GIỚI THIỆU LUẬN ÁN 1. Đặt vấn đề Metformin hydroclorid thuộc nhóm biguanid và sitagliptin thuộc nhóm ức chế men DPP-4 thường được sử dụng điều trị đái tháo đường mang hiệu quả kiểm soát tốt không gây hạ đường huyết quá mức và không gây tăng cân. Tuy nhiên, nhược điểm nhược điểm của metformin hydroclorid là có thời gian bán thải ngắn 3-4 giờ, sinh khả dụng thấp (50%) gây bất tiện khi phải dùng thuốc nhiều lần trong ngày. Ngược lại, sitagliptin có thời gian bán thải dài 12,6 giờ. Do đó, việc bào chế kết hợp thuốc metformin hydroclorid phóng thích kéo dài và sitagliptin phóng thích tức thời là giải pháp giúp kiểm soát đường huyết ổn định cả ngày, giảm tác dụng phụ không mong muốn. Về mặt bào chế, metformin hydroclorid là hoạt chất chịu nén kém, dễ tan trong nước và hàm lượng trong dạng bào chế cao nên việc lựa chọn polyme và kỹ thuật bào chế thích hợp để kiểm soát sự phóng thích kéo dài rất khó khăn. Điều này cũng gây bất lợi cho việc phối hợp 2 hoạt chất metformin hydroclorid phóng thích kéo dài và sitagliptin phóng thích tức thời trong một dạng bào chế với khối lượng viên phù hợp cho sử dụng. Hiện nay, ở Việt Nam chưa có nghiên cứu dangj viên phối hợp 2 thành phần trên, vì vậy đề tài “Nghiên cứu bào chế và đánh giá tương đương sinh học viên nén phóng thích kéo dài chứa metformin và sitagliptin” được thực hiện nhằm bào chế viên nén 2 lớp bao phim chứa 2 thành phần metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài và sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời đạt tiêu chuẩn chất lượng, độ ổn định và tương đương sinh học với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg, góp phần phát triển các dạng thuốc mới được sản xuất trong nước, đáp ứng nhu cầu điều trị cho nhiều đối tượng kể cả bệnh nhân có bảo hiểm y tế, thay thế thuốc ngoại nhập. Mục tiêu nghiên cứu của đề tài là: - Nghiên cứu bào chế viên nén 2 lớp chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài và sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời. - Nghiên cứu nâng cỡ lô lên quy mô 10.000 viên/lô. - Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở và theo dõi độ ổn định của sản phẩm. - Đánh giá tương đương sinh học thuốc nghiên cứu chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài và sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg. 2. Tính cấp thiết của đề tài Đái tháo đường là một bệnh mạn tính đang gia tăng trên toàn cầu. Ở Việt Nam, năm 2014 có khoảng hai triệu người bị bệnh đái tháo đường. Số người mắc bệnh đái tháo đường đang tăng lên với tốc độ đáng báo động, với tỷ lệ tăng gấp đôi trong vòng 10 năm qua. Bệnh không được kiểm soát tốt có thể dẫn đến nhồi máu cơ tim và đột quỵ, hoại tử chi, suy thận…làm ảnh hưởng nhiều đến chất lượng cuộc sống. Theo hiện hội Đái tháo đường Hoa kỳ ADA 2018, có thể bắt đầu với đơn trị liệu metformin sau đó kết hợp các nhóm khác trong đó sitagliptin là thuốc không bị FDA cảnh báo đóng khung hoặc cảnh báo đặc biệt. Việc điều trị bằng cách phối hợp metformin và sitagliptin là lựa chọn kiểm soát đường huyết tốt.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN NGỌC NHÃ THẢO NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC VIÊN NÉN PHĨNG THÍCH KÉO DÀI CHỨA METFORMIN VÀ SITAGLIPTIN Chuyên ngành: Công nghệ dược phẩm & bào chế thuốc Mã số: 62720402 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh, năm 2019 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Metformin hydroclorid thuộc nhóm biguanid sitagliptin thuộc nhóm ức chế men DPP-4 thường sử dụng điều trị đái tháo đường mang hiệu kiểm soát tốt không gây hạ đường huyết mức không gây tăng cân Tuy nhiên, nhược điểm nhược điểm metformin hydroclorid có thời gian bán thải ngắn 3-4 giờ, sinh khả dụng thấp (50%) gây bất tiện phải dùng thuốc nhiều lần ngày Ngược lại, sitagliptin có thời gian bán thải dài 12,6 Do đó, việc bào chế kết hợp thuốc metformin hydroclorid phóng thích kéo dài sitagliptin phóng thích tức thời giải pháp giúp kiểm soát đường huyết ổn định ngày, giảm tác dụng phụ không mong muốn Về mặt bào chế, metformin hydroclorid hoạt chất chịu nén kém, dễ tan nước hàm lượng dạng bào chế cao nên việc lựa chọn polyme kỹ thuật bào chế thích hợp để kiểm sốt phóng thích kéo dài khó khăn Điều gây bất lợi cho việc phối hợp hoạt chất metformin hydroclorid phóng thích kéo dài sitagliptin phóng thích tức thời dạng bào chế với khối lượng viên phù hợp