3. đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.2. Phương pháp kiểm tra chỉ tiêu thuần khiết của vacxin nhược ựộc Gumboro ựông khô
Gumboro ựông khô
Áp dụng theo 10 TCN 161-92 Vacxin thú y Ờ Quy trình kiểm tra thuần khiết
3.4.2.1. Phương pháp kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn, nấm
Mẫu lô vacxin ựược lấy theo tiêu chuẩn ngành, sau ựó mẫu ựược hoàn nguyên trở lại bằng nước muối sinh lý vô trùng.
Bước 1: mỗi lô vacxin ựược kiểm tra trên các môi trường với số lượng như sau:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 37
- 2 ống ( hoặc ựĩa ) thạch máu - 2 ống môi trường yếm khắ - 2 ống môi trường thạch nấm
Bước 2: các môi trường trên ựược chế theo các quy trình thông dụng hoặc từ môi trường chế sẵn, ựể phát hiện ựược các vi khuẩn dung huyết, hiếu khắ, yếm khắ và nấm có trong vacxin.
Bước 3: lượng vacxin cấy kiểm tra bằng 1-2% dung tắch môi trường Bước 4: môi trường ựã cấy kiểm tra ựược theo dõi 7 ngày ở 37oC. Riêng môi trường thạch nấm ựể ở nhiệt ựộ phòng (25-30oC).
đọc kết quả:
Lô vacxin ựược xem là ựạt vô trùng khi không có vi khuẩn và nấm mọc.
3.4.2.2. Kiểm tra tạp nhiễm virus Newcastle
Phương pháp làm phản ứng ngưng kết hồng cầu - HA ( Hemagglutination test) ựể kiểm tra tạp nhiễm virus Newcastle trong vacxin nhược ựộc Gumborọ
Phản ứng ngưng kết hồng cầu ựược thực hiện trên tấm nhựa vi ngưng kết ( Microtiter plates) 96 lỗ, ựáy chữ U, dung tắch mỗi lỗ 0,1ml.
Phản ứng gồm các bước sau:
- Pha loãng virus vacxin nhược ựộc Gumboro theo các bậc pha loãng 1/2, 1/4, 1/8...
- Nhỏ 50 ộl hồng cầu gà 1% vào tất cả các lỗ virus ựã phạ Lắc nhẹ tấm nhựa, ựể ở nhiệt ựộ phòng (25oC) 20 phút.
- đối chứng:
+/ đối chứng dương: cho 50 ộl virus Newcastle ( Lasota) vào lỗ và 50 ộl hồng cầu gà 1%.
+/ đối chứng âm: cho 50 ộl nước muối sinh lý và 50 ộl hồng cầu gà 1% - Phản ứng dương tắnh:
Hồng cầu bị ngưng kết nằm rải ựều thành mảng ở ựáy lỗ.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 38
hồng cầu ( virus Newcastle). - Phản ứng âm tắnh:
Hồng cầu bị lắng xuống ựáy thành cục tròn, nước ở bên trên trong. Kết luận: vacxin nhược ựộc Gumboro không bị nhiễm virus gây ngưng kết hồng cầu ( virus Newcastle).