Sản xuất thử nghiệm một số cao dược liệu phục vụ công nghiệp dược

Công ty TNHH Nam Dược, Diệp hạ Châu, VG-5 Công ty Cổ phần Dược DANAPHAẦ Các dược liệu trên ựã ựược Trung tâm Nghiên cứu và Sản xuất Dược liệu miền Trung phối hợp với Viện Công nghệ Hóa h

UBND TP HỒ CHÍ MINH

TT NC & SX DƯỢC LIỆU MIỀN TRUNG

BÁO CÁO NGHIỆM THU

(đã chỉnh sửa theo góp ý của Hội ựồng nghiệm thu)

DỰ ÁN

SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM MỘT SỐ CAO

DƯỢC LIỆU PHỤC VỤ CÔNG NGHIỆP DƯỢC

PHẦN II BÁO CÁO TOÀN VĂN

CHỦ NHIỆM đỀ TÀI

T ÓM TẮT KẾT QUẢ THỰC HIỆN DỰ ÁN

Hiện nay, các cây thuốc như Diệp hạ châu (Phyllanthus amarus Schum et Thonn.), Giá ựậu nành (Glycin max.), Bạch tật lê (Tribulus terrestris L.), Khổ qua (Momordica charantia L.), Xuyên tâm liên (Andrographolis paniculata Burm F Nees)

và Gừng (Zingiber officinal Rosc.) ựã ựược các công ty dược phẩm trong nước thu mua

và chế biến thành các loại cao hoặc sản xuất dưới nhiều dạng chế phẩm khác nhau như ORTENZIO, BRONZONI (Công ty Cổ phần Sản xuất Thương mại dược phẩm đông Nam), TÂY SA, SAVIGOLD (Công ty SAVIPHARM), Thanh huyết kháng viêm (Công

ty Khang Minh), BẢO XUÂN, HAMEGA (Công ty TNHH Nam Dược), Diệp hạ Châu, VG-5 (Công ty Cổ phần Dược DANAPHA)Ầ

Các dược liệu trên ựã ựược Trung tâm Nghiên cứu và Sản xuất Dược liệu miền Trung phối hợp với Viện Công nghệ Hóa học nghiên cứu và ựã công bố một số công trình về chiết xuất, phân lập và xác ựịnh cấu trúc trong phòng thắ nghiệm cũng như ựầu tư công nghệ ựể chiết xuất pilot và ựã cung cấp với số lượng nhỏ cho các Công ty trên Trong khi ựó nhu cầu về sản xuất các dược liệu nói trên là rất lớn nên ựòi hỏi phải có sự nghiên cứu hoàn thiện công nghệ chiết xuất cũng như các phương pháp kiểm nghiệm, ựánh giá chất lượng ựể ựưa ra thị trường những sản phẩm ựạt chất lượng theo yêu cầu của

Bộ Y tế

Mục tiêu của Dự án là hoàn thiện công nghệ sản xuất 6 loại cao sấy phun: Bạch tật

lê, Diệp hạ châu, Giá ựậu nành, Khổ qua, Xuyên tâm liên và Gừng (Nhật bản); phân lập các chất ựánh dấu (marker); xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho 6 loại bột sấy phun và 6 chất ựánh dấu của các dược liệu trên

Xuất xứ của Dự án là kế thừa kết quả của các ựề tài nghiên cứu cấp Viện Khoa học & Công nghệ Việt Nam và Bộ Y tế từ năm 2000 Ờ 2008

Dự án ựã ựạt ựược các kết quả như sau:

1 đã xác ựịnh nguồn nguyên liệu ựang trồng ựại trà (theo tiêu chuẩn ViệtGAP) tại Trung tâm nghiên cứu và Sản xuất dược liệu miền Trung bằng vi phẫu và soi bột của các cây Bạch tật lê, Diệp hạ châu, Giá ựậu nành, Khổ qua, Xuyên tâm liên và Gừng

2 đã khảo sát các ựiều kiện chiết xuất quy mô phòng thắ nghiệm Riêng với Gừng, khảo sát thêm các ựiều ựể chiết xuất tinh dầu theo phương pháp lôi cuốn hơi nước

3 đã phân lập các chất ựánh dấu (marker) dưới dạng tinh khiết bằng các phương pháp chiết lỏng Ờ lỏng, chiết pha rắn, sắc ký cột pha thường, sắc ký cột pha ựão, các phương pháp kết tinh của Bạch tật lê, Diệp hạ châu, Giá đậu nành, Khổ qua, Xuyên tâm liên như sau: Tribulosin (100 mg), Phyllanthin (100 mg), Hypophyllanthin (100 mg), Niranthin (100 mg), Genistein (100 mg), Charantin (100 mg) và Andrographolid (100 mg) Tất cả các chất tinh khiết phân lập ựược ựều ựược xác ựịnh bằng các phương pháp phổ hiện ựại như NMR, IR, MS và xác ựịnh ựộ tinh khiết của các chất ựánh dấu trên bằng HPLC

4 Khảo sát các ựiều kiện chiết xuất tối ưu quy mô 100 - 200 kg/mẻ trên thiết bị hiện có tại Trung tâm Nghiên cứu và Sản xuất Dược liệu miền Trung, huyện đông Hòa, tỉnh Phú Yên

5 đã khảo sát ựiều kiện sấy phun với ựiều kiện mất 10 lắt nước/giờ như: nhiệt ựộ, tỷ lệ phụ gia, lưu lượng, hàm lượng dịch rắn trong dịch sấy phunẦ

6 đã xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho 6 sản phẩm bột sấy phun, xác ựịnh các tiêu chuẩn: hàm

ẩm, ựộ tan, kắch cỡ hạt, hàm lượng kim loại nặng, vi sinh, hàm lượng chất bảo vệ thực vật, hàm lượng chất ựánh dấuẦ

7 đã xây dựng tiêu chuẩn chất ựánh dấu (marker) Tribulosin, Phyllanthin, Hypophyllanthin, Niranthin, Genistein, Charantin và Andrographolid như: cảm quan, ựộ tinh sạch, ựộ tan, ựiểm nóng chảy, các ựặc ựiểm phổ NMR, MS

8 đã sản xuất 6 loại cao sấy phun với số lượng như sau: Bạch tật lê (50 kg), Diệp hạ châu (3.490 kg), Giá ựậu nành (2.600 kg), Khổ qua (35 kg), Xuyên tâm liên (200 kg), Gừng Nhật bản (300 kg), Tinh dầu Gừng (100 kg), Bột sấy phun Gừng (150 kg) Ngoài ra còn sản xuất cao ựặc Diệp hạ châu (550 kg)

9 đã sản xuất 7 chất ựánh dấu dưới dạng tinh kiết > 97 % (HPLC) , mỗi loại 200 mg là: Tribulosin, Phyllanthin, Hypophyllathin, Niranthin, Genistein, Charantin và Andrographolid

Tổng doanh số ựã bán là 4.240.925 ựồng (Bốn tỉ hai trăm bốn mươi triệu chắn trăm

hai mươi lăm ngàn ựồng) so với kế hoạch ựã ựăng ký là 3.030.000 ựồng (Ba tỉ ba mươi triệu ựồng), cho các công ty dược như Công ty cổ phần Dược DANAPHA (đà Nẵng),

Công ty TNHH Nam Dược (Nam định), Công ty Khang Minh (TP Hồ Chắ Minh), Công

ty đông Nam ( TP Hồ Chắ Minh)

- Dự án ñã góp phần chuyển ñổi cơ cấu cây trồng cho nông dân sống vùng ñất cát ven biển, ven sông miền Trung Các nông dân trồng Diệp hạ châu, Gừng Nhật Bản, Khổ qua, Xuyên tâm liên… có thu nhập cao và ổn ñịnh Bình quân 1 ha thu nhập ñược từ 200

- 250 triệu

- ðơn vị thực hiện dự án – Trung tâm Nghiên cứu và Sản xuất dược liệu miền

Trung có ñiều kiện ñổi mới thiết bị sản xuất hiện ñại hơn, năng suất cao hơn và chất

lượng ổn ñịnh hơn so với thiết bị cũ, cho phép Trung tâm ñáp ứng ñầy ñủ các yêu cầu

về số lượng cũng như chất lượng của các xí nghiệp dược

- Các sản phẩm chất chuẩn của Dự án ñã góp phần tiêu chuẩn hoá, ñịnh lượng ñuợc các hoạt chất chính trong sản phẩm, nâng cao giá trị sản phẩm, chất lượng dược liệu và các thuốc sản xuất từ dược liệu của Việt Nam

Dự án cũng góp phần ñào tạo 03 Luận văn Thạc sĩ Hoá học và 03 luận văn Thạc

sĩ Dược học và ñã công bố 02 bài báo ñã ñăng ở Tạp chí Hoá học (2009), 01 bài báo ñã ñăng ở Tạp chí Y học Thực hành TP HCM (2010)

I

THÔNG TIN CHUNG

1 Tên dự án: SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM MỘT SỐ CAO DƯỢC LIỆU

PHỤC VỤ CÔNG NGHIỆP DƯỢC

2 Chủ nhiệm ñề tài: PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh và CN Lê Thị Tuyết Anh

3 Cơ quan chủ trì: TRUNG TÂM NC & SX DƯỢC LIỆU MIỀN TRUNG

4 Thời gian thực hiện ñề tài: 24 tháng 10/2008 ñến 10/2010

5 Kinh phí ñược duyệt: 2.500.000.000 ñồng (Hai tỷ năm trăm triệu ñồng)

- Phân lập các chất ñánh dấu cho mỗi loại dược liệu

- Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở của 6 lọai cao sấy phun trên

- Xây dựng tiêu chuẩn chất ñánh dấu (marker) của 6 lọai cao trên

8 Nội dung thực hiện:

- Khảo sát nguyên liệu, xác ñịnh nguồn nguyên liệu thực vật bằng vi phẫu và soi bột dược liệu

- Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất quy mô phòng thí nghiệm như nhiệt ñộ, thời gian, dung môi, tỉ lệ dung môi / nguyên liệu …

- Cô lập các chất ñánh dấu (marker) như Phyllanthin, Hypophyllanthin, Niranthin (Diệp hạ châu), Genistein (Giá ñậu nành), Tribulosin (Bạch tật lê), Charanthin (Khổ qua), Andrographolid (Xuyên tâm liên) dưới dạng tinh khiết bằng các phương pháp chiết lỏng – lỏng, chiết pha rắn, sắc ký cột pha thường, sắc ký cột pha ñão, các phương pháp kết tinh…

- Xác ñịnh cấu trúc các chất tinh khiết bằng các phương pháp phổ hiện ñại như UV,

IR, Mass, cộng hưởng từ hạt nhân 1 chiều, 2 chiều

- Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất tối ưu quy mô 100-200 kg/mẻ như nhiệt ñộ, thời gian, tỉ lệ dung môi / nguyên liệu …

- Khảo sát ñiều kiện sấy phun với ñiều kiện mất 10 lít nước/giờ nhiệt ñộ, tỉ lệ phụ gia, lưu lượng, hàm lượng rắn trong dịch phun …

II

- Xác ựịnh ựộ tinh khiết chất ựánh dấu (marker) bằng HPLC

- Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở 6 bột sấy phun (hàm ẩm, ựộ tan, cỡ hạt, hàm lượng kim loại nặng, vi sinh, hàm lượng chất ựánh dấu,Ầ)

- Thẩm ựịnh các phương pháp kiểm nghiệm và ựịnh lượng

II KẾT QUẢ THỰC HIỆN (Giai ựoạn 1)

Tóm tắt các nội dung thực hiện ở giai ựoạn 1 (ựối chiếu với hợp ựồng ựã ký):

1 Khảo sát nguyên liệu, xác ựịnh

nguồn nguyên liệu thực vật

bằng vi phẫu và soi bột dược

liệu

đã xác ựịnh nguồn nguyên liệu thực vật bằng

vi phẫu và soi bột dược liệu trên cả 6 ựối tượng nghiên cứu là Bạch tật lê, Diệp hạ châu, Giá đậu nành, Khổ qua, Xuyên tâm liên và Gừng

2 Khảo sát các ựiều kiện chiết

xuất quy mô phòng thắ nghiệm

Khảo sát các ựiều kiện chiết xuất quy mô phòng thắ nghiệm trên cả 5 ựối tượng nghiên cứu là Bạch tật lê, Diệp hạ châu, Giá đậu nành, Khổ qua và Xuyên tâm liên Riêng với Gừng,

ựã khảo sát các ựiều ựể chiết xuất tinh dầu theo phương pháp lôi cuốn hơi nước

đã phân lập ựược các chất ựánh dấu từ Bạch tật

lê, Diệp hạ châu, Giá đậu nành, Khổ qua, Xuyên tâm liên như sau: Tribulosin (100 mg), Phyllanthin (100 mg), Hypophyllanthin (100 mg), Niranthin (100 mg), Genistein (100 mg), Charantin (100 mg), Andrographolid (100 mg)

5 Khảo sát các ựiều kiện chiết

xuất tối ưu quy mô 100-200

kg/mẻ

Khảo sát các ựiều kiện chiết xuất quy mô phòng thắ nghiệm trên cả 5 ựối tượng nghiên cứu là Bạch tật lê, Diệp hạ châu, Giá đậu nành, Khổ qua và Xuyên tâm liên

6 Báo cáo sơ kết giai ựoạn I 10/2009

III

Tóm tắt các nội dung thực hiện ở giai ñoạn 2 (ñối chiếu với hợp ñồng ñã ký):

1 Khảo sát ñiều kiện sấy phun với

ñiều kiện mất 10 lít nước/giờ

Các ñiều kiện: nhiệt ñộ, tỷ lệ phụ gia, lưu lượng, hàm lượng dịch rắn trong dịch sấy phun…

2 Xác ñịnh ñộ tinh khiết chất

ñánh dấu (marker) bằng HPLC

Kết quả ñộ tinh khiết của 7 chất ñánh dấu

3 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho

6 sản phẩm bột sấy phun

Xác ñịnh các tiêu chuẩn: hàm ẩm, ñộ tan, kích

cỡ hạt, hàm lượng kim loại nặng, vi sinh, hàm lượng chất bảo vệ thực vật, hàm lượng chất ñánh dấu…

4 Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất cao chiết quy mô phòng thí nghiệm 14

1.1 Xác ñịnh nguồn nguyên liệu thực vật bằng vi phẫu và soi bột

dược liệu

17 1.2 Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất Bạch tật lê quy mô phòng thí

1.7 Khảo sát ñộ tinh khiết chất ñánh dấu Tribulosin bằng HPLC 31

2.9 Khảo sát ñộ tinh khiết chất ñánh dấu Phyllanthin bằng HPLC 47

3.1 Xác ñịnh nguồn nguyên liệu thực vật bằng vi phẫu và soi bột

dược liệu

48 3.2 Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất Giá ñậu nành quy mô phòng

3.7 Khảo sát ñộ tinh khiết chất ñánh dấu Genistein bằng HPLC 59

4.7 Khảo sát ñộ tinh khiết chất ñánh dấu Charantin bằng HPLC 80

5.1 Xác ñịnh nguồn nguyên liệu thực vật bằng vi phẫu và soi bột

5.7 Khảo sát ñộ tinh khiết chất ñánh dấu Andrographolid bằng

mô phòng thí nghiệm

103 6.3 Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất tinh dầu Gừng Nhật bản tối ưu 104

VI

quy mô 100 kg/mẻ

‘

DEPT Detortionless Enhancement by Polarization Transfer

1H–NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance

HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence

HPLC High Performance Liquid Chromatography

HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation

NaHCO3 Sodium bicarbonate

ppm Parts per million

TLC Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng)

Hình 6: Cành lá mang hoa quả của Phyllanthus amarus 6

Hình 43: Phổ IR - Tribulosin / mẩu ñối chiếu (viên ép KBr) 31

Hình 45: Phổ UV - Vis của mẫu chuẩn ñối chiếu tribulosin 31 Hình 46: Phổ UV - Vis của mẫu cao khô BTL từ máy HPLC có ñầu dò PDA 31

X

Hình 68:Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Giá ñậu nành 51 Hình 69: Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Giá ñậu nành 52

Hình 72: Sắc ký ñồIR của a: daidzein (Viện CN Hóa Học); b: daidzein

Hình 84: Một số thành phần của bột vỏ quả Khổ qua 68 Hình 85: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Khổ

qua

69

Hình 86: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Khổ qua 70 Hình 87: Ảnh hưởng của thời gian với hiệu suất chiết Khổ qua 71 Hình 88: Dẫn xuất của Stigmasterol glucoside 74

Hình 89: β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside 75 Hình 90: Sắc ký ñồ của H1: dung dịch charantin ñối chiếu, H2: dung môi

MeOH

81

Hình 91: ðặc ñiểm giải phẫu thân Xuyên tâm liên 82 Hình 92: ðặc ñiểm giải phẫu lá Xuyên tâm liên 82 Hình 93: Thành phần bột thân và lá Xuyên tâm liên 83 Hình 94: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Xuyên tâm liên

XI

Hình 101: Sắc ký ñồ của dung dịch chứa andrographolid chuẩn 95 Hình 102: Sắc ký ñồ của dung dịch chứa A thêm chuẩn 96

Hình 104: Sắc ký ñồ chất A tại nhiều bước sóng 97

Hình 106: Sắc ký ñồ của dung dịch dehydoandrographolid chuẩn 98 Hình 107: Sắc ký ñồ của dung dịch D thêm chuẩn 98

Hình 109: Sắc ký ñồ chất D tại nhiều bước sóng 99

XII

DANH SÁCH BẢNG

Trang Bảng 1: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Bạch tật lê 18 Bảng 2: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Bạch tật lê 20 Bảng 3: Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Bạch tật lê 21 Bảng 4: Hiệu suất chiết của cao chiết Bạch tật lê 22

Bảng 6: Kết quả chiết xuất Bạch tật lê quy mô 100 kg/mẻ 29 Bảng 7: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ khí mang khi sấy phun Bạch tật lê 29 Bảng 8: Ảnh hưởng của hàm lượng chất rắn hoà tan khi sấy phun Bạch tật lê 30 Bảng 9: Ảnh hưởng của tỉ lệ phụ gia/cao chiết khi sấy phun Bạch tật lê 30 Bảng 10: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Diệp hạ

châu

35

Bảng 11: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Diệp hạ châu 36 Bảng 12: Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Diệp hạ châu 36 Bảng 13: Hiệu suất chiết của cao chiết Diệp hạ châu 37

Bảng 17: Kết quả chiết xuất Diệp hạ châu quy mô 100 kg/mẻ 45 Bảng 18: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ khí mang khi sấy phun Diệp hạ châu 45 Bảng 19: Ảnh hưởng của hàm lượng chất rắn hoà tan khi sấy phun Diệp hạ châu 46 Bảng 20: Ảnh hưởng của tỉ lệ phụ gia/cao chiết khi sấy phun Diệp hạ châu 46 Bảng 21: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Giá ñậu

nành

50

Bảng 22: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Giá ñậu nành 51 Bảng 23: Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Giá ñậu nành 52 Bảng 24: Hiệu suất chiết của cao chiết Giá ñậu nành 53 Bảng 25: Dữ liệu phổ 13C-NMR và DEPT của genistein 55 Bảng 26: Kết quả chiết xuất Giá ñậu nành quy mô 100 kg/mẻ 56 Bảng 27: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ khí mang khi sấy phun Giá ñậu nành 57 Bảng 28: Ảnh hưởng của hàm lượng chất rắn hoà tan khi sấy phun Giá ñậu nành 58 Bảng 29: Ảnh hưởng của tỉ lệ phụ gia/cao chiết khi sấy phun Giá ñậu nành 58 Bảng 30: Nhiệt ñộ nóng chảy của daidzein và genistein 59

XIII

Bảng 32: Kết quả ñịnh lượng chất ñối chiếu genistein (Viện Hóa Học) 63 Bảng 33: Kết quả ñịnh lượng chất ñối chiếu daidzein (Viện Hóa Học) 63 Bảng 34: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Khổ qua 68 Bảng 35: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Khổ qua 69 Bảng 36: Ảnh hưởng của thời gian với hiệu suất chiết Khổ qua 70 Bảng 37: Hiệu suất chiết của cao chiết Khổ qua 71 Bảng 38: Dữ liệu các phổ dẫn xuất stigmasterol glucoside và β-sitosterol

glucoside

75

Bảng 39: Kết quả chiết xuất Khổ qua quy mô 100 kg/mẻ 78 Bảng 40: Ảnh hưởng của tỉ lệ phụ gia/cao chiết khi sấy phun Khổ qua 79 Bảng 41: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ khí mang khi sấy phun Khổ qua 79 Bảng 42: Ảnh hưởng của hàm lượng chất rắn hoà tan khi sấy phun Khổ qua 79 Bảng 43: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Xuyên

tâm liên

83

Bảng 44: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Xuyên tâm liên 84 Bảng 45: Ảnh hưởng của thời gian với hiệu suất chiết Xuyên tâm liên 85 Bảng 46: Hiệu suất chiết của cao chiết Xuyên tâm liên 85 Bảng 47: Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, COSY và HMBC 89 Bảng 48: Kết quả chiết xuất Xuyên tâm liên quy mô 100 kg/mẻ 91 Bảng 49: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ khí mang khi sấy phun Xuyên tâm liên 92 Bảng 50: Ảnh hưởng của hàm lượng chất rắn hoà tan khi sấy phun Xuyên tâm

liên

92

Bảng 51: Ảnh hưởng của tỉ lệ phụ gia/cao chiết khi sấy phun Xuyên tâm liên 93 Bảng 52: Thời gian lưu và diện tích ñỉnh của dung dịch chứa A 96 Bảng 53: Thời gian lưu và diện tích ñỉnh của dung dịch chứa D 97

Bảng 55: Hiệu suất chiết xuất tinh dầu Gừng Nhật bản quy mô phòng thí nghiệm 103 Bảng 56: Hiệu suất chiết xuất tinh dầu Gừng Nhật bản quy mô 100 kg/mẻ 104 Bảng 57: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ khí mang khi sấy phun Gừng Nhật bản 105 Bảng 58: Ảnh hưởng của hàm lượng chất rắn hoà tan khi sấy phun Gừng Nhật

Sơ ñồ 1: Quy trình ñiều chế tribulosin từ Bạch tật lê 23

Sơ ñồ 2: Quy trình phân lập phyllanthin, hypophyllathin và niranthin tinh khiết từ

Diệp hạ châu

38

Sơ ñồ 3: Quy trình ñiều chế genistein từ Giá ñậu nành 54

Sơ ñồ 5: Quy trình ñiều chế andrographolide từ Xuyên tâm liên 87

1

đẶT VẤN đỀ

Việt Nam có nguồn dược liệu phong phú và ựa dạng; kinh nghiệm sử dụng thuốc từ thiên nhiên ựể phòng và trị bệnh cũng ựược khẳng ựịnh qua nền Y học cổ truyền ựã có từ lâu ựời Trong những năm gần ựây, các nước tiên tiến trên thế giới ựang ựẩy mạnh việc nghiên cứu các chế phẩm mới từ cây thuốc, các sản phẩm thực phẩm có hoạt tắnh sinh học ựặc biệt, hỗ trợ cho việc phòng ngừa và bổ trợ ựiều trị các bệnh nan y, ựây là thời cơ thuận lợi cho nước ta Tuy nhiên, theo báo cáo tổng kết công tác dược của Cục quản lý Dược Việt nam: ỘHơn 90% nguyên liệu phải nhập khẩuỢ Do ựó trong quyết ựịnh của Chắnh phủ số 108/2002/Qđ-TTg về việc phê duyệt: ỘChiến lược phát triển ngành dược thành một ngành kinh tế mũi nhọn theo hướng công nghiệp hóa Ờ hiện ựại hóa, phải từng bước ựáp ứng nguồn nguyên liệu làm thuốc bảo ựảm sản xuất từ trong nước 60% nhu cầu thuốc phòng bệnh và chữa bệnh của xã hộiỢ

Tại hội nghị Dược liệu toàn quốc lần thứ 2, tổ chức tại thành phố Hồ Chắ Minh ngày 26/10/2007 cũng ựã khẳng ựịnh tầm quan trọng của các thuốc sản xuất từ

dược liệu ỘTập trung nghiên cứu và hiện ựại hóa công nghệ chế biến, sản xuất

thuốc có nguồn gốc từ dược liệu, quy hoạch, xây dựng các nguồn nuôi trồng và chế biến dược liệu theo tiêu chuẩn GACP của WHO ựể ựảm bảo ựủ nguyên liệu cho sản xuất thuốc, khai thác hợp lý dược liệu tự nhiên, bảo ựảm lưu trữ tái sinh và phát triển nguồn gen dược liệu, tăng cường ựầu tư phát triển các cơ sở chiết xuất hoạt chất tinh khiết từ dược liệu phục vụ sản xuất thuốcỢ

Hiện nay, các cây thuốc như Diệp hạ châu (Phyllanthus amarus Schum et Thonn.), Giá ựậu nành (Glycin max.), Bạch tật lê (Tribulus terrestris L.), Khổ qua (Momordica charantia L.), Xuyên tâm liên (Andrographolis paniculata Burm F Nees) và Gừng (Zingiber officinal Rosc.) ựã ựược các công ty dược phẩm trong

nước thu mua và chế biến thành các loại cao hoặc sản xuất dưới nhiều dạng chế phẩm khác nhau như ORTENZIO, BRONZONI (Công ty đông Nam), TÂY SA, SAVIGOLD (Công ty SAVIPHARM), Thanh huyết kháng viêm (Công ty Khang Minh)

Các dược liệu trên ựã ựược Trung tâm Nghiên cứu và Sản xuất Dược liệu miền Trung phối hợp với Viện Công nghệ Hóa học nghiên cứu và ựã công bố một số công trình về chiết xuất, phân lập và xác ựịnh cấu trúc trong phòng thắ nghiệm cũng như ựầu tư công nghệ ựể chiết xuất pilot và ựã cung cấp với số lượng nhỏ cho các Công ty trên Trong khi ựó nhu cầu về sản xuất các dược liệu nói trên là rất lớn nên ựòi hỏi phải có sự nghiên cứu hoàn thiện công nghệ chiết xuất cũng như các phương pháp kiểm nghiệm, ựánh giá chất lượng ựể ựưa ra thị trưởng những sản phẩm ựạt

lượng theo yêu cầu của Bộ Y tế Dự án ỘSản xuất thử nghiệm một số cao dược liệu

phục vụ công nghiệp dượcỢ với các nội dung chuẩn hóa 6 loại dược liệu và các sản

phẩm chế biến từ 6 loại dược liệu là Diệp hạ châu (Phyllanthus amarus Schum et

2

Thonn.), Giá ñậu nành (Glycin max.), Bạch tật lê (Tribulus terrestris L.), Khổ qua (Momordica charantia L.), Xuyên tâm liên (Andrographolis paniculata Burm F

Nees) và Gừng (Zingiber officinal Rosc.); ñây là các dược liệu ñã va ñang ñược

trồng ñại trà tại Trung tâm Nghiên cứu và Sản xuất ñược liệu miền Trung

ñược chứng nhận tiêu chuẩn VIETGAP, với mong muốn ñáp ứng một phần nhu

cầu của thị trường và góp phần chuẩn hóa các sản phẩm có nguồn gốc dược liệu theo các yêu cầu mới của nước ta cũng như trên thế giới

ðề tài cấp Viện Khoa học và Công nghệ VN

Chủ nhiệm: TS Nguyễn Ngọc Hạnh, nghiệm thu năm 2003

2 « Nghiên cứu các alcaloid và lignan của các loài Phyllanthus thuộc họ

Euphorbiaceae ðề tài cấp Viện Khoa học và Công nghệ VN

Chủ nhiệm ñề tài: TS Nguyễn Ngọc Hạnh, nghiệm thu ngày 27 tháng 10 năm 2004

3 « Nghiên cứu tách chiết và xác ñịnh cấu trúc triterpen glycosid và saponin có hoạt tính hạ ñường huyết và ñộc tính tế bào của họ Bầu Bí (Cucurbitaceae)»

ðề tài nghiên cứu cơ bản cấp Nhà nước (Mã số 51)

Chủ nhiệm ñề tài: TS Nguyễn Ngọc Hạnh, nghiệm thu ngày 13 - 3 - 2006

4 « Sản xuất thử nghiệm hợp chất lignan từ cây Phyllanthus niruri L ứng dụng

trong công nghệ dược phẩm và nuôi trồng thủy sản »

Dự án cấp Viện Khoa học và Công nghệ VN

Chủ nhiệm dự án: TS Nguyễn Ngọc Hạnh, nghiệm thu ngày 8 tháng 7 năm 2006

5 « Nghiên cứu di thực cây Gừng Nhật bản ( Zingiber officinal ROSC, Kintoki »

ðề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ (Bộ Y tế)

Chủ nhiệm ñề tài: CN Lê Thị Tuyết Anh, ñã nghiệm thu năm 2008

6 « Nghiên cứu giống, quy trình trồng, thu hái, chế biến cây Diệp hạ châu »

ðề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ (Bộ Y tế)

Chủ nhiệm ñề tài: CN Lê Thị Tuyết Anh

7 « Nghiên cứu thành phần hóa học của cây Gừng KINTOKI di thực từ Nhật bản »

ðề tài nghiên cứu cơ bản cấp Nhà nước (Mã số 51)

Chủ nhiệm ñề tài TS: Nguyễn Ngọc Hạnh, ñã nghiệm thu năm 2008

8 « Nghiên cứu qui trình trồng trọt, thu hái và sản xuất chế phẩm chứa Saponin từ cây Bạch Tật Lê » ðề tài cấp Viện Khoa học và Công nghệ VN

Chủ nhiệm ñề tài TS: Nguyễn Ngọc Hạnh, ñã nghiệm thu năm 2009

4

CHƯƠNG I TỔNG QUAN VỀ DƯỢC LIỆU

1 Bạch tật lê

Còn gọi là: Quỉ kiến sầu, Gai chống, Gai sầu, Tật lê, Thắch tật lê, Ớt sầu

Tên khoa học: Tribulus terrestris L

Họ Tật Lê (Gai chống, Zygophyllaceae)

Ngoài ra Bạch tật lê còn ựược gọi: Puncture Vine, Caltrop, Yellow Vine, và Goathead đây là các tên nước ngoài ựược sử dụng rộng rãi, còn có tên là automobile-weed, bindy weed, bindy eye, bindii, bullhead, burnut, devilỖs weed, devilỖs thorn, Mexican sandbur, puncture weed, rose, small caltrop,Ầ

Bạch tật lê chứa ựầy gai Khi gia súc giẫm phải gai này sẽ bị thối thịt, sút móng rất ựau (như gai của quỷ sứ ựâm vào) Ngoài ra quả này còn gây ra chứng Tribulosis (viêm da do ánh sáng) ở cừu khi ăn phải cây này

Mô tả cây

Cây thảo hằng năm mọc bò lan mặt ựất, phân nhánh nhiều Thân cành mảnh dài

từ 30 Ờ 60cm Lá kép lông chim lẻ, mọc ựối hoặc gần ựối dài 2-3 cm, gồm 5-7 lá chét bằng nhau, hình bầu dục, gốc thuôn, ựầu tròn, mặt trên nhẵn, mặt dưới có phủ lông trắng mịn

Hoa mọc riêng lẻ ở nách lá Cuống hoa dài, có lông cứng đài 5 răng rời hoặc dắnh nhau ở gốc, tràng 5 cánh hoa mỏng, màu vàng, rụng sớm Nhị 10, chỉ nhị hình chỉ, bầu hình chóp có 5 ô

Bạch tật lê chắc cứng, có ựầy gai nhọn và lông dày; do 5 phân quả xếp ựối xứng toả tròn tạo thành, ựường kắnh 7-12 mm Các phân quả phân cách nhau rõ rệt, có hình rìu nhỏ, dài 3-6mm Mỗi phân quả có 1 ựôi gai dài ngắn khác nhau, mọc ựối nhau, dưới lớp vỏ dầy là hạt có phôi không có nội nhũ Mặt lưng quả màu lục hơi vàng nhô lên, có các gờ dọc, mặt bên thô ráp, các vân mạng lưới màu trắng xám

Phân bố, thu hái và chế biến:

Bạch Tật Lê phát triển mạnh và mọc nhiều ở vùng có khắ hậu ấm áp, các nuớc nhiệt ựới và ở phắa Nam Châu Âu, Nam Á, phắa Nam nước Australia, ựặc biệt loài cây này mọc khắp nơi ở Châu Phi Thậm chắ, nó còn có thể mọc cả vùng ựất khô cằn

và khắ hậu khắc nghiệt

Ở Trung Quốc và Việt Nam mới chỉ phát hiện thấy 2 loài:

5

Ở nước ta cả 2 loài này thường mọc dại ven biển, ven sông các tỉnh từ Quảng Bình trở vào, nhiều nhất ở các tỉnh Phú Yên, Khánh Hòa, Bình Thuận, Ninh Thuận…

Cây ưa sáng, chịu ñược khô hạn, mọc thành những ñám nhỏ trên bãi cát ven biển Cây con mọc nhiều vào ñầu mùa mưa (khoảng tháng 5 - 6), sinh trưởng và phát triển nhanh Cây cũng nhanh chóng lụi tàn vào ñầu mùa khô (khoảng cuối năm) Trái khô khi chín, tự mở ñể hạt thoát ra ngoài

Bộ phận dùng: Trái khô chín (Fructus Tribuli), thu hái từ tháng 8 - 9, có thể hái

cả cành mang trái, phơi khô, dùng gậy ñập lấy trái già, thường dùng sống hay sao qua cho cháy gai rồi sàng sảy bỏ gai giã nát vụn mà dùng

2 Diệp hạ châu

Còn gọi là Chó ñẻ răng cưa, Diệp hạ châu ñắng

Tên khoa học: Phyllanthus amarus Schum & Thonn

Họ Thầu Dầu (Euphorbiaceae)

Hình 1: Hoa Bạch Tật Lê Hình 2 : Cành lá Bạch Tật Lê

Hình 3: Quả tươi Bạch Tật Lê Hình 4: Quả khô Bạch Tật Lê

6

Thân: Thân thảo, mọc ựứng, cao 20 - 80 cm, phân nhánh ựều từ gốc lên ngọn

Thân có tiết diện tròn, màu xanh lục tươi, bóng nhẵn, không có nhựa mủ Cành mang lá dài 6-10 cm, có tiết diện tròn, phù ra ở gốc, màu xanh lục tươi, hai bên gốc cành có hai vảy nhỏ, rời, hình tam giác, màu nâu

LaU: Lá ựơn, màu lục nhạt, mọc cách trên cành trông giống lá kép lông chim

Phiến lá hình bầu dục, dài 5 - 10 mm, rộng 3 - 6 mm, mặt trên xanh lục, mặt dưới hơi mốc trắng, mép lá nguyên, gốc lá ựối xứng, gân lá kiểu lông chim Cuống lá rất ngắn, chỉ khoảng 0,5 mm, màu xanh Hai lá kèm rất nhỏ, hình tam giác hẹp, rời nhau màu xanh nhạt, tồn tại

Cụm hoa: Mọc thành chụm hai hoa ở nách lá, gồm 1 hoa ựực và 1 hoa cái, ựôi

khi hoa cái mọc riêng lẻ ở nách lá

Hoa ựực màu trắng rất nhỏ, cuống hoa dài 1 - 1,5 mm 5 lá ựài, ựều, rời, hình bầu dục, dài khoảng 5 - 6 mm, rộng khoảng 3 - 4 mm, ựầu nhọn, bìa phiến trong suốt, có một gân giữa màu xanh nổi rõ không cánh hoa Nhị 3 ựều nhau, ựắnh trên ựế hoa Hoa cái hơi to hơn hoa ựực, không có cánh, cuống dài 1,5 mm Lá ựài 5, giống hoa ựực nhưng bầu tròn hơn, dài khoảng 6 - 7 mm, rộng khoảng 3 - 4 mm Lá noãn

3, dắnh nhau thành bầu trên 3 ô, mỗi ô 2 noãn, ựắnh noãn trung trụ Bầu noãn màu xanh lục ngoài trơn, có 3 thùy

Quả: Quả nang nằm dưới lá, màu xanh lục, vỏ quả nhẵn, hình cầu hơi dẹp,

ựường kắnh 2 mm, mang 5 lá ựài tồn tại phủ 1/3 quả Cuống quả dài 1 - 1,5 mm Hạt

6, màu nâu, có 5 - 6 rãnh dọc ở mặt lưng

Phân bố sinh thái: Diệp hạ châu có nguồn gốc xa xưa ở vùng nhiệt ựới Nam Mỹ

và hiện nay thấy phân bố rải rác khắp các vùng nhiệt ựới Ở Châu Á, vùng phân bố của Diệp hạ châu ựắng gồm các nước: Ấn ựộ, Malaysia, Philippin, Indonesia, Thái Lan, Campuchia, Lào, Việt Nam, Nam Trung Quốc Ở Việt Nam, Diệp hạ châu ựắng cũng thấy rải rác khắp nơi, từ các tỉnh ở vùng ựồng bằng, ven biển, các ựảo lớn ựến các tỉnh ở trung du và miền núi, có ựộ cao dưới 800 m Ở các nước đông Nam Á, ựộ cao phân bố này có thể ựến 1000 m

Hình 5: Toàn cây Phyllanthus

amarus

Hình 6: Cành lá mang hoa quả của

Phyllanthus amarus

7

3 Giá ñậu nành

Còn gọi là ñậu tương, ñỗ tương

Tên khoa học: Glycin max L

Họ: ðậu (Fabaceae)

Cây thảo nhất niên, cao 40 - 80 cm thân cành mảnh có lông màu trắng

Lá kép mọc so le, gồm ba lá chét hình bầu dục, gốc tròn ñầu nhọn, dài 3 - 12 cm,

rộng 2 - 8 cm lá chét bên lệch, hai mặt có lông rải rác, gân chính 3; cuống chung dài khoảng 7 - 10 cm, có lông

Cụm hoa mọc thành chùm ngắn ở kẽ lá và ở ñầu ngọn cành, hoa già ở gốc hoa

non ở ngọn chùm, cụm hoa ñơn mang từ 5 ñến 12 hoa, hoa nhỏ màu trắng Hoa không ñều, lưỡng tính, mẫu 5, cuống hoa dài 1,5 cm tiêt diện tròn, màu xanh, phủ

nhiều lông trắng 2 lá bắc chính và 2 lá bắc con tồn tại ở hai bên, dạng vảy tam giác, màu xanh, có nhiều lông 5 lá ñài màu xanh có lông dính nhau ở phía dưới

thành một ống, phía trên rời nhau thành những vảy nhỏ, tiên khai ñài van 5 cánh

hoa không ñều, một cánh cờ to nằm phía sau giữa trục hoa, tiền khai cờ 10 nhị ñều,

9 nhị dính thành một ống hình lòng máng, nhị thứ 10 rời, bao phấn hình ñầu tên màu

vàng, hạt phấn rời hình bầu dục màu vàng 1 lá noãn, bầu trên một ô, ñính noãn

mép, bầu noãn màu xanh dẹp có nhiêu lông, một vòi nhụy màu trắng, dạng sợi

Quả ñậu rất nhiều lông mềm màu vàng mọc thòng xuống, dài 3 - 4 cm, hơi thắt

lại ở giữa các hạt ; quả 2 - 5 hạt, hạt hình thận màu vàng

8

Hình 9: Cành mang hoa Hình 10: Quả mang ñài tồn tại

Hình 11: Quả ñậu non có nhiều

lông Hình 12 : Cành ñậu nành mang quả già Giá ñậu nành:

Giá ñậu nành dài khoảng 5-10 cm thân giá mềm mọng nước, mang hai tử diệp màu vàng hơi xanh

Giá khô là những sợi dài màu vàng trộn lẫn những tử diệp nhỏ màu hơi xanh

Hình 13: Giá ñậu nành 3 ñêm Hình 14: Giá ñậu nành 5 ñêm

9

Hình 15: Giá ựậu nành 7 ựêm Hình 16: Giá ựậu nành 7 ựêm

4 Khổ qua

Còn gọi là: Mướp ựắng, lương qua, hồng cô nươngẦ

Tên khoa học: Momordica charantia L Họ Bầu bắ (Cucurbitaece)

Dây leo bằng tua cuốn Thân có cạnh và lông Lá ựơn, mọc so le Phiến lá

mỏng, có chia thùy (5 - 7 thùy), mép khắa răng, gốc hình tim, ựầu thùy nhọn hoặc hơi tù, mặt trên màu lục sậm và có ắt lông hơn mặt dưới Gân lá hình chân vịt, nổi rõ

ở mặt dưới và có lông ngắn Cuống lá dài 1 - 1,5 cm, có lông ngắn

Hoa ựơn ựộc, mọc ở nách lá hay ngọn cành, có lá hoa hình tim mọc ở cuống hoa

Hoa ựực: lá ựài có màu xanh lợt, rời, hình bầu dục, nhọn ở trên ựỉnh, dưới ựáy lá ựài có những vẩy nhỏ 5 cánh hoa có màu vàng nhạt, rời, hình trứng ngược, thuôn nhọn ở gốc và có những gân song song mọc ra từ gốc (5 - 7 gân) 3 nhị dắnh nhau trên ựầu, bao phấn 2 ô, mở bằng khe nứt dọc, gốc chỉ nhị ựắnh với cánh hoa Hoa cái: đài và tràng giống hoa ựực Bầu hạ 1 ô, hình thoi Lá noãn 3, noãn ựảo, ựắnh noãn bên Quả mọng, hình thoi dài, gốc và ựầu thuôn nhọn, mặt ngoài có nhiều u lồi không bằng nhau, màu xanh ựậm, khi chắn màu vàng hồng

10

Hình 20: Quả khổ qua còn xanh Hình 21: Quả khổ qua khi chín

Hạt dẹt có màng xanh nhạt bao quanh, khi chín màng chuyển thành màu ñỏ Phôi to

Hình 22: Hạt khổ qua còn non Hình 23: Hạt khổ qua khi chín

5 Xuyên tâm liên

Còn ñược gọi là công cộng, nguyễn cộng…

Tên khoa học: Andrographis paniculata Burm

Họ: Ô rô (Acanthaceae)

Thân: cỏ ñứng, cao 0,5 - 1 m, phân nhánh nhiều Thân vuông, nhẵn; ở thân già

mấu lá thường phình to

Lá: ñơn, nguyên, mọc ñối chéo chữ thập Phiến lá thuôn dài hình mũi mác có

ñáy hẹp hoặc hình xoan thon hẹp do men dần xuống cuống, ñỉnh nhọn, dài 4 - 8 cm, rộng 1,5 - 2,5 cm, nhẵn Gân lá hình lông chim, nổi rõ ở mặt dưới, có 4 - 5 cặp gân phụ Cuống lá rất ngắn, khoảng 1 - 2 mm không có lá kèm

Cụm hoa: là chùm kép ở nách lá hoặc ở ngọn cành Nhánh mang hoa còn non

cong lên ở ñỉnh

11

Hoa: nhỏ, dài khoảng 1,2 - 1,3 cm, màu trắng, ñiểm những ñốm hồng tím, không

ñều, lưỡng tính, mẫu 5, cuống hoa dài khoảng 4 - 6 mm

Lá bắc: dài khoảng 2 mm, dạng dải hẹp, lá bắc con dạng sợi màu xanh nhỏ

Lá ñài: 5, rời, ñều, dài khoảng 3 mm, dạng tam giác hẹp màu xanh

Cánh hoa: hợp thành ống hình trụ dài 6 mm, có lông, phần trên loe ra và chia

thành 2 môi 2/3 rõ, môi trên có thùy cạn, màu trắng không có sọc tím; môi dưới xẻ 3 thùy rộng có sọc hồng tím, ñầu nhọn; tiền khai lợp

Nhị: 2, ñính ở họng tràng; chỉ nhị rời, dạng sợi màu trắng, 2 bao phấn dính nhau

ở ñáy, bao phấn hình hạt ñậu, màu tím, nứt dọc, hướng trong, hạt phấn rời, màu vàng nhạt, hình bầu dục có các rãnh dọc

Nhụy: Vòi nhụy dạng sợi màu tím, không lông, 2 ñầu nhụy hình sợi Bầu dẹp dài

khoảng 1,5 cm, 2 lá noãn vị trí trước sau tạo bầu trên, 2 ô, mỗi ô có trên 4 noãn, ñính noãn trung trụ, ñĩa mật to bao quanh ñáy bầu

Quả: Nang dẹp, 2 buồng, hình bầu dục hai ñầu nhọn, dài 15 - 16 mm, rộng 3 -

3,5 mm, có ít lông mịn

Hình 24: ðặc ñiểm hình thái của cây Xuyên tâm liên

Hoa

Mặt dưới lá

Quả

13

CHƯƠNG II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

1 Nguyên liệu

Bạch tật lê, Diệp hạ châu, Giá ñậu nành, Khổ qua và Xuyên tâm liên ñều ñược Trung tâm Nghiên cứu và Sản xuất Dược liệu Miền Trung trồng theo tiêu chuẩn VietGAP cung cấp

d Khổ qua

Trái khổ qua tươi sau khi thu hoạch ñược phân loại ñể chọn những quả tốt, không bị sâu bệnh, hư thối rồi ñem cắt thành lát mỏng, sấy khô ở 50 oC Kiểm tra các chỉ tiêu hoá lý và ô nhiễm trước khi lưu trữ Nguyên liệu trước khi chiết xuất ñược xay thô (qua lưới 1 cm)

e Xuyên tâm liên

Phần trên mặt ñất của cây Xuyên tâm liên ñược rửa sạch ñất cát, loại bỏ những thành phần sâu bệnh, hư thối rồi ñem sấy khô ở 50 oC, xay thô (qua lưới 1 cm) trước khi tiến hành chiết xuất

f Gừng Nhật bản

Củ gừng tươi, ñược xay thô trước khi thí nghiệm

2 Dung môi, hóa chất

- EtOH

- EtOAc

- Iso-BuOH

- MeOH

- Silicagel ñường kính hạt: 0,040 - 0,063mm (tương ứng 230 - 400 mesh)

- Sắc ký lớp mỏng silica gel Merck - GF60 tráng sẵn

3 Thiết bị

- ðiểm nóng chảy (mpoC) ñược ño trên máy Electrothermal IA 9000 Series

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR ñược ño trên máy AV500

- Phổ khối lượng (MS) LC-MSD-Trap ñược thực hiện trên máy Agilent 1100

- Phổ hồng ngoại (IR) ñược ño trên máy VECTOR 22, dùng viên nén KBr

- Máy HPLC Aligent Technologies 1200 series, Water 2695

- Thiết bị chiết xuất, thiết bị cô ñặc

Hình 27: Thiết bị chiết xuất, thiết bị cô ñặc

4 Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất cao chiết quy mô phòng thí nghiệm

15

♦ Tỉ lệ dung môi /nguyên liệu: 25

♦ Thời gian chiết: 4 giờ

♦ Nhiệt ñộ chiết: tại ñiểm sôi của dung môi

- Khối lượng mẫu: 100 g/thí nghiệm

- Chỉ tiêu kiểm soát: Hiệu suất chiết (%)

Các thông số biến ñổi:

- Tỉ lệ dung môi/nguyên liệu

- Nhiệt ñộ chiết xuất

- Thời gian chiết xuất

5 Khảo sát ñiều kiện sấy phun

a Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt ñộ khí mang

Mục ñích: Nhiệt ñộ khí mang hay nhiệt ñộ sấy phun là yếu tố có ảnh hưởng rất

lớn ñến ñộ ẩm, màu sắc cảm quan và mùi vị của sản phẩm Vì thế cần phải khảo sát khoảng nhiệt ñộ sấy phun ñể có sản phẩm ñạt ñộ ẩm dưới 5%, màu sắc tươi ñẹp và hương vị tự nhiên như cao chiết ban ñầu

Phương pháp tiến hành: Cố ñịnh các yếu tố như: Tỉ lệ cao chiết và phụ gia ,

hàm lượng chất rắn hòa tan (30 %) và thay ñổi nhiệt ñộ sấy ñể chọn khoảng nhiệt ñộ sấy phù hợp

b Khảo sát ảnh hưởng của hàm lượng chất rắn hoà tan

Mục ñích: Khảo sát hàm lượng tối ña chất rắn hòa tan trong dung dịch nhằm tiết

kiệm thời gian và năng lượng sấy, nâng cao công suất thiết bị, giảm giá thành sản phẩm

Phương pháp tiến hành: Cố ñịnh các yếu tố như: Tỉ lệ cao chiết và phụ gia,

nhiệt ñộ sấy Thay ñổi hàm lượng chất rắn hòa tan ñể chọn mức tối ña có thể sấy ñược

c Khảo sát ảnh hưởng của tỉ lệ phụ gia/cao chiết

Mục ñích: ðể ñiều chỉnh hàm lượng hoạt chất trong sản phẩm bột sấy phun thì

phải dùng phu gia với các tỉ lệ khác nhau Do vậy, phải khảo sát tỉ lệ phụ gia / cao chiết ñể kiểm soát chất lượng sản phẩm

Phương pháp tiến hành: Cố ñịnh các yếu tố như: nhiệt ñộ sấy, hàm lượng chất

rắn hòa tan (30%) và thay ñổi tỉ lệ cao chiết với phụ gia ñể ñánh giá khả năng bổ sung phụ gia vào trong sản phẩm

16

Hình 28: Thiết bị sấy phun

17

CHƯƠNG III KẾT QUẢ & THẢO LUẬN

Vi phẫu thân:

Mặt cắt ngang hình tròn Biểu bì gồm một hàng tế bào hình chữ nhật xếp ñều ñặn, có những lông che chở dài hoặc ngắn; mập tẩm silic Mô mềm vỏ gồm 4 - 5 hàng tế bào màng mỏng xếp lộn xộn; to nhỏ không ñều, trong mô mềm có chứa các bó sợi xếp thành một vòng tròn phía dưới là vòng libe Các bó gỗ xếp thành vòng tròn, uốn lượn theo hình dạng của mặt cắt, có các mạch gỗ to Mô mềm ruột cấu tạo bởi các tế bào hình tròn màng mỏng ở phần thân non có các khuyết

Vi phẫu cuống quả:

Biểu bì gồm một lớp tế bào, có nhiều lông che chở ñơn bào

Mô dày gồm 2 - 3 lớp tế bào ngay sát biểu bì

Mô mềm gồm 6 - 8 lớp tế bào, vách tế bào mỏng

Một vòng mô cứng không liên tục bao quanh bó libe - gỗ cấp 2

Vi phẫu một phân quả:

Bên ngoài là một lớp tế bào biểu bì có lông che chở ñơn bào dài; vách mỏng; uốn lượn Tiếp theo là 3 - 4 lớp tế bào mô mềm hình tròn hay ña giác

18

Lớp tế bào mô cứng rất dày Nhân phân quả rỗng, có hạt phía trong

Vi phẫu cuống quả:

Biểu bì gồm một lớp tế bào, có nhiều lông che chở ñơn bào

Mô dày gồm 2 - 3 lớp tế bào ngay sát biểu bì

Mô mềm gồm 6 - 8 lớp tế bào, vách tế bào mỏng

Một vòng mô cứng không liên tục bao quanh bó libe - gỗ cấp 2

Soi bột:

Tế bào cương mô

- Mảnh mạch

- Tinh thể calci oxalat hình khối

- Lông che chở tẩm silic

- Hạt tinh bột

Kết luận: Dược liệu ñược nghiên cứu trên ñây ñúng là cây Bạch tật lê, có tên

khoa học là Tribulus terrestris L., họ Tật Lê (Gai chống, Zygophyllaceae)

1.2 Khảo sát các ñiều kiện chiết xuất Bạch tật lê quy mô phòng thí nghiệm

Hàm lượng chất chiết ñược cao nhất tương ứng với hiệu suất chiết 100% là:

mmax (cao) = 16.76 g

Cố ñịnh các thông số như nhiệt ñộ chiết xuất (ñiểm sôi), thời gian chiết (4 giờ) như trong thí nghiệm khảo sát hàm lượng chất chiết ñược cao nhất Khảo sát các tỉ lệ dung môi/nguyên liệu khác nhau, thu ñược bảng kết quả như sau:

Bảng 1: Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Bạch tật

Gỗ II

Lông che chở Biểu bì trên

Hình 31: Vi phẫu thân

Hình 33: Vi phẫu phân quả Hình 34 : Tế bào cương mô

Hình 36: Tinh thể oxalat Hình 37: Hình khối Hình 38: Hạt tinh bột

Hình 32: Vi phẫu cuống quả

Hình 35 : Mảnh mạch

20

y = 0.0009x 4 - 0.0047x 3 - 0.8507x 2 + 17.216x

R 2 = 0.9977

0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00

Cố ñịnh các thông số như tỉ lệ dung môi /nguyên liệu (25:1), thời gian chiết (4giờ) như trong thí nghiệm khảo sát hàm lượng chất chiết ñược cao nhất Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt ñộ, thu ñược bảng kết quả như sau:

Bảng 2: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Bạch tật lê

21

y = -0.0444x 2 + 6.7349x - 162.24

R 2 = 0.9949

40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00

50 55 60 65 70 75 80 85nhiệt ñộ

%

Hình 40: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ với hiệu suất chiết Bạch tật lê

Cố ñịnh các thông số như tỉ lệ dung môi /nguyên liệu (25:1), nhiệt ñộ chiết (ñiểm sôi) như trong thí nghiệm khảo sát hàm lượng chất chiết ñược cao nhất Khảo sát ảnh hưởng của thời gian, thu ñược bảng kết quả như sau:

Bảng 3: Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Bạch tật lê

22

y = -0.0018x 2 + 0.7092x + 24.169

R 2 = 0.9921

0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00

phút

%

Hình 41: Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Bạch tật lê

Kết luận: Hiệu suất ñạt 90 % khi chiết xuất với thời gian là 149,7 phút

d Kết quả:

Áp dụng các thông số khảo sát trên ñây cho các mẫu khảo sát hiệu chỉnh, kết quả như sau:

Bảng 4: Hiệu suất chiết của cao chiết Bạch tật lê

Mẫu m cao (g) Hiệu suất (%)

- Cần tăng thêm thời gian và/hoặc nhiệt ñộ ñể tăng hiệu suất chiết xuất

1.3 Phân lập Tribulosin tinh khiết từ Bạch tật lê

Toàn cây Bạch tật lê phơi khô xay nhỏ (20 kg) ñược chiết với cồn 50 % sau ñó ñược cô loại dung môi thu ñược cao TLW (2,83 kg) có màu xanh ñậm Lấy 2,8 kg TLW hòa tan trong một lượng nước cho vừa ñủ sệt Dịch này ñược chiết với ether petroleum (EP), thu ñược 50 g cao TLE

Pha nước còn lại ñược chiết tiếp tục với ethyl acetate (EtOAc), dịch EtOAc cô loại dung môi dưới áp suất kém thu ñược 60 g cao TLA có màu xanh ñen

Pha nước còn lại sau khi chiết với EtOAc ñược lắc tiếp tục với n-butanol