cho sử dụng Hiện nay, Việt Nam chưa có nghiên cứu dangj viên phối hợp thành phần trên, đề tài “Nghiên cứu bào chế đánh giá tương đương sinh học viên nén phóng thích kéo dài chứa metformin sitagliptin” thực nhằm bào chế viên nén lớp bao phim chứa thành phần metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời đạt tiêu chuẩn chất lượng, độ ổn định tương đương sinh học với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg, góp phần phát triển dạng thuốc sản xuất nước, đáp ứng nhu cầu điều trị cho nhiều đối tượng kể bệnh nhân có bảo hiểm y tế, thay thuốc ngoại nhập Mục tiêu nghiên cứu đề tài là: - Nghiên cứu bào chế viên nén lớp chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời - Nghiên cứu nâng cỡ lô lên quy mô 10.000 viên/lô - Xây dựng tiêu chuẩn sở theo dõi độ ổn định sản phẩm - Đánh giá tương đương sinh học thuốc nghiên cứu chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg Tính cấp thiết đề tài Đái tháo đường bệnh mạn tính gia tăng tồn cầu Ở Việt Nam, năm 2014 có khoảng hai triệu người bị bệnh đái tháo đường Số người mắc bệnh đái tháo đường tăng lên với tốc độ đáng báo động, với tỷ lệ tăng gấp đôi vòng 10 năm qua Bệnh khơng kiểm sốt tốt dẫn đến nhồi máu tim đột quỵ, hoại tử chi, suy thận…làm ảnh hưởng nhiều đến chất lượng sống Theo hội Đái tháo đường Hoa kỳ ADA 2018, bắt đầu với đơn trị liệu metformin sau kết hợp nhóm khác sitagliptin thuốc khơng bị FDA cảnh báo đóng khung cảnh báo đặc biệt Việc điều trị cách phối hợp metformin sitagliptin lựa chọn kiểm sốt đường huyết tốt Những đóng góp luận án Cơng thức quy trình bào chế viên hai lớp chứa hoạt chất metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời nghiên cứu thành cơng phương pháp khảo sát thực nghiệm kết hợp tối ưu hóa Thuốc nghiên cứu đạt độ ổn định, đạt tiêu chuẩn sở tương đương hòa tan in vitro với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg Lần Việt Nam, kỹ thuật phối hợp polyme giúp kiểm sốt tốt phóng thích hoạt chất có hàm lượng cao dễ tan nước metformin hydroclorid 500 mg chế phẩm chứa đồng thời thành phần sitagliptin 50 mg với chế phóng thích tức thời cơng bố Quy trình định lượng đồng thời metformin sitagliptin huyết tương người phương pháp LC-MS/MS xây dựng thẩm định Thử nghiệm người tình nguyện ghi nhận kết thuốc nghiên cứu chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời tương đương sinh học với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg Đây kết hoàn toàn thực người tình nguyện Việt Nam Bố cục luận án Luận án có 145 trang chính: đặt vấn đề trang; Tổng quan tài liệu 26 trang; Đối tượng Phương pháp nghiên cứu 29 trang; Kết nghiên cứu 65 trang, Bàn luận 20 trang; kết luận trang; kiến nghị trang Luận án có 102 bảng; 26 hình; 17 biểu đồ; 115 tài liệu tham khảo gồm 25 tài liệu tiếng Việt 90 tài liệu tiếng Anh; 137 trang phụ lục thể kết thực nghiệm Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan metformin hydroclorid, sitagliptin Metformin hydroclorid: Tinh thể màu trắng, dễ tan nước, tan ethanol 96%, thực tế không tan ether, cloroform, aceton methylen clorid pKa metformin 12,4, log P - 1,8 Sitagliptin: Tinh thể trắng vàng nhạt, khơng hút ẩm, tan nước N,N-dimethyl formamid, tan methanol tan ethanol, aceton, acetonitril Sitagliptin có pKa 8,8 Độ tan nước 0,034 mg/ml Log P 1,95 1.2 Thuốc phóng thích kéo dài dạng khung matrix Hệ thống khung matrix hệ thống phân phối thuốc kiểm sốt, phóng thích thuốc liên tục chế kiểm sốt hòa tan kiểm sốt khuếch tán hai Để kiểm sốt việc phóng thích loại thuốc có độ tan khác nhau, thuốc phân tán tá dược thân nước có khả trương nở, khung matrix không tan nước tá dược kỵ nước tá dược nhựa dẻo không trương nở cứng Một số tá dược phóng thích kéo dài có cấu trúc khung xốp thường dùng: hydroxylpropyl methyl cellulose (HPMC), Na CMC, gôm xanthan 1.3 Đánh giá tương đương sinh học Việc đánh giá tương đương sinh học tiến hành theo hướng dẫn Bộ Y tế, Hiệp hội Quốc gia Đông Nam Á (ASEAN) Cơ quan Quản lý Thuốc Thực phẩm (FDA) Mỹ Cần tham khảo hướng dẫn để chọn mơ hình thiết kế nghiên cứu, tiêu chuẩn tuyển chọn người tình nguyện, uống thuốc lấy mẫu, phân tích mẫu dịch sinh học phù hợp 1.4 Các nghiên cứu liên quan đến thành phần metformin hydroclorid sitagliptin Các nghiên cứu bào chế, nghiên cứu định lượng hoạt chất chế phẩm, định lượng huyết tương người, xác định giới hạn tạp chất liên quan Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu - Sản phẩm thuốc thử (sản phẩm thuốc nghiên cứu): 03 lô sản phẩm nghiên cứu bào chế quy mô 10.000 viên/lô - Sản phẩm thuốc đối chiếu: Viên Janumet XR 50/500 mg (chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời) cơng ty Merck Sharp & Dolme BV-Mỹ sản xuất 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Xây dựng cơng thức quy trình bào chế viên chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời Bào chế lớp metformin hydroclorid phóng thích kéo dài phương pháp xát hạt ướt Khảo sát loại polyme, phối hợp polyme khảo sát polyme trộn để kéo dài phóng thích HPMC K100M, HPMC K15M, HPMC K100LV, gơm xanthan, Na CMC… Bào chế lớp sitagliptin phóng thích tức thời phương pháp dập thẳng với tỷ lệ tá dược siêu rã natri starch glycolat 5% Bảng 2.1 Thành phần cơng thức viên phóng thích kéo dài Simet XR Thành phần Metformin HCl Polyme tạo khung Polyme trộn PVP K30 Magnesi stearat Aerosil Nước (*) Ethanol 96o (*) Avicel PH101 Sitagliptin phosphat Ludipress Natri starch glycolat Povidon K90 Magnesi stearat Colloid silicon dioxid Dicalci phosphat Carmoisin lake Tổng cộng Tỷ lệ (%) 39,4 4,7 0,8 0,4 5,1 3,9 1,2 2,4 0,2 0,04 10,8 0.03 100 (*): loại trình điều chế Khối lượng (mg) 500 x1 x2 60 10 x3 (0,6 - x3) ml 1270,35- (x1 + x2) 64,25 50,00 15,00 30,00 2,50 0,50 137,75 0,35 1270.35 Các biến độc lập khảo sát x1: Lượng tá dược polyme tạo khung (mg) x2: Lượng tá dược polyme trộn (mg) x3: Lượng nước (ml) Kết độ giải phóng hoạt chất viên đối chiếu Janumet XR 50/500 mg làm sở độ phóng thích hoạt chất lớp phóng thích kéo dài chứa metformin hydroclorid với thơng số đầu gồm: Y1: hàm lượng metformin hydroclorid phóng thích thời điểm 24,0-32,0%, Y2: hàm lượng metformin hydroclorid phóng thích thời điểm 42,0-50,0%, Y3: hàm lượng metformin hydroclorid phóng thích thời điểm 77,0-85,0% Y4: hàm lượng metformin hydroclorid phóng thích thời điểm 10 94,0-102,0% Xác định công thức bào chế tối ưu: sử dụng phần mềm tối ưu hóa cơng thức BCPharsoft OPT Thực nghiệm kiểm chứng cơng thức tối ưu 2.2.2 Nghiên cứu nâng cỡ lô lên quy mô 10.000 viên/lô Bào chế quy mô 10.000 viên/lô thiết bị: máy trộn cao tốc, máy trộn lập phương máy sấy tầng sôi Xác định thông số thời gian trộn thiết bị Tiến hành dập viên kiểm soát phân tán khối lượng trung bình viên khối lượng trung bình lớp Bao phim viên nghiên cứu nhằm mục đích tránh cảm giác đắng sử dụng với hỗn dịch Opadry II, khảo sát thông số: tốc độ nồi, nhiệt độ khí vào, nhiệt độ viên, tốc độ phun, áp suất khí nén… máy bao phim 2.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn sở cho thành phẩm Tiêu chuẩn sở viên thành phẩm xây dựng dựa theo DĐVN V, USP 41, kết nghiên cứu gồm: hình thức cảm quan, độ đồng hàm lượng, độ hòa tan, giới hạn tạp chất liên quan, định tính, định lượng 2.2.4 Đánh giá độ ổn định thuốc nghiên cứu Nghiên cứu độ ổn định thực lô điều kiện bảo quản dài hạn (nhiệt độ 30 ± oC, độ ẩm tương đối 75 ± 5%) thời gian lấy mẫu 0, 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24 Các tiêu khảo sát gồm hình thức cảm quan, độ hòa tan, giới hạn tạp chất liên quan hàm lượng hoạt chất viên 2.2.5 Đánh giá tương đương sinh học thuốc nghiên cứu với thuốc đối chiếu Thẩm định quy trình định lượng đồng thời metformin sitagliptin huyết tương phương pháp LC-MS/MS theo US-FDA EMA Đánh giá tương đương độ hòa tan: thử độ hòa tan viên nghiên cứu viên đối chiếu môi trường pH 1,2; pH 4,5 pH 6,8 Xác định phần trăm phóng thích hoạt chất, so sánh tương đương thuốc thử thuốc đối chiếu thông qua hệ số tương đồng f2 môi trường Xác định sinh khả dụng đánh giá tương đương sinh học: thiết kế nghiên cứu, tuyển chọn người tình nguyện, uống thuốc, lấy mẫu máu, chiết xuất định lượng đồng thời metformin sitagliptin huyết tương, phân tích thơng số dược động học gồm Cmax, Tmax, AUC0-t, AUC0-∞ So sánh thông số dược động học AUC0-t, AUC0-∞, Cmax, Tmax thuốc thử với thuốc đối chiếu theo hướng dẫn nghiên cứu sinh khả dụng đánh giá tương đương sinh học hiệp hội nước ASEAN Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết xây dựng cơng thức quy trình bào chế viên metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời Để xây dựng thành phần công thức tối ưu lớp metformin hydroclorid Mơ hình thực nghiệm thiết kế phần mềm Design Expert v7.0 Bảng 3.1 Dữ liệu thực nghiệm bào chế kiểm nghiệm Công thức 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 x1 220 180 180 220 260 220 260 260 180 180 260 220 220 180 x2 75 75 50 90 50 90 90 75 90 75 50 75 50 50 x3 0,07 0,14 0,14 0,14 0,07 0,07 0,14 0,07 0,14 0,07 0,14 0,14 0,07 0,07 y1 31,83 30,19 32,23 29,38 35,00 30,49 27,46 31,10 29,55 32,57 31,61 29,82 35,25 35,45 y2 49,01 48,28 52,65 45,43 53,51 49,08 45,28 47,72 45,65 49,73 50,35 48,18 54,85 54,93 y3 83,41 86,74 87,08 84,63 82,31 82,58 80,99 82,01 84,04 87,08 83,23 83,38 87,12 90,39 y4 101,72 102,54 103,66 100,14 100,55 101,67 96,89 100,05 102,01 103,81 99,81 101,14 102,15 104,85 Bảng 3.2 Công thức tối ưu dự đoán phần mềm BCPharsoft OPT Dự đốn Thơng số dự đốn x1 246 x2 81 x3 0,12 Bảng 3.3 % metformin hydroclorid phóng thích so với dự đốn Dự đốn Cơng thức dự đốn Cơng thức tối ưu thực nghiệm Janumet XR 50/500 mg Phần trăm metformin hydroclorid (%) giờ 10 29,3 46,2 81,5 99,1 31,0 47,5 80,9 97,9 28,2 46,6 81,6 98,9 Thuốc nghiên cứu có phần trăm phóng thích hoạt chất gần tương tự thuốc đối chiếu đạt tiêu chuẩn USP 41 test chuyên luận viên nén phóng thích kéo dài chứa metformin hydroclorid 3.2 Kết nghiên cứu nâng cỡ lô lên quy mô 10.000 viên/lô Lớp metformin hydroclorid: trộn bột khô máy trộn cao tốc với tốc độ vòng 1.400 vòng/phút phút, thời gian sấy khơ cốm máy sấy tầng sôi nhiệt độ 60 oC 10 phút, trộn hoàn tất máy trộn lập phương với tốc độ vòng 45 vòng/phút 15 phút Lớp sitagliptin: trộn hỗn hợp bột khô máy trộn lập phương với tốc độ vòng 45 vòng/phút 10 phút Bảng 3.4 Chỉ tiêu kiểm nghiệm bán thành phẩm Độ ẩm Tỷ trọng biểu kiến Tốc độ chảy Cốm metformin HCL 2-5% 0,52 - 0,58 g/ml 9,8 – 11,1 g/s Hỗn hợp bột sitagliptin < 4% 0,6 - 0,7 g/ml 3,1 - 3,7 g/s Dập viên máy dập viên lớp, tốc độ 12 vòng/ phút; chày caplet 19 x 11 mm, dập lớp metformin hydroclorid với khối lượng trung bình đạt 970 mg/viên ± 3%, độ cứng sơ 70 N Chỉnh khối lượng trung bình viên lớp đạt 1280 mg/viên ± 3%, độ cứng 150 210 N, độ mài mòn < 1% Khoảng cách lần lấy mẫu kiểm tra khối lượng trung bình viên, khối lượng trung bình lớp 15 phút Cả lơ có độ phân tán khối lượng trung bình, độ đồng khối lượng độ mài mòn đạt yêu cầu, chứng tỏ quy trình sản xuất quy mô 10.000 viên/lô ổn định 3.3 Kết xây dựng tiêu chuẩn sở Bảng 3.5 Tiêu chuẩn sở kết kiểm nghiệm thuốc nghiên cứu Chỉ tiêu Hình thức Mức chất lượng Kết Lơ NC001 Viên nén bao phim, hình caplet, màu hồng cam nhạt, cạnh thành viên lành lặn Đạt 11 Thời điểm đánh giá (giờ) Lô Lô Lô Lô Lô 10 Lô Lô 47,5 ± 1,0 80,6 ± 1,3 80,0 ± 1,7 81,1 ± 2,7 97,1 ± 1,8 98,5 ± 1,9 97,9 ± 1,5 Thời gian theo dõi (tháng) 47,1 ± 47,4 ± 1,0 46,2 ± 1,4 1,6 79,9 ± 81,2 ± 2,2 81,3 ± 1,8 2,7 81,0 ± 82,1 ± 1,6 79,6 ± 1,0 1,6 81,8 ± 82,3 ± 2,3 81,2 ± 1,2 1,3 96,4 ± 96,2 ± 2,3 97,2 ± 1,9 1,9 96,4 ± 98,1 ± 2,3 95,9 ± 2,6 0,7 98,3 ± 97,0 ± 2,2 96,6 ± 2,8 1,7 12 47,6 ± 1,4 80,6 ± 1,8 81,3 ± 1,5 80,4 ± 2,0 95,2 ± 2,4 97,9 ± 1,5 95,8 ± 2,5 Bảng 3.7 Kết thử độ hòa tan sitagliptin điều kiện dài hạn Thời điểm đánh giá (giờ) Lô 1 Lô Lô 98,3 ± 1,4 97,3 ± 2,3 96,9 ± 2,2 Thời gian theo dõi (tháng) 98,1 ± 97,9 ± 98,2 ± 3,1 1,9 2,9 97,2 ± 96,5 ± 2,2 96,6 ± 3,2 2,7 98,0 ± 96,7 ± 2,7 96,1 ± 2,4 3,4 12 96,9 ± 3,2 97,6 ± 2,9 97,1 ± 2,7 Bảng 3.8 Sự thay đổi hàm lượng metformin HCl sitagliptin điều kiện dài hạn Tháng 12 Hàm lượng metformin HCL (%) Lô Lô Lô 103,0 102,1 101,3 101,5 101,8 100,7 100,6 100,9 100,9 102,4 99,8 100,3 100,8 100,1 99,4 Hàm lượng sitagliptin (%) Lô Lô Lô 99,0 99,6 98,8 99,8 99,4 99,1 98,9 98,5 98,7 98,1 98,2 97,6 98,5 98,1 97,8 12 3.5 Kết đánh giá tương đương sinh học thuốc nghiên cứu với thuốc đối chiếu 3.5.1 Kết xây dựng thẩm định quy trình định lượng hoạt chất huyết tương Đã xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời metforminvà sitagliptin huyết tương phương pháp sắc ký lỏng ghép lần khối phổ đạt yêu cầu phương pháp phân tích dịch sinh học theo US-FDA EMA Phương pháp ứng dụng nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học in vivo sinh khả dụng cho chế phẩm chứa metformin sitagliptin Hình 3.1 Sắc ký đồ mẫu chuẩn metformin, sitagliptin chuẩn nội điều kiện sắc ký phù hợp 3.5.2 Kết đánh giá tương đương in vitro thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu Bảng 3.9 Độ hòa tan metformin HCl sitagliptin mơi trường hòa tan (n = 12) Dược chất Sitagliptin (pH 1,2) Metformin hydroclorid (pH 1,2) Thời điểm phút 15 phút 30 phút So sánh giờ 10 So sánh Thuốc nghiên cứu Thuốc đối chiếu % TB hòa tan RSD (%) % TB hòa tan RSD (%) 15,06 7,32 14,26 5,46 59,39 4,09 68,58 2,58 98,86 6,21 99,36 3,21 f2 = 63,30 32,19 6,37 30,53 9,11 48,12 2,23 50,34 6,26 78,84 3,49 86,38 5,25 97,14 2,83 100,27 4,37 f2 = 67,50 13 Dược chất Sitagliptin (pH 4,5) Metformin hydroclorid (pH 4,5) Sitagliptin (pH 6,8) Metformin hydroclorid (pH 6,8) Thời điểm phút 15 phút 30 phút So sánh giờ 10 So sánh phút 15 phút 30 phút So sánh giờ 10 So sánh Thuốc nghiên cứu Thuốc đối chiếu % TB hòa tan RSD (%) % TB hòa tan RSD (%) 16,22 4,13 14,00 3,41 58,84 3,54 67,43 3,86 99,74 0,85 99,02 2,11 f2= 64,05 32,26 3,28 28,02 5,11 47,53 1,85 47,71 5,20 80,77 4,85 85,02 4,46 99,42 3,87 102,99 2,41 f2= 71,95 17,09 4,44 12,82 6,13 54,56 4,09 63,57 5,59 98,11 2,84 94,32 3,44 f2= 60,26 31,43 6,48 28,51 7,48 47,93 7,55 46,59 5,91 80,75 5,32 81,63 6,61 97,27 1,72 99,20 2,95 f2= 83,19 Các kết f2 lớn 50 Thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu tương đương hòa tan in vitro 3.5.3 Kết đánh giá tương đương sinh học in vivo Xác định thơng số dược động học trung bình tình trạng đói Bảng 3.71 Các thơng số dược động học trung bình metformin 14 người tình nguyện (NTN) dùng thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu tình trạng đói AUC0-∞ ± SD Tmax ± SD (giờ) (ng.giờ/ml) Chế phẩm Cmax ± SD (ng/ml) AUC0-48 ± SD (ng.giờ/ml) Thuốc nghiên cứu (SiMet XR) 707,3 ± 114,7 6137,4 ± 816,1 6225,5 ± 825,1 5,2 ± 1,5 Thuốc đối chiếu (Janumet XR 50/500 mg) 741,1± 124,0 6951,2 ± 1632,1 7020,2 ± 1646,0 5,4 ± 1,5 14 Bảng 3.10 Các thông số dược động học trung bình sitagliptin 14 NTN dùng thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu tình trạng đói Cmax ± SD (ng/ml) Chế phẩm AUC0-48 ± SD AUC0-∞ ± SD Tmax ± SD (ng.giờ/ml) (giờ) (ng.giờ/ml) Thuốc nghiên cứu 216,3 ± 52,1 (SiMet XR) Thuốc đối chiếu (Janumet XR 200,7 ± 46,6 50/500 mg) 1885,3 ± 226,8 1920,0 ± 234,1 2,9 ± 1,2 1857,4 ± 307,9 1888,3 ± 311,9 3,5 ± 1,7 Bảng 3.11 Tóm tắt số liệu so sánh sinh khả dụng metformin Thông số Giá trị trung bình* thuốc nghiên cứu 699,5 Giá trị trung bình* thuốc đối chiếu 731,4 AUC0-48 AUC0-∞ 6087,4 6175,1 6812,0 6879,8 Thơng số Giá trị trung bình* thuốc nghiên cứu 210,3 1872,0 1906,1 Cmax Tỷ lệ giá trị trung bình thuốc Khoảng tin cậy nghiên cứu/đối 90% chiếu* (%) 95,63 86,99%-105,14% 89,36 89,76 81,10%-98,47% 81,54%-98,80% Bảng 3.12 Tóm tắt số liệu so sánh sinh khả dụng sitagliptin Cmax AUC0-48 AUC0-∞ Giá trị trung bình* thuốc đối chiếu 195,5 1832,7 1863,2 Tỷ lệ giá trị trung bình thuốc nghiên cứu/đối chiếu* (%) 107,58 102,14 102,30 Khoảng tin cậy 90% 97,99%-118,11% 97,49%-107,02% 97,53%-107,30% Bảng 3.13 Tóm tắt số liệu so sánh sinh khả dụng metformin tình trạng đói tình trạng no Thơng số Cmax AUC0-48 AUC0-∞ Giá trị Giá trị trung bình* trung bình* thuốc thuốc đối nghiên cứu chiếu 856,3 918,7 10442,8 8481,1 10538,5 8555,5 *: Giá trị trung bình hình học Tỷ lệ giá trị trung bình thuốc nghiên cứu/đối chiếu* (%) 93,21 123,13 123,18 Khoảng tin cậy 90% 78,65%-110,47% 106,32%-142,60% 106,64%-142,28% 15 Bảng 3.14 Tóm tắt số liệu so sánh sinh khả dụng sitagliptin tình trạng đói tình trạng no Thơng số Cmax AUC0-48 AUC0-∞ Giá trị trung bình* thuốc nghiên cứu 205,3 Giá trị trung bình* thuốc đối chiếu 198,0 2151,9 2038,1 2210,2 2092,3 *: Giá trị trung bình hình học Tỷ lệ giá trị trung bình thuốc Khoảng tin cậy nghiên cứu/đối 90% chiếu* (%) 103,69 81,95%-131,21% 105,59 105,63 94,55%-117,91% 94,99%-117,47% Nhận xét: khoảng tin cậy 90% tỷ số thông số dược động học Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ hai chế phẩm chênh lệch không 80- 125% chuyển qua logarit Đối với metformin sitagliptin có Tmax thuốc thử so với thuốc đối chiếu khác khơng có ý nghĩa thống kê Như vậy, thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg tương đương sinh học với tình trạng đói Đối với sitagliptin: Sử dụng thuốc tình trạng no làm tăng nhẹ Cmax, Tmax AUC không bị ảnh hưởng so với tình trạng đói Đối với metformin: Sử dụng thuốc tình trạng no làm Cmax giảm, Tmax tăng, AUC tăng so với tình trạng đói Chương BÀN LUẬN 4.1 Xây dựng cơng thức quy trình bào chế Để tìm cơng thức tối ưu cho công thức lớp metformin hydroclorid sở công thức khảo sát, phần mềm Design Expert V7.0 BCPharsoft OPT sử dụng Trong đó, yếu tố khảo sát gồm lượng tá dược tạo khung, lượng tá dược trộn lượng nước dùng giai đoạn xát hạt ướt Kết ảnh hưởng yếu tố đến độ hòa tan thời điểm cho thấy x1 x2 ảnh hưởng nhiều đến độ hòa tan metformin hydroclorid 16 thời điểm Riêng x3 khoảng khảo sát có ảnh hưởng đến kết độ hòa tan Giới hạn khối lượng x1 x2 để đạt độ hòa tan gần với thuốc đối chiếu 220 mg 75 mg; khoảng khảo sát x1 x2 bị nằm lệch qua phần khối lượng khoảng khối lượng cho độ hòa tan đạt yêu cầu gần với độ hòa tan thuốc đối chiếu nên không xác định giới hạn khối lượng x1 x2 Kết giải thích giới hạn khối lượng viên Mục đích thiết kế viên lớp có khối lượng viên khoảng 1,3 g để gần giống với khối lượng viên đối chiếu đồng thời đảm bảo thể tích viên phù hợp để dễ uống đặc biệt đối tượng bệnh nhân lớn tuổi Để khảo sát cận khối lượng x1 x2 mà đảm bảo thể tích viên phù hợp khảo sát tăng thêm khối lượng viên chuyển kỹ thuật bào chế từ viên lớp thành viên bao với lớp bao chứa hoạt chất sitagliptin Tuy nhiên, mức khối lượng chọn tìm cơng thức tối ưu cho kết biến phụ thuộc đạt yêu cầu với f2 so với thuốc đối chiếu Janumet XR cao f2 83 môi trường pH 6,8 Công thức tối ưu cho phóng thích hoạt chất đạt u cầu theo USP 41 gần sát với kết độ hòa tan thuốc đối chiếu Việc phối hợp polyme trộn ngồi sử dụng nước cơng thức để kiểm sốt phóng thích chưa thấy đề tài công bố áp dụng Các nghiên cứu viên metformin phóng thích kéo dài cơng bố Trần Thị Vân Anh cộng (2012), Bùi Tuyết Mai cộng (2012) sử dụng HPMC làm khung khuếch tán kiểm sốt phóng thích hoạt chất metformin, khơng sử dụng thêm kỹ thuật để kiểm sốt phóng thích thời điểm đầu Các nghiên cứu bào chế viên nén metformin phóng thích kéo dài tương đương với thuốc đối chiếu Glucophage XR 500 mg Tuy nhiên, hệ số tương tự f2 nghiên cứu đạt nhỏ 75 Nếu sử dụng HPMC 17 nghiên cứu này, việc kiểm sốt khơng tốt phóng thích hoạt chất thời điểm đầu dẫn đến khả tương đương độ hòa tan in vitro với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg thấp Lý thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg bào chế dạng bao phim với lớp bao chứa hoạt chất sitagliptin, làm cản trở phóng thích thời điểm đầu Điều chứng minh tiến hành thực nghiệm đánh giá so sánh độ hòa tan thuốc nghiên cứu (công thức tối ưu) với thuốc đối chiếu Glucophage XR 500 mg cho thấy hệ số f2 đạt cao 92 môi trường pH 6,8, so sánh với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg hệ số f2 đạt 83 mơi trường pH 6,8 4.2 Nghiên cứu nâng cỡ lô Quá trình nâng cấp cỡ lơ nghiên cứu máy móc phù hợp máy trộn cao tốc, sấy tầng sôi, máy trộn lập phương Ở giai đoạn sấy khô quy mô 10.000 viên/lô thời gian sấy 10 phút Nếu so với dùng tủ sấy-thời gian tốn quy mơ sản xuất rút ngắn thời gian sấy nhiều Như vậy, quy trình sản xuất quy mơ 10.000 viên/lơ sử dụng máy móc có cơng suất cao giúp rút ngắn thời gian bào chế, giảm chi phí cho sản xuất đồng thời sản phẩm đạt yêu cầu kiểm tra bán thành phẩm thành phẩm 4.3 Xây dựng tiêu chuẩn sở đánh giá độ ổn định thành phẩm Chế phẩm viên nén chứa thành phần metformin phóng thích kéo dài sitagliptin phóng thích tức thời chưa có chuyện luận riêng DĐVN V khơng có BP 2018 USP 41, việc xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm thành phẩm dựa chuyên luận riêng hoạt chất sẵn có dược điển kết 18 kiểm nghiệm thuốc nghiên cứu Qua tham khảo tài liệu tiêu chuẩn kiểm nghiệm, tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nén chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời đề xuất bao gồm tiêu: hình thức cảm quan, độ đồng hàm lượng, định tính, giới hạn tạp chất, độ hòa tan định lượng Ba lô nghiên cứu bào chế quy mô 10.000 viên, đánh giá độ ổn định dài hạn 12 tháng cấp tốc tháng cho thấy giữ chất lượng sản phẩm đạt yêu cầu tiêu chuẩn sở Kết chứng tỏ việc chọn bao bì cách đóng gói thuốc nghiên cứu phù hợp, thuốc nghiên cứu đạt tiêu chất lượng theo tiêu chuẩn sở bảo quản tốt lọ kín, nhiệt độ bảo quản 30 oC ± oC, độ ẩm tương đối 75% ± 5% 4.4 Đánh giá tương đương sinh học 4.4.1 So sánh độ hòa tan thuốc đối chiếu thuốc nghiên cứu Việc tiến hành đánh giá tương đương in vitro thuốc nghiên cứu với thuốc đối chiếu ba môi trường pH 1,2; 4,5 6,8 định lượng hoạt chất phương pháp HPLC thẩm định Từ kết thực nghiệm, cho thấy: - Đối với metformin hydroclorid: hệ số tương đồng f2 hai chế phẩm môi trường pH 1,2; 4,5 6,8 67,5; 71,95 83,19 (tất lớn 50) Ngoài ra, hầu hết thời điểm lấy mẫu, RSD không 10% theo quy định FDA - Đối với sitagliptin: tương tự với metformin hydroclorid kết f2 môi trường lớn 50 19 Như vậy, chế phẩm xem tương đương in vitro với Janumet XR 50/500 mg ba mơi trường hòa tan pH 1,2; 4,5 6,8 Ngoài ra, sử dụng cơng cụ f2 để so sánh khả phóng thích metformin hydroclorid cặp mơi trường, nhận thấy chế phẩm nghiên cứu phóng thích metformin hydroclorid khơng phụ thuộc vào mơi trường hòa tan (f2 cặp môi trường lớn 50 tương đương), cho phép thuốc hấp thu suốt theo chiều dài ống tiêu hóa Bảng 4.1 Hệ số tương đồng f2 thuốc nghiên cứu độ hòa tan metformin hydroclorid cặp môi trường Cặp môi trường f2 pH 1,2 – pH 4,5 pH 4,5 – pH 6,8 87,0 pH 6,8 – pH 1,2 89,8 89,4 Tóm lại, từ kết độ hòa tan, dự đốn mơ hình phóng thích hoạt chất chế phẩm nghiên cứu thuốc đối chiếu ống tiêu hóa tương tự nhau, làm sở ban đầu cho tương đồng trình hấp thu thuốc vào máu để đạt hiệu trị liệu thuốc nghiên cứu với thuốc đối chiếu 4.4.2 Phương pháp định lượng hoạt chất đánh giá tương đương sinh học Điều kiện khối phổ sắc ký cho thời gian lưu metformin hydroclorid, chuẩn nội sitagliptin khoảng 1,18; 1,26; 1,40 phút Thời gian phân tích cho mẫu khoảng phút phù hợp cho phương pháp phân tích thuốc với số mẫu sinh học lớn Phương pháp xử lý mẫu đơn giản, tốn thời gian, làm mẫu, mẫu mục tiêu quan trọng phát triển phương pháp phân tích, đặc biệt quan trọng phân tích dịch sinh học Nhiều phương pháp xử lý mẫu khác 20 thực khảo sát: Phương pháp chiết lỏng – lỏng, phương pháp tủa protein Kết thực nghiệm cho thấy quy trình xử lý mẫu MeOH không sử dụng cô quay cho hiệu suất chiết hoạt chất cao nhất, cường độ tín hiệu hoạt chất cao ổn định, hình dạng pic cân đối ổn định, thời gian xử lý mẫu nhanh đơn giản tủa protein MeOH có sử dụng cô quay So sánh với kỹ thuật SPE phương pháp xử lý mẫu hỗn hợp dung mơi chiết khó bay, quy trình xử lý mẫu đề tài đơn giản hơn, khơng đòi hỏi trang thiết bị đặc biệt, dễ thực kinh tế mà tổng số mẫu nghiên cứu sinh khả dụng/tương đương sinh học nhiều Cơng trình Bonde S.L cộng (2013) sử dụng phương pháp xử lý mẫu đơn giản, tốn kém, tủa protein ACN Tuy nhiên, phương pháp có hiệu suất chiết metformin hydroclorid q thấp (38,06 - 42,57%) Cơng trình John G S cộng (2011) sử dụng kit xử lý mẫu dịch sinh học FTA DKMP–C để loại tạp, giá thành đắt phổ biến Việt Nam nên không phù hợp để triển khai đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học Phương pháp phân tích thẩm định đầy đủ đạt yêu cầu theo hướng dẫn US-FDA 2018 thẩm định phương pháp phân tích dịch sinh học với tiêu: tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, ảnh hưởng mẫu, độ nhiễm chéo, đường chuẩn khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng dưới, độ độ xác, độ ổn định hoạt chất Kết nghiên cứu đảm bảo phương pháp phân tích có đủ độ tin cậy, đặc hiệu xác, sử dụng nghiên cứu tương đương sinh học người 4.4.3 Đánh giá tương đương sinh học Xác định tương đương sinh học nhằm so sánh sinh khả dụng thuốc nghiên cứu so với thuốc đối chiếu Từ đó, làm sở cho 21 việc lựa chọn thay thuốc nước với thuốc ngoại nhập Ngoài ra, dự đốn trước có tương đương trị liệu thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu hay không Nghiên cứu đề tài thực cỡ mẫu 14 người tình nguyện so với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg Thiết kế theo mơ hình chéo, ngẫu nhiên, đơn liều, thuốc, giai đoạn, trình tự Tồn quy trình thực tuân thủ nghiêm ngặt theo quy trình thao tác chuẩn Các kết đánh giá tương đương sinh học tình trạng đói cho thấy có ảnh hưởng yếu tố cá thể lên thông số dược động học (Cmax AUC) sitagliptin Các kết nghiên cứu thống kê thông số dược động học hai thuốc tình trạng đói cho thấy phương pháp thử nghiệm đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học đề tài thành công chế phẩm đạt tương đương in vivo so với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg tình trạng đói Thử nghiệm tình trạng no cho thấy thức ăn ảnh hưởng đến sinh khả dụng metformin so với tình trạng đói mẫu thuốc nghiên cứu Kết đánh giá ảnh hưởng thức ăn thuốc nghiên cứu có tương đồng với ảnh hưởng thức ăn thuốc đối chiếu nghiên cứu công bố Như vậy, kết thông số dược động học công bố hàm lượng metformin khác có ảnh hưởng thức ăn Kết đánh giá thuốc nghiên cứu ghi nhận ảnh hưởng thức ăn tương đồng với viên phóng thích kéo dài chứa metformin hydroclorid hàm lượng 500 mg làm tăng AUC, tăng Tmax Riêng giá trị Cmax giảm Đối với sitagliptin, kết đánh giá thuốc nghiên cứu cho thấy dùng chung với bữa ăn không ảnh hưởng đến dược động học sitagliptin Kết tương đồng với tài 22 