- Sắc ký lớp mỏng
K ết luận: Tỉ lệ cao chiết/ phụ gia thắch hợp là 50:
5.7. Khảo sát ựộ tinh khiết chất ựánh dấu andrographolid bằng HPLC
- Sắc ký lớp mỏng
- Thuốc thử, dụng cụ
Bản mỏng Silicagel 60 F254.
Dung môi khai triển: CHCl3 - ethyl acetate - MeOH
đèn UV 254 nm. - Tiến hành
Mẫu thử: Cân khoảng 1mg tinh thể A và 1mg tinh thể D hòa tan trong 10ml MeOH, dùng dung dịch này ựể chấm sắc ký.
Mẫu chuẩn: Cân khoảng 1mg chất chuẩn andrographolid và 1mg
94
Phát hiện: Soi UV 254 nm, phun thuốc thử VS. Sau khi phun, sấy bản mỏng ở
1050C trong vài phút ựể hiện màu.
Kết quả: Quan sát và mô tả sắc ký ựồ. Trên sắc ký ựồ, dung dịch mẫu thử phải cho vết có màu sắc và vị trắ Rf tương ứng với vết của dung dịch ựối chiếu.
Hình 98: Sắc ký lớp mỏng của chất A và D so với chuẩn AD, DH
Ghi chú: A và D là chất ựã chiết tách từ Xuyên tâm liên. CA, DC lần lượt là chuẩn
andrographolid và Dehydoandrographolid.
- Sắc ký lỏng hiệu năng cao
Cân chắnh xác 10 mg tinh thể andrographolid, hòa tan trong bình ựịnh mức 10 ml với MeOH, thêm MeOH ựến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 ộm, pha loãng thành nồng
ựộ thắch hợp và tiêm vào hệ thống HPLC với ựiều kiện như trên.
Cân chắnh xác khỏan 5 mg dehydoandrographolid, hòa tan trong bình ựịnh mức 10
ml với MeOH, thêm MeOH ựến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 ộm, pha loãng thành
nồng ựộ thắch hợp và tiêm vào hệ thống HPLC với ựiều kiện như trên.
Phát hiện ở bước sóng hấp thu cực ựại của andrographolid và
95
Hình 99: Sắc ký ựồ của mẫu trắng
Hình 100: Sắc ký ựồ của dung dịch chứa A
96
Hình 102: Sắc ký ựồ của dung dịch chứa A thêm chuẩn
Bảng 52: Thời gian lưu và diện tắch ựỉnh của dung dịch chứa A đỉnh Thời gian lưu (phút) Diện tắch ựỉnh Chiều cao ựỉnh % diện tắch ựỉnh Hệ số bất ựối 1 5,853 1,892763 193,289 100 1,144 Hình 103: độ tinh khiết của ựỉnh A
97
Hình 104: Sắc ký ựồ chất A tại nhiều bước sóng
Nhận xét: Sắc ký ựồ có một pic có tR = 5,853 phút chiếm hàm lượng 100% so với tổng diện tắch pic trên sắc ký ựồ. đỉnh hấp thu UV ở bước sóng 225 nm, ựộ tinh khiết của pic ựạt 100%.
Hình 105: Sắc ký ựồ của dung dịch chứa D
Bảng 53: Thời gian lưu và diện tắch ựỉnh của dung dịch chứa D
đỉnh lThời gian
ưu (phút) Diựỉện tắch nh Chiựỉềnh u cao tắch % diựỉệnh n cao % chiựỉnh ều
98
Hình 106: Sắc ký ựồ của dung dịch dehydoandrographolid chuẩn
Hình 107: Sắc ký ựồ của dung dịch D thêm chuẩn
99
Hình 109: Sắc ký ựồ chất D tại nhiều bước sóng
Nhận xét: Sắc ký ựồ có một pic có tR = 16,787 phút chiếm hàm lượng 100% so với tổng diện tắch pic trên sắc ký ựồ. đỉnh hấp thu UV ở bước sóng 250 nm, ựộ tinh khiết của pic ựạt 99,91%.
Hình 110: Sắc ký ựồ của hỗn hợp A và D
100
Nhận xét: Thông số thời gian lưu trên so sánh trên HPLC không thấy có sự khác biệt giữa chất A, chất D ựã chiết tách so với chuẩn làm việc andrographolid, dehydoandrographolid. - điểm chảy Bảng 54: điểm nóng chảy của các chất A Andrographolid điểm nóng chảy (0C) 228 oC 226-230 oC D Dehydoandrographolid điểm nóng chảy (0C) 204 oC 203-204 oC - Sắc ký ựồ IR Hình 112: Sắc ký ựồ IR của chất A và chất D
Sắc ký ựồ IR của chất A và D có các ựình hấp thu C=O (1727.5 và 1738), và C=C
(1674 và 1637) phù hợp với tài liệu công bố về andrographolid và
101
- Sắc ký ựồ UV
A Andrographolid A +andrographolid
Hình 113: Sắc ký ựồ UV của chất A và andrographolid chuẩn
Chất D Dehydoandrographolid D+Dehydoandrographolid
Hình 114: Sắc ký ựồ UV của chất D và Dehydroandrographolid chuẩn
102
6. Gừng Nhật bản
6.1. Xác ựịnh nguồn nguyên liệu thực vật bằng vi phẫu và soi bột dược liệu
Vi phẫu Vi phẫu thân rễ: Hình 118: Sơựồ cấu tạo thân rễ Hình 119: Vi phẫu thân rễ . Hình 120: Sơựồ cấu tạo lá Hình 121: Vi phẫu phần thịt lá Hình 115:Cây gừng Nhật Bản. Hình 116:Thân rễ và rễ cây gừng Nhật Bản. Hình 117: Lá cây gừng Nhật Bản.
103
Hình 122: Vi phẫu phần
gân giữa Hình 123: Sơựồ cấu tạo rễ Hình 124: Vi phẫu rễ
-Kết luận: Dược liệu ựược nghiên cứu trên ựây ựúng là cây Gừng, có tên khoa học là: Zingiber officinale var kintoki Nees, họ Gừng (Zinbiberaceae)