Nghiên cứu kiểm nghiệm một số dược liệu mang tên sâm bằng phương pháp hiển vi

Theo đánh giá sơ bộ, ngoài Nhân sâm, có khoảng 40 loại dược liệu cũng mang tên Sâm với các tác dụng khác nhau, vì thế trong khi sử dụng không tránh khỏi nhầm lẫn.. Xuất phát từ thực tế t

BỘ Y TÊ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

NGHIÊN c ú u KIỂM NGHIỆM MỘT s ố

DƯỢC LIỆU MANG TÊN SẢM

BẰNG PHƯƠNG PHÁP HIEN VI

KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ ĐẠI HỌC KHOÁ 1995-2000

Người thực hiện: Nguyễn Thị Phương Lan

Người hướng dẫn: TS Nguyễn Viết Thân

PGS.TS Nguyễn Kim c ẩ n

Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu

Thời gian thực hiện: 3/2000 - 5/2000

HÀ NỘI - 5.2000

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới các thầy TS Nguyễn Viết Thân, PGS.PTS Nguyễn Kim Cẩn đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ em hoàn thành luận văn tốt nghiệp này.

Em xin chân thành cảm ơn DS Thái Nguyễn Hùng Thu cùng các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên bộ môn Dược liệu đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo điều kiện để em hoàn thành luận văn đúng thời hạn.

Cuối cùng em xin bày tợ lỏng biết ơn tới tất cả các thầy cô giáo đã dạy bảo em trong suốt năm năm học qùa.

Hà Nội 201512000.

Sinh viên

t /pỳu yển 3ÏU Ỉỹíu ỉcln ỹ ỉ£ a n

M Ụ C L Ụ C

1 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 2

PHẦN I

ĐẶT VẤN ĐỂ

Từ xa xưa, ông cha ta đã biết sử dụng nguồn cây cỏ quí giá của đất nước để phòng và chữa bệnh Trải qua hàng ngàn năm lịch sử, từ thế hệ này truyền lại cho thế hệ khác, đến nay dược liệu và các sản phẩm có nguồn gốc

từ thực vật vẫn được sử dụng rộng rãi, mặc dù nền công nghiệp hoá dược phát triển rất mạnh sản xuất ra nhiều thuốc mới có tác dụng tốt Trong các loại dược liệu, Nhân Sâm là một vị thuốc quí, đây là vị thuốc có tác dụng bồi bổ khí lực tăng cường sức khoẻ và kéo dài tuổi thọ, vì thế đông y đã coi

Nhân sâm là vị thuốc đứng đầu các vị thuốc bổ theo thứ tự sâm, nhung, quế,

phụ Do tác dụng như vậy nên một số cây thuốc có tác dụng bổ được gọi là

Sâm Theo đánh giá sơ bộ, ngoài Nhân sâm, có khoảng 40 loại dược liệu cũng mang tên Sâm với các tác dụng khác nhau, vì thế trong khi sử dụng không tránh khỏi nhầm lẫn

Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi tiến hành khoá luận: "Nghiên cứu kiểm nghiệm một số dược liệu mang tên Sâm bằng phương pháp hiển vi" với mục tiêu là:

1 Phân biệt một số dược liệu mang tên Sâm bằng phương pháp hiển vi.

2 Nghiên cứu một sô mẫu dược liệu mang tên Sâm để bổ sung tư liệu và

góp phần vào việc thành lập các chuyên luận kiểm ngiệm chúng vê mặt hiển vù

PHẦN II

TỔNG QUAN

Để thuận tiện cho việc theo dõi và tránh lặp lại, chúng tôi sẽ trình bày

phần tổng quan theo từng phần tương ứng với từng vị dược liệu

PHẦN III

THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ

1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu

1.1 Nguyên liệu:

Trong luận văn này, chúng tôi tiến hành nghiên cứu các dược liệu

mang tên Sâm sau:

1 Huyền sâm: Scrophularia ningpoensis Hemsl., họ Hoa mõm chó

ịScrophulariaceae).

2 Đảng sâm: Codonopsis sp., họ Hoa chuông (Campanulaceae).

3 Đan sâm: Salvia miltiorrhiza Bunge, họ Hoa môi (Lamiaceae).

4 Sâm cau: Curculigo orchioides Gaeitn., họ Sâm cau (Hypoxidaceae).

1.2 Phương pháp nghiên cứu:

Chúng tôi tiến hành quan sát đặc điểm hình thái bên ngoài và nghiên

cứu cấu tạo giải phẫu, bột của từng vị dược liệu

Với mỗi dược liệu tiến hành theo các bước sau:

1.2.1 Thu mẫu và bảo quản:

- Dược liệu khố mua ở các cửa hàng bán cho người bệnh và cho các

cơ sở sản xuất được sấy cho vào túi P.E, đóng kín để nơi khô ráo Riêng với

Sâm cau là rễ lấy từ cây tươi, để thuận tiện cho việc bảo quản, mẫu được cắt thành từng đoạn và ngâm trong hỗn hợp cồn: glycerin: nước (1:1:1).

1.2.2 Quan sát đặc điểm hình thái:

Dược liệu được quan sát bằng mắt thường về hình dạng kích thước, màu sắc, thể chất

1.2.3 Nghiên cứu cấu tạo giải phẫu:

- Tiến hành cắt bằng máy cắt mỏng cầm tay

- Sau đó các lát cắt được xử lý theo trình tự:

Tẩy sáng:

* Ngâm hoặc đun các lát cắt trong dung dịch cloramin 5-10% khoảng hai đến năm phút từ lúc sôi, tuỳ từng trường hợp

* Rửa bằng nước cất nhiều lần đến hết cloramin

* Ngâm trong dung dịch axit acetic 10% trong khoảng năm phút

* Rửa lại bằng riiĩớc cất đến hết axit

Nhuộm bằng phương pháp nhuộm kép thông thường với đỏ son phèn

và xanh metylen.

* Các lát cắt sau khi rửa hết axit acetic, nhuộm đỏ son phèn

* Rửa lại bằng nước cất đến khi nước rửa không còn màu hồng

* Nhuộm xanh bằng xanh metylen

* Rửa lại bằng nước cất đến khi nước rửa không còn màu xanh

Thời gian nhuộm tuỳ thuộc vào tính chất bắt màu của mỗi dược liệu

Loại nước:

Vi phẫu cần được loại hết nước trước khi cố định

* Các lát cắt được khử nước từ từ với cồn có độ cồn tăng dần 20°, 30°,80°, 90°, sau đó là cồn tuyệt đối.

* Rửa xylen nguyên chất ba lần

Lên kính:

* Nhỏ lên phiến kính một giọt bôm canada (đã được pha loãng trong xylen)

* Đặt vi phẫu vào giữa giọt bôm và đậy lá kính

* Để tiêu bản ỏ' nơi thoáng mát một đến hai tuần

* Tiêu bản đã khô được đưa lên kính hiển vi quan sát, mô tả các đặc điểm giải phẫu

Chụp ảnh:

Vi phẫu được chụp ảnh bằng hệ thống kính hiển vi chụp ảnh với các

độ phóng đại khác nhau tuỳ từng trường hợp cụ thể

♦ Bột dược liệu:

- Dược liệu được rửa sạch, đem sấy khô và nghiền thành bột Quan sát bằng mắt thường màu sắc của bột, nếm, ngửi, để nhận biết mùi vị từng bột

- Lên tiêu bản Thường dùng nước để lên tiêu bản bột dược liệu, đôi khi có thể dùng thêm cloranhydrat 10%, glycerin: nước (1:1)

- Quan sát các đặc điểm của bột bằng kính hiển vi Mô tả các đặc điểm đó

- Chụp ảnh bột dược liệu bằng hệ thống kính hiển vi chụp ảnh với các

độ phóng đại khác nhau tuỳ từng trường hợp cụ thể

2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM

2.1 Huyền sâm:

Dược liệu là rễ cây Huyền sâm (Scrophularia ningpoensis HemslJ,

họ Hoa mõm chó (Scrophulariaceae) [3].

Còn có tên gọi khác QuảnỄíg huyền sâm, Nguyên sâm, Hắc sâm, Ô

nguyên sâm Phân bố chủ yếu ở các huyện Đông Dương, Tiêu Cư, Đông

Hương Loài này có sản xuất ở các tỉnh Sơn Đông, Hồ Bắc, Giang Tây,

Thiểm Tây,Quí Châu, Cát Lâm, Liêu Ninh Cây thảo cao l,5-2m, thân có

bốn cạnh, màu lục, có rãnh dọc Lá mọc đối, hình trứng, đầu nhọn, mép có

răng cưa, dài 3-8cm, rộng l,5-2cm Hoa màu tím nâu, có bốn nhị mọc

thành chùm ngắn ở ngọn thân, kẽ lá, đầu cành, quả và hạt màu đen Bộ

phận dùng là rễ có hình trụ không đều thon dần về một đầu Dài khoảng 6-

13cm , đường kính 0,6-2,5cm Rễ có thể phân nhánh Mặt ngoài có màu

vàng nhạt mang các vết sẹo ngang và các rễ phụ Thể chất chắc [2,5]

Trước đây Việt Nam ta phải nhập Huyền sâm từ Trang Quốc Vào

những năm 1960, Huyền sâm đã bắt đầu di thực vào nước ta Hiện nay

Huyền sâm đã được trồng nhiều ở miền núi cao và đồng bằng trung du Việt

Nam [2,9]

Có một số cây thuộc chi Scrophularia được trồng và sử dụng ở các

địa phương khác nhau:

- Scrophularia buergeriana Miq (S oldhami Oliv.) : Bắc huyền sâm,

Dã huyền sâm Có một số đặc điểm khác Huyền sâm - Scrophularia

ningpoensis Hemsl Hoa mọc từng chùm, núm hoa màu xanh vàng, lá hình

trứng có loại hình trứng dài, chiều dài lá khoảng 5-12cm Quả non hình

trứng dài 6mm Củ tròn dài, có nếp nhăn dọc, vỏ màu nâu tối, có củ con

hoặc nốt củ con cắt ngang mặt củ trong vỏ không có tế bào mô cứng Củ

ngâm nước thành màu đen, ưa trồng ở nơi ẩm ướt Có trồng tại các vùng

Hắc long giang, Cát lâm, Liên minh, Hà bắc, Sơn đông, Sơn tây, Nội mông,

Giang tô [6,7,12]

- S spicata Franch: Thổ huyền sâm, Xuyên huyền sâm, Huyền sâm

đại sâm, thường trồng và sử dụng ở tây bắc tỉnh Vân nam Cây có hoa mọc

thành bông, hoa có tán không có cuống chung xếp lại như những bánh xe

Cuống hoa ngắn, dài 3mm Lá hình trứng có khía hình kim, hai mặt không

có lông, gân lá liền nhau như mặt võng Cành mang lá dài 3-5cm, không có

lá kèm [12]

Rễ củ chứa nhiều thành phần hoá học khác nhau đặc biệt là harpozit

một iridoitlglycosũl không bền vững dễ bị chuyển hoá thành dẫn chất màu

đen

Thường chữa sốt, viêm họng, táo bón [2,9]

Yêu cầu kiểm nghiệm:

Hình dạng bên ngoài: Rễ nguyên hầu như hình trụ, phía trên phình

to, phía dưới thuôn nhỏ dần, có chỗ cong queo như sừng dê, dài 3-15cm,

đường kính 0,5-l,5cm Mặt ngoài màu nâu tro, có nếp nhăn và rãnh lộn

xộn, nhiều lỗ bì nằm ngang và nhiều vết tích của rễ con hay đoạn rễ nhỏ

còn lại Mặt cắt ngang màu đen, phía ngoài cùng có lớp bần mỏng, phía

trong có nhiều vân toả ra (bó libe-gỗ) [3]

Vỉ phẫu: Lớp bần có 4-5 hàng tê bào nhăn nheo, có chỗ bị rách nứt

Mô mềm vỏ gồm những tế bào có màng mỏng nhăn nheo Trong mô mềm

có những đám mô cứng gồm 2-3 tế bào có màng dày với ống trao đổi rõ và

những tế bào mô cứng riêng lẻ xếp rải rác lộn xộn Ở gần lófp bần, các đám

mô cứng và tế bào xếp mô cứng xếp dày hơn Libe cấp 2 cấu tạo bởi những

tế bào nhỏ xếp đều đặn, bị những tia ruột rộng cắt libe ra thành từng đám

ứng với đám gỗ bên trong Tầng sinh libe-gỗ Gỗ cấp 2 xếp liên tiếp thành

những đoạn dãy mạch thẳng hàng từ trong ra ngoài, tia ruột rộng, màng

không hoá gỗ, ở giữa tâm điểm có đám mạch gỗ cấp 1 [3]

Bột: Màu đen nhạt, vị hơi mặn Soi dưới kính hiển vi thấy: nhiều tế

bào mô cứng tập hợp thành từng đám, hoặc rải rác những tế bào riêng lẻ có ống trao đổi rõ, đa số hình thoi Mạch gỗ hầu hết là mạch vạch Mảnh bần gồm những tê bào nhiều cạnh đều đặn có thành dày Mảnh mô mềm Rải rác tinh bột nhỏ có hình tròn [3]

Kết quả kiểm nghiệm:

Hình dạng bên ngoài: Bộ phận dùng là rễ có hình trụ thon dần một

đầu Dài khoảng 6-13cm, đường kính 0,6-®*2¿5cm Rễ có thể phân nhánh Mặt ngoài có màu vàng nhạt mang các sẹo ngang và các rễ phụ, thể chất chắc (Ảnh 2)

Vỉ phẫu: Mặt cắt có hình tròn Từ ngoài vào trong có: Lớp bần gồm

1 -3 hàng tê bào thành nhăn nheo xếp thành hàng, có chỗ bị rách nứt Mô mềm vỏ gồm các tế bào có màng mỏng hình đa giác xếp sít nhau Trong mô mềm có những đám tế bào mô cứng gồm 2-3 tế bào có thành rất dày hoặc những tế bào mô cứng riêng lẻ xếp rải rác gần bần Libe cấp 2 cấu tạo bởi những tế bào nhỏ xếp đều đặn, libe phát triển thành tạo thành các bó nhỏ nằm ứng với bó gỗ bên trong Tầng phát sinh libe-gỗ liên tục thành vòng

Gỗ cấp 2 liên tiếp thành những đoạn, dãy mạch thẳng hàng từ trong ra ngoài Giữa tâm điểm có một đám mạch gỗ cấp 1 Tia ruột rộng (Ảnh 3)

Bột: Màu đen xám nhạt Soi kính hiển vi thấy: Mảnh bần có màu

vàng gồm các tế bào thành dầy (1) Mảnh mô mềm (2) Rải rác có các sợi thành mỏng (3) Nhiều mảnh mạch vạch (4) Những tế bào mô cứng liêng lẻ hoặc tập trung thành từng đám có ống trao đổi rõ^Có khi gặp những hạt tinh bột tròn có rốn phân nhánh (Ảnh 4)

Bàn luận:

Kết quả nghiên cứu cho thấy các mẫu Huyền sâm có đặc điểm hiển

vi đáp ứng các yêu cầu của Dược điển Việt Nam II tập 2

Ảnh 1 : Cây Huyền sâm Ảnh 2: Rễ Huyền sâm

Ảnh 3: Vi phẫu rễ Huyền sâm

Ảnh 4: Một số đặc điểm bột Huyền sâm

8

2.2 Đảng sâm.

Dược liệu dùng là rễ phơi hay sấy khô của nhiều loài Đảng sâm

(Campanumoea sp.), họ Hoa chuông (Campanulaceae) [3].

Còn có tên khác là Phòng đảng sâm, Lộ đảng sâm, Xuyên đảng sâm, Đông đảng sâm, Rầy cáy, Mần cáy [6]

Trên thực tế người ta trồng, thu hái và sử dụng các loài:

- Codonopsis javanica Blum.e, Đảng sâm nam Là loài Đảng sâm mà

ta khai thác trong nước [1]

- Codonopsispilosula (Tranch) Nannf ,Đảng sâm bắc [12]

- Codonopsis tangshen Oliv., Xuyên đảng sâm [6,12].

- Codonopsis viridiỷlora Maxim, Đảng sâm hoa xanh[5].

- Codonopsis tubulosa Kom, Đảng sâm hoa ống [5].

- Codonopsis nervosa Nannf, Đảng sâm mõm chó [5].

- Codonopsis lanceolata Benth et.Hook, Đảng sâm bốn lá[12].

- Codonopsis ussuriensis Hemsl [12].

- Codonopsis clematidea Clarke [12].

Đông y coi Đảng sâm có thể dùng thay thế nhân sâm trong các bệnh thiếu máu, vàng da, bệnh bạch huyết, viêm thượng thận, nước tiểu có anbumin, chân phù đau Còn dùng làm thuốc bổ dạ dày, chữa ho, tiêu đờm, lợi tiểu tiện Người ta còn gọi Đảng sâm là Nhân sâm của người nghèo vì

có mọi công dụng của Nhân sâm lại rẻ tiền hơn [6]

Đảng sâm bắc có saponin và đường Đảng sâm nam có đường, chất

2.2.1 Đ ả n g sâ m n a m

Yêu cầu kiểm nghiệm:

Hình dạng bên ngoài: Dược liệu là rễ hình trụ, có khi phân nhánh,

đường kính 0,5-2cm, dài 6-15cm, có khi tới 20cm Đầu trên phát triển to, có nhiều sẹo của thân Mặt ngoài màu vàng nâu nhạt, trên có những rãnh dọc

và ngang, chia rễ thành đường lồi lõm Mùi thơm nhẹ, vị hơi ngọt [3]

Vỉ phẫu: Lófp bần gồm 5-6 hàng tế bào hình chữ nhật Mô mềm vỏ

cấu tạo bởi tế bào hình nhiều cạnh Trong mô mềm rải rác có đám mô cứng

và ống nhựa mủ Một sô tế bào chứa inulin và tinh bột Libe chiếm phần lớn lát cắt, có ống nhựa mủ Mạch gỗ họp thành 2 hàng phân cách nhau bởi tia ruột có có tế bào thành mỏng[3]

Bột: Màu vàng nâu nhạt Soi kính hiển vi thấy: Nhiều hạt tinh bột

nhỏ, đường kính 3-20|Lim Khá nhiều mảnh mạch mạng Tế bào mô cứng màu vàng nhạt Mảnh mô mềm với ống nhựa mủ Mảnh bần màu vàng nâu [3]

Kết quả kiểm nghiệm:

Hình dạng bên ngoài: Dược liệu thường có kích thước lớn và phân

nhánh nhiều, màu sẫm, có nhiều nếp nhăn dọc, cứng chắc (ảnh 5,6)

Vi phẫu: Mặt cắt có hình tròn Từ ngoài vào trong có: Lớp bần

khoảng 4-5 hàng tế bào hình chữ nhật xếp đều đặn thành hàng đồng tâm và dãy xuyên tâm, hơi rách Mô mềm vỏ cấu tạo bởi các tế bào hình nhiều cạnh hơi dài dẹt, xếp lộn xộn, rải rác có các đám tế bào mô cứng Các tế bào libe nhỏ xếp xít nhau, trong libe có ống nhựa mủ xếp rải rác thành hàng

và thành vòng ứng với bó libe gỗ Libe thành dải dài chiếm phần lớn lát cắt Các mạch gỗ xếp thành hàng (hai hàng) tạo thành hệ thống hình nan quạt toả ra từ tâm Các bó libe-gỗ phân cách nhau bởi tia ruột rộng có tế bào thành mỏng (Ảnh 7)

Bột: Màu vàng nhạt, mùi thơm, vị ngọt nhạt sau đắng Soi kính hiển

vi thấy: Mảnh mô mềm (1) có thể mang hạt tinh bột Đám tế bào mô cứng riêng lẻ màu vàng nhạt thành dầy (2) Mảnh mạch điểm (3) Tinh thể calci oxalat hình khối (4), kích thước 0,01-0,02 mm Khối inulin nhiều hình dạng, thường có hình quạt (5) Hạt tinh bột hình tròn thường đơn lẻ có rốn phân nhánh kích thước 0,015-0,025 mm (6) (Ảnh 8)

Bàn luận:

Kết quả nghiên cứu cho thấy các mẫu Đảng sâm nam có đặc điểm hiển vi đáp ứng các tiêu chuẩn của Dược điển Việt Nam II Tập 2

Ảnh 5: Cây Đảng sâm nam Anh 6: Rễ Đảng sâm nam

Anh 7: Vi phẫu rê Đảng sâm nam

0,05 mm

:o Ö o

Ảnh 8: Một số đặc điểm bột Đảng sâm nam

12