liệu trích dẫn Như vậy, ý nghĩa thực tiễn kết tương đương sinh học thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg cho phép thay cho sử dụng thuốc generic điều trị; ý nghĩa khoa học, nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học thuốc chứa metformin hydroclorid phóng thích kéo dài sitagliptin phóng thích tức thời với Janumet XR 50/500 mg thực người tình nguyện Việt Nam KẾT LUẬN Viên nén chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời nghiên cứu hoàn thành nội dung, mục tiêu nghiên cứu đặt sau: Xây dựng cơng thức bào chế, quy trình bào chế viên chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời: Đã chọn thành phần tá dược tạo khung kiểm sốt phóng thích hoạt chất lớp metformin gồm polyme HPMC K100M carbopol trộn lượng nước xát hạt ướt với tỷ lệ tối ưu cho kiểm sốt phóng thích hoạt chất viên 245 mg, 81 mg 0,12 ml; thành phần tá dược giúp hình thành viên phóng thích tức thời cho lớp sitagliptin gồm 15 mg natri starch glycolat 30 mg PVP K90 Ngoài ra, thành phần tá dược khác (tá dược độn, trơn, bóng) cơng thức xác định Nâng cỡ lô lên quy mô 10.000 viên/lô Cụ thể bào chế lô quy mô 10.000 viên/lô kết hợp đánh giá thơng số quy trình thực nghiệm Các kết cho thấy quy trình đạt ổn định cần thiết Sản phẩm 03 lô bào chế quy mơ 10.000 viên/lơ có chất lượng tương đồng đạt tiêu chuẩn quy định, có độ 23 hòa tan đạt yêu cầu đặt Điều cho thấy q trình nâng cỡ lơ lên quy mơ 10.000 viên/lô thành công Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng sản phẩm với tiêu (hình thức cảm quan, độ đồng hàm lượng, định tính, định lượng, giới hạn tạp chất, độ hòa tan) phương pháp kiểm nghiệm thẩm định đầy đủ theo hướng dẫn ICH Tiêu chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương thẩm định, đưa vào áp dụng để phân tích, kiểm nghiệm mẫu thuốc nghiên cứu thuốc đối chiếu trước tiến hành nghiên cứu tương đương sinh học in vivo Đã theo dõi độ ổn định sản phẩm điều kiện dài hạn điều kiện cấp tốc lô 10.000 viên/lô Kết sản phẩm đạt độ ổn định sau 12 tháng điều kiện dài hạn tháng điều kiện cấp tốc Đánh giá tương đương sinh học thuốc nghiên cứu so với thuốc đối chiếu Các kết đạt được: - Quy trình định lượng hoạt chất huyết tương người phương pháp LC-MS/MS đạt yêu cầu theo hướng dẫn FDA 2018, áp dụng để định lượng hoạt chất huyết tương người tình nguyện đánh giá tương đương sinh học thuốc - Đánh giá tương đương sinh học sản phẩm 14 người tình nguyện Việt Nam khỏe mạnh tình trạng đói xác nhận sản phẩm đề tài đạt tương đương sinh học với thuốc đối chiếu Janumet XR 50/500 mg - Ảnh hưởng thức ăn lên sinh khả dụng thuốc nghiên cứu cho thấy thức ăn làm kéo dài Tmax tăng AUC 24 metformin; Cmax metformin, Cmax sitagliptin, Tmax AUC sitagliptin không bị ảnh hưởng bới thức ăn KIẾN NGHỊ Để hoàn thiện đề tài, nội dung sau đề nghị: Tiếp tục theo dõi độ ổn định thuốc điều kiện dài hạn để xác định tuổi thọ sản phẩm Nâng cỡ lô lên quy mô pilot Hợp tác, triển khai sản xuất DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Ngọc Nhã Thảo, Lâm Thị Kim Cương, Nguyễn Thị Ngọc Vân, Trịnh Thị Thu Loan, Nguyễn Đức Tuấn (2016), “Định lượng đồng thời metformin sitagliptin viên nén hai lớp phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao”, Tạp chí dược học, 484, tr 56-58 Nguyen Ngoc Nha Thao, Nguyen Ngoc Hieu, Do Chau Minh Vinh Tho, Nguyen Duc Tuan (2017), “Development and validation of LC-MS/MS method for simultaneous determination of metformin hydrocloride and sitagliptin in human plasma”, Proceedings of The 2nd International Conference on Pharmacy Education and Research Network of ASEAN (ASEAN PharmNET II), pp 323-332 Nguyễn Ngọc Nhã Thảo, Nguyễn Đức Tuấn, Trịnh Thị Thu Loan (2019), “Nghiên cứu cơng thức viên chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, phụ tập 23, số 2-2019, tr 150-160 ... trên, đề tài Nghiên cứu bào chế đánh giá tương đương sinh học viên nén phóng thích kéo dài chứa metformin sitagliptin thực nhằm bào chế viên nén lớp bao phim chứa thành phần metformin hydroclorid. .. ngoại nhập Mục tiêu nghiên cứu đề tài là: - Nghiên cứu bào chế viên nén lớp chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích tức thời - Nghiên cứu nâng cỡ lô lên... 10.000 viên/ lô - Xây dựng tiêu chuẩn sở theo dõi độ ổn định sản phẩm - Đánh giá tương đương sinh học thuốc nghiên cứu chứa metformin hydroclorid 500 mg phóng thích kéo dài sitagliptin 50 mg phóng thích