chỉ thị phân tử dna

... LIệU 2.1. Hiện tượng ưu thế lai  2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng ­ Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng  ­ Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng ­ Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai  dòng(EGMS).        + Phương pháp truyền thống         + Chỉ thị phân tử và ứng dụng  2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉ thị phân tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng  ­ Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới  ­ Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam 1.2.Mục đích và yêu cầu:  1.2.1.Mục đích: ­Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng  chỉ thị phân tử. ­Nghiên cứu di truyền gen tms2.   1.2.2 Yêu cầu :  ­Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai  F 1 ­Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR ­Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp  truyền thống của các tổ hợp lai F 2 . ­Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F 2   . PHầN ... PCR  Bước 6:Cho 600 µl hỗn hợp Chlorofom :  Isoamylalcohol(24:1),lắc đều va ly tâm 7 phút với tốc độ  13000 vòng/phút rồi hút phần dung dịch ở trên vào ống  eppendorf mới đã đánh dấu tương ứng.   Bước 7: Cho 800 µl Ethanol(96%)(hoặc 600 µl  Isopropanol),trộn đều và ly tâm 7 phút với tốc độ 13000  vòng/phút.Sau đó đổ phần dung dịch phía trên giữ lại  phần kết tủa dưới đáy ống nghiệm.    Bước 8: Rửa kết tủa bằng Ethanol 70%,làm khô tự nhiên  ở nhiệt độ phòng bằng cách úp ngược ống nghiệm lên giấy  thấm.    Bước 9:Hòa tan kết tủa bằng 50 µl dung dịch TE rồi bảo  quản ở nhiệt độ ­20 o C +Kiểm tra độ tinh sạch ADN bằng cáchđiện di trên gel  agarose 1%. +Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi RM11 cho gen tms2.   Bằng  việc sử dụng ADN marker (chỉ thị phân tử)  thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút  ngắn.Các chỉ thị liên kết chặt  với các tính trạng  kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được  các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen  mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính  xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn  vật liệu nghiên cứu.   Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi  tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các  dòng TGMS mới”. ... ĐầU 1.1.Đặt vấn đề:   Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong ba cây  lương thực chủ yếu trên thế giới(lúa mì,lúa  gạo,ngô),có tầm quan trọng sống còn với hơn nửa  dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số  nhanh và sự giảm dần diện tích đất nông nghiệp  đặc biệt là đất canh tác lúa mỗi năm thì vấn đề  đảm bảo an ninh lương thực là yêu cầu cấp thiết  cần quan tâm trước mắt cũng như lâu dài.Do  đó,để tăng năng suất lúa gạo,một trong những  hướng  đặt ra có hiệu quả cao đó là sử dụng ưu  thế lai. 3.1.3. Địa điểm nghiên cứu:tại phòng công nghệ sinh học  ứng dụng và khu thí nghiệm đồng ruộng khoa nông học –  Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội .  3.1.4. Thời gian nghiên cứu :    Đề tài được thực hiện từ tháng 1/2010 đến tháng 5/2010. Đề cương thực tập tốt nghiệp Đề tài:    “  Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA để chọn lọc gen tms2 tạo ra các dòng  TGMS mới” Người hướng dẫn : 1.PGS.TS.Phan Hữu Tôn                                   2.KS.Tống Văn Hải                     Bộ môn : Công nghệ sinh học ứng dụng                     Khoa CNSH­Trường ĐHNN­Hà Nội Người thực hiện : SV.Nguyễn Thị Hồng Hạnh Lớp                    :06­02 CNSH   PHầN...

... LIệU 2.1. Hiện tượng ưu thế lai  2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng ­ Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng  ­ Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng ­ Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai  dòng(EGMS).        + Phương pháp truyền thống         + Chỉ thị phân tử và ứng dụng  2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉ thị phân tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng  ­ Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới  ­ Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam Step ... ĐầU 1.1.Đặt vấn đề:   Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong ba cây  lương thực chủ yếu trên thế giới(lúa mì,lúa  gạo,ngô),có tầm quan trọng sống còn với hơn nửa  dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số  nhanh và sự giảm dần diện tích đất nông nghiệp  đặc biệt là đất canh tác lúa mỗi năm thì vấn đề  đảm bảo an ninh lương thực là yêu cầu cấp thiết  cần quan tâm trước mắt cũng như lâu dài.Do  đó,để tăng năng suất lúa gạo,một trong những  hướng  đặt ra có hiệu quả cao đó là sử dụng ưu  thế lai. *Nghiên cứu ưu thế lai của các tổ hợp lai F 1  so với bố +Bố trí thí nghiệm:    ­Thí nghiệm được bố trí theo phương pháp khảo sát tập đoàn,các con lai F 1   trồng cạnh bố tương ứng.Các tổ hợp lai được bố trí tuần tự không nhắc lại.    ­Ô thí nghiệm được bố trí theo hình chữ nhật,mỗi ô là 5m 2 . +Các biện pháp kỹ thuật:    ­Làm đất cày bừa    ­Thời vụ: Vụ chiêm xuân 2010    ­Ngày gieo mạ :01/2010    ­Ngày cấy: 02/2010    ­Cấy 1 dảnh/khóm,cây x cây 11cm,hàng x hàng 20cm.    ­Mật đọ cấy 45 khóm/m 2 .    ­Lượng phân bón cho 1 ha:        Phân đạm 120 kg        Phân lân     90kg        Phân kali    60kg +Kỹ thuật bón phân:     ­Bón lót:100%lân + 30%đạm,bón sau khi bừa.     ­Bón thúc lần 1:50% phân đạm +40% phân kali,bón vào thời kì bắt đầu đẻ  nhánh.     ­Bón thúc lần 2:bón hết số đạm,kali còn lại,bón khi lúa làm đòng.  Ưu thế lai của các tổ hợp lai  so với bố mẹ :   Ưu thế lai trung bình          H (MP%)   =   MP (mit parent) là giá trị trung bình của hai bố mẹ .  ƯTL trung bình là sự biểu hiện hơn hẳn ở một tính trạng nào đó  ở con lai F1 so với giá trị trung bình dó ở hai bố mẹ.      Ưu thế lai thực                      H (BP%)  =    BP(best parent) là bố hoặc mẹ tốt nhất . Ưu thế lại thực là biểu hiện sự hơn hẳnn ở một tính trạng nào đó   của con lai F 1  so với giá trị đó của bố hoặc mẹ tốt nhất.  Nghiên cứu chỉ thị phân tử nhằm xác định được gen tms2 có  trong các dòng TGMS , các tổ hợp F  2 .  %100 1 × − MP MPF %100 1 × − BP BPF 3.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu  * Nội dung nghiên cứu  +) Theo dõi đặc điểm nông sinh học :   Các chỉ tiêu nông sinh học : + Thời gian từ cấy đến bắt đầu trổ(10% số bông thoát khỏi lá  đòng). + Thời gian trổ từ khi bắt đầu trỗ(10% số bông thoát khỏi lá  đòng) đến khi kết thúc trổ (85% thoát khỏi lá đòng) . + Thời gian tự cấy đến chín(85% số hạt chắc màu vàng) + Tổng thời gian sinh trưởng từ gieo đến khi thu hoạch . + Chiều cao cây (cm) cuối cùng : đo từ mặt đất đến mút đầu bông  dài nhất không kể râu . + Chiều dài lá đòng : đo từ gối lá đến đầu mút lá , đo vào giai  đoạn chín sáp.  + Chiều rộng lá đòng.  + Góc độ lá đòng . + Chiều dài bông : đo từ cổ bông đến hết bông vào thời kì  chín  chắc .  Chỉ tiêu các yếu tổ cấu thành năng suất: + Tổng số nhánh(số nhánh max) + Số nhánh hữu hiệu /khóm : đến toàn bộ số nhánh trổ  thành bông . + Tổng số hạt/bông.  + Số hạt chắc/bông + Khối lượng 1000 hạt . + Số bông hữu hiệu/khóm: đến toàn bộ số bông  có từ 10 hạt  chắc trở lên  + Năng suất lý thuyết được tính theo công thức : NSLT = A x B x C x mật độ/đơn vị diện tích(g)  Trong đó: A: số bông hữu hiệu/khóm                  B: số hạt chắc/bông                  C: khối lượng 1000 hạt PHầN ... TE 3.1.3. Địa điểm nghiên cứu:tại phòng công nghệ sinh học  ứng dụng và khu thí nghiệm đồng ruộng khoa nông học –  Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội .  3.1.4. Thời gian nghiên cứu :    Đề tài được thực hiện từ tháng 1/2010 đến tháng 5/2010.   Bằng  việc sử dụng ADN marker (chỉ thị phân tử)  thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút  ngắn.Các chỉ thị liên kết chặt  với các tính trạng  kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được  các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen  mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính  xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn  vật liệu nghiên cứu.   Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi  tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các  dòng TGMS mới”. PHầN...

... thơm sử dụng chỉ thị L05 và chỉ thị BADH2 chỉ thị L05 và chỉ thị BADH2 Kết quả sử dụng chỉ thị phân tử L05 và BADH2 trong Kết quả sử dụng chỉ thị phân tử L05 và BADH2 trong phân loại các ... xuất  Các chỉ thị phân tử là RG 28 (F và R), RM342 (F và R), Các chỉ thị phân tử là RG 28 (F và R), RM342 (F và R), L05 (F và R) và chỉ thị BADH2 gồm 4 mồi EAP, ESP, L05 (F và R) và chỉ thị BADH2 ... cao; chỉ thị phân tử nhưng độ chính xác không cao; chỉ thị phân tử BADH2 đã phân biệt chính xác 100% các giống lúa BADH2 đã phân biệt chính xác 100% các giống lúa thơm và không thơm. Đây là chỉ...

... diện trong hình Ứng dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn tạo giống lúa thơm Các chỉ thị phân tử là RG 28, RM342, L05 và chỉ thị BADH2 gồm 4 mồi EAP, ESP, IFAP và ... Có thể thấy việc sử dụng chỉ thị BADH2 đã xác định được toàn bộ các giống lúa thơm có mang gen thơm fgr với các giống lúa không thơm. Điều đó cho thấy chỉ thị phân tử BADH2 có độ tin cậy và ... bằng hệ thống chụp và phân tích hình ảnh Gel Doc 2000. Ứng dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn tạo giống lúa thơm Kết quả sử dụng chỉ thị phân tử BADH2 để xác định...

... + MgCl 2 + dNTPS + Taq + Primers + DNA template THERMAL CYCLING Định nghĩa: Chọn lọc dựa trên chỉ thị phân tử (Marker assisted selection- MAS) là sử dụng chỉ thị DNA liên kết chặt với locus mục ... thể lưỡng bộ ( NST theo các cặp) có 2 allel của một gen, mỗi allel có nguồn từ một bố mẹ • Chỉ thị phân tử không xem xét như các gen bình thường khi chúng không có ảnh hưởng sinh học mà xem xét ... BREEDING Phương pháp chọn lọc kiểu hình trên cơ sở DNA markers DNA extractions DNA EXTRACTIONS LEAF SAMPLING Porcelain grinding plates High throughput DNA extractions “Geno-Grinder” Mortar and pestles Wheat...

... trình bày ở bảng 4.1. Bảng 4. 1 Tỷ số OD và hàm lƣợng DNA của thịt bò, heo, cừu Chỉ tiêu DNA thịt bò ( X ± SD) DNA thịt heo ( X ± SD) DNA thịt cừu ( X ± SD) Xác xuất thống kê Tỷ số OD 1,93 ... hỏi phải biết trình tự nucleotid của đoạn DNA cần khuếch đại, hay ít nhất cũng phải biết trình tự hai đầu của phân tử DNA. Chỉ khuếch đại những phân tử DNA có kích thƣớc nhỏ hơn 3 kb, tốt nhất ... chỉ chứa thịt bò nhƣng kết quả kiểm tra lại phát hiện có lẫn thịt gia cầm; các mẫu thịt bò tƣơi kết quả kiểm nghiệm lại cho dƣơng tính với thịt hƣơu và thịt ngựa; thịt bò viên lại có chứa thịt...

... nghiên cứu 3.2.1. Đánh giá các chỉ tiêu chất lượng gạo của một số giống lúa địa phương: nhiệt hoá hồ, độ bền gel, và hàm lượng amylose. 3.2.2.Sử dụng chỉ thị phân tử phát hiện gen quy định hàm ... hành thực hiện đề tài “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử phát hiện gen quy định hàm lượng amylose ở lúa” Mục đích và yêu cầu - Khảo sát đánh giá một số chỉ tiêu cơ bản liên quan đến hàm lượng ... lúa gạo ở mức phân tử, đặc biệt hàm lượng amylose. Hiểu rõ bản chất cấu trúc chức năng của các yếu tố quy định sự hình thành và biến đổi của amylose trong hạt gạo ở cấp độ phân tử sẽ cho phép...

... và không mang gen thơm. + Chỉ thị phân tử L05 có thể phân biệt được giữa các giống lúa thơm và không thơm, nhưng độ chính xác không cao. + Chỉ thị phân tử BADH2 đã phân biệt chính xác 100% các ... cậy của các chỉ thị phân tử liên kết với gen quy định mùi thơm fgr đã được tiến hành trên 40 dòng, giống lúa thơm và không thơm cho thấy: + Các chỉ thị phