Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA để chọn lọc gen TMS2 tạo ra các dòng TGMS mới

Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA để chọn lọc gen TMS2 tạo ra các dòng TGMS mới

Đề cương thực tập tốt nghiệpĐề tài:   “  Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA để chọn lọc gen tms2 tạo ra các dòng TGMS mới”Người hướng dẫn : 1.PGS.TS.Phan Hữu Tôn                                  2.KS.Tống Văn Hải                    Bộ môn : Công nghệ sinh học ứng dụng                    Khoa CNSH­Trường ĐHNN­Hà NộiNgười thực hiện : SV.Nguyễn Thị Hồng HạnhLớp                    :06­02 CNSH   PHầN I :Mở ĐầU1.1.Đặt vấn đề: Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong ba cây lương thực chủ yếu trên thế giới(lúa mì,lúa gạo,ngô),có tầm quan trọng sống còn với hơn nửa dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số nhanh và sự giảm dần diện tích đất nông nghiệp đặc biệt là đất canh tác lúa mỗi năm thì vấn đề đảm bảo an ninh lương thực là yêu cầu cấp thiết cần quan tâm trước mắt cũng như lâu dài.Do đó,để tăng năng suất lúa gạo,một trong những hướng  đặt ra có hiệu quả cao đó là sử dụng ưu thế lai.  Các giống lúa lai hiện nay cho có thể cho năng suất cao hơn 20­30% so với các giống lúa thường.Hiện nay,chúng ta đang sử dụng  hai hệ thống:hệ thống lúa lai hai dòng và hệ thống lúa lai ba dòng.Nhưng lúa lai hai dòng vượt trội hơn hẳn như:cơ hội chọn tạo các dòng bố lớn thuận lợi cho việc cải tạo chất lượng gạo,không có hiệu ứng đồng tế bào chất nên ít bị sâu hại hơn,năng suất cao hơn lúa lai ba dòng từ 5­10%,chỉ cần hai dòng khác nhau về bản chất di truyền(một là dòng TGMS hoặc PGMS,hai là dòng cho phấn) nên giá thành giảm,tính trạng bất dục đực mẫn cảm với điều kiện môi trường(EGMS) chủ yếu do một cặp gen lặn điều khiển thuận lợi cho việc tạo giống mới.  Để chọn tạo lúa lai hai dòng thành công thì dòng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho ưu thế lai cao.Hiện nay các dòng TGMS đang được sử dụng như:103S,T1S­96,64S,287S,36S2,Kim 76S,Pair 64S và 25S.Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS(tms1, tms2, tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó,gen tms2 có ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các dòng,giống lúa triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả năng phối hợp cao,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế lai cao như TH3­3,Việt Lai 20,TH3­4,…  Bằng  việc sử dụng ADN marker(chỉ thị phân tử) thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút ngắn.Các chỉ thị liên kết chặt  với các tính trạng kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn vật liệu nghiên cứu. Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các dòng TGMS mới”. 1.2.Mục đích và yêu cầu:1.2.1.Mục đích:­Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng chỉ thị phân tử.­Nghiên cứu di truyền gen tms2. 1.2.2 Yêu cầu : ­Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai F1­Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR­Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp truyền thống của các tổ hợp lai F2.­Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F2 . PHầN II : TổNG QUAN TÀI LIệU2.1. Hiện tượng ưu thế lai 2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng­ Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng ­ Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng­ Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai dòng(EGMS).       + Phương pháp truyền thống        + Chỉ thị phân tử và ứng dụng 2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉ thị phân tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng ­ Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới ­ Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam PHầN III : VậT LIệU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CứU3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu  3.1.1. Đối tượng nghiên cứu             Gồm một số tổ hợp lai F1­­­ , quần thể F2 3.1.2. Vật liệu nghiên cứu  * Thí nghiệm trong phòng:Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di ,  máy chụp ảnh điện di ,  máy li tâm , máy votex ,  tủ lạnh , lò vi sóng .           + Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm . Thành phần cho phản ứng  PCR           + Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez và cộng sự (2003)có trình tự là :              RM11_F:5’­TCTCCTCTTCCCCCGATC­3’            RM11_R:5’­ATAGCGGGCGAGCTTAG­3’Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl2 , Taq ADN polymerase , PCR mastermix , nước cất Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen : Thành phần Nồng độ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 10ml dung dịch chiết táchTris­HCl(pH=8) 1M 50mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 0,25mM 0,5mlSDS 10% 1% 1,0mlNaCl 5M 300mM 0,6mlH2O 7,4mlThành phần dung dịch đệm chiết tách Ngoài ra còn có : •Hỗn hợp Phenol : Chlorofom : Isoamylalcohol ( 25:24:1 )•Ethanol 70%•Đá lạnh•Dung dịch đệm TE Thành phần Nồng dộ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 50ml dung dịch TE làm việcTris­HCl(pH=8) 1M 10mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 1mM 0,1mlH2O 49,4mlThành phần dung dịch đệm TE•Hóa chất dùng cho chạy điện di trên Gel agarose : Agarose 1% , Ethidium Bromide 10mg/ml, loading Bufer(Bromo phenol blue , Xylen cyanol , Saccarose )* Thí nghiệm ngoài đồng ruộng:•Gồm 1 vài tổ hợp lai F1­­­ giữa dòng mẹ TGMS là 103S với các dòng bố khác •Cọc tre, nilon, thước. [...]... 1.2.Mục đích và u cầu:  1.2.1.Mục đích: ­Xác định gen tms2 trong tập đồn các dịng TGMS bằng  chỉ thị phân tử. Nghiên cứu di truyền gen tms2.    1.2.2 u cầu :  ­Khảo sát một số đặc điểm nơng sinh học của các tổ hợp lai  F 1 ­Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR ­Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp  truyền thống của các tổ hợp lai F 2 . ­Phát hiện gen tms2 ở các dịng TGMS và thế hệ F 2   . Đề cương thực tập tốt nghiệp Đề tài:    “  Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA để chọn lọc gen tms2 tạo ra các dịng  TGMS mới Người hướng dẫn : 1.PGS.TS.Phan Hữu Tơn                                   2.KS.Tống Văn Hải                     Bộ mơn : Cơng nghệ sinh học ứng dụng                     Khoa CNSH­Trường ĐHNN­Hà Nội Người thực hiện : SV.Nguyễn Thị Hồng Hạnh Lớp                    :06­02 CNSH   ... CứU 3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu  3.1.1. Đối tượng nghiên cứu             Gồm một số tổ hợp lai F 1­­­  , quần thể F 2   3.1.2. Vật liệu nghiên cứu  * Thí nghiệm trong phịng:  Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di ,  máy chụp ảnh điện  di ,  máy li tâm , máy votex ,  tủ lạnh , lị vi sóng .            + Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm .   Thành phần cho phản ứng  PCR            + Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez  và cộng sự (2003)có trình tự là :               RM11_F:5’­TCTCCTCTTCCCCCGATC­3’             RM11_R:5’­ATAGCGGGCGAGCTTAG­3’  Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl 2  , Taq ADN polymerase ,  PCR mastermix , nước cất   Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen : 1.2.Mục đích và u cầu:  1.2.1.Mục đích: ­Xác định gen tms2 trong tập đồn các dịng TGMS bằng  chỉ thị phân tử. Nghiên cứu di truyền gen tms2.    1.2.2 u cầu :  ­Khảo sát một số đặc điểm nơng sinh học của các tổ hợp lai  F 1 ­Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR ­Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp  truyền thống của các tổ hợp lai F 2 . ­Phát hiện gen tms2 ở các dịng TGMS và thế hệ F 2   . ... ĐầU 1.1.Đặt vấn đề:   Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong ba cây  lương thực chủ yếu trên thế giới(lúa mì,lúa  gạo,ngơ),có tầm quan trọng sống cịn với hơn nửa  dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số  nhanh và sự giảm dần diện tích đất nơng nghiệp  đặc biệt là đất canh tác lúa mỗi năm thì vấn đề  đảm bảo an ninh lương thực là u cầu cấp thiết  cần quan tâm trước mắt cũng như lâu dài.Do  đó ,để tăng năng suất lúa gạo,một trong những  hướng  đặt ra có hiệu quả cao đó là sử dụng ưu  thế lai.  Để chọn tạo lúa lai hai dịng thành cơng thì dịng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho  ưu thế lai cao.Hiện nay các dịng TGMS đang được sử  dụng như:103S,T1S­96,64S,287S,36S 2 ,Kim 76S,Pair 64S  và 25S.  Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS( tms1, tms2,   tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển  hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó ,gen tms2 có  ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống  đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các dịng,giống lúa triển vọng để tạo dịng TGMS tốt,có khả  năng phối hợp cao ,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế  lai cao như TH3­3,Việt Lai 20,TH3­4,… ...  Để chọn tạo lúa lai hai dịng thành cơng thì dịng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho  ưu thế lai cao.Hiện nay các dịng TGMS đang được sử  dụng như:103S,T1S­96,64S,287S,36S 2 ,Kim 76S,Pair 64S  và 25S.  Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS( tms1, tms2,   tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển  hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó ,gen tms2 có  ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống  đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các dịng,giống lúa triển vọng để tạo dịng TGMS tốt,có khả  năng phối hợp cao ,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế  lai cao như TH3­3,Việt Lai 20,TH3­4,…  Các giống lúa lai hiện nay cho có thể cho năng  suất cao hơn 20­30% so với các giống lúa  thường.Hiện nay,chúng ta đang sử dụng  hai hệ  thống:hệ thống lúa lai hai dịng và hệ thống lúa  lai ba dịng.Nhưng lúa lai hai dịng vượt trội hơn  hẳn như:cơ hội chọn tạo các dịng bố lớn thuận lợi  cho việc cải tạo chất lượng gạo,khơng có hiệu ứng đồng tế bào chất nên ít bị sâu hại hơn,năng suất  cao hơn lúa lai ba dịng từ 5­10% ,chỉ cần hai dịng  khác nhau về bản chất di truyền(một là dịng  TGMS hoặc PGMS,hai là dịng cho phấn) nên giá  thành giảm,tính trạng bất dục đực mẫn cảm với  điều kiện mơi trường(EGMS) chủ yếu do một cặp  gen lặn điều khiển thuận lợi cho việc tạo giống  mới. ...  Các giống lúa lai hiện nay cho có thể cho năng  suất cao hơn 20­30% so với các giống lúa  thường.Hiện nay,chúng ta đang sử dụng  hai hệ  thống:hệ thống lúa lai hai dịng và hệ thống lúa  lai ba dịng.Nhưng lúa lai hai dịng vượt trội hơn  hẳn như:cơ hội chọn tạo các dịng bố lớn thuận lợi  cho việc cải tạo chất lượng gạo,khơng có hiệu ứng đồng tế bào chất nên ít bị sâu hại hơn,năng suất  cao hơn lúa lai ba dịng từ 5­10% ,chỉ cần hai dịng  khác nhau về bản chất di truyền(một là dịng  TGMS hoặc PGMS,hai là dịng cho phấn) nên giá  thành giảm,tính trạng bất dục đực mẫn cảm với  điều kiện mơi trường(EGMS) chủ yếu do một cặp  gen lặn điều khiển thuận lợi cho việc tạo giống  mới. PHầN III : VậT LIệU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CứU 3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu  3.1.1. Đối tượng nghiên cứu             Gồm một số tổ hợp lai F 1­­­  , quần thể F 2   3.1.2. Vật liệu nghiên cứu  * Thí nghiệm trong phịng:  Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di ,  máy chụp ảnh điện  di ,  máy li tâm , máy votex ,  tủ lạnh , lị vi sóng .            + Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm .   Thành phần cho phản ứng  PCR            + Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez  và cộng sự (2003)có trình tự là :               RM11_F:5’­TCTCCTCTTCCCCCGATC­3’             RM11_R:5’­ATAGCGGGCGAGCTTAG­3’  Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl 2  , Taq ADN polymerase ,  PCR mastermix , nước cất   Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen : ...  Các giống lúa lai hiện nay cho có thể cho năng  suất cao hơn 20­30% so với các giống lúa  thường.Hiện nay,chúng ta đang sử dụng  hai hệ  thống:hệ thống lúa lai hai dịng và hệ thống lúa  lai ba dịng.Nhưng lúa lai hai dịng vượt trội hơn  hẳn như:cơ hội chọn tạo các dịng bố lớn thuận lợi  cho việc cải tạo chất lượng gạo,khơng có hiệu ứng đồng tế bào chất nên ít bị sâu hại hơn,năng suất  cao hơn lúa lai ba dịng từ 5­10% ,chỉ cần hai dịng  khác nhau về bản chất di truyền(một là dịng  TGMS hoặc PGMS,hai là dịng cho phấn) nên giá  thành giảm,tính trạng bất dục đực mẫn cảm với  điều kiện mơi trường(EGMS) chủ yếu do một cặp  gen lặn điều khiển thuận lợi cho việc tạo giống  mới. ... Tùy theo Chu trình nhiệt PCR cho cặp mồi tms2 Chạy điện di phát hiện sản phẩm PCR trên gel agarose 1 % *Nghiên cứu ưu thế lai của các tổ hợp lai F 1  so với bố +Bố trí thí nghiệm:    ­Thí nghiệm được bố trí theo phương pháp khảo sát tập đồn ,các con lai F 1   trồng cạnh bố tương ứng. Các tổ hợp lai được bố trí tuần tự khơng nhắc lại.    ­Ơ thí nghiệm được bố trí theo hình chữ nhật,mỗi ơ là 5m 2 . +Các biện pháp kỹ thuật:    ­Làm đất cày bừa    ­Thời vụ: Vụ chiêm xn 2010    ­Ngày gieo mạ :01/2010    ­Ngày cấy: 02/2010    ­Cấy 1 dảnh/khóm,cây x cây 11cm,hàng x hàng 20cm.    ­Mật đọ cấy 45 khóm/m 2 .    ­Lượng phân bón cho 1 ha:        Phân đạm 120 kg        Phân lân     90kg        Phân kali    60kg +Kỹ thuật bón phân:     ­Bón lót:100%lân + 30%đạm,bón sau khi bừa.     ­Bón thúc lần 1:50% phân đạm +40% phân kali,bón vào thời kì bắt đầu đẻ  nhánh.     ­Bón thúc lần 2:bón hết số đạm,kali cịn lại,bón khi lúa làm địng. ... Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA để chọn lọc gen tms2 tạo ra các dịng  TGMS mới Người hướng dẫn : 1.PGS.TS.Phan Hữu Tơn                                   2.KS.Tống Văn Hải                     Bộ mơn : Cơng nghệ sinh học ứng dụng                     Khoa CNSH­Trường ĐHNN­Hà Nội Người thực hiện : SV.Nguyễn Thị Hồng Hạnh Lớp                    :06­02 CNSH   3.2.2. Phương pháp nghiên cứu *   Xác định khả năng chứa gen bất dục đực mẫn cảm với  nhiệt độ tms2 bằng phương pháp PCR : +) Chiết tách ADN tổng số của dịng mẹ TGMS ,các tổ hợp phân ly  F 2   theo quy trình cải tiến của Bộ mơn Cơng nghệ sinh học.   Bước 1:Thu ngắt mẫu lá khỏe,dài khoảng 2cm bỏ vào ống  eppendorf có dung tích 1,5ml,đánh dấu tên giống rồi bỏ vào đá  lạnh.    Bước 2:Cối,chày sứ dùng để nghiền mẫu đã được hấp khử  trùng và đặt trong đá lạnh .Các mẫu lá được cắt nhỏ khoảng  0,5cm rồi bỏ vào cối.    Bước 3:Nhỏ 400 µl dung dịch đệm chiết suất ADN vào cối rồi  nghiền nhỏ mẫu lá  cho đến khi dung dịch chuyển sang màu  xanh đen.     Bước 4:Bổ sung thêm 400 µl dung dịch chiết suất AND vào pha  trộn lẫn sau đó hút 400 µl vào ống eppendorf đã được đánh dấu.    Bước 5: Cho 700 µl hỗn hợp Phenol : Chlorofom :  Isoamylalcohol ( 25:24:1 ) ... CứU 3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu  3.1.1. Đối tượng nghiên cứu             Gồm một số tổ hợp lai F 1­­­  , quần thể F 2   3.1.2. Vật liệu nghiên cứu  * Thí nghiệm trong phịng:  Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di ,  máy chụp ảnh điện  di ,  máy li tâm , máy votex ,  tủ lạnh , lị vi sóng .            + Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm .   Thành phần cho phản ứng  PCR            + Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez  và cộng sự (2003)có trình tự là :               RM11_F:5’­TCTCCTCTTCCCCCGATC­3’             RM11_R:5’­ATAGCGGGCGAGCTTAG­3’  Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl 2  , Taq ADN polymerase ,  PCR mastermix , nước cất   Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen : ... *Nghiên cứu ưu thế lai của các tổ hợp lai F 1  so với bố +Bố trí thí nghiệm:    ­Thí nghiệm được bố trí theo phương pháp khảo sát tập đồn ,các con lai F 1   trồng cạnh bố tương ứng. Các tổ hợp lai được bố trí tuần tự khơng nhắc lại.    ­Ơ thí nghiệm được bố trí theo hình chữ nhật,mỗi ơ là 5m 2 . +Các biện pháp kỹ thuật:    ­Làm đất cày bừa    ­Thời vụ: Vụ chiêm xn 2010    ­Ngày gieo mạ :01/2010    ­Ngày cấy: 02/2010    ­Cấy 1 dảnh/khóm,cây x cây 11cm,hàng x hàng 20cm.    ­Mật đọ cấy 45 khóm/m 2 .    ­Lượng phân bón cho 1 ha:        Phân đạm 120 kg        Phân lân     90kg        Phân kali    60kg +Kỹ thuật bón phân:     ­Bón lót:100%lân + 30%đạm,bón sau khi bừa.     ­Bón thúc lần 1:50% phân đạm +40% phân kali,bón vào thời kì bắt đầu đẻ  nhánh.     ­Bón thúc lần 2:bón hết số đạm,kali cịn lại,bón khi lúa làm địng. . ĐầU1.1.Đặt vấn đề: Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong ba cây lương thực chủ yếu trên thế giới(lúa mì,lúa gạo,ngô),có tầm quan trọng sống còn với hơn nửa dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số nhanh và sự giảm dần diện tích đất nông nghiệp đặc biệt là đất canh tác lúa mỗi năm thì vấn đề đảm bảo an ninh lương thực là yêu cầu cấp thiết cần quan tâm trước mắt cũng như lâu dài.Do đó ,để tăng năng suất lúa gạo,một trong những hướng  đặt ra có hiệu quả cao đó là sử dụng ưu thế lai.  Các giống lúa lai hiện nay cho có thể cho năng suất cao hơn 20­30% so với các giống lúa thường.Hiện nay,chúng ta đang sử dụng  hai hệ thống:hệ thống lúa lai hai dòng và hệ thống lúa lai ba dòng. Nhưng lúa lai hai dòng vượt trội hơn hẳn như:cơ hội chọn tạo các dòng bố lớn thuận lợi cho việc cải tạo chất lượng gạo,không có hiệu ứng đồng tế bào chất nên ít bị sâu hại hơn,năng suất cao hơn lúa lai ba dòng từ 5­10% ,chỉ cần hai dòng khác nhau về bản chất di truyền(một là dòng TGMS hoặc PGMS,hai là dòng cho phấn) nên giá thành giảm,tính trạng bất dục đực mẫn cảm với điều kiện môi trường(EGMS) chủ yếu do một cặp gen lặn điều khiển thuận lợi cho việc tạo giống mới.  Để chọn tạo lúa lai hai dòng thành công thì dòng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho ưu thế lai cao.Hiện nay các dòng TGMS đang được sử dụng như:103S,T1S­96,64S,287S,36S2,Kim 76S,Pair 64S và 25S. Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS( tms1, tms2,  tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó ,gen tms2 có ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các dòng, giống lúa triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả năng phối hợp cao ,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế lai cao như TH3­3,Việt Lai 20,TH3­4,…  Bằng  việc sử dụng ADN marker (chỉ thị phân tử)  thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút ngắn .Các chỉ thị liên kết chặt  với các tính trạng kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn vật liệu nghiên cứu.  Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi tiến hành đề tài:  Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các dòng TGMS mới . 1.2.Mục đích và yêu cầu:1.2.1.Mục đích:­Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng chỉ thị phân tử. Nghiên cứu di truyền gen tms2.  1.2.2 Yêu cầu : ­Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai F1­Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR­Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp truyền thống của các tổ hợp lai F2.­Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F2 . PHầN. cương thực tập tốt nghiệpĐề tài:   “  Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA để chọn lọc gen tms2 tạo ra các dòng TGMS mới Người hướng dẫn : 1.PGS.TS.Phan Hữu Tôn                                  2.KS.Tống Văn Hải                    Bộ môn : Công nghệ sinh học ứng dụng                    Khoa CNSH­Trường ĐHNN­Hà NộiNgười thực hiện : SV.Nguyễn Thị Hồng HạnhLớp                    :06­02 CNSH   PHầN