2. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.9.Phương pháp xác ựịnh hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà sau khi sử dụng vacxin bằng phản ứng HI.
của gà sau khi sử dụng vacxin bằng phản ứng HI.
Sử dụng phản ứng ngưng kết hồng cầu gà (HA) ựể xác ựịnh sự có mặt của virus và phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI) ựể xác ựịnh hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh của gà.
2.4.9.1. Phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA)
Phương pháp:
- Nhỏ tuần tự vào mỗi giếng của ựĩa nhựa 96 giếng 25 ộl dung dịch muối sinh lý 0,9%.
- Nhỏ 25 ộl kháng nguyên virus Newcastle vào giếng ựầu tiên.
- Pha loãng theo cơ số 2 lượng 25 ộl virus kháng nguyên ngang qua ựĩa nhựa chuẩn ựộ.
- Nhỏ 25 ộl hồng cầu gà 1% vào mỗi giếng. Trộn ựều ựĩa nhựa bằng cách lắc nhẹ nhàng và ựể trong 40 phút ở 4ồC.
- Trong quá trình tiến hành phản ứng có một dãy ựối chứng hồng cầu (chỉ có nước muối sinh lý và hồng cầu).
đọc kết quả: Kết quả ựược ựọc qua kắnh chuẩn ựộ chuyên dụng hoặc bằng cách nhìn nghiêng tấm nhựa chuẩn ựộ.
+ Phản ứng dương tắnh: Hồng cầu ngưng kết thành những hạt lấm tấm màu ựỏ rải ựều ở ựáy giếng của ựĩa nhựa chuẩn ựộ.
+ Phản ứng âm tắnh: Hồng cầu không bị ngưng kết lắng xuống ựáy giếng và tập trung thành một cục máu tròn ựỏ ở chắnh giữa ựáy giếng.
độ pha loãng virus lớn nhất mà tại ựó vẫn có hiện tượng ngưng kết hồng cầu thì ựược tắnh là 1 ựợn vị HA = 1HAU
2.4.9.2. Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI).
Phản ứng HI ựược sử dụng thường quy trong chẩn ựoán và kiểm soát sự ựáp ứng miễn dịch của Vacxin Newcastle.
Phương pháp:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 43 - Nhỏ 25 ộl dung dịch muối sinh lý 0,9% vào mỗi giếng của ựĩa nhựa 96
giếng.
- Nhỏ 25 ộl huyết thanh vào giếng ựầu tiên của ựĩa. - Pha loãng huyết thanh theo cơ số 2.
- Nhỏ vào mỗi giếng 25 ộl kháng nguyên virus có chứa 4 ựơn vị HA, lắc ựều và ựể yên trong 30 phút.
- Nhỏ vào mỗi giếng 25 ộl hồng cầu gà 1%, lắc nhẹ nhàng và ựể yên trong 40 phút.
- Trong quá trình tiến hành phản ứng, ựể một dãy làm ựối chứng âm (chỉ có virus và hồng cầu) và một dãy làm ựối chứng dương (chỉ có nước muối sinh lý và hồng cầu).
đọc kết quả: Kết quả ựược ựọc qua kắnh chuẩn ựộ chuyên dụng hoặc bằng cách nhìn nghiêng tấm nhựa chuẩn ựộ.
+ Phản ứng dương tắnh: Hồng cầu lắng xuống ựáy giếng thành cục tròn ựỏ giống giếng ựối chứng dương.
+ Phản ứng âm tắnh: Hồng cầu bị ngưng kết thành những hạt lấm tấm màu ựỏ giống giếng ựối chứng âm.
Hiệu giá HI là sự pha loãng cao nhất của huyết thanh gây ra sự ngăn trở ngưng kết hồng cầu hoàn toàn của 4 ựơn vị HA kháng nguyên.