Nghiên cứu tương đương sinh học của viên Azithromycin 250mg sản xuất tại Việt nam

Chương 1: TỔNG QUAN ...................................................................................... 3 1.1. SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC .................................................................. 3 1.1.1. Sinh khả dụng (Bioavailability) ....................................................... 3 1.1.2. Tương đương sinh học .................................................................... 3 1.1.3. Tình hình nghiên cứu TĐSH ở Việt nam và thế giớ ........................ 5 1.1.3.1. Trên thế giớ ............................................................................... 5 1.1.3.2. Trong nướ .................................................................................. 6 1.1.4. Quy định về đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh họ ........ 7 1.1.4.1. Chế phẩm cần và không cần đánh giá TĐS .............................. 8 1.1.4.2. Phương pháp DĐH đánh giá TĐS ............................................ 9 1.1.4.3. Thẩm định phương pháp phân tích trong dịch sinh học ........ 12 1.1.4.4. Phân tích số liệu và đánh giá TĐSH ....................................... 13 1.1.5. Sinh khả dụng của thuốc dạng rắn ................................................ 14 1.2. ĐẠI CƯƠNG VỀ AZITHROMYCI ........................................................................................................................ 14 1.2.1. Tính chất lýhoá của Azithromy .................................................... 14 1.2.2. Tính chất dược lý và dược động họ ............................................... 15 1.2.3. Một số chế phẩm chứa AZI trên thị trườn ..................................... 17 1.2.4. Một số nghiên cứu định lượng Azithromycin trong dịch sinh họ .......... 18 1.2.4.1.Định lượng AZI bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC........ 18 1.2.4.2. Các phương pháp khác ngoài sử dụng sắc .............................. 20

LỜI CẢM ƠN Sau một thời gian thực hiện, luận văn “Nghiên cứu tương đương sinh học của viên Azithromycin 250mg sản xuất tại Việt nam” đã hoàn thành. Ngoài sự làm việc nghiêm túc, sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân, tôi đã nhận được sự khích lệ rất nhiều từ phía nhà trường, thầy cô, gia đình và bè bạn đồng nghiệp. Trước hết, tôi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Trường ĐH Dược Hà Nội, đặc biệt là những thầy cô đã trực tiếp giảng dạy tôi suốt thời gian học tập tại Trường. Tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Kiều Anh, người đã dành rất nhiều thời gian và tâm huyết hướng dẫn nghiên cứu, giúp tôi hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Tôi xin chân thành cảm ơn TS Trần Việt Hùng, người đã rất nhiệt tình hướng dẫn tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Đồng thời, tôi xin gửi lời cảm ơn tới ThS Tạ Mạnh Hùng và Ban giám đốc cùng toàn thể cán bộ, nhân viên Trung tâm Tương đương sinh học-Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, nơi tôi thực hiện đề tài, đã tạo điều kiện và giúp đỡ tôi trong quá trình làm thực nghiệm. Tôi xin chân thành cám ơn Ban giám đốc Sở y tế vả Trung tâm Kiểm nghiệm Bắc Kạn, đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành khoá học này. Cuối cùng, tôi xin tỏ lòng biết ơn đến gia đình, bạn bè và đồng nghiệp, đã động viên khích lệ và giúp đỡ tôi tận tình trong quá trình học tập và nghiên cứu, là động lực không nhỏ để tôi có kết quả ngày hôm nay. Tôi xin chân thành cám ơn! Hà Nội, ngày 30 tháng 11 năm 2009 Hà Thị Xuân MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT µg : Microgam µL : Microlit AUC : Diện tích dưới đường cong (Area Under Curve) AZI : Azithromycin CLA : Clarithromycin C max : Nồng độ thuốc tối đa (Maximum Concentration) DĐH : Dược động học FDA : Cục quản lý thuốc và thực phẩm (Food and Drug Administration) HPLC : Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Perfomance Liquid Chromatography) HQC : Mẫu kiểm chứng nồng độ cao (High Quality Control Sample) HT : Huyết tương IS : Nội chuẩn (Internal Standard) LC-MS : Sắc ký lỏng ghép khối phổ (Liquid Chromatography- Mass Spectrometry) LLOQ : Giới hạn định lượng dưới (Lower Limit of Quantification) LOD : Giới hạn phát hiện (Limit of Detection) LQC ; Mẫu kiểm chứng nồng độ thấp (Low Quality Control Sample) MeCN : Acetonitril MeOH : Methanol MQC : Mẫu kiểm chứng nồng độ trung bình (Medium Quality Control Sample) ng : Nanogam NTN : Người tình nguyện PA :Tinh khiết phân tích (Pure for Analysis) ROXI : Roxithromycin RSD : Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SD : Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) SKD : Sinh khả dụng S/N : Tín hiệu/nhiễu đường nền (Signal/Noise) STT : Số thứ tự TĐSH : Tương đương sinh học T max : Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa TW : Trung ương ULOQ : Giới hạn định lượng trên (Upper limit of Quantification) USP : Dược điển Mỹ (The United States Pharmacopoeia) WHO : Tổ chức y tế thế giới (Word Health Organization) DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Sự phát triển nhanh chóng của nền công nghiệp Dược Việt Nam trong thời gian gần đây làm nảy sinh khá nhiều vấn đề về chất lượng thuốc. Do đó, việc quản lý chất lượng thuốc ngày càng chặt chẽ hơn và thu hút nhiều hơn sự quan tâm của xã hội. Một trong những vấn đề được quan tâm nhiều nhất, đó là tương đương sinh học (TĐSH). Tương đương sinh học được sử dụng để chỉ các sản phẩm cùng dạng bào chế, chứa một lượng dược chất như nhau và có sinh khả dụng tương tự trong cùng điều kiện thử nghiệm. Trên thực tế, nhiều chế phẩm thuốc có cùng hoạt chất, cùng dạng bào chế nhưng tốc độ và mức độ hấp thu vào tuần hoàn lại khác nhau nên tác dụng điều trị không hoàn toàn giống nhau. Chất lượng nguyên liệu, thành phần tá dược và kỹ thuật bào chế là những yếu tố có nhiều ảnh hưởng tới sự hấp thu của thuốc. Trong quá trình phát triển sản phẩm, đánh giá TĐSH là một trong những phương pháp thường được sử dụng để lựa chọn công thức và kỹ thuật bào chế. Kết quả đánh giá TĐSH là bằng chứng về hiệu quả điều trị của thuốc và làm cơ sở cho việc lựa chọn và thay thế thuốc trong lâm sàng. Dựa vào kết quả đánh giá TĐSH, nhà sản xuất có thể tự khẳng định chất lượng đích thực cho sản phẩm của mình; nhà quản lý có cơ sở để xem xét, thẩm định khi cấp giấy phép lưu hành và thầy thuốc có thêm các thông tin về dược động học để lựa chọn, thay thế thuốc trong điều trị. Sau hàng loạt các nghiên cứu, các bộ phận đăng ký thuốc ở các nước phát triển lớn như Mỹ [45], Úc [15] hoặc Châu Âu [43]… nhận thấy rằng TĐSH là cách thích hợp nhất để chứng tỏ sự tương thích trị liệu giữa thuốc generic và thuốc phát minh. Hiện nay, tại Việt Nam, nhu cầu sử dụng kháng sinh rất lớn. Một trong các loại kháng sinh đang được sử dụng rộng rãi trong điều trị là Azithromycin 1 (AZI). Chế phẩm kháng sinh Azithromycin được cung cấp bởi nhiều doanh nghiệp dược phẩm trong nước và ngoài nước, với nhiều dạng bào chế khác nhau như: viên nang, viên nén, viên phân tán, thuốc bột, hỗn dịch uống… Trong đó, viên nang là dạng chế phẩm đã được các doanh nghiệp Việt Nam sản xuất và lưu hành với tỉ trọng lớn. Tuy nhiên, về giá cả, có sự chênh lệch rất lớn giữa các chế phẩm của Việt Nam và ngoại nhập. Do tính đa dạng kết hợp với tính phổ biến trong sử dụng Azithromycin ở nước ta, chúng tôi thấy việc đánh giá TĐSH cho chế phẩm này là rất cần thiết. Để so sánh chất lượng của chế phẩm Azithromycin sản xuất trong nước với chế phẩm thuốc nước ngoài có cùng hoạt chất có uy tín trên thị trường, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Nghiên cứu tương đương sinh học của viên Azithromycin 250mg sản xuất tại Việt Nam”. Mục tiêu của đề tài là: 1. Xây dựng và thẩm định phương pháp phân tích Azithromycin trong huyết tương nhằm ứng dụng để nghiên cứu tương đương sinh học. 2. Đánh giá tương đương sinh học của viên nang Azithromycin 250mg sản xuất trong nước so sánh với viên nén Zitromax ∗ 250mg của hãng dược phẩm Pfizer-Bỉ. 2 Chương 1 TỔNG QUAN 1.1. SINH KHẢ DỤNG VÀ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC 1.1.1. Sinh khả dụng (Bioavailability) [5], [6], [21], [25] Sinh khả dụng (SKD) là đặc tính biểu thị mức độ và tốc độ hấp thu của một dược chất hoặc nhóm chất còn nguyên hoạt tính từ dạng bào chế vào hệ đại tuần hoàn và đưa đến nơi tác dụng. Mức độ hấp thu được phản ánh bằng diện tích dưới đường cong nồng độ-thời gian (AUC: Area Under Curve). AUC cho biết tổng lượng dược chất được hấp thu từ dạng bào chế vào hệ tuần hoàn. Tốc độ hấp thu được phản ánh bởi thời gian thuốc đạt cực đại (T max ) và nồng độ cực đại của thuốc (C max ) trong máu. Có 2 cách đánh giá SKD in vivo: SKD tương đối và SKD tuyệt đối, trong đó SKD tương đối được dùng nhiều hơn trong nghiên cứu phát triển các sản phẩm generic. 1.1.2. Tương đương sinh học [25], [47], [46] Hai chế phẩm được coi là TĐSH nếu chúng là những chế phẩm tương đương bào chế, chứa một lượng dược chất như nhau, được dùng với liều như nhau và có SKD tương tự trong cùng điều kiện thử nghiệm. TĐSH là cơ sở cho việc lựa chọn và thay thế thuốc trong lâm sàng. Hai chế phẩm đạt TĐSH có thể được sử dụng thay thế nhau trong điều trị. Kết quả đánh giá TĐSH khẳng định chất lượng đích thực của thuốc. Để đánh giá TĐSH của một thuốc, người ta dùng 4 phương pháp sau: - Phương pháp Dược động học - Phương pháp Dược lực học. - Thử nghiệm lâm sàng. 3 - Thử độ hoà tan in vitro. Trong đó phương pháp Dược động học (DĐH) được dùng phổ biến nhất để đánh giá TĐSH cho các thuốc tác dụng toàn thân, giải phóng thuốc vào hệ tuần hoàn. Nội dung chính của phương pháp này là dựa vào các thông số DĐH trung bình thu được từ nhiều cá thể. Phương pháp này thường được bố trí theo 2 mô hình: mô hình chéo và mô hình song song [21], [25]. Trong mỗi mô hình có thể tiến hành nghiên cứu theo thử nghiệm đơn liều hoặc đa liều. ♦ Mô hình nghiên cứu chéo + Chéo 2 thuốc, 2 giai đoạn : áp dụng khi cần so sánh 1 thuốc thử với 1 thuốc chứng. Người tình nguyện (NTN) được chia ngẫu nhiên thành 2 nhóm, 2 giai đoạn: Giai đoạn 1: Nhóm 1 sử dụng thuốc thử, nhóm 2 sử dụng thuốc chứng. Giai đoạn 2: Nhóm 2 sử dụng thuốc thử, nhóm 1 sử dụng thuốc chứng. + Chéo 3 thuốc, 3 giai đoạn: Áp dụng khi so sánh 2 thuốc thử A, B với 1 thuốc chứng. NTN được chia ngẫu nhiên thành 3 nhóm, 3 giai đoạn. Giai đoạn 1 Giai đoạn 2 Giai đoạn 3 Nhóm 1 Thuốc thử A Thuốc thử B Thuốc chứng Nhóm 2 Thuốc thử B Thuốc chứng Thuốc thử A Nhóm 3 Thuốc chứng Thuốc thử A Thuốc thử B Ưu điểm: Mỗi nhóm NTN đều uống thuốc thử và thuốc chứng nên hạn chế ảnh hưởng của yếu tố cá thể. Số NTN tham gia nghiên cứu ít nên tiết kiệm được kinh phí, nhân lực. Nhược điểm: Thời gian nghiên cứu kéo dài, NTN có thể bỏ giữa chừng nên ảnh hưởng đến kết quả nghiên cứu. ♦ Mô hình nghiên cứu song song: NTN được chia thành 2 nhóm. 4 [...]... trường hợp chế phẩm Azithromycin, trong khi viên Zithromax® 250mg của Pfizer giá 80.000-90.000đ /viên, viên Usmax 250mg của Dong in Dang Pharmaco (Hàn Quốc) giá khoảng 34.000đ /viên thì viên Azimax 250mg của Stada hoặc viên Azithromycin 250mg của Công ty Traphaco giá chỉ khoảng 7 3.000đ /viên Do đó đánh giá SKD và TĐSH của chế phẩm Azithromycin nói riêng và các thuốc của Việt Nam sản xuất nói chung so với... Cipla Viên nang 250mg Azifast Ipca Viên nén bao phim 250 mg Azimax Imexpharm Viên nang 250 mg Aziphar Mekophar Viên bao phim Viên nang 500 mg 250 mg Azithromycin Traphaco Viên bao phim Viên nang 500 mg 250 mg Azithromycin Naphaco Viên nang 250 mg Azithromycin Stada Viên nang 250 mg Nadymax CTCPDP 2/9 Viên nén dài bao phim 250 mg Pfizer Gói bột uống Viên nén Zithromax® 250mg 250mg 500mg 1.2.4 Một số nghiên. .. đồng xem xét các khía cạnh đạo đức và khoa học của nghiên cứu như mục đích, sự cần thiết phải tiến hành nghiên cứu; tính khoa học của đề cương nghiên cứu; sự đảm bảo quyền lợi và các biện pháp phòng ngừa các nguy cơ có thể xảy ra đối với NTN của nhóm nghiên cứu Vì vậy, trước khi tiến hành đánh giá SKD và TĐSH, nhóm nghiên cứu phải xây dựng đề cương nghiên cứu, nộp đơn xin đánh giá SKD và TĐSH lên thường... nghiệm (GLP) và ISO để đảm bảo kết quả nghiên cứu có độ tin cậy Từ các nghiên cứu thu được, chúng tôi nhận thấy một số thuốc của Việt Nam sản xuất không thua kém về SKD so với chế phẩm nổi tiếng cùng loại của nước ngoài Ví dụ: viên nang Cefaclor 250mg của Stada [10], Viên nén bao film Vigentin 500mg/125mg của Xí nghiệp Dược phẩm TW I [1]…, các chế phẩm nghiên cứu đều TĐSH với chế phẩm đối chiếu, nhưng... kinh tế Việt Nam, đồng thời thúc đẩy nhà sản xuất không ngừng nâng cao chất lượng để sản phẩm của mình có tính cạnh tranh cao 1.1.4 Quy định về đánh giá sinh khả dụng và tương đương sinh học Tổ chức Y tế thế giới, hiệp hội các nước Đông Nam Á, và một số nước đã có ban hành tài liệu hướng dẫn, quy định chung cho việc đánh giá SKD và TĐSH [21], [22], [33], [36], [40], [45] Nói chung, các nghiên cứu SKD... tiến hành Nghiên cứu chỉ được bắt đầu khi được sự chấp thuận của Hội đồng đạo đức [43], [45], [46] Hội đồng đạo đức (HĐĐĐ) bao gồm các chuyên gia đầu ngành, các nhà khoa học độc lập với nhóm nghiên cứu, bác sỹ lâm sàng và người đại diện cho quyền lợi của NTN Hội đồng được thành lập để đảm bảo nghiên cứu đánh giá SKD và TĐSH nếu được tiến hành, sẽ tuân thủ đầy đủ “đạo đức trong nghiên cứu Y -Sinh học Hội... nền rất đáng kể Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng kỹ thuật MS/MS để định lượng AZI trong huyết tương 24 Chương 2 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 2.1.1 Dược phẩm - Chế phẩm thử (T): Viên nang Azithromycin 250mg do Công ty CPDP X sản xuất SĐK: VNB-2709-05, Số lô: 08102, hạn sử dụng: 10/2011 - Chế phẩm chuẩn (R): Viên nén bao phim Zitromax∗ 250mg của hãng dược phẩm Pfizer... thuốc cần nghiên cứu - Nếu là nữ không được có thai - Kiểm tra sức khoẻ: đạt các yêu cầu về thể trạng, tiền sử bệnh tật, các phép thử lâm sàng, cận lâm sàng - Người tình nguyện phải tuân thủ nghiêm ngặt các quy định của thử nghiệm và các điều kiện thử nghiệm Chế phẩm nghiên cứu Chế phẩm nghiên cứu để đánh giá TĐSH phải đảm bảo các yêu cầu: - Được sản xuất theo tiêu chuẩn GMP - Chế phẩm nghiên cứu cần... thuốc sản xuất trong nước chưa yêu cầu có số liệu đánh giá SKD và TĐSH, riêng thuốc giải phóng có kiểm soát yêu cầu đánh giá TĐSH in vivo Hiện nay, Cục quản lý Dược Việt Nam, Trung tâm đánh giá TĐSH kết hợp với một số đơn vị và các nhà khoa học đang soạn thảo quy chế đánh giá TĐSH ở Việt Nam Khoảng 3-5 năm trở lại đây, những nghiên cứu về lĩnh vực này đã được quan tâm nhiều hơn Tuy nhiên hầu hết các nghiên. .. hoá sinh và huyết học 30 Sau khi được tuyển chọn theo tiêu chuẩn, được đọc và nghe phổ biến, giải thích các thông tin liên quan đến nghiên cứu, NTN phải tự nguyện cam kết tham gia nghiên cứu và ký tên vào Bản cam kết theo mẫu đã được Hội đồng đạo đức thông qua Trong số 17 người tình nguyện: 3 NTN tham gia nghiên cứu khảo sát ban đầu để xây dựng mô hình thực nghiệm, 14 NTN tham gia vào nghiên cứu TĐSH . nhằm ứng dụng để nghiên cứu tương đương sinh học. 2. Đánh giá tương đương sinh học của viên nang Azithromycin 250mg sản xuất trong nước so sánh với viên nén Zitromax ∗ 250mg của hãng dược phẩm. tài: Nghiên cứu tương đương sinh học của viên Azithromycin 250mg sản xuất tại Việt Nam . Mục tiêu của đề tài là: 1. Xây dựng và thẩm định phương pháp phân tích Azithromycin trong huyết tương. thực hiện, luận văn Nghiên cứu tương đương sinh học của viên Azithromycin 250mg sản xuất tại Việt nam đã hoàn thành. Ngoài sự làm việc nghiêm túc, sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân, tôi đã