- Phổ I R:
2.9.Khảo sát ựộ tinh khiết chất ựánh dấu Phyllathin bằng HPLC
Phổ 13C-NMR và phổ DEPT 90, DEPT 135 cho thấy trong 24 nguyên tử
2.9.Khảo sát ựộ tinh khiết chất ựánh dấu Phyllathin bằng HPLC
Phương pháp ựịnh tắnh bằng Sắc ký lỏng hiệu năng caoHPLC
điều kiện sắc ký: Máy HPLC Waters 2695 (Alliance). Detector PDA 2996. Bước sóng phát hiện: 205 nm. Pha tĩnh: cột C18 (4,6 ừ 250mm, 5ộm). Nhiệt ựộ cột: 25
oC. Pha ựộng: H2O-MeOH (35: 65). Rửa giải ựẳng dòng. Tốc ựộ dòng: 0,9 ml/phút. Thời gian phân tắch: 30 phút.Thể tắch tiêm mẫu: 10 ộl.
Mẫu thử (A): Hoà tan 10 mg phyllanthin trong MeOH trong bình ựịnh mức 10
ml ựể có dung dịch thử với nồng ựộ 0, mg/ml.
Mẫu thử có peak với thời gian lưu tR 15 phút + 0.2 trong ựiều kiện sắc ký như
trên đẠT
Hình 59: định tắnh Phyllathin bằng HPLC
Phương pháp ựịnh lượng: Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
điều kiện sắc ký: Máy HPLC Waters 2695 (Alliance). Detector PDA 2996. Bước sóng phát hiện: 210 nm. Pha tĩnh: cột C18 (4,6 ừ 250mm, 5ộm). Nhiệt ựộ cột: 25 oC. Pha ựộng: H2O-MeOH (35: 65). Rửa giải ựẳng dòng. Tốc ựộ dòng: 0,9 ml/phút. Thời gian phân tắch: 30 phút.Thể tắch tiêm mẫu: 10 ộl.
48
Mẫu thử: Cân chắnh xác 0,01 g mẫu thử vào bình nón nút mài 10 ml. Thêm chắnh xác 10 ml MeOH ựể hoà tan mẫu trong 5 phút. Dùng dịch MeOH này ựể ựịnh
lượng.
Phyllanthin phải có ựộ tinh khiết lớn hơn hoặc bằng 97% (≥ 97 %)
Hình 60: định lượng Phyllathin bằng HPLC
3. Giá ựậu nành
3.1. Xác ựịnh nguồn nguyên liệu thực vật bằng vi phẫu và soi bột dược liệu
- Vi phẫu:
- Mô tảựặc ựiểm thực vật học dựa trên quan sát cây tươi. Dùng lưỡi lam cắt ngang 1 phần của thân giá và rể giá, nhuộm vi phẫu bằng phương pháp nhuộm kép (dùng ựỏ
carmin và lục iod). Quan sát vi phẫu dưới kắnh hiển vi ở vật kắnh 4x, 10x, 40x. - Vi phẫu cắt ngang của rễ, vì là giá nên cũng giống như thân chỉ có bên ngoài là
biểu bì, bên trong là mô mềm, mô mềm gồm 6 - 8 lớp tế bào, vách tế bào mỏng.
49
- Vi phẫu cắt ngang một thân giá, gồm có: Thân có tiết diện tròn, bên ngoài là một lớp tế bào biểu bì, vách mỏng, uốn lượn. Tiếp theo là lớp tế bào mô mềm hình tròn hay hình bầu dục, libe cấp 1 rõ xếp thành từng cụm. Gổ cấp 1 mỗi cụm 1 - 2 bó gỗ.
Hình 62: Vi phẫu cắt ngang một thân giá
Hình 63: Mảnh mạch (vi cấp) Hình 64: Mảnh mạch (vi cấp)
50
- Soi bột
Tiến hành:
Làm bột: sấy giá ựậu nành ở nhiệt ựộ 60 Ờ 70 oC cho ựến khi giá khô, nghiền nhỏ rây qua rây số 32.
Lấy một ắt bột dược liệu cho lên một lá kắnh, nhỏ 1 - 2 giọt nước, hoặc glycerin 50 %. đậy phiến kắnh, dùng ngón tay di nhẹ trên phiến kắnh cho bột phân tán ựều. Soi kắnh hiển vi, ựầu tiên ở vật kắnh 10x sau ựó là 40x.
Nhận xét: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bột có màu vàng lục, có mảnh mô mềm có khắ khổng, có mảnh mạch xoắn, mảnh mạch ựiểm và hạt tinh bột hình cầu.
Kết luận: Dược liệu ựược nghiên cứu trên ựây ựúng là gắa cây đậu nành có tên khoa học là Glycin max L., họ: đậu (Fabaceae)