Xác định một số chỉ tiêu chất lượng và khả năng đáp ứng miễn dịch chống bệnh gumboro của vacxin đa giá ND IBD IB sản xuất tại xí nghiệp thuốc thú y trung ương

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI BÙI THỊ NGA MY XÁC ðỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG VÀ KHẢ NĂNG ðÁP ỨNG MIỄN DỊCH CHỐNG BỆNH GUMBORO CỦA VACXIN ðA GIÁ ND-IBD-IB SẢN XUẤT TẠI XÍ NGHIỆP THUỐC THÚ Y TRUNG ƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học : TS NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI – 2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là ñề tài nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực, do tôi khảo sát nghiên cứu, có sự giúp ñỡ của các ñồng nghiệp trong cơ quan và chưa từng ñược sử dụng ñể bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam ñoan, các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2012 Tác giả Bùi Thị Nga My Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CÁM ƠN Lời ñầu tiên, tôi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến Tiến sĩ Nguyễn Bá Hiên là thầy trực tiếp hướng dẫn ñã dành nhiều thời gian quý báu chỉ bảo tận tình, giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình nghiên cứu, học tập và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo Khoa Thú y, trường ðại học nông nghiệp Hà Nội ñã trang bị kiến thức cho tôi trong thời gian học tập tại lớp cao học Thú y khóa 19 của trường. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám ñốc Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương ñặc biệt là Phó giám ñốc - Tiến sĩ Nguyễn Hồng Minh và các anh chị, các bạn ñồng nghiệp trong phân xưởng vacxin virus ñông khô – Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương, chính là nơi tôi công tác, ñã tận tình giúp ñỡ tôi hoàn thành công việc trong quá trình học tập, nghiên cứu. Nhân dịp này, tôi muốn bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến những người thân trong gia ñình ñã luôn khuyến khích, ñộng viên cũng như chia sẻ những khó khăn với tôi trong quá trình học tập và hoàn thành luận văn của mình. Hà Nội, ngày tháng năm 2012 Tác giả luận văn Bùi Thị Nga My Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cám ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt và ký hiệu vi Danh mục bảng vii ðẶT VẤN ðỀ 1 1 Tính cấp thiết của ñề tài 1 2 Mục tiêu nghiên cứu : 2 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1 Một số hiểu biết về bệnh Newcastle, Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm ở gà. 3 1.1.1 Bệnh Newcastle 3 1.1.2 Bệnh gumboro. 10 1.1.3 Bệnh viêm phế quản truyền nhiễm ở gà 21 1.2 Một số hiểu biết về vacxin. 27 1.2.1 Khái niệm vacxin 27 1.2.2 ðặc tính cơ bản của vacxin 27 1.2.3 Yêu cầu ñối với một vacxin 28 1.2.4 Kiểm nghiệm vacxin thú y 29 1.2.5 Vacxin phòng bệnh Newcastle, Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm tại Việt Nam 34 2 NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Nội dung 36 2.2 Nguyên liệu 36 2.3 Thiết bị, máy móc 37 2.4 Phương pháp nghiên cứu 37 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 2.4.1 Phương pháp lấy mẫu 37 2.4.2 Phương pháp kiểm tra ñộ ẩm. 38 2.4.3 Phương pháp kiểm tra ñộ chân không. 38 2.4.4 Phương pháp kiểm tra vô trùng 39 2.4.5 Phương pháp kiểm tra an toàn. 39 2.4.6 Phương pháp kiểm tra hiệu lực. 39 2.4.7 Phương pháp công cường ñộc gà bằng virus Gumboro cường ñộc chủng CVL 52/70 40 2.4.8 Phương pháp công cường ñộc gà bằng virus Newcastle cường ñộc chủng VN91. 41 2.4.9 Phương pháp xác ñịnh hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin bằng phản ứng HI. 42 2.4.10 Phương pháp xác ñịnh hiệu giá kháng thể Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin bằng phản ứng ELISA 43 2.4.11 Phương pháp xử lý số liệu 45 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 46 3.1 Kết quả xác ñịnh chỉ tiêu chất lượng của các lô vacxin ña giá ND – IBD – IB sản xuất thử nghiệm. 46 3.1.1 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vật lý. 48 3.1.2 Kết quả kiểm tra vô trùng 50 3.1.3 Kết quả kiểm tra an toàn 52 3.2 Xác ñịnh chỉ tiêu hiệu lực của vacxin ña giá. So sánh hiệu quả bảo hộ của gà ñược sử dụng vacxin ñơn giá Newcastle chủng Lasota, ñơn giá Gumboro chủng 2512 và ña giá ND-IBD-IB bằng phương pháp thay thế và công cường ñộc. 54 3.2.1 Kết quả kiểm tra hiệu lực vacxin ña giá 54 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v 3.2.2 Kết quả so sánh hiệu quả bảo hộ của gà ñược sử dụng vacxin ñơn giá Newcastle chủng Lasota, ñơn giá Gumboro chủng 2512 và ña giá ND-IBD-IB bằng phương pháp thay thế và công cường ñộc. 65 3.3 Xác ñịnh ñộ dài miễn dịch chống bệnh Gumboro của gà sau khi sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB. 75 3.4 Xác ñịnh hiệu quả thử nghiệm vacxin ña giá ND-IBD-IB trên thực ñịa. 77 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 80 1 Kết luận 80 2 ðề nghị 80 CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CÓ LIÊN QUAN ðẾN ðỀ TÀI 81 TÀI LIỆU THAM KHẢO 82 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU IB Infectious bronchitis AGP Agar gel precipitation test ARN Acid ribonucleic BHK Baby hamster kidney CAM Chorioallantoic membrane CEK chick embryo kidney CEL chick embryo liver CK chick kidney CPE Cytopathic effect EID 50 50 percent Embrio Infective Dose S/P Sample value related to Positive value HA Haemagglutination HI Haemagglutination inhibition ICPI Intracerebral pathogenicity index IVPI Intravenous pathogenicity index M Membrain MDT Mean death time M41 Massachusetts – 41 N Nucleocapsid ND - IBD - IB Newcastle - Gumboro - Viêm phế quản truyền nhiễm PBS Phosphate buffered saline S Spike SN Serum neutralisation CID 50 50 percent Culture Infective Dose ts type-specific protein VP Viral protein Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 3.1 Kết quả kiểm tra ñộ ẩm và chân không của vacxin ña giá ND- IBD-IB sản xuất thử nghiệm. 48 3.2 Kết quả kiểm tra vô trùng các lô vacxin ña giá ND-IBD-IB sản xuất thử nghiệm 51 3.3 Kết quả kiểm tra tính an toàn các lô vacxin ña giá ND-IBD-IB sản xuất thử nghiệm 53 3.4 Kết quả công cường ñộc bằng virus Newcastle chủng VN91 cho gà sau khi sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB 55 3.5 Kết quả công cường ñộc virus Gumboro chủng CVL 52/70 cho gà ñã sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB 57 3.6 Kết quả xác ñịnh hàm lượng kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB 61 3.7 Kết quả xác ñịnh hiệu giá kháng thể Gumboro trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB. 63 3.8 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể IB trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB. 64 3.9 Kết quả so sánh hiệu quả bảo hộ của gà ñược sử dụng vacxin ñơn giá Newcastle chủng Lasota và vacxin ña giá ND-IBD-IB bằng phương pháp công cường ñộc. 66 3.10 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi dùng vacxin ñơn giá Newcastle chủng Lasota bằng phản ứng HI. 68 3.11 Kết quả so sánh tỷ lệ bảo hộ của gà ñược sử dụng vacxin ñơn giá Newcastle chủng Lasota và vacxin ña giá ND-IBD-IB 69 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… viii 3.12 Kết quả so sánh hiệu quả bảo hộ của gà ñược sử dụng vacxin ñơn giá Gumboro chủng 2512 và vacxin ña giá ND-IBD-IB bằng phương pháp công cường ñộc 71 3.13 Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể Gumboro trong huyết thanh của gà sau khi dùng vacxin ñơn giá Gumboro chủng 2512 bằng phản ứng ELISA 73 3.14 Kết quả so sánh tỷ lệ bảo hộ của gà ñược sử dụng vacxin ñơn giá Gumboro chủng 2512 và vacxin ña giá ND-IBD-IB 74 3.15 Kết quả xác ñịnh biến ñộng hiệu giá kháng thể Gumboro trong huyết thanh gà ñược sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB bằng phản ứng ELISA. 76 3.16 Kết quả theo dõi ñàn gà nuôi tại trại thực nghiệm sau khi sử dụng vacxin ña giá ND-IBD-IB 78 3.17 Kết quả xác ñịnh hiệu giá kháng thể trung bình chống bệnh Gumboro của ñàn gà nuôi tại trại thực nghiệm bằng phản ứng ELISA 79 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ix DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Cấu trúc hệ gen của virus Gumboro 15 3.2 Quy trình sản xuất vacxin ña giá nhược ñộc ñông khô ND-IBD-IB . 47 3.3 Biểu ñồ biểu diễn kết quả kiểm tra ñộ ẩm và ñộ chân không của vacxin ña giá ND-IBD-IB 49 3.4 Gà ñối chứng xác chết khô, lông xơ xác. 58 3.5 Gà ñối chứng bị xuất huyết cơ ñùi ở 66h 58 3.6 Gà ñối chứng ỉa phân trắng lẫn bọt 59 3.7 Hình ảnh túi Fabricius xuất huyết của gà ñối chứng ở 72h 59 3.8 Bệnh tích túi Fabricius của gà ñối chứng ở 72h 60 3.9 Biểu ñồ so sánh tỷ lệ bảo hộ ñối với bệnh Newcastle của gà sau khi sử dụng vacxin ñơn giá và ña giá 70 3.10 Biểu ñồ so sánh tỷ lệ bảo hộ ñối với bệnh Gumboro của gà khi sử dụng vacxin ñơn giá và ña giá. 74 3.11 Biến ñộng hiệu giá kháng thể Gumboro trong huyết thanh của gà các lô thí nghiệm 77 [...]... giá ND- IBD- IB s n xu t t i Xí nghi p thu c Thú y Trung ương 2 M c tiêu nghiên c u : - ðánh giá ñư c ch t lư ng c a vacxin ña giá s n xu t t i Xí nghi p thu c thú y Trung ương qua các ch tiêu vô trùng, an toàn, hi u l c - Xác ñ nh kh năng ñáp ng mi n d ch ch ng b nh Newcastle, Gumboro c a vacxin ña giá - T ñó giúp cơ s x y d ng và hoàn thi n ñư c m t quy trình s n xu t vacxin ña giá phòng ba b nh truy... Xí nghi p thu c thú y Trung ương ñã tri n khai nghiên c u s n xu t th nghi m vacxin ña giá phòng ba b nh Newcastle, Gumboro, Viêm ph qu n truy n nhi m gà và ñ ñánh giá ñư c ch t lư ng c a s n ph m thông qua t ng thành ph n vacxin ñơn giá có m t trong vacxin ña giá, chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Xác ñ nh m t s ch tiêu ch t lư ng và kh năng ñáp ng mi n d ch ch ng b nh Gumboro c a vacxin ña giá. .. 1.1.2 B nh gumboro B nh Gumboro hay còn g i là b nh viêm túi huy t truy n nhi m (Infectious Bursal Disease - IBD) là m t b nh truy n nhi m c p tính gà nhưng ch y u x y ra gà con 3-6 tu n tu i và gà t y B nh Gumboro do Birnavirus thu c h Birnaviridae g y ra Virus cư ng ñ c Gumboro t n công vào túi Fabricius và các cơ quan có th m quy n mi n d ch, g y hu ho i t bào lymphoB và ñ i th c bào, làm suy gi m mi... túi Fabricius, tuy n c (thymus), lách và các mô lympho, m ng Payer ru t, ch trong vòng vài gi ñ n vài ch c gi sau khi virus cư ng ñ c Gumboro xâm nh p vào cơ th Theo Müller và cs (1986) [69], có s t p trung c a ñ i th c bào và các t bào lympho trong vòng 4-5 gi sau khi g y nhi m qua ñư ng tiêu hóa và sau 11 gi xu t hi n nh ng t bào lympho b nhi m virus N u g y nhi m virus tr c ti p vào túi Fabricius... virus theo ñư ng tiêu hoá xâm nh p vào cơ th , qua niêm m c h u h ng r i vào máu g y huy t nhi m trùng Sau ñó m m b nh ñi vào h u h t các cơ quan t ch c c a cơ th g y ra viêm ho i t N i mô thành huy t qu n b phá ho i, g y xu t huy t làm thâm nhi m d ch th m xu t vào các xoang trong cơ th Virus tác ñ ng g y r i lo n tu n hoàn và tác ñ ng vào trung khu hô h p c a h th n kinh trung ương g y hi n tư ng khó... viêm não và c t s ng không có m , d y th n kinh ñ m, t bào bi u mô trương to M ch qu n: b xung huy t, phù thũng, xu t huy t, ch ng huy t kh i các mao m ch c a nhi u t ch c trong cơ th và thoái hóa, ho i t n i mô huy t qu n H lympho: ñ c trưng là s thoái hóa và bi n m t c a các mô lympho T bào lympho b phá h y ho c hình thành không bào mi n v và mi n t y c a lách và tuy n c Các t bào mi n t y túi Fabricius... trưng ðôi khi có xu t huy t d d y tuy n và d d y cơ, vì v y b nh Gumboro ñôi khi d nh m l n v i b nh Newcastle Tuy n t y có th xu t huy t l m ch m hay có nh ng ñám ho i t màu ghi xám Th n có th b sưng n ng, trên m t có mu i urat, tuy nhiên t l phát hi n th n r t th p (5%), tuy n c có xu t huy t ñi m hay m ng - B nh tích vi th Xu t hi n r t s m các cơ quan có c u trúc t t ch c lympho và các cơ quan t o mi... ng và b nh tích gi ng v i b nh Cúm gà ð c trưng c a b nh là viêm, xu t huy t và loét niêm m c ñư ng tiêu hóa V d ch Newcastle ñ u tiên x y ra vào năm 1926 Indonesia và nhiên ñã có nhi u báo cáo cho th y m t b nh tương t cũng ñã x y ra Anh tuy Trung Âu t trư c năm 1926 Năm 1927, Doyle ñã phân l p ñư c m m b nh trong d ch c a gà t i Newcastle (Anh) và ch ng minh virus phân l p ñư c có tính kháng nguyên... s n xu t và ng d ng vacxin Kh o sát v d ch t c a b nh (Nguy n Ti n Dũng, 1996) [22]; (Lê Văn Năm, 1997) [12]; phân l p giám ñ nh virus cư ng ñ c Gumboro và bi n ñ i b nh lý các cơ quan có th m quy n mi n d ch gà b nh (Nguy n Văn C m, 1999) [23]; xác ñ nh hàm lư ng kháng th Gumboro b ng ph n ng trung hoà virus (Nguy n Ti n Dũng và cs, 1993) [21]; giám ñ nh phân t và phân nhóm ph h virus g y b nh (Lê... t hi n nh ng t bào lympho b nhi m virus Sau 24 gi sau khi nhi m các t bào lympho trong túi Fabricius ñã b thoái hóa, các t bào lympho vùng t y c a nang ñã b t ñ u quá trình ho i t Virus t n công và phá h y các t bào lympho B non và lympho B trư ng thành, nên ch trong th i gian r t ng n lư ng t bào lympho B ñã gi m ñáng k Vào ng y th 3 ho c 4, do th y thũng, xung huy t và t p trung c a các t bào c . chống bệnh Gumboro của vacxin ña giá ND-IBD-IB sản xuất tại Xí nghiệp thuốc Thú y Trung ương 2. Mục tiêu nghiên cứu : - ðánh giá ñược chất lượng của vacxin ña giá sản xuất tại Xí nghiệp thuốc. BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI BÙI THỊ NGA MY XÁC ðỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG VÀ KHẢ NĂNG ðÁP ỨNG MIỄN DỊCH CHỐNG BỆNH GUMBORO CỦA VACXIN ðA GIÁ. của sản phẩm thông qua từng thành phần vacxin ñơn giá có mặt trong vacxin ña giá, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: Xác ñịnh một số chỉ tiêu chất lượng và khả năng ñáp ứng miễn dịch chống