Trung ương về: thu n khiết,. NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN NHƯỢC ðỘC GUMBORO SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHIỆP THU C THÚ Y TRUNG ƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP