- Phổ I R:
9.mảnh mô mềm 10 tinh bột 11 Hạt phấn hoa 12.tinh th oxalat ể Can
Hình 49: Hình chụp bột soi toàn cây trừ rễP.amarus
35
2.2. Khảo sát các ựiều kiện chiết xuất Diệp hạ châu quy mô phòng thắ nghiệm
a. Khảo sát ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi / nguyên liệu:
Cố ựịnh các thông số như nhiệt ựộ chiết xuất (ựiểm sôi), thời gian chiết (4 giờ) như trong thắ nghiệm khảo sát hàm lượng chất chiết ựược cao nhất. Khảo sát các tỉ lệ
dung môi / nguyên liệu khác nhau, thu ựược bảng kết quả như sau: mmax (cao) = 17,8 g
Bảng 10:Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Diệp hạ
châu Mẫu Tỉ lnguyên liệ dung môi /
ệu m cao Hiệu suất (%) 1 10 10,4 58,3 2 15 15,2 85,4 3 20 17,2 96,8 y = -0.3157x2 + 13.32x - 43.315 R2 = 1 - 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0 5 7 9 11 13 15 17 19 21 dm/nl %
Hình 53:Ảnh hưởng của tỉ lệ dung môi/nguyên liệu với hiệu suất chiết Diệp hạ
châu
Kết luận: Hiệu suất ựạt 90 % khi chiết xuất với tỉ lệ dung môi / nguyên liệu là 16,32
b. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt ựộ chiết xuất:
Cố ựịnh các thông số như tỉ lệ dung môi /nguyên liệu (25:1), thời gian chiết (4 giờ) như trong thắ nghiệm khảo sát hàm lượng chất chiết ựược cao nhất. Khảo sát
36
Bảng 11: Ảnh hưởng của nhiệt ựộ với hiệu suất chiết Diệp hạ châu Mẫu oC m cao (g) Hiệu suất (%) 1 50.00 9,83 55,22 2 60.00 14,01 78,71 3 70.00 16,55 92,98 4 80.00 17,11 96,12 y = -0.0508x2 + 7.9792x - 216.72 R2 = 0.9998 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00 50.00 55.00 60.00 65.00 70.00 75.00 80.00 85.00 nhiệt ựộ %
Hình 54: Ảnh hưởng của nhiệt ựộ với hiệu suất chiết Diệp hạ châu
Kết luận: Hiệu suất ựạt 90 % khi chiết xuất ở nhiệt ựộ 67,14oC
c. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian chiết xuất:
Cốựịnh các thông số như tỉ lệ dung môi /nguyên liệu (25:1), nhiệt ựộ chiết (ựiểm sôi) như trong thắ nghiệm khảo sát hàm lượng chất chiết ựược cao nhất. Khảo sát
ảnh hưởng của thời gian, thu ựược bảng kết quả như sau:
Bảng 12:Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Diệp hạ châu Mẫu phút m cao (g) Hiệu suất (%)
1 60 11,45 64,33 2 90 13,33 74,89 2 90 13,33 74,89 3 120 14,78 83,03
37 4 150 15,46 86,85 5 180 16,89 94,89 6 210 17,33 97,36 y = -0.0008x2 + 0.4372x + 41.457 R2 = 0.9922 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 0.00 50.00 100.00 150.00 200.00 250.00 phút %
Hình 55:Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất với hiệu suất chiết Diệp hạ châu
Kết luận: Hiệu suất ựạt 90 % khi chiết xuất với thời gian là 155 phút
d. Kết quả:
Áp dụng các thông số khảo sát trên ựây cho các mẫu khảo sát hiệu chỉnh, kết quả
như sau:
Bảng 13: Hiệu suất chiết của cao chiết Diệp hạ châu Mẫu m cao (g) Hiệu suất (%) 1 15,24 85,62 2 15,03 84,44 3 15,47 86,91 TB 15,25 85,66 Kết quả áp dụng cho thấy, hiệu suất trung bình ựạt 85,66 % e. Kết luận:
38 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.3. Phân lập Phyllanthin, Hypophyllathin và Niranthin từ Diệp hạ châu
Sơựồ 2: Quy trình phân lập Phyllathin, Hypophyllathin và Niranthin tinh khiết từ Diệp hạ châu
Dịch chiết ether Bã
Cô loại dung môi
Cắn màu vàng
Chiết nóng với EtOH
để nguội, lọc qua phễu Buchner
Tẩm bằng kiềm 50%, ựể khô qua ựêm. Chiết petroleum ether.
Cây DHC khô
Lignan thô Cắn màu vàng
Hòa tan trong ether petrol
Dịch EP
Loại dung môi dưới áp suất thấp
Dịch EtOH Sáp trắng
SK cột với Silica gel Hòa tan trong ether petrol
39
2.4. Xác ựịnh cấu trúc Phyllathin
Tắnh chất
Kết tinh trong ethyl acetat cho tinh thể hình kim ngắn. Dễ tan trong ethyl acetat, petroleum ether.
điểm chảy: 96 oC
Xác ựịnh cấu trúc
Phổ khối lượng cho một pic ion phân tửm/z = 418 tương ứng với C24H34O6. Phổ IR (KBr), νmax (cm-1) cho một số mũi ựặc trưng ở 951,6 (C-H), 1021,1 (C- O-C),1086,5 (C-O-C), 1102,8 (C-O-C), 1139,6 (C-O-C), 1151,9 (C-O-C), 1266,3 (C-O-C), 1413,4 (C-O-C), 1458,3 (C-H), 1511,5 (C-H), 1585(C-H), 2838 (C-H), 2864 (C-H), 2933,5 (C-H).
Phổ 1H-NMR trong CDCl3 (δppm) cho thấy sự có mặt của 17 proton trong phân tử. Trong ựó có 4 nhóm OCH3 ựược gắn vào vòng thơm (2 nhóm ở δ 3,81 và 2 nhóm ởδ 3,85 ppm) và 2 nhóm OCH3 thuộc mạch nhánh propyl (ở δ 3,30 ppm).
Phổ 13C-NMR và phổ DEPT 90, DEPT 135 cho thấy tắn hiệu của 12 nguyên tử carbon, phổ 1H Ờ NMR chỉ có tắn hiệu của 17 proton → phân tử