3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.4.3. Xác địnhserotype kháng nguyên Ocủa các chủng vi khuẩn phân lập được
Vi khuẩn E. coli có nhiều serotyp e khác nhau, do vậy bước quan trọng đầu tiên là xác định được nhóm serotyp e O, sau đó tiến hành các phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính với các kháng huyết thanh đơn giá trong
nhóm cần xác đ ịnh. Xác định một số serotype kháng nguyên O của vi khuẩn
E. coli phân lập được theo Karen. W et al (2000) [56].
Những nguyên liệu cơ bản cho việc xác định serotyp e gồm: + Các chủng E. coli cần định type được giữ trên thạch máu .
+ Các kháng huyết thanh O chuẩn (đa giá và đơn giá ), dung dịch nước muối sinh lý NaCl 0,85%, phiến kính sạch.
* Phương pháp tiến hành phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính như sau:
Phản ứng được thực hiện trên phiến kính, tiến hành chia phiến kính làm 3 phần. Trên một đầu của phiến kính ta nhỏ giọt nước muối sinh lý làm đối chứng âm, phần còn lại chia làm 2, mỗi vị trí nhỏ một giột kháng huyết thanh
nhóm (Poly O). Dùng que cấy vô khuẩn lấy một vòng khuẩn lạc chủng E. coli
cần giám định hòa trộn đều với một giọt kháng huyết thanh, làm như vậy đối với giọt nước muối sinh lý. Để 1 - 2 phút đọc kết quả phản ứng.
+ Phản ứng dương tính khi hình thành ngưng kết giữa kháng nguyên là vi khuẩn với kháng huyết thanh, tạo thành những hạt nhỏ trắng lấm tấm, huyễn dịch tách ra làm 2 phần là các hạt ngưng kết và phần nước trong. Với phản ứng ngưng kết xảy ra nhanh, rõ rệt thì được đánh giá mức ++++. Tùy theo khả năng ngưng kết để có thể đánh giá mức ngưng kết ở các mức độ khác nhau +, ++, +++ (theo Difco Laboratories).
+ Phản ứng âm tính khi hỗn dịch vi khuẩn với kháng huyết thanh đục đều tương tự như bên đối chứng.
Các chủng có ngưng kết với nhóm kháng nguyên O đa giá, sẽ tiếp tục làm phản ứng ngưng kết với từng kháng huyết thanh đơn giá có trong nhóm đa giá đó, cách làm và theo dõi tương tự như phản ứng kháng huyết thanh nhóm Poly O ở trên. Trong trường hợp các chủng có hiện tượng ngưng kết chéo với nhiều nhóm hoặc ngưng kết với nhiều đơn giá khác nhau, thì phải pha loãng kháng huyết thanh theo cấp số 2 rồi tiếp tục làm phản ứng. Nhóm serotype kháng huyết thanh nào có phản ứng ngưng kết xảy ra ở độ pha loãng cao nhất với chủng vi khuẩn giám định, chủng vi khuẩn thuộc về serotype đó.