c. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian chiết xuất:
1.3. Phân lập Tribulosin tinh khiết từ Bạch tật lê
Toàn cây Bạch tật lê phơi khô xay nhỏ (20 kg) ựược chiết với cồn 50 % sau ựó
ựược cô loại dung môi thu ựược cao TLW (2,83 kg) có màu xanh ựậm. Lấy 2,8 kg TLW hòa tan trong một lượng nước cho vừa ựủ sệt. Dịch này ựược chiết với ether petroleum (EP), thu ựược 50 g cao TLE.
Pha nước còn lại ựược chiết tiếp tục với ethyl acetate (EtOAc), dịch EtOAc cô loại dung môi dưới áp suất kém thu ựược 60 g cao TLA có màu xanh ựen.
23
BuOH), cô loại dung môi dưới áp suất kém thu ựược 74 g cao thô, toàn bộ lượng cao này ựược hòa tan vào MeOH sau ựó tủa bằng aceton, thu lấy phần tủa cô dưới áp suất kém thu ựược saponin tổng màu nâu, dạng hạt mịn, kắ hiệu là TLB (46 g).
Từ cao TLB (24 g), tiến hành sắc ký cột nhanh với hệ dung môi giải ly EtOAc: MeOH có ựộ phân cực tăng dần (100:0Ầ60:40 ) thu ựược 10 phân ựoạn (Pđ1-Pđ10).
Tại Pđ5, lúc cô loại dung môi xuất hiện tủa màu trắng, dịch cô quay thu ựược ựể
một thời gian cũng thấy xuất hiện chất kết tủa màu trắng, chất bột màu trắng ựược hòa tan vào hỗn hợp CHCl3: MeOH = 1:1. Kết tinh lại nhiều lần trong MeOH thu
ựược Tribulosin (300 mg), TLC với dung môi giải li CHCl3: MeOH: H2O= 65:35:10 (lớp dưới) hiện một vết tròn màu xanh ựen có Rf = 0,45.
Toàn cây Chiết với cồn 50 % Chiết với EP Cô quay áp suất kém Kết tinh Sắc ký cột nhanh Chiết với n-BuOH Cô, ựuổi dm
Hòa trong MeOH, tủa bằng aceton
Chiết với EtOAC Cao TLB Pha nước Pđ5 (EtOAc: MeOH=85:15) Cao TLW Dịch chiết EP Dịch chiết cồn
Dịch chiết EtOAc Pha nước
Dịch chiết n-BuOH Pha nước
Tribulosin
Sơựồ 1: Quy trình ựiều chế tribulosin từ Bạch tật lê
20 kg
2,83 kg
46 g
24