nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa trên địa bàn tỉnh thái bình và chế tạo thử nghiệm auto - vaccine phòng bệnh

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  TRẦN THỊ HUỆ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH PHÙ ĐẦU Ở LỢN SAU CAI SỮA TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH THÁI BÌNH VÀ CHẾ TẠO THỬ NGHIỆM AUTO - VACCINE PHÒNG BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Thái Nguyên - 2011 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  TRẦN THỊ HUỆ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH PHÙ ĐẦU Ở LỢN SAU CAI SỮA TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH THÁI BÌNH VÀ CHẾ TẠO THỬ NGHIỆM AUTO - VACCINE PHÒNG BỆNH CHUYÊN NGÀNH: THÚ Y Mã Số: 60. 62. 50 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: TS. Đặng Xuân Bình Thái Nguyên- 2011 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tôi xin cam đoan các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ. Tác giả Trần Thị Huệ Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt 2 năm học tập, với nỗ lực của bản thân, tôi đã nhận được sự giúp đỡ, hướng dẫn tận tình của nhiều cá nhân và tập thể, đến nay luận văn của tôi đã hoàn thành. Nhân dịp này, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn và cảm ơn chân thành tới thầy giáo hướng dẫn TS. Đặng Xuân Bình đã tận tình chỉ bảo, hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành tới cán bộ, công nhân viên Bộ môn Công nghệ vi sinh – Viện Khoa học và sự sống - Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm Khoa Sau Đại học – Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên đã giúp đỡ tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu tại trường. Tôi xin chân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Chi cục Thú y tỉnh Thái Bình, cán bộ trạm thú y và các trang trại, gia trại chăn nuôi lợn tại các huyện Hưng Hà, Kiến Xương,Thái Thụy tỉnh Thái Bình đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Trong quá trình thực hiện đề tài tôi cũng nhận được sự quan tâm, động viên sâu sắc của gia đình bạn bè và đồng nghiệp. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành trước mọi sự giúp đỡ quý báu đó. Thái Bình, tháng 9 năm 2011 Tác giả Trần Thị Huệ Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦ U 1 1. Đặt vấn đề 1 2. Mục tiêu nghiên cứu 2 3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 2 Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Đặc điểm bệnh phù đầu lợn 3 1.2. Vai trò của vi khuẩn E. coli trong bệnh phù đầu lợn 4 1.2.1. Đặc điểm sinh học của vi khuẩn E. coli 4 1.2.2. Đặc tính gây bệnh của vi khuẩn E. coli 8 1.2.3. Biện pháp phòng trị bệnh phù đầu lợn 15 1.3. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 16 1.3.1. Tình hình nghiên cứu ở trong nước 16 1.3.2. Tình hình nghiên cứu ở nước ngoài 19 Chƣơng 2: NỘ I DUNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁ P NGHIÊN CƢ́ U 22 2.1. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu 22 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 22 2.1.2. Địa điểm nghiên cứu 22 2.1.3. Thời gian nghiên cứu 22 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn iv 2.2. Nội dung nghiên cứu 22 2.2.1. Điều tra một số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu lợn trên địa bàn tỉnh Thái Bình 22 2.2.2. Phân lập vi khuẩn E. coli từ những lợn mắc bệnh phù đầu 22 2.2.3. Chế tạo auto - vaccine phòng bệnh phù đầu lợn 23 2.3. Vật liệu nghiên cứu 23 2.4. Phương pháp nghiên cứu 23 2.4.1. Phương pháp nghiên cứu dịch tễ 23 2.4.2. Thu thập mẫu và phân lập vi khuẩn. 25 2.4.3. Xác định serotype khá ng nguyên O của các chủng vi khuẩn phân lập được 27 2.4.4. Phương pháp xác định các yếu tố gây bệnh của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 28 2.4.5. Kiểm tra độc lực của các chủng vi khuẩn phân lập trên chuột bạch 31 2.4.6. Xác định khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các chủng vi khuẩn phân lập được 32 2.4.7. Chế tạo auto - vaccine 32 2.4.8. Phương pháp tiêm phòng: 35 2.4.9. Phương pháp xử lý số liệu 35 Chƣơng 3: KẾ T QUẢ NGHIÊN CƢ́ U VÀ THẢ O LUẬ N 36 3.1. Điều tra một số đặ c điể m dị ch tễ bệ nh phù đầ u lợ n nuôi trên địa bàn tỉnh Thái Bình 36 3.1.1. Tình hình bệnh phù đầu lợn trong các năm 2008, 2009, 2010 36 3.1.2. Tình hình bệnh phù đầu theo địa điểm 37 3.1.3. Điều tra tình hình lợn chết do mắc bệnh phù đầu 41 3.1.4. Điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo mùa 44 3.1.5. Điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo lứa tuổi 46 3.2. Phân lập vi khuẩn E. coli từ mẫu bệnh phẩm lợn mắc bệnh phù đầu 48 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn v 3.3. Giám định một số đặc tính sinh vật, hóa học của chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 50 3.4. Xác định một số serotype kháng nguyên O của các chủng phân lập 51 3.5. Xác định yếu tố bám dính của chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 53 3.6. Xác định khả năng gây dung huyết của chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 54 3.7. Xác định khả năng sản sinh độc tố đường ruột của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 55 3.8. Xác định độc lực của chủng vi khuẩn phân lập 57 3.9. Kết quả thử tính mẫn cảm với kháng sinh và hóa dược của vi khuẩn E. coli phân lập được 58 3.10. Chế tạo và kiểm nghiệm auto - vaccine phòng bệnh phù đầu lợn 61 3.10.1. Bồi dưỡng kháng nguyên phục vụ chế auto - vaccine 61 3.10.2. Kiểm tra đánh giá chất lượng auto - vaccine trong phòng thí nghiệm 62 3.11. Thử nghiệm an toàn auto - vaccine trên lợn thí nghiệm 63 3.12. Khảo sát đáp ứng miễn dịch của lợn thí nghiệm sử dụng auto - vaccine 64 3.13. Thử nghiệm khả năng bảo hộ lợn thí nghiệm của auto - vaccine với chủng E. coli phân lập. 65 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 67 1. Kết luận 67 2. Đề nghị 68 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Cs : Cộng sự CFU : Colony Forming Unit ĐC : Đối chứng E. : Escherichia EDP : Edema Disease Principle ETEC : Enterotoxigenic E. coli BHI : Brain Heart Infusion broth P : Độ tin cậy PCR : Polymerase Chain Reaction LT : Heat Labile toxins N : Dung lượng mẫu KHT : Kháng huyết thanh RR : Relative Risk PBS : Phosphate Buffered Saline ST : Heat Stable toxins Stx : Shiga toxin TN : Thí nghiệm VT : Verotoxin Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1. Tình hình bệnh phù đầu lợn trong các năm 2008, 2009, 2010 36 Bảng 3.2. Kết quả điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu tại 3 huyện thuộc tỉnh Thái Bình năm 2010 38 Bảng 3.3. So sánh nguy cơ mắc phù đầu lợn giữa các huyện tại tỉnh Thái Bình 40 Bảng 3.4. Kết quả điều tra tình hình lợn chết do mắc bệnh phù đầu 41 Bảng 3.5. So sánh nguy cơ chết ở lợn mắc bệnh phù đầu sau cai sữa giữa các huyện 43 Bảng 3.6. Kết quả điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo mùa 44 Bảng 3.7. Kết quả điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo lứa tuổi 46 Bảng 3.8. Kết quả phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm lợn mắc bệnh phù đầu sau cai sữa 48 Bảng 3.9. Kết quả giám định đặc tính sinh hóa của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 50 Bảng 3.10. Kết quả xác định serotype kháng nguyên O của vi khuẩn E. coli phân lập được 52 Bảng 3.11. Kết quả xác định yếu tố bám dính của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 53 Bảng 3.12. Kết quả xác định khả năng gây dung huyết của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 54 Bảng 3.13. Kết quả xác định khả năng sản sinh độc tố của chủng vi khuẩn E. coli phân lập được 56 Bảng 3.14. Kết quả thử độc lực của các chủng vi khuẩn E. coli phân lập 57 Bảng 3.15. Kết quả thử tính mẫn cảm với kháng sinh và hóa dược của vi khuẩn E. coli phân lập được 59 Bảng 3.16. Kết quả bồi dưỡng kháng nguyên E. coli chế tạo auto - vaccine tại Thái Bình 61 Bảng 3.17. Kết quả kiểm nghiệm chất lượng auto - vaccine trong phòng thí nghiệm 62 Bảng 3.18. Kết quả thử an toàn auto - vaccine ở lợn thí nghiệm 63 Bảng 3.19. Kết quả khảo sát hiệu giá kháng thể ở lợn thí nghiệm sau khi tiêm auto – vaccine 64 Bảng 3.20. Kết quả bảo hộ lợn thí nghiệm bằng auto – vaccine 65 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn viii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1. Cơ chế gây bệnh phù đầu lợn của E. coli (Bertschinger. H. U, Nielsen. N. O, 1992) 9 Hình 2.1. Sơ đồ phân lập giám định vi khuẩn E. coli 26 Hình 2.2. Sơ đồ bố trí thí nghiệm đánh giá hiệu quả bảo hộ của vắc xin trên thực địa 35 Hình 3.1. Biểu đồ vể tỷ lệ mắc bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa tại 03 huyện của tỉnh Thái Bình 39 Hình 3.2. Biểu đồ về tỷ lệ lợn chết do mắc bệnh phù đầu ở 03 huyện của tỉnh Thái Bình 42 Hình 3.3. Biểu đồ về tỷ lệ mắc bệnh phù đầu lợn theo mùa vụ 45 Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn tỷ lệ mắc bệnh phù đầu theo lứa tuổi lợn 47 Hình 3.5. Biểu đồ về tỷ lệ phân lập vi khuẩn E. coli từ lợn mắc bệnh phù đầu 49 Hình 3.6. Biểu đồ về tỷ lệ đề kháng của E. coli với từng loại kháng sinh. 61 [...]... http://www.lrc-tnu.edu.vn 2 2 Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu lợn tại tỉnh Thái Bình - Chế tạo và thử nghiệm vắc xin tại chỗ (auto - vaccine) phòng bệnh phù đầu lợn 3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn - Bổ sung tư liệu khoa học về đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa trên địa bàn tỉnh Thái Bình, đặc tính sinh vật học và yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E coli gây bệnh; kết quả chế. .. xuất của nghề chăn nuôi lợn trên địa bàn tỉnh Thái Bình, căn cứ vào điều kiện phòng thí nghiệm và năng lực nghiên cứu khoa học của Bộ môn Công nghệ vi sinh - Viện Khoa học Sự sống - Đại học Thái Nguyên chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa trên địa bàn tỉnh Thái Bình và chế tạo thử nghiệm auto - vaccine phòng bệnh Số hóa bởi Trung tâm Học liệu... quả chế tạo và thử nghiệm auto - vaccine phòng bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa sử dụng auto - vaccine - Sử dụng auto - vaccine phòng bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa, tăng hiệu quả kinh tế chăn nuôi, góp phần phát triển bền vững nghề chăn nuôi lợn trên địa bàn tỉnh Thái Bình Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn 3 Chƣơng 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm bệnh phù đầu lợn Căn cứ... 2.2.3 Chế tạo auto - vaccine phòng bệnh phù đầu lợn - Chọn chủng E coli chế tạo vắc xin - Kiểm tra, đánh giá auto - vaccine trong phòng thí nghiệm - Thử nghiệm auto - vaccine trên lợn thí nghiệm - Khảo sát đáp ứng miễn dịch của lợn thí nghiệm sử dụng auto - vaccine 2.3 Vật liệu nghiên cứu - Môi trường, hóa chất thông dụng đạt tiêu chuẩn Quốc tế (ISO) của Merck được chọn lọc để sử dụng phân lập và giám... công ̀ ́ nghiệp tập trung trên địa bàn tỉnh Thái Bình - Đị a điêm xet nghiêm mâu: Bộ môn Công nghệ vi sinh - Viên Khoa ̉ ́ ̣ ̃ ̣ học Sự sống - Đai hoc Thai Nguyên ̣ ̣ ́ 2.1.3 Thời gian nghiên cứu: Tư thang 12/2010 - 12/ 2011 ̀ ́ 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Điều tra một số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu lợn trên địa bàn tỉnh Thái Bình 2.1.1.1 Tình hình lợn mắc bệnh phù đầu trong các năm 2008, 2009,... 41g so với 708 ± 40g Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn 22 Chƣơng 2 NÔI DUNG VẬT LIỆU VA PHƢƠNG PHAP NGHIÊN CƢU ̣ ̀ ́ ́ 2.1 Đối tƣợng, địa điểm và thời gian nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu - Lợn con sau cai sữa nuôi tại các huyện, của tỉnh Thái Bình - Vi khuẩn E coli gây bệnh phù đầu ở lợn 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu - Địa ban nghiên cưu : Các trại lợn chăn nuôi theo hình... cả nước thì việc sử dụng auto- vaccine sẽ mang lại hiệu quả phòng bệnh cao nhất Nguyễn Khả Ngự, Lê Văn Tạo (1996) [20] đã nghiên cứu tình hình bệnh phù đầu lợn trên địa bàn một số tỉnh khu vực đồng bằng sông Cửu Long Để phòng bệnh, Nguyễn Khả Ngự, Lê Văn Tạo và cs (1999) [21], đã nghiên cứu chế tạo vắc xin phòng bệnh từ các chủng E coli phân lập được 1.3.2 Tình hình nghiên cứu ở nước ngoài Theo Theo... Các tỉnh, thành phố có số đầu lợn lớn trên 1 triệu con là Hà Nội, Đồng Nai, Nghệ An, Bắc Giang và Thái Bình Bên cạnh những kết quả đạt được, lợn nuôi tại Thái Bình thường xuyên mắc một số bệnh truyền nhiễm và ký sinh trùng, đặc biệt là bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa Bệnh xảy ra gây thiệt hại kinh tế đáng kể do tỷ lệ chết khá cao, từ 40 - 100%, tập trung ở những lợn béo, khỏe ăn tốt nhất đàn Lợn bệnh. .. lợn mắc bệnh phù đầu theo địa điểm 2.1.1.3 Tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo mùa 2.1.1.3 Tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo tuổi 2.1.1.4 Tình hình lợn chết do mắc bệnh phù đầu 2.2.2 Phân lập vi khuẩn E coli từ những lợn mắc bệnh phù đầu 2.2.2.1 Thu thập mẫu bệnh phẩm và phân lập vi khuẩn E coli gây bệnh 2.2.2.2 Giám định một số đặc tính sinh vật, hóa học của chủng vi khuẩn E coli phân lập được Số. .. [29]; Nguyễn Văn Thiện, 1997) [31] Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn 24 - Điều tra một số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu lợn theo Dirk U Pfeiffer (2002) [45] Phương pháp phân tích dịch tễ: Để so sánh nguy cơ mắc bệnh phù đầu và chết do bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa theo lứa tuổi, mùa vụ, chúng tôi dùng chỉ tiêu nguy cơ tương đối (Relative Risk - RR) Theo Nguyễn Như Thanh (2001) . tiến hành đề tài: Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa trên địa bàn tỉnh Thái Bình và chế tạo thử nghiệm auto - vaccine phòng bệnh . Số hóa bởi Trung tâm Học. gây bệnh; kết quả chế tạo và thử nghiệm auto - vaccine phòng bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa sử dụng auto - vaccine. - Sử dụng auto - vaccine phòng bệnh phù đầu ở lợn sau cai sữa, tăng hiệu quả. http://www.lrc-tnu.edu.vn 2 2. Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu lợn tại tỉnh Thái Bình. - Chế tạo và thử nghiệm vắc xin tại chỗ (auto - vaccine) phòng bệnh phù đầu lợn.