đánh giá tương đương sinh học viên nén kali clorid 600mg phóng thích kéo dài

Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu ngày 1 trước khi uống thuốc thử nghiệm ...47... Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu trong ngày 2 ngày uống thuốc t

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM

SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP.HCM

BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý hội đồng)

ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN KALI CLORID 600 MG

PHÓNG THÍCH KÉO DÀI

Thành phố HỒ CHÍ MINH

Tháng 05 năm 2008

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM

SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP.HCM BỘ Y TẾ

BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý hội đồng)

ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN KALI CLORID 600 MG

PHÓNG THÍCH KÉO DÀI

PGS.TS Hoàng Minh Châu Cố vấn khoa học

Th.S Lê Thị Thu Vân Nghiên cứu viên chính

DS Nguyễn Hoàng Tiến Nghiên cứu viên

Thành phố HỒ CHÍ MINH

Tháng 05 năm 2008

(CƠ QUAN CHỦ QUẢN)

(CƠ QUAN THỰC HIỆN)

SỞ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BÁO CÁO NGHIỆM THU ĐỀ TÀI CẤP THÀNH PHỐ

Thực hiện bởi:

DS Nguyễn Hoàng Tiến Nghiên cứu viên

TP HỒ CHÍ MINH

- 2008 -

MỤC LỤC

Trang

Danh mục chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1 1 Kali clorid 3

1 2 Đánh giá tương đương sinh học bằng nồng độ thuốc bài tiết qua nước tiểu 11

Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14

2.1 Đối tượng nghiên cứu – Thiết bị – Hoá chất 14

2.2 Phương pháp nghiên cứu 18

2.2.1.So sánh tốc độ phóng thích in vitro 18

2.2.2.Đánh giá tương đương sinh học in vivo 19

2.2.3 Xử lý và phân tích dữ liệu thực nghiệm 24

2.4 Phân tích thống kê để xác định tương đương sinh học 26

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27

3.1 So sánh tốc độ phóng thích của thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu 27

3.2 Nghiên cứu tương đương sinh học 29 Thời gian sau khi dùng một liều

3.2.1.Thẩm định qui trình phân tích ion kali trong nước tiểu bằng phương

pháp điện cực chọn lọc ion (ISE) 29

3.2.2 Tuyển chọn người tình nguyện 33

3.2.3 Thiết kế khẩu phần ăn 36

3.2.4.Hoàn chỉnh hồ sơ pháp lý 39

3.2.5 Thực hiện nghiên cứu 39

3.3 Xác định lượng ion kali bài tiết trong nước tiểu 41

3.3.1 Xác định lượng ion kali bài tiết trong ngày 1 (Luợng ion kali bài tiết căn bản) 41

3.3.2 Xác định lượng ion kali bài tiết trong ngày 2 (Ae0-24) 51

3.3.3 Xác định lượng ion kali bài tiết trong ngày 3 62

3.3 Xác định các thông số dược động học 71

3.4 Phân tích thống kê – xác định tương đương sinh học 76

Chương 4 BÀN LUẬN 79

KẾT LUẬN .84

TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC -

DANH MỤC CÁC BẢNG

Trang

Bảng 2.1 Bảng thu thập mẫu nước tiểu của NTN ở từng phân đoạn 23

Bảng 3.2 Kết quả khảo sát độ chính xác giữa các lần đo trong ngày 31

Bảng 3.3 Kết quả khảo sát độ chính xác giữa các lần đo liên ngày 31

Bảng 3.4 Kết quả khảo sát độ đúng giữa các lần đo trong ngày 32

Bảng 3.5 Kết quả khảo sát độ đúng giữa các lần đo liên ngày .33

Bảng 3 6 Kết quả kiểm tra sức khỏe tổng quát của NTN 34

Bảng 3.7 Các thông số sinh học của NTN 35

Bảng 3.8 Nhu cầu dinh dưỡng khuyến nghị cho người Việt Nam 36

Bảng 3.9 Đánh giá đặc điểm cân đối trong khẩu phần ăn của NTN 37

Bảng 3.10 Đánh giá mức đáp ứng nhu cầu trong khẩu phần ăn của NTN 38

Bảng 3.11 Thiết kế thử nghiệm theo mô hình chéo đôi, 2 thuốc, 2 trình tự, 2 giai đoạn 39

Bảng 3.12 Thể tích các phân đoạn nước tiểu ngày 1 (trước khi uống thuốc thử nghiệm) 42

Bảng 3.13 Thể tích các phân đoạn nước tiểu ngày 1 (trước khi uống thuốc đối chiếu) 43

Bảng 3.14 Nồng độ ion kali trong các phân đoạn nước tiểu ngày 1 (trước khi uống thuốc thử nghiệm) 44

Bảng 3.15 Nồng độ ion kali trong các phân đoạn nước tiểu ngày 1 (trước khi uống thuốc đối chiếu) 45

Bảng 3.16 Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu ngày 1 (trước khi uống thuốc thử nghiệm) 47

Bảng 3.17 Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu

ngày 1 (truớc khi uống thuốc đối chiếu) 48 Bảng 3.18 So sánh tốc độ bài tiết ion kali trong ngày xác

định lượng ion kali căn bản trước khi uống thuốc thử nghiệm và uống thuốc đối chiếu 49 Bảng 3.19 Thể tích các phân đoạn nước tiểu ngày 2

(NTN uống thuốc thử nghiệm) 52 Bảng 3.20 Thể tích các phân đoạn nước tiểu ngày 2

(NTN uống thuốc đối chiếu) 53 Bảng 3.21 Nồng độ ion kali trong các phân đoạn nước tiểu ngày 2 (thuốc thử nghiệm) 54 Bảng 3.22 Nồng độ ion kali trong các phân đoạn nước tiểu

ngày 2 (thuốc đối chiếu) 55 Bảng 3.23 Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu trong ngày 2 (ngày uống thuốc thử nghiệm) .56 Bảng 3.24 Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu

ngày 2 (thuốc đối chiếu) 57

Bảng 3.25 Lượng ion kali TĂNG trong khoảng 0-24 giờ (Ae0-24)

do uống thuốc thử nghiệm (= ngày 2 – ngày 1) 59 Bảng 3.26 Lượng ion kali TĂNG trong khoảng 0-24 giờ (Ae0-24)

do uống thuốc đối chiếu (= ngày 2 – ngày 1) 60

Bảng 3.27 Thể tích các phân đoạn nước tiểu ngày 3 ở NTN uống

thuốc thử nghiệm .63 Bảng 3.28 Thể tích các phân đoạn nước tiểu ngày 3 ở NTN

uống thuốc đối chiếu .64

Bảng 3.29 Nồng độ ion kali trong các phân đoạn nước tiểu ngày 3 của NTN uống thuốc thử nghiệm .65 Bảng 3.30 Nồng độ ion kali trong các phân đoạn nước tiểu ngày 3 của NTN uống thuốc đối chiếu 66 Bảng 3.31 Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu ngày 3 ở NTN uống thuốc thử nghiệm .67 Bảng 3.32 Lượng ion kali bài tiết trong các phân đoạn nước tiểu ngày 3 ở NTN uống thuốc đối chiếu .68

Bảng 3.33 Lượng ion kali TĂNG trong các phân đoạn nước tiểu

ngày 3 (Ae24-48) ở NTN uống thuốc thử nghiệm

(=lượng ion kali ngày 3 - lượng ion kali căn bản) 69 Bảng 3.34 Lượng ion kali TĂNG trong các phân đoạn nước tiểu

ngày 3 (Ae24-48) ở NTN uống thuốc đối chiếu

(=lượng ion kali ngày 3 - lượng ion kali căn bản) 70 Bảng 3.35 Tốc độ bài tiết ion kali sau khi uống thuốc thử nghiệm (Tính trong 24 giờ) 72 Bảng 3.36 Tốc độ bài tiết ion kali sau khi uống thuốc đối chiếu

(tính trong 24 giờ) 73 Bảng 3.37 Bảng số liệu tính hằng số tốc độ bài tiết (Kel)

của thuốc thử nghiệm 74 Bảng 3.38 Bảng số liệu tính hằng số tốc độ bài tiết (Kel)

của thuốc đối chiếu 75

DANH MỤC CÁC HÌNH

Trang Hình 2.1 Máy ADVIA 1650 15 Hình 2.2 Hệ thống điện cực chọn lọc ion K+, Na+, Cl- 16 Hình 2.3 Sơ đồ cấu hình hệ thống ISE của máy ADVIA 1650 17

Hinh 3.4 Đồ thị so sánh lượng kali clorid phóng thích in vitro

của thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu trong môi trường

HCl 0,1N (f2= 85,30) 27

Hinh 3.5 Đồ thị so sánh lượng kali clorid phóng thích in vitro

của thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu trong môi trường

nước cất (f2=76,92) 28

Hinh 3.6 Đồ thị so sánh lượng kali clorid phóng thích in vitro

của thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu trong môi trường

dung dịch đệm phosphat pH 6,8 (f2=90,98) 28 Hình 3.7 Điện cực chọn lọc ion kali 29Hình 3.8 Lượng ion kali bài tiết tích lũy trong ngày xác định

ion kali căn bản (ngày 1) trước khi uống thuốc thử nghiệm hoặc thuốc đối chiếu 49 Hình 3.9 Tốc độ bài tiết ion kali của người tình nguyện trước khi uống thuốc thử nghiệm hoặc thuốc đối chiếu (tốc độ bài tiết ion kali căn bản) 50 Hình 3.10 Biểu đồ so sánh lượng ion kali bài tiết trong ngày 2

(uống thuốc thử nghiệm hoặc thuốc đối chiếu 58

Hình 3.11 Lượng ion kali bài tiết tích luỹ (đã trừ lượng ion kali

căn bản sau khi dùng thuốc thử nghiệm hoặc

thuốc đối chiếu) (n=24) 61 Hình 3.12 Tốc độ bài tiết ion kali trong ngày 2 ở người tình nguyện uống thuốc thử nghiệm hoặc thuốc đối chiếu 61 Hình 3.13 Đường biểu diễn lượng thuốc còn lại sau khi được bài tiết qua đường tiểu theo thời gian ở NTN uống thuốc thử nghiệm 74 Hình 3.14 Đường biểu diễn lượng thuốc còn lại sau khi được bài tiết qua đường tiểu theo thời gian ở NTN uống thuốc đối chiếu .75

PHẦN MỞ ĐẦU

Thuốc là những sản phẩm được dùng trực tiếp cho người bệnh nên phải đạt chất lượng, an toàn và hiệu quả Cho đến nay chất lượng của thuốc thường được đánh giá bằng các phương pháp lý hóa theo tiêu chuẩn qui định của sản phẩm Trong trị liệu, các thuốc có dạng phân liều, loại dược chất và hàm lượng giống nhau (tương đương dược học) thường được dùng thay thế cho

nhau Tuy nhiên, sự đánh giá chất lượng theo các tiêu chuẩn dược học in vitro

không thể hiện được hiệu quả đích thực của thuốc trong cơ thể do tính chất phóng thích dược chất và sự hấp thu khác nhau của các chế phẩm từ các nhà sản xuất khác nhau

Tại Hoa Kỳ, từ trước năm 1962, các thuốc có cùng loại dược chất và hàm lượng với thuốc của nhà phát minh có thể lưu hành trên thị trường mà không

cần phải thử in vivo Tuy nhiên, thực tế cho thấy hai thuốc cùng đạt chỉ tiêu

chất lượng theo cùng một tiêu chuẩn chưa đủ để kết luận 2 thuốc cho tác dụng trị liệu như nhau Đến năm 1962, tu chính án Kefauver-Harris đã yêu cầu tất

cả các thuốc generic đều phải được chứng minh hiệu quả và tính an toàn in

vivo trước khi được lưu hành trên thị trường [23] Hiệu quả của thuốc phải

được chứng minh bởi các thử nghiệm in vivo với các bằng chứng là các thông

số dược động học đã được xử lý và so sánh với thuốc của nhà phát minh (hoặc thuốc đối chiếu) bằng các phương pháp thống kê thích hợp Đến đầu thập niên

1970, cơ quan FDA đã thiết lập những tiêu chuẩn để chứng minh hiệu quả của thuốc generic và đề ra những chuẩn mực để đánh giá tương đương sinh học Hiện nay, không những các nước tiên tiến (Hoa Kỳ, Canada, Liên minh Châu Âu…) mà rất nhiều nước đang phát triển (Malaysia, Trung Quốc, Hàn Quốc…) đã có những hướng dẫn nghiên cứu tương đương sinh học Ở Việt Nam, nghiên cứu tương đương sinh học chỉ mới được đề cập trong khoảng 10

năm gần đây Cho đến nay các nghiên cứu tương đương sinh học được thực hiện trong nước chưa nhiều, chưa đáp ứng được nhu cầu của các nhà sản xuất thuốc trong nước

Thuốc tác dụng kéo dài là dạng thuốc được thiết kế đặc biệt để có thể vừa cung cấp được liều điều trị tức thì đồng thời có thể duy trì được một nồng độ thuốc ổn định trong cơ thể trong một khoảng thời gian nhất định sau khi dùng thuốc Sự phóng thích ổn định của thuốc phóng thích kéo dài phải được xác

nhận bằng các thử nghiệm in vitro lẫn thử nghiệm tương đương sinh học in

ổn định cao về hàm lượng và tốc độ phóng thích dược chất in vitro

Tiếp nối các thành quả nghiên cứu đã đạt được trước đây, đề tài “Đánh giá

tương đương sinh học viên nén kali clorid 600 mg phóng thích kéo dài”

được thực hiện nhằm so sánh sinh khả dụng của viên nén Kali clorid 600 mg phóng thích kéo dài với viên Kaleorid ® LP 600 mg trên người tình nguyện

Đề tài được thực hiện với các nội dung sau:

- So sánh tốc độ phóng thích dược chất từ thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu

- Thẩm định qui trình phân tích ion kali trong nước tiểu bằng phương pháp điện cực chọn lọc ion (ISE)

- Nghiên cứu xác định các thông số dược động học ở người tình nguyện uống thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu

- Xử lý thống kê để kết luận về tương đương sinh học giữa 2 thuốc

Sản phẩm cần đạt của đề tài (theo hợp đồng nghiên cứu số 209/HĐ-SKHCN ngày 13 tháng 12 năm 2006 giữa Sở Khoa Học và Công Nghệ TP.HCM và Đại Học Y Dược TP.HCM):

1 Báo cáo tổng kết

2 Báo cáo kết quả đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học cũa viên nén Kali clorid 600 mg phóng thích kéo dài

3 Qui trình và số liệu thử độ phóng thích dược chất của viên Kali clorid

600 mg phóng thích kéo dài và viên Kaleorid®

4 Protocol nghiên cứu tương đương sinh học viên Kali clorid 600 mg phóng thích kéo dài so với viên Kaleorid®

5 Bài báo khoa học

Nhóm nghiên cứu gồm:

Cơ quan chủ trì: Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh

Kinh phí được duyệt: 280.000.000 đồng

Chương I

TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 KALI CLORID

Vai trò sinh lý của ion kali

Kali là ion chiếm lượng lớn trong cơ thể, có chức năng duy trì hoạt động của enzym nội bào và hoạt động của các mô cơ thần kinh Trong cơ thể ion kali tập trung chủ yếu ở dịch nội bào (khoảng 90%), dịch ngoại bào chỉ chứa khoảng 10%

Ion kali phân bố nhiều nhất ở 3 cơ quan chủ yếu là cơ (76%), gan (7%) và hồng cầu (7%), phần còn lại phân bố trong dịch nội bào với lượng khá cao (140 – 150 mEq/L)

Trong dịch ngoại bào, ion kali phân bố chủ yếu trong dịch gian bào (1%), lượng ion kali phân bố trong huyết tương chỉ bằng khoảng 0,4% tổng lượng kali có trong cơ thể Nồng độ của kali trong huyết thanh từ 3,5 đến 5,5 mEq/L [13],[22]

Tỉ lệ nồng độ kali trong dịch nội bào và ngoại bào (Ki/Ke) quyết định phần lớn chức năng hoạt động của mô cơ thần kinh Do lượng kali trong dịch ngoại bào chiếm một tỉ lệ rất nhỏ, nên chỉ cần một thay đổi nhỏ về nồng độ kali trong dịch ngoại bào sẽ ảnh hưởng đến hoạt động của mô cơ thần kinh Cơ thể

có một cơ chế điều chỉnh rất tinh vi nhằm duy trì sự ổn định của ion kali Chênh lệch nồng độ K+ trong và ngoài tế bào cần thiết cho dẫn truyền xung động thần kinh ở các mô đặc biệt như tim, não và cơ xương cũng như duy trì chức năng thận bình thường và cân bằng kiềm toan

Sự vận chuyển ion kali qua màng tế bào được thực hiện bởi men Na+-K+ase, có tác dụng vận chuyển tích cực, bơm Na+ ra ngoài và K+ vào trong tế bào Những bất thường về nồng độ kali có thể ảnh hưởng đến chức năng tim Các bệnh lý liên quan đến ion kali bao gồm tăng kali huyết và hạ kali huyết,

-ATP-có thể đuợc chia làm 3 nhóm căn cứ vào nguyên nhân:

- Rối loạn do thay đổi cung cấp kali cho cơ thể

- Rối loạn do bài tiết

- Rối loạn trong phân phối kali qua màng tế bào

Tăng kali huyết xảy ra khi kali được tạo ra quá nhiều (ly giải mô) hoặc không được thải trừ hữu hiệu do nguyên nhân hormon (thiếu aldosteron) hoặc do các nguyên nhân từ nhu mô thận gây tổn thương bài tiết Triệu chứng lâm sàng là cảm giác khó chịu, đánh trống ngực và yếu cơ

Nếu nồng độ kali trong huyết tương ít hơn 137 mg/Lít (3,5mEq/Lít) thì được chẩn đoán là hạ kali huyết; trường hợp kali huyết tương ít hơn 98 mg/Lít thì được xem là hạ kali huyết nặng Dấu hiệu lâm sàng sơ phát là yếu cơ và đau

cơ, vọp bẻ, liệt, táo bón, buồn nôn, nôn, rối loạn nhịp tim Thiếu kali huyết thường ít xảy ra do thiếu kali trong khẩu phần ăn, trừ những trường hợp ăn kiêng lâu dài Các nguyên nhân gây hạ kali huyết thông thường nhất là tiêu chảy, nôn mữa, đổ mồ hôi nhiều trong thời gian dài, bỏng trên diện tích rộng

và sự thải kali quá nhiều do dùng thuốc lợi niệu

Hấp thu – chuyển hoá và thải trừ

Kali được hấp thu rất tốt qua đường tiêu hoá, sự hấp thu xảy ra phần lớn ở ruột non và phần còn lại ở ruột già và ruột kết theo cơ chế vận chuyển thụ động qua thành ruột Ion kali có trong các muối được hấp thu tốt hơn kali có trong thực phẩm, đặc biệt là ion kali có trong muối kali clorid

Sinh khả dụng bằng đường uống của kali rất cao, lượng kali hấp thu bằng đường uống có thể lên đến 90-95% do có sự phân ly hoàn toàn của ion kali trong đường tiêu hoá Ngoài ra, sự hấp thu ion kali không bị ảnh hưởng bởi thức ăn

Trong điều kiện trạng thái cơ thể ổn định, lượng ion kali hấp thu qua đường tiêu hóa bằng với lượng ion kali đào thải trong nước tiểu Trường hợp lượng ion kali đưa vào cơ thể qua đường tiêu hoá quá cao trong thời gian ngắn, cơ thể không thể loại ngay bằng cách thải trừ qua đường tiểu, cơ thể sẽ tạm thời

tự điều chỉnh nồng độ kali bằng cách vận chuyển kali qua màng tế bào Cuối cùng sự điều chỉnh dài hạn được thực hiện bằng cơ chế đào thải kali qua nước tiểu Thải trừ kali ở thận xảy ra thụ động (qua cầu thận) và tái hấp thu tích cực

qua ống gần và nhánh lên của quai Henle Ở ống xa và ống góp (thận) kali được thải trừ tích cực dưới sự điều khiển của aldosteron

Các dạng thuốc chứa ion kali

Các muối kali aspartat, kali acetat, kali gluconat, kali bicarbonat, kali clorid [24]… đều có thể được dùng để cung cấp kali trong trường hợp phòng và điều trị hạ kali huyết Kali clorid hấp thu nhanh qua đường tiêu hoá và hấp thu tốt hơn các muối kali khác Mặt khác, khi nồng độ kali huyết giảm thường kèm theo tình trạng giảm clo huyết, nên kali clorid thường được sử dụng để vừa cung cấp ion kali vừa cung cấp ion clo [4] Hiện nay có nhiều dạng thuốc chứa kali clorid như dạng dung dịch uống, thuốc bột để pha thành dùng dịch uống chứa 10, 15, 20 mmol; dạng kali đậm đặc dùng pha tiêm 1,5 mmol/ml; viên nén bao tan trong ruột 600 mg và viên nén hoặc viên nang phóng thích kéo dài

600 mg (8 mmol) hoặc 750 mg (10 mmol)

Các dạng thuốc viên qui ước (kể cả viên nén bao tan trong ruột) thường gây nhiều biến chứng cho đường tiêu hoá như buồn nôn, nôn mữa, loét dạ dày, thực quản Dạng dung dịch uống ít gây biến chứng cho đường tiêu hoá hơn,

do niêm mạc dạ dày không tiếp xúc trực tiếp với các tinh thể kali clorid, nhưng thuốc lại có vị mặn khó uống và thường gây buồn nôn Các dạng thuốc kali clorid phóng thích kéo dài có ưu điểm là tránh được nguy cơ tác dụng phụ tại đường tiêu hoá đồng thời hiệu quả điều trị tốt hơn các dạng thuốc kinh điển

vì tạo được một nồng độ ion kali ổn định Các biệt dược đang lưu hành tại Việt Nam gồm: Kaldyum 600 mg (Egis Pharma, Hungary), Kaleorid® LP

600 mg (Leo Pharmaceuticals, Đan Mạch), Slow-K®

Chỉ định - Liều dùng

Chỉ định

Các thuốc chứa kali clorid thường được chỉ định để điều trị giảm kali huyết nặng ở người bệnh dùng thuốc lợi tiểu thải kali để điều trị cao huyết áp vô căn chưa biến chứng

Kali clorid cũng có thể chỉ định cho người bị xơ gan có chức năng thận bình thường, một số trạng thái tiêu chảy, kể cả do sử dụng thuốc nhuận tràng dài

ngày, nôn kéo dài, hội chứng Bartter, bệnh thận gây mất kali và ở những người bệnh (kể cả trẻ em) điều trị corticosteroid kéo dài

Kali clorid dạng uống còn được dùng để phòng ở những bệnh nhân đặc biệt có nguy cơ giảm kali huyết

Liều dùng

Liều lượng phụ thuộc vào ion đồ huyết thanh và cân bằng kiềm toan

Bệnh nhân giảm kali huyết nhẹ hoặc bệnh nhân cao huyết áp đang điều trị bằng thuốc lợi tiểu có thể được điều trị bằng cách bổ sung kali clorid theo đường uống hoặc được khuyến cáo dùng các thực phẩm có chứa nhiều kali như cà chua, cam, chuối

Người lớn đang được điều trị bằng liệu pháp lợi niệu dài ngày khi dùng kali clorid với liều 40 mmol/ngày có thể phòng được giảm kali huyết Đối với người tăng huyết áp không biến chứng, không phù, điều trị ngoại trú, thường không cần bổ sung kali, tuy nhiên nếu kali huyết thanh dưới 3 mmol/L, nên dùng 50-60 mmol/ngày Đối với người bệnh phù như suy tim, xơ gan cổ trướng dùng liều 40-80 mmol/ngày (thiếu nhẹ) hoặc 100-120 mmol/ngày (thiếu nặng) kèm theo dõi cẩn thận kali huyết thanh

Trẻ em uống 1-2 mmol/kg; Người cao tuổi dùng liều thấp hơn ở người bình thường vì chức năng thận giảm ở một số người do tuổi cao

Trong trường hợp giảm kali huyết nặng (kali huyết ít hơn 2,5 mmol/L), nên dùng dạng dịch truyền với nồng độ từ 40 mmol đến 80 mmol/ lít được sử dụng với tốc độ truyền dịch không quá 1 mmol trong một phút cho người lớn và 0,02 mmol/kg thể trọng/phút đối với trẻ em Nếu tốc độ truyền vượt quá 0,5 mmol/kg/giờ, cần phải theo dõi các dấu hiệu lâm sàng và điện tâm đồ liên tục Nếu có rối loạn chức năng thận, đặc biệt là suy thận cấp như có dấu hiệu thiểu niệu và (hoặc) tăng creatinin huyết thanh, xảy ra trong khi truyền kali clorid, cần ngừng truyền ngay

Tương tác thuốc

Kali clorid có thể tương tác với amphotericin B, corticosteroid, glucocorticoid, corticotrophin, ACTH, gentamicin, penicilin (kể cả azlocilin, carbenicilin, mezlocilin, piperacilin, ticarcilin), polymycin B Nhu cầu kali có thể tăng ở

những người dùng các thuốc trên do tăng bài tiết kali qua thận, cần theo dõi chặt chẽ kali huyết thanh Các thuốc ức chế men chuyển, thuốc chống viêm không steroid (NSAID), các tác nhân chẹn beta giao cảm, máu từ ngân hàng máu (có thể chứa kali tới 30 mmol trong một lít huyết tương hoặc tới 65 mmol trong một lít máu khi bảo quản quá 10 ngày), cyclosporin, thuốc lợi tiểu ít thải kali, heparin, sữa có ít muối, chất thay thế muối, sử dụng đồng thời với kali clorid có thể tăng nồng độ kali huyết thanh, làm tăng kali máu nặng gây ngừng tim, đặc biệt đối với bệnh nhân suy thận Sử dụng các chất chống viêm không steroid cùng với kali clorid có thể tăng nguy cơ tác dụng phụ đối với dạ dày- ruột

Kali clorid cần sử dụng thận trọng ở người dùng muối calci đường tiêm vì có nguy cơ gây loạn nhịp tim Khi dùng kali clorid kết hợp với thuốc lợi tiểu thiazid (làm mất nhiều kali), có nguy cơ làm tăng kali máu khi ngừng thuốc lợi tiểu Kali clorid dùng đồng thời với insulin hoặc natri bicarbonat gây giảm kali huyết thanh do thúc đẩy ion kali vào trong tế bào

Kali clorid không được dùng ở người bị blốc tim hoàn toàn hoặc nặng đang dùng digitalis, tuy nhiên nếu phải bổ sung kali để đề phòng hoặc điều trị hạ kali máu ở những người dùng digitalis thì phải theo dõi chặt chẽ nồng độ kali huyết thanh [4]

Kali clorid không được pha vào mannitol, máu hoặc các sản phẩm máu, hoặc dung dịch chứa aminoacid hoặc có chứa lipid vì có thể làm kết tủa những chất này hoặc gây tan hồng cầu truyền vào

Kali clorid dạng viên chống chỉ định khi thực quản bị chèn ép, dạ dày chậm tiêu, tắc ruột, hẹp môn vị vì cản trở kali clorid qua dạ dày-ruột có thể gây kích ứng dạ dày ruột nặng hơn do nồng độ kali cao tại chỗ

Sử dụng thận trọng ở người bị suy thận hoặc suy thượng thận, bệnh tim, mất nước cấp, say nóng, tổn thương mô rộng như bỏng nặng hoặc người dùng thuốc lợi tiểu ít thải kali Ở người loét dạ dày tá tràng, phải chống chỉ định dùng dạng viên Các thuốc chứa kali uống dạng rắn, đặc biệt khi dùng liều cao cho người mang thai hoặc người bệnh đồng thời dùng thuốc kháng acetylcholin, có khả năng làm giảm nhu động dạ dày- ruột Ở người bị suy

giảm chức năng thận, kali clorid có thể có nguy cơ tăng kali máu Theo dõi các chất điện giải trong huyết thanh đặc biệt cần thiết ở những người bị bệnh tim hoặc thận Ở một số người bệnh thiếu magnesi do dùng thuốc lợi tiểu sẽ ngăn cản hấp thu kali ở ruột vì vậy cần phải điều chỉnh nồng độ magnesi huyết để điều trị giảm kali máu Khi có tiêu chảy, mất dịch kết hợp với sử dụng kali clorid có thể gây độc tính trên thận và có thể có nguy cơ tăng kali máu Kali clorid có thể làm trầm trọng thêm bệnh liệt theo chu kỳ hoặc các bệnh loạn trương lực cơ bẩm sinh, vì vậy cần phải thận trọng đối với các bệnh nhân này

Thời kỳ mang thai: sử dụng thận trọng ở người mang thai vì kali clorid có

trong cấu tạo tự nhiên của mô và dịch, nồng độ kali cao hay thấp đều có hại cho chức năng tim của mẹ và thai nên phải theo dõi sát kali huyết thanh khi dùng các thuốc chứa kali

Thời kỳ cho con bú: việc dùng kali được xem là an toàn trong thời kỳ cho con

bú Sữa người bình thường có ít kali, nếu nồng độ kali huyết thanh của mẹ được duy trì ở mức sinh lý thì không có hại cho trẻ bú mẹ khi mẹ dùng kali clorid

Tác dụng phụ

Khi dùng lâu dài kali clorid có thể xảy ra tăng kali máu, nhịp tim không đều là dấu hiệu lâm sàng sớm nhất của tăng kali máu và được phát hiện dễ dàng bằng điện tâm đồ

Các tác dụng phụ khác

Tiêu hóa: tiêu chảy, buồn nôn, đau họng, đau dạ dày, khó chịu hoặc trướng bụng nhẹ, nôn Trường hợp nặng có thể xuất huyết đường tiêu hoá (phân có máu màu đỏ hoặc màu đen)

Tuần hoàn: tăng kali máu, nhịp tim không đều hoặc chậm

Cơ: mất cảm giác hoặc như kim châm ở bàn tay, bàn chân hoặc môi, chi dưới yếu hoặc có cảm giác nặng, cảm giác chuột rút

Hô hấp: thở nông hoặc khó thở

Để tránh các tác dụng phụ tại đường tiêu hoá, nên uống thuốc cùng với thức ăn

và uống với nhiều nước

Độc tính – Quá liều và xử lý quá liều

Xử lý quá liều: Khi rối loạn nhịp xảy ra hoặc khi lượng kali vượt quá 6,5 mmol/L, bắt buộc phải hạ kali khẩn cấp Một vài thuốc được dùng để hạ lượng kali, việc lựa chọn phụ thuộc vào mức độ và nguyên nhân gây tăng kali máu, cũng như tình trạng của bệnh nhân Triệu chứng thường gặp là những thay đổi trên điện tâm đồ điển hình (sóng T tăng biên độ và nhọn, sóng P biến mất, phức hợp QRS giãn rộng)

Điều trị dùng dextrose 10 % pha thêm 10-20 đơn vị insulin trong một lít và truyền với tốc độ 300-500 ml dịch trong một giờ

Điều chỉnh nhiễm toan bằng natri bicarbonat 50 mmol tiêm tĩnh mạch trong 5 phút Có thể nhắc lại liều này trong vòng 10-15 phút

Dùng calci gluconat (0,5-1 g, tiêm tĩnh mạch trong 2 phút) để chống lại tác dụng độc trên tim

Sử dụng nhựa trao đổi ion để rút kali thừa ra khỏi cơ thể bằng sự hấp phụ và (hoặc) trao đổi kali Uống 20-50 g nhựa trao đổi ion natri polystyren sulfonat pha trong 100-200 ml dung dịch sorbitol 20 % Liều có thể cho 4 giờ một lần, 4-5 lần trong một ngày tới khi nồng độ kali trở về mức bình thường

Có thể cần thiết sử dụng lọc máu thận nhân tạo hoặc thẩm phân màng bụng để làm giảm nồng độ kali huyết thanh ở người suy giảm chức năng thận

1 2 ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC BẰNG LƯỢNG THUỐC BÀI TIẾT QUA NƯỚC TIỂU

Nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học bằng xác định lượng thuốc hoặc chất chuyển hoá bài tiết qua nước tiểu là một phương pháp thuận lợi có thể thay thế cho nghiên cứu xác định lượng thuốc trong máu So với phương pháp xác định nồng độ máu, phương pháp dùng nước tiểu không gây tổn thương cho người tình nguyện

Đánh giá sinh khả dụng bằng cách xác định lượng thuốc bài tiết trong nước tiểu chỉ thường được áp dụng khi lượng thuốc nguyên vẹn hoặc chất chuyển hoá của nó được bài tiết chủ yếu vào nước tiểu và có liên quan tuyến tính với lượng thuốc và thời gian thuốc xuất hiện trong huyết tương

Đối với các thuốc có vị trí tác động là nước tiểu, ví dụ các thuốc sát trùng niệu đạo như nitrofurantoin hoặc methenamine, phương pháp dùng nước tiểu được xem là phương pháp đánh giá nồng độ thuốc tại vị trí tác động Phương pháp cũng thuận lợi đối với các thuốc bài tiết dưới dạng chưa chuyển hoá qua nước tiểu như thuốc lợi niệu nhóm thiazide hoặc sulfonamid

Phương pháp đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học bằng lượng thuốc bài tiết trong nước tiểu không thể sử dụng trong trường hợp sau: Thuốc hoặc chất chuyển hóa của nó bài tiết theo cơ chế vận chuyển chủ động vào ống uốn xa của cầu thận; thuốc nguyên vẹn và chất chuyển hóa của nó là acid hoặc kiềm yếu (tốc độ bài tiết phụ thuộc vào pH); tốc độ bài tiết phụ thuộc vào tốc

độ dòng nước tiểu

Về mặt kỹ thuật, để định lượng nồng độ thuốc trong nước tiểu không cần thiết phải có phương pháp có độ nhạy cao, vì có thể thu được một lượng nước tiểu lớn để có thể nâng cao nồng độ khi cần Nồng độ thuốc nguyên vẹn hoặc chất chuyển hóa của nó trong nước tiểu thường cao hơn, ít bị cản trở bởi các protein và các chất khác có trong máu do đó dễ định lượng hơn

Khó khăn lớn nhất là cần thiết phải thu thập đủ lượng nước tiểu, tránh mất mát lượng nước tiểu trong từng phân đoạn, vì hàm lượng của thuốc được bài tiết trong nước tiểu liên quan đến thể tích nước tiểu thu thập được trong các phân đoạn lấy mẫu Muốn vậy, cần phải kiểm soát chặt chẽ người tình nguyện và lượng nước uống phải đủ để thu được lượng nước tiểu đầy đủ Tương tự như xác định nồng độ thuốc trong máu, sự xác định nồng độ thuốc trong nước tiểu cũng căn cứ trên giả định là các thông số dược động học không phụ thuộc vào liều dùng; nếu sự bài tiết thuốc qua thận đạt đến trạng thái bão hoà, tỉ lệ phần trăm thuốc bài tiết qua nước tiểu không phản ánh được sinh khả dụng của thuốc

Ba thông số dược động học quan trọng cần xác định trong nghiên cứu sinh khả dụng qua nước tiểu là [14],[18], [19]:

- Ae (còn ký hiệu là dU hoặc ∑Xu): lượng thuốc chưa chuyển hoá được bài tiết qua nước tiểu Thông số Ae được xem là tương tự với diện tích

dưới đường cong nồng độ thời gian trong nghiên cứu sinh khả dụng dựa trên nồng độ thuốc trong máu

- Rmax (hoặc ERmax): tốc độ bài tiết tối đa, được tính từ tốc độ bài tiết thuốc trong các phân đoạn nước tiểu Thơng số Rmax được xem là tương

tự với nồng độ thuốc tối đa (Cmax) trong nghiên cứu sinh khả dụng dựa trên nồng độ thuốc trong máu

- Tmax: thời gian tốc độ bài tiết tối đa

Tương đương sinh học trong nghiên cứu dựa trên lượng thuốc bài tiết qua nước tiểu cũng được kết luận dựa trên phân tích khoảng tin cậy 90% (CI 90%) của 2 thơng số căn bản là Ae0-t và Rmax và phân tích two one- sided t test

Nồng độ thuốc bài tiết qua nước tiểu đã được áp dụng để đánh giá tương đương sinh học (hoặc sinh khả dụng) của các chế phẩm chứa Ampicillin [15], Nitrofurantoin [35], Lomefloxacin [26], Ranitidin [25]…

Đối với các thuốc chứa ion kali, sự xác định tương đương sinh học bằng cách so sánh nồng độ thuốc trong máu khơng thể áp dụng vì cơ chế tự cân bằng của cơ thể giúp điều chỉnh lượng ion kali trong máu ở một giới hạn hẹp, nên nồng độ ion kali trong máu khơng phản ánh được lượng ion kali đã hấp thu [30], [32] Phương pháp sử dụng lượng thuốc bài tiết trong nước tiểu rất thuận lợi vì trong điều kiện thể trạng bình thường, lượng ion kali đào thải qua đường tiểu tỉ lệ với lượng kali đã hấp thu

Thời gian sau khi dùng một liều

Chương II

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU – THIẾT BỊ – HOÁ CHẤT

Đối tượng nghiên cứu

- Thuốc thử nghiệm: Viên nén bao phim Kali clorid 600 mg phóng thích kéo dài (tương đương 8 mEq), lô số 020806, hàm lượng 102,1 % Thuốc thử nghiệm được sản xuất ở qui mô pilot với cỡ lô 30.000 viên và đạt tiêu chuẩn

cơ sở

- Thuốc đối chiếu: Viên nén Kaleorid® LP 600 mg, lô số DA 8417, sản xuất bởi Pharmaceutical Products, Đan Mạch, ngày sản xuất 09/2006, hạn dùng 09/2011, hàm lượng 100,5 %

Các mẫu thuốc đối chiếu và thuốc thử nghiệm đã được kiểm nghiệm tại Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Tp.HCM, kết quả cả 2 mẫu thuốc đều đạt tiêu chuẩn cơ

sở (phụ lục 1 và phụ lục 2)

- Các mẫu nước tiểu, máu, phân thu thập từ người tình nguyện tham gia

nghiên cứu

Trang thiết bị

Cân phân tích điện tử Metter HR 200, độ nhạy 0,1 mg

Máy thử độ hòa tan Pharma Test PTWS 3C

Máy pH kế Metler Metrohm IT40010, có chức năng đo điện thế, điện cực Bạc titrode 60431100

Máy ADVIA 1650, Ser.No CA 176515-825 (Bayer -Đức)

Điện cực chọn lọc ion K+ Ser.No 15656

Điện cực đối chiếu ISE 00824710 ( B01-4173-51)

Hoá chất – Thuốc thử [3]

Dung dịch chuẩn điện cực chọn lọc ion (ADVIA ISE Standard Set)

ADVIA ISE Serum Standard Set: REF 00615933, Prod.No B03-4175-0 có thành phần Formaldehyd 0,1%, Na+ 130 - 160 mEq/L, K+ 3,5 - 6 mEq/L, Cl-

-1 Ống rút mẫu thử 11 Van bơm dung dịch đối chiếu

2 Mẫu thử 12 Bơm nhu động

3 Trục trộn 13 Khối chất thải

4 Que trộn 14 Bộ phận làm nóng

5 Điện cực Cl 15 Đường ống phân phối

6 Điện cực Na 16 Van bơm dung dịch đệm

7 Điện cực K 17 Bơm dung dịch đệm

8 Buồng pha loãng 18 Bộ phận khử khí

9 Điện cực đối chiếu 19 Dung dịch đệm

10 Dung dịch đối chiếu

Hình 2.3 Sơ đồ cấu hình hệ thống ISE của máy ADVIA 1650

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1. So sánh tốc độ phóng thích In vitro

Thử nghiệm phóng thích dược chất được thực hiện theo hướng dẫn của FDA[30]: Các viên được thử trong 900 ml nước cất ở nhiệt độ 37 ± 0,5oC; với thiết bị cánh khuấy với tốc độ 50 vòng/phút Mẫu được lấy cách mỗi giờ đến khi lượng dược chất phóng thích trên 80%

Ở mỗi thời điểm quy định, lấy chính xác 10 ml dung dịch thử, thêm 25 ml nước cất, 5 ml dung dịch acid acetic 25% và 0,1 ml dung dịch kali sulfat bão hòa Định lượng bằng dung dịch AgNO3 0,01N Điểm tương đương được xác định bằng bước nhảy thế Song song tiến hành với mẫu trắng [7]

1 ml dung dịch AgNO3 0,01N tương đương 0,7455 mg kali clorid

Thử nghiệm được thực hiện trên 12 đơn vị thuốc thử nghiệm (Viên nén Kali clorid 600 mg phóng thích kéo dài) và 12 đơn vị thuốc đối chiếu (viên Kaleorid® LP 600 mg)

Ngoài ra, viên còn được thử trong môi trường pH 1,2 và pH 6,8; khi đó phương pháp ISE được dùng để định lượng ion kali có trong môi trường thử

và sau đó tính ra lượng kali clorid

Hệ số f2 được ứng dụng để so sánh sự tương đồng về tốc độ phóng thích hoạt chất giữa 2 sản phẩm: tốc độ phóng thích được xem là tương đương nhau khi giá trị f2 trong khoảng 50 -100 Hệ số f2 được tính theo công thức :

5 , 0

1

2

n x

t : thời điểm lấy mẫu

2.2.2 Đánh giá tương đương sinh học in vivo

2.2.2.1 Mô hình nghiên cứu

Nghiên cứu được thực hiện theo mô hình thử nghiệm ngẫu nhiên, liều đơn, chéo đôi, 2 thuốc, 2 trình tự, 2 giai đoạn

- Người tình nguyện

Hai mươi bốn người tình nguyện khoẻ mạnh, phái nam đã tham gia vào thử nghiệm Người tình nguyện đã được phổ biến về mục tiêu nghiên cứu, cách cho uống thuốc, thời gian lấy mẫu dịch sinh học, số lượng và lượng mẫu mỗi lần lấy và các tác dụng phụ có thể xảy ra khi tham gia thử nghiệm

Tiêu chuẩn chấp nhận tham gia nghiên cứu

Người tình nguyện tham gia vào nghiên cứu là người khoẻ mạnh, phái nam, thể trạng và sức khoẻ bình thường căn cứ vào kết quả khám sức khoẻ tổng quát và xét nghiệm các thông số sinh hoá căn bản gồm:

Creatinin huyết Creatinin niệu

Cân nặng và chiều cao phải phù hợp trong giới hạn bình thường; chỉ số khối

cơ thể (Body Mass Index – BMI) phải trong khoảng 18-25

Tiêu chuẩn loại trừ:

- Có các dấu hiệu bệnh lý về thận, tiêu hóa, tim mạch, gan, thần kinh hoặc rối loạn thận-tụy

- Có dấu hiệu bất thường về thể chất và các thông số sinh học

- Hiện đang hút thuốc hoặc đã từng hút thuốc trong thời gian 6 tháng trước thử nghiệm

- Sử dụng các thuốc có tính chất kích thích hoặc ức chế men trong thời gian 30 ngày trước thử nghiệm

- Có tiền sử nghiện rượu

- Có tiền sử quá mẫn với dược chất hoặc các chất tương tự

- Sử dụng các thuốc kê toa hoặc không kê toa trong thời gian 2 tuần trước thử nghiệm

Các khuyến nghị đối với người tình nguyện [30], [32]:

Không nên có các hoạt động thể chất mạnh trong thời gian 7 ngày trước thử nghiệm và trong thời gian thử nghiệm

Không uống các thức uống có cồn 48 giờ trước khi dùng thuốc và trong thời gian thử nghiệm

Khẩu phần ăn và điều kiện sinh hoạt

Người tình nguyện được dùng khẩu phần ăn tương đối giống nhau đã được tiêu chuẩn hóa theo bảng nhu cầu dinh dưỡng khuyến nghị cho người Việt Nam do Viện dinh dưỡng ban hành [5], [6] và theo hướng dẫn cho thuốc thử nghiệm là kali [30], [32]

Người tình nguyện phải uống 3,7 lít nước/ngày để đảm bảo có thể bài tiết đủ lượng nước tiểu cho nghiên cứu Lượng nước này thường cao hơn lượng nước uống bình thường trong ngày (1,3-2,5 lít/ngày)

Người tình nguyện phải ở trong điều kiện có điều hòa nhiệt độ trong suốt thời gian thử nghiệm, càng ở trong nhà nhiều thì tốt Cần hạn chế các hoạt động thể lực để tránh đổ mồ hôi

Các bữa ăn được phục vụ vào những khoảng thời gian đã định trước

v Thu thập mẫu nước tiểu - máu

Người tình nguyện được yêu cầu cung cấp các mẫu nước tiểu vào bình chứa

có ký hiệu riêng của từng người và từng phân đoạn Thể tích nước tiểu ở mỗi phân đoạn trên người tình nguyện sẽ được ghi nhận bởi 2 nhân viên của nhóm nghiên cứu Các mẫu nước tiểu phải được trích ra một phần để được định lượng nồng độ ion kali ngay trong ngày thu thập mẫu nước tiểu Sau khi lấy mẫu phân tích, tất cả các mẫu nước tiểu của từng người tình nguyện sẽ được tập trung lại (thể tích nước tiểu thu được trong 24 giờ) để phân tích creatinin niệu Trường hợp phải để lâu, các mẫu phải được trữ ở nhiệt độ -25 oC cho đến khi phân tích Thời điểm lấy mẫu nước tiểu được trình bày trong bảng 2.1

Bảng 2.1 Bảng thu thập mẫu nước tiểu của NTN ở từng phân đoạn

Từ giờ- đến giờ Phân đoạn tính theo thời điểm uống

thuốc (giờ – giờ)

2.2.2.2 Thiết kế nghiên cứu

Theo mô hình chéo đôi, nghiên cứu được thực hiện trong 2 giai đoạn, thời gian nghỉ giữa 2 lần dùng thuốc là 7 ngày Mỗi giai đoạn gồm 3 ngày (72 giờ) được phân bổ như sau:

Ngày 1 (Ngày xác định kali căn bản): Người tình nguyện đến nơi nghiên cứu vào lúc 6 giờ Người tình nguyện được yêu cầu loại bỏ toàn bộ phần nước tiểu trong cơ thể Người tình nguyện uống 500 ml nước vào 7 giờ sáng, và uống

200 ml nước cách mỗi giờ cho đến 23 giờ Người tình nguyện bắt đầu cung cấp mẫu nước tiểu vào lúc 7 giờ sáng theo bảng 2.1

Ngày 2 (Ngày uống thuốc nghiên cứu): Người tình nguyện uống 10 viên Kali clorid 600 mg PTKD hoặc 10 viên Kaleorid® vào lúc 7 giờ với 500 ml nước, người tình nguyện được yêu cầu uống 200 ml nước cách mỗi giờ cho đến 23 giờ Người tình nguyện bắt đầu cung cấp mẫu nước tiểu từ 7 giờ sáng theo bảng 2.1

Ngày theo dõi tình trạng sức khỏe người tình nguyện và xác định kali bài tiết trong 48 giờ (ngày 3): Người tình nguyện tiếp tục uống nước và cho mẫu nước tiểu tương tự ngày 1 Người tình nguyện rời khỏi nơi nghiên cứu sau khi lấy mẫu nước tiểu cuối cùng vào lúc 7 giờ sáng hôm sau theo bảng 2.1

Một mẫu máu 3 ml được lấy vào khoảng 14 giờ để xác định creatinin huyết và thanh thải creatinin

Một mẫu phân được lấy ở lần đi tiêu gần nhất sau khi uống thuốc để tìm máu trong phân

Người tình nguyện phải giữ tư thế thẳng (ngồi thẳng, đứng thẳng, hoặc đi chậm) trong khoảng 3 giờ sau khi uống thuốc

Theo dõi dấu hiệu lâm sàng và tác dụng phụ

- Hai bác sĩ và 2 điều dưỡng túc trực thường xuyên tại phòng nghiên cứu

để theo dõi phát hiện và xử lý các triệu chứng (do tác dụng phụ hoặc không do tác dụng phụ của thuốc) xảy ra cho người tình nguyện nếu có

Để đề phòng trường hợp tăng kali huyết quá mức có thể ảnh hưởng đến sức khỏe người tình nguyện, điện tâm đồ được đo vào khoảng 14 giờ (6-7 giờ sau khi uống thuốc thử nghiệm hoặc thuốc đối chiếu) trong ngày uống thuốc Kali huyết được đo vào khoảng 14 giờ để phát hiện các trường hợp kali huyết tăng đến giới hạn nguy hiểm (nếu có)

- Bản kê khai tác dụng phụ được điền bởi người tình nguyện trong 24 giờ sau khi uống thuốc thử nghiệm hoặc thuốc đối chiếu để thống kê những tác dụng phụ xảy ra nếu có

- Các mẫu phân của người tình nguyện được xét nghiêm tìm máu trong phân bằng phương pháp soi tươi để phát hiện biến chứng tại hệ tiêu hoá nếu có

2.2.2.3 Phân tích nồng độ ion kali trong nước tiểu

Nồng độ ion kali trong nước tiểu được phân tích bằng phương pháp ISE (điện cực chọn lọc ion) trên máy ADVIA 1650 (Bayer)

Nguyên tắc: Mẫu thử được pha với dung dịch đệm ISE Dịch thử này khi trao đổi qua màng của điện cực chọn lọc ion sẽ làm phát sinh điện thế Sự thay đổi điện thế sẽ cho một giá trị chính xác từ mẫu đo [20]

Qui trình định lượng sẽ được thẩm định về tính đặc hiệu, giới hạn định lượng,

độ chính xác trong ngày, độ chính xác liên ngày, độ đúng trong ngày và độ đúng liên ngày

2.2.3 Xử lý và phân tích dữ liệu thực nghiệm – xác định các thông số

dược động học trên người tình nguyện uống thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu

Các thông số dược động học Rmax, Tmax, Ae 0-24, Ae 0-48 được tính từ số liệu thực nghiệm nồng độ ion K+ trong nước tiểu theo thời gian của từng cá thể

Các thông số được tính toán trên từng người tình nguyện theo công thức và được xử lý, phân tích số liệu bằng chương trình Excel

v Hàm lượng ion kali có trong mỗi phân đoạn nước tiểu (Ae)

1000

M x V

Ae = (mEq) (2) V: Thể tích nước tiểu (ml)

M: Kết quả định lượng (mEq/L)

v Lượng ion kali tăng trong mỗi phân đoạn trước và sau khi uống thuốc (∆X)

∆Ae = AeT – AeCB (3)

AeCB: Hàm lượng kali căn bản trong phân đoạn (mEq)

AeT : Hàm lượng kali bài tiết trong ngày uống thuốc của phân đoạn (mEq)

v Tổng lượng kali bài tiết tới thời điểm t (Ae 0-t)

h: Số giờ có trong phân đoạn (giờ)

v Thời gian đạt tốc độ bài tiết tối đa (Tmax)

Tmax = Thời điểm đạt Rmax tương ứng (giờ) (5)

v Tỉ lệ phần trăm ion kali bài tiết sau t giờ so với liều uống (F)

100 (%) 0 x

D

Ae

Ae 0-t: Tổng lượng kali bài tiết tính đến thời điểm t (mEq)

D: Liều cho thuốc (mEq)

v Thanh thải Creatinin (CC)

t

V x P

U

CC = (7)

CC : Hệ số thanh thải (ml/phút)

U : Hàm lượng creatinin trong nước tiểu (mg/100ml)

P : Hàm lượng creatinin trong máu (mg/100ml)

V : Thể tích nước tiểu trong t phút (ml)

t : Thời gian tương ứng với phân đoạn lấy mẫu (phút)

* Hằng số tốc độ thải trừ (Kel)

Hằng số tốc độ thải trừ của thuốc được tính bằng phương pháp MINUS: tốc độ thải trừ của thuốc có dạng đường thẳng được mô tả theo phương trình tuyến tính sau:

SIGMA-303,2log

)log(A e∞ −A e = A e∞ −Kel x t (8)

∞

e

A : lượng thuốc được thải trừ tại thời điểm cuối (mEq)

Ae: lượng thuốc được thải trừ tại thời điểm t (mEq)

Kel: hằng số tốc độ thải trừ (giờ -1)

Độ dốc của đường tuyến tính có giá trị là

303,2

Kel

− (giờ -1) (9) Thời gian bán thải của dạng thuốc:

t1/2 =

Kel

693 , 0

(giờ) (10)

2.2.4 Phân tích thống kê để xác định tương đương sinh học

Phân tích thống kê (p=0,05) được thực hiện với các số liệu thô và số liệu chuyển dạng logarit của các thông số dược động học (Ae0-24, Rmax và Tmax)

Tương đương sinh học được xác định bằng phân tích two one-sided t test với

khoảng tin cậy 90 % của các số liệu Ae0-24, Rmax và Tmax đã chuyển dạng logarit Khoảng tin cậy 90 % được xác định theo công thức [27]:

CI =

n S t

R T

2 )

(µ −µ ± 0,95(ν)× (11)

µT: Trung bình từ mẫu dùng thuốc thử

µR: Trung bình từ mẫu dùng thuốc đối chiếu

ν : bậc tự do (ν = n – 1)

S: Căn bậc 2 của bình phương sai số trung bình thu được từ kết quả phân tích ANOVA

n: số người tình nguyện tham gia vào mô hình chéo đôi

Chương III

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

3.1 SO SÁNH TỐC ĐỘ PHĨNG THÍCH CỦA THUỐC THỬ NGHIỆM

VÀ THUỐC ĐỐI CHIẾU

Kết quả so sánh tốc độ phĩng thích dược chất bằng hệ số f2 cho thấy thuốc thử nghiệm và thuốc đối chiếu cĩ tốc độ phĩng thích tương đương nhau ở

cả 3 mơi trường thử là nước cất, dung dịch HCl 0,1 N và mơi trường đệm phopshat pH 6,8 Hệ số f2 tính tốn được khi so sánh sự tương đồng về tốc

độ phĩng thích dược chất đều đạt trong khoảng 76,92 đến 90,98 (giới hạn 50-100 ) sự phĩng thích dược chất là tương đương nhau Lượng dược chất phĩng thích từ các viên trong cùng một mơi trường rất đồng nhất, hệ số phân tán của 12 đơn vị thuốc đều nhỏ hơn 10% tại tất cả các thời điểm (phụ lục 3 – 8)

Hinh 3.4 Đồ thị so sánh lượng kali clorid phĩng thích in vitro của thuốc

thử nghiệm và thuốc đối chiếu trong mơi trường HCl 0,1N (f2= 85,30)

Trong môi trường HCl 0,1N

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

Hinh 3.5 Đồ thị so sánh lượng kali clorid phĩng thích in vitro của thuốc

thử nghiệm và thuốc đối chiếu trong mơi trường nước cất (f2=76,92)

Hinh 3.6 Đồ thị so sánh lượng kali clorid phĩng thích in vitro của thuốc

thử nghiệm và thuốc đối chiếu trong mơi trường dung dịch đệm phosphat

pH 6,8 (f2=90,98)

Tỉ lệ phần trăm kali clorid phĩng thích trong cả 3 mơi trường đều như nhau ở

cả 2 loại thuốc, nên kết luận pH của mơi trường khơng ảnh hưởng đến tốc độ

phĩng thích dược chất in vitro Khả năng phĩng thích dược chất in vivo dự

đốn sẽ ổn định khi thuốc di chuyển qua các vùng cĩ pH khác nhau của hệ tiêu hố

Trong môi trường nước cất

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Trong môi trường đệm pH 6,8

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

3.2 NGHIÊN CỨU TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC

3.2.1.Thẩm định qui trình phân tích ion kali trong nước tiểu bằng phương pháp điện cực chọn lọc ion (ISE)

Tính đặc hiệu

Hệ thống ADVIA 1650 có thể định lượng 3 ion K+, Na+, Cl- trong dịch sinh học bằng 3 điện cực chọn lọc khác nhau, trong đó mỗi điện cực có tính đặc hiệu (chọn lọc) cho mỗi loại ion

Hình 3.7 Điện cực chọn lọc ion kali

Giới hạn định lượng

Giới hạn định lượng bằng phương pháp ISE trên máy ADVIA 1650 đối với ion kali đã được nhà cung cấp xác định trong khoảng 1-300 mEq/L khi dùng điện cực chọn lọc ion kali mã số Ser.No 15656

Độ chính xác

Độ chính xác trong ngày và giữa các ngày phân tích khác nhau được thực hiện bằng cách phân tích các mẫu thử có ion kali ở 3 nồng độ thấp, trung bình

và cao (tương ứng khoảng 1 mEq/L, 40 mEq/L và 80 mEq/L) Tất cả các mẫu

này đều được pha trong nước tiểu đã biết trước nồng độ là 1,02 mEq/ L

Độ chính xác trong ngày

Phân tích dịch thử có 3 nồng độ được pha như trên, mỗi nồng độ được đo 6 lần trong cùng thời điểm trong ngày, cùng một người làm và trong cùng một

phòng thí nghiệm Các lần thử được tiến hành độc lập với nhau Kết quả được trình bày ở bảng 3.2

Độ chính xác liên ngày

Phân tích dịch thử có 3 nồng độ được pha như trên, mỗi nồng độ được đo 6 lần trong 6 ngày khác nhau, cùng một người làm và trong cùng một phòng thí nghiệm Các lần thử được tiến hành độc lập với nhau Kết quả được trình bày

ở bảng 3.3

Độ chính xác trong ngày và liên ngày ở nồng độ thấp có hệ số phân tán nhỏ hơn 20 %, ở nồng độ trung bình, nồng độ cao có hệ số phân tán nhỏ hơn 15 % Phương pháp đạt độ chính xác theo yêu cầu để phân tích nồng độ thuốc trong dịch sinh học

Bảng 3.2 Kết quả khảo sát độ chính xác giữa các lần đo trong ngày

Số lần đo Nồng độ thấp

(mEq/L)

Nồng độ trung bình (mEq/L)

Nồng độ cao (mEq/L)

Nồng độ cao (mEq/L)

Độ đúng

Độ đúng trong ngày và giữa các ngày khác nhau được thực hiện bằng cách phân tích các mẫu thử chứa ion kali ở 3 nồng độ thấp, trung bình và cao (tương ứng khoảng 1 mEq/L, 40 mEq/L và 80 mEq/L) Tất cả các mẫu được

pha trong nước tiểu đã biết trước nồng độ là 1,02 mEq/ L

Độ đúng trong ngày

Phân tích dịch thử có 3 nồng độ được pha như trên, mỗi nồng độ được pha 6 lần trong cùng thời điểm trong ngày, cùng một người pha mẫu và trong cùng một phòng thí nghiệm Các lần thử được tiến hành độc lập với nhau Kết quả được trình bày ở bảng 3.4

Độ đúng liên ngày

Phân tích dịch thử có 3 nồng độ được pha như trên, mỗi nồng độ được pha 6 lần trong 6 ngày khác nhau, cùng một người pha mẫu và trong cùng một phòng thí nghiệm Các lần thử được tiến hành độc lập với nhau Kết quả được trình bày ở bảng 3.5

Độ đúng trong ngày và liên ngày ở nồng độ thấp có hệ số phân tán nhỏ hơn

20 %, ở nồng độ trung bình, nồng độ cao có hệ số phân tán nhỏ hơn 15 % Phương pháp đạt độ đúng theo yêu cầu

Bảng 3.4 Kết quả khảo sát độ đúng giữa các lần đo trong ngày

Số lần đo Nồng độ thấp

(mEq/L)

Nồng độ trung bình (mEq/L)

Nồng độ cao (mEq/L)