ứng dụng kỹ thuật phân tử lai huỳnh quang ( fish) nhằm xác định nhanh một số loại tảo độc hại biển việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Lưu Xuân Hòa ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PHÂN TỬ LAI HUỲNH QUANG (FISH) NHẰM XÁC ĐỊNH NHANH MỘT SỐ LOÀI TẢO ĐỘC HẠI BIỂN VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – Năm 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Lưu Xuân Hòa ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PHÂN TỬ LAI HUỲNH QUANG (FISH) NHẰM XÁC ĐỊNH NHANH MỘT SỐ LOÀI TẢO ĐỘC HẠI BIỂN VIỆT NAM Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60 42 70 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS. TS. ĐINH ĐOÀN LONG Hà Nội – Năm 2011 iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 2 1.1. Khái quát về kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ (FISH) 2 1.1.1. Lịch sử nghiên cứu, ứng dụng kỹ thuật FISH 2 1.1.2. Trình tự đích và đầu dò trong phép lai huỳnh quang tại chỗ 6 1.1.3. Các loại tín hiệu đánh dấu huỳnh quang 9 1.1.4. Tình hình nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật FISH trong vi tảo biển độc hại 13 1.2. Tình hình nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật FISH tại Việt Nam 17 1.3. Các bước cơ bản của quy trình lai huỳnh quang tại chỗ - FISH 18 1.4. Đặc điểm sinh thái của một số loài vi tảo biển độc hại nghiên cứu 19 CHƯƠNG II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1. Địa điểm thu mẫu và đối tượng nghiên cứu 21 2.2. Phương pháp thu và lưu giữ mẫu 21 2.3. Phương pháp phân loại hình thái 23 2.4. Phương pháp kiểm tra phân loại bằng ADN và thiết kế đầu dò 23 2.4.1. Phương pháp chuẩn bị ADN khuôn 23 2.4.2. Phương pháp Singel cell PCR 23 2.4.3. Phương pháp kiểm tra phân loại bằng ADN 24 2.4.4. Phương pháp thiết kế đầu dò đặc hiệu 25 2.5. Phương pháp lai huỳnh quang tại chỗ 25 CHƯƠNG III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1. Kết quả phân lập và phân loại các chủng vi tảo độc hại bằng hình thái 27 3.1.1. Loài Alexandrium affine 27 3.1.2. Loài A. pseudogonyaulax 28 3.2. Ảnh hưởng của độ mặn tới nuôi sinh khối vi tảo tạo nguyên liệu 29 3.3. Kết quả giải trình tự và phân loại bằng ADN các mẫu nghiên cứu 31 3.4. Thiết kế đầu dò lai huỳnh quang tại chỗ 35 3.5. Tối ưu nhiệt độ lai và thử nghiệm đầu dò 37 KẾT LUẬN 43 KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 54 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TT Chữ viết tắt Nội dung tiếng Anh Nội dung tiếng Việt 1. ADN Deoxyribonucleic acid Axít deoxyribonucleic 2. ARN Ribonucleic acid Axít ribonucleic 3. Bp Base pair Cặp bazơ 4. FISH Fluorescent in situ hybridization Phép lai huỳnh quang tại chỗ 5. FITC Fluorescein isothiocyanate Chất phát tín hiệu huỳnh quang 6. ISH In situ hybridization Phép lai tại chỗ 7. ITS Internal transcribed spacer Vùng đệm phiên mã 8. LSU Large subunit Tiểu phần lớn 9. PCR Polymerase chain reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp 10. PSP Paralytic shellfish poisoning Chất độc gây liệt cơ 11. rADN Ribosomal deoxyribonucleic acid Trình tự ADN mã hóa ribosome 12. rARN Ribosomal ribonucleic acid ARN ribosome 13. SSU Small subunit Tiểu phần nhỏ v DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Một số chất huỳnh quang được dùng phổ biến trong kỹ thuật FISH 10 Bảng 1.2: Trình tự đầu dò cho một số loài Alexandrium 16 Bảng 3.1: Một số điều kiện thích hợp cho nhân nuôi sinh khối tảo A. affine và A. pseudogonyaulax trong phòng thí nghiệm 31 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1. Các cách gắn nhãn tín hiệu vào đầu dò 12 Hình 1.2. Các bước cơ bản của kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ FISH 19 Hình 2.1. Sơ đồ phản ứng PCR nhân vùng D1-D2 của rADN 23 Hình 3.1. Một số đặc điểm hình thái của A. affine 27 Hình 3.2. Một số đặc điểm hình thái của A. pseudogonyaulax 28 Hình 3.3. Ảnh hưởng của độ mặn tới sự sinh trưởng của tảo A. affine 30 Hình 3.4. Ảnh hưởng của độ mặn tới sự sinh trưởng của tảo A. pseudogonyaulax 30 Hình 3.5. Kết quả điện di sản phẩm PCR lần 2 32 Hình 3.6. Cây phát sinh chủng loại của một số loài thuộc chi Alexandrium 34 Hình 3.7. So sánh sự khác biệt trình tự nucleotit của A. affine với các loài Alexandrium 36 Hình 3.8. So sánh sự khác biệt trình tự nucleotit của A. pseudogonyaulax với các loài Alexandrium 37 Hình 3.9. Tế bào A. affine dưới ánh sáng thường (trái) và phát huỳnh quang dưới ánh sáng kích thích (phải) với điều kiện lai 43°C 38 Hình 3.10. Tế bào A. pseudogonyaulax dưới ánh sáng thường (trái) và phát huỳnh quang dưới ánh sáng kích thích (phải) với điều kiện lai 43°C 38 Hình 3.11. Lai đầu dò A. affine với mẫu tự nhiên 40 Hình 3.12. Lai đầu dò A. pseudogonyaulax với mẫu tự nhiên 40 1 MỞ ĐẦU Trong nghiên cứu phân loại sinh vật phù du biển nói chung và vi tảo biển độc hại nói riêng, nhiều nhóm loài sinh vật rất khó hoặc hoàn toàn không thể phân loại đến loài nếu chỉ bằng phương pháp so sánh hình thái. Sự giống nhau về nhiều đặc điểm hình thái bên ngoài và khó nhận biết những đặc điểm khác nhau của chúng rất dễ dẫn đến nhầm lẫn trong nghiên cứu phân loại. Cùng với số lượng loài rất lớn có nhiều đặc điểm hình thái giống nhau, công tác nghiên cứu phân loại vi tảo biển trong nhiều trường hợp gặp nhiều khó khăn, tốn thời gian. Những điều này đã gây cản trở đối với công tác nghiên cứu hệ sinh thái biển, đánh giá và quản lý nguồn lợi sinh vật biển nói chung và các nghiên cứu chuyên sâu về các nhóm loài nói riêng. Kế thừa các đặc tính ưu việt của các kỹ thuật di lai các axit nucleic và trên nền tảng của kỹ thuật lai tại chỗ (in situ hybridization - ISH), kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ (fluorescence in situ hydridization - FISH) đã được phát triển. Kể từ khi ra đời, nó đã trở thành một công cụ mạnh trong nhiều nghiên cứu sinh học, không chỉ các lĩnh vực sinh học phân tử và tế bào, mà cả trong các nghiên cứu về sinh thái học, môi trường, trong chẩn đoán và nghiên cứu phát sinh loài. Kỹ thuật FISH ra đời đã khắc phục được nhiều trở ngại trong nghiên cứu phân loại sinh vật. Các trở ngại, như các vấn đề khó khăn do phân loại bằng hình thái, nhược điểm về thời gian phân tích kéo dài, các yêu cầu đòi hỏi về lượng mẫu lớn hay các yêu cầu về môi trường nuôi cấy đặc chủng để sàng lọc loài… có thể được khắc phục bằng kỹ thuật FISH. Bên cạnh đó, bằng kỹ thuật này, các nhà nghiên cứu không chỉ phân tích định tính mà còn có thể định lượng chính xác số lượng tế bào sinh vật, không gian phân bố hay mối tương quan với môi trường của các vi sinh vật. Kỹ thuật FISH đặc biệt hữu ích trong nghiên cứu phân loại sinh vật phù du trong môi trường biển nói chung và các loài tảo độc hại nói riêng. Nhằm từng bước ứng dụng kỹ thuật FISH để giải quyết những khó khăn trong phân loại các loài vi tảo độc hại biển, chúng tôi tiến hành đề tài “Ứng dụng kỹ thuật phân tử lai huỳnh quang (FISH) nhằm xác định nhanh một số loài tảo độc hại biển Việt Nam”. Kết quả mong đợi của đề tài sẽ giúp cho việc nghiên cứu đánh giá, quan trắc biến động các loài vi tảo độc hại, cảnh báo các hiện tượng ô nhiễm môi trường biển (như thủy triều đỏ) trở nên thuận tiện, nhanh chóng và hiệu quả hơn. 2 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 1.1. Khái quát về kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ (FISH) 1.1.1. Lịch sử nghiên cứu, ứng dụng kỹ thuật FISH Kỹ thuật FISH được ra đời vào những năm 1980. Tuy nhiên, trước đó, khi nghiên cứu tế bào, các nhà nghiên cứu thường sử dụng phương pháp nhuộm mô đơn giản. Trong đó, các chất màu nhuộm tự nhiên hoặc tổng hợp đã được sử dụng để nhuộm các cấu trúc hoặc các chất tích lũy trong tế bào. Nhưng, một nhược điểm lớn là các chất này thường không đặc hiệu do chúng có những ái lực với những đặc tính chung của các phần tử protein, axit nucleic, các lipit, cacbonhydrate. Chính điều này đã cản trở cho các nghiên cứu chuyên sâu. Sau đó, các thuốc nhuộm đặc hiệu hơn đối với các thành phần của tế bào hay các phức hợp phân tử lớn như hemosiderin, amyloid, elastin đã được tìm thấy, phát triển và áp dụng trong việc nhuộm đặc hiệu một số thành phần cấu trúc ở cấp độ phân tử và dưới tế bào. Dù đã có nhiều cải thiện về tính đặc hiệu, nhưng các chất nhuộm này cũng không được áp dụng phổ biến cho tất cả các đại phân tử sinh học được quan tâm. Khả năng phát hiện sự giống và khác nhau của các đại phân tử đặc biệt ban đầu được dựa trên các phản ứng kháng nguyên kháng thể. Vào những năm 1940, việc liên kết các kháng thể với fluorochome nhưng không làm mất đi sự đặc hiệu liên kết thụ thể của chúng đã được phát hiện. Trên cơ sở này, kỹ thuật sử dụng tín hiệu huỳnh quang phụ thuộc kháng thể nhằm phát hiện các phân tử axit nucleic lai đã được Rudkin và Stollar phát triển năm 1977 [58]. Tuy vậy, trước đó, kỹ thuật lai tại chỗ ISH (in situ hybridization), tiền thân của kỹ thuật FISH, đã ra đời bởi nhóm các nhà khoa học Pardue, Gall và John [54]. Trong phương pháp này, các thử nghiệm đã được tiến hành với việc nhận biết được các trình tự ADN đích có trong noãn bào của chủng vi khuẩn Xenopus bằng các đoạn đầu dò có bản chất là ADN hoặc ARN-28S đã được đánh dấu bằng đồng vị phóng xạ. Sau đó chúng được ghi nhận bằng kỹ thuật phóng xạ tự ghi. Kỹ thuật ISH này đã giúp các nhà khoa học có thể đưa các đoạn ngắn ADN xâm nhập vào trong tế bào mà không làm chết, làm thay đổi hình thái của tế 3 bào hay tính toàn vẹn của các bộ phận bên trong tế bào. Trên cơ sở đó, một số cải tiến kỹ thuật đã tiếp nối như việc ứng dụng các chất chỉ thị (reporter) dựa trên cơ sở các enzym [33] hay sử dụng hệ thống đầu dò bằng vàng quan sát bằng kính hiển vi điện tử [55]. Sau khi ra đời, ISH không ngừng được cải tiến nhằm nghiên cứu sự tiến hóa của nhiễm sắc thể, phân tích các nhiễm sắc thể của các khối u, tế bào ung thư bạch cầu và nghiên cứu di truyền học tế bào ở các loài. Tuy nhiên, một số nhược điểm dễ nhận thấy của phương pháp ISH cũng đã bộc lộ. Đầu tiên, rất nhiều vật liệu phóng xạ tự nhiên sử dụng cho đầu dò là kém bền. Do các đồng vị phân rã theo thời gian nên hoạt động của đầu dò dễ bị thay đổi. Thứ hai, mặc dù thông thường độ nhạy của phóng xạ tự ghi là cao nhưng mức độ phân giải lại bị hạn chế. Thứ ba, để tạo ra tín hiệu có thể đo được trên film chụp X quang thì mẫu cần phải có thời gian phơi nhiễm dài. Điều này làm chậm tiến trình thí nghiệm, phân tích kết quả, gia tăng nguy cơ phơi nhiễm với người sử dụng. Ngoài ra, vì kỹ thuật này đòi hỏi sử dụng nguyên liệu là các đồng vị phóng xạ nên các đầu dò phóng xạ có giá thành cao; mặt khác đòi hỏi chúng phải được vận chuyển, thao tác, lưu trữ và loại bỏ theo những quy trình rất nghiêm ngặt, phức tạp. Vì những lý do đó, dù có nhiều ưu điểm nổi trội nhưng những hạn chế cơ bản trên đã yêu cầu các nhà nghiên cứu cần phải tìm ra một biện pháp hiệu quả hơn. Có lẽ vì vậy mà kỹ thuật ISH (với các đầu dò mang đồng vị phóng xạ) sau đó đã nhanh chóng được thay thế bởi một kỹ thuật mới có nhiều ưu điểm hơn mang tên kỹ thuật lai tại chỗ sử dụng các đầu dò axit nucleic có gắn tín hiệu huỳnh quang (Fluorescence in situ hybridization - FISH). Với kỹ thuật FISH, các trở ngại về thời gian thí nghiệm, độ phân giải và tính an toàn được giải quyết khá triệt để, mở đường cho sự phát hiện đồng thời nhiều mục tiêu, phân tích định lượng và cho những hình ảnh tế bào sống động. Những nghiên cứu thử nghiệm ứng dụng tín hiệu huỳnh quang đầu tiên trong phương pháp lai tại chỗ bắt đầu từ những năm 1980. Trong một nghiên cứu, các nhà khoa học đã tiến hành gắn phân tử ARN trực tiếp với tín hiệu huỳnh quang ở đầu 3’ và thử nghiệm dùng nó là một đầu dò cho trình tự ADN đặc hiệu. Kết quả cho thấy 4 rằng so với các đầu dò phóng xạ, đầu dò huỳnh quang sử dụng an toàn hơn, ít gây hại đối với môi trường và sức khỏe con người, đồng thời kết quả thu được cũng chính xác hơn [18]. Ở những nghiên cứu khác, các đầu dò gắn biotin và các tín hiệu streptavidin kết hợp huỳnh quang đã được dùng cho việc phát hiện các trình tự ADN đích đặc trưng trên nhiễm sắc thể [46] và các trình tự trên mARN [60]. Năm 1989, DeLong cũng đã tiến hành thử nghiệm sử dụng các đầu dò oligonucleotit (17 - 34 nucleotit) được đánh dấu huỳnh quang để dò tìm các vi khuẩn E.coli dựa vào trình tự đích là đoạn ARN 16s [24]. Nhiều nghiên cứu cũng chỉ ra rằng, việc sử dụng nhiều đầu dò khác nhau cho phép xác định được các loại tế bào khác nhau trong cùng một nhóm và thậm chí với việc phân tích cường độ huỳnh quang cũng cho thấy được giai đoạn và tốc độ phát triển của các tế bào vi sinh vật [19, 24]. Với khả năng ứng dụng rộng rãi của kỹ thuật FISH, ngày càng nhiều nghiên cứu được tiến hành trên các lĩnh vực khoa học. Sự phát triển ngày càng cao của nhiều kỹ thuật phân tích đã cho thấy rằng số lượng loài có trong tự nhiên, nhất là đối với nhóm vi khuẩn, có con số vượt xa so với số lượng các loài đã được phát hiện và mô tả trước đó. Do đó, sự đa dạng thành phần loài vi sinh vật trong thời gian trước đây đã từng bị đánh giá thấp. Các phương pháp cổ điển trước đây hầu như không thể mô tả được chính xác và đầy đủ rất nhiều loài vi sinh vật. Rất nhiều loài sau này được phát hiện mới bằng các phương pháp hiện đại và chính xác hơn, như phương pháp FISH. FISH có khả năng đưa ra những hình ảnh chi tiết của môi trường vi sinh mà không cần phải qua những bước làm sạch hay khuếch đại. Chính vì vậy mà nó đã được sử dụng rộng rãi trong các lĩnh vực nghiên cứu khác nhau về môi trường. Phương pháp này hiện nay được ứng dụng nhiều trong các nghiên cứu về sự đa dạng sinh học của các quần thể vi sinh vật ở nhiều điều kiện địa lý khác nhau trong tự nhiên, Llobet (1998) đã sử dụng kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ như một công cụ để các nghiên cứu về hệ vi sinh vật có trong trầm tích biển. Kết quả cho thấy, gần 45% số tế bào vi khuẩn có trong đó thuộc nhóm ngành đã biết với nhóm Cytophaga-Flavobacterium có trong hầu hết các lớp trầm tích [45]. Hay các nghiên cứu sự phân bố của vi khuẩn bằng kỹ thuật FISH trong đại dương [31], trong [...]... đầu dò không được lai ( ầu dò tự do) - Bước 5: Hiển thị, quan sát và phân tích kết quả bằng kính hiển vi huỳnh quang Hình 1.2 Các bước cơ bản của kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ FISH 1.4 Đặc điểm sinh thái của một số loài vi tảo biển độc hại nghiên cứu Alexandrium affine được xác định là một trong số 31 loài tảo độc hại thuộc phân chi Alexandrium nom nud của chi Alexandrium (chi tảo Hai roi) trên... gây thủy triều đỏ tại Việt Nam [3] 1.3 Các bước cơ bản của quy trình lai huỳnh quang tại chỗ - FISH Sự ra đời của kỹ thuật FISH dựa trên các cải tiến của kỹ thuật ISH đã ra đời và là sự kết hợp chính xác của phép lai một đoạn oligonucleotit ( ầu dò) có gắn tín hiệu huỳnh quang với một trình tự ADN đích đặc trưng Bằng quan sát trực quan từ kính hiển vi huỳnh quang, các phân tử huỳnh quang phát sáng với... phát hiện nhanh tảo độc hại và quan trắc, cảnh báo môi trường một cách hiệu quả hơn Phương pháp này thường được sử dụng trong các nghiên cứu quan trắc môi trường biển cho các loài vi tảo độc hại, đặc biệt khi có những biến động bất thường về môi trường và sự nở hoa vi tảo biển [59] Một trong những thử nghiệm đầu tiên sử dụng các đầu dò phân tử như một công cụ để phân loại các loài tảo độc hại được tiến... 17 sỹ lâm sàng trong việc phân nhóm bệnh nhân và lựa chọn phác đồ điều trị thích hợp [5] Các nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ FISH đối với các loài sinh vật thủy sinh tại Việt Nam gần như rất ít Trong một nghiên cứu gần đây tại Viện nghiên cứu hải sản về ứng dụng kỹ thuật FISH cho việc nhận diện nhanh 2 loài tảo giáp độc hại A tamarense và A catenella, một số thử nghiệm đã được tiến... là một trong những công cụ di truyền phân tử ứng dụng rộng rãi trong nghiên cứu về sinh thái học, môi trường học, chẩn đoán bệnh và phát sinh loài 1.1.4 Tình hình nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật FISH trong vi tảo biển độc hại Vi tảo biển (Microalgae) là bộ phận sinh vật có thành phần rất phong phú trong hệ sinh thái thủy sinh của biển Trong chuỗi thức ăn, vi tảo biển là sinh vật sản xuất sơ cấp, là một. .. đưa ra nhằm hoàn thiện và tối ưu hơn cho từng mục đích hay đối tượng quan tâm 16 khác nhau [17] Với những ưu thế về độ chính xác, độ nhạy và tiết kiệm thời gian, kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ vẫn được xem là một công cụ rất hữu hiệu cho nhiều nghiên cứu sinh học 1.2 Tình hình nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật FISH tại Việt Nam Cho đến nay, tại Việt Nam, kỹ thuật FISH chủ yếu được nghiên cứu ứng dụng trong... chứng Đao, hội chứng Tớc-nơ cũng đã cho kết quả thành công Kết quả nghiên cứu cũng cho thấy, việc sử dụng kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ đã cho kết quả rất chính xác khi so sánh với phương pháp phân tích nhiễm sắc thể của tế bào ối [1, 2] Bên cạnh đó, các nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật FISH trong việc phát hiện các lệch bội nhiễm sắc thể số 13, 18, 21, X, Y từ tế bào dịch ối bằng kỹ thuật lai huỳnh quang. .. thập từ Mĩ và Canada Phép lai phân tử cũng cho thấy tín hiệu huỳnh quang giảm nhẹ khi tế bào nuôi cấy ở giai đoạn muộn chứng tỏ lượng ARN đã giảm trong tế bào Việc định lượng tế bào Pseudo-nitzschia bằng sử dụng kết hợp kỹ thuật FISH cũng trở nên dễ dàng và nhanh chóng hơn [59] Khả năng ứng dụng kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ đối với các mẫu Pseudo-nitzschia đã được cố định bằng hóa chất bảo quản... thị môi trường quan trọng [7] Một loài tảo khác là Alexandrium pseudogonyaulax đã được xác định là một trong 15 loài tảo độc hại thuộc chi Alexandrium (phân chi Gessnerrium) có ở biển Việt Nam A pseudogonyaulax được coi là loài tảo gây hại trong nhiều thủy vực nước mặn và lợ ven biển Việt Nam Các kết quả điều tra nghiên cứu trước đây đã cho thấy rằng: A pseudogonyaulax có phân bố rộng và rất dễ bùng... trong lĩnh vực y học Một số nghiên cứu xây dựng quy trình chẩn đoán trước sinh bằng kỹ thuật FISH đã được tiến hành Các nghiên cứu này được dựa trên các trình tự ADN đích thuộc các nhiễm sắc thể nhằm phát hiện một cách chính xác các bất thường trên các nhiễm sắc thể (NST) tương ứng với các bệnh di truyền được quan tâm [4] Trong một số nghiên cứu khác, ứng dụng kỹ thuật lai tại chỗ huỳnh quang được dùng . khăn trong phân loại các loài vi tảo độc hại biển, chúng tôi tiến hành đề tài Ứng dụng kỹ thuật phân tử lai huỳnh quang (FISH) nhằm xác định nhanh một số loài tảo độc hại biển Việt Nam . Kết. Lưu Xuân Hòa ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PHÂN TỬ LAI HUỲNH QUANG (FISH) NHẰM XÁC ĐỊNH NHANH MỘT SỐ LOÀI TẢO ĐỘC HẠI BIỂN VIỆT NAM Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60 42 70 LUẬN VĂN. KHOA HỌC TỰ NHIÊN Lưu Xuân Hòa ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PHÂN TỬ LAI HUỲNH QUANG (FISH) NHẰM XÁC ĐỊNH NHANH MỘT SỐ LOÀI TẢO ĐỘC HẠI BIỂN VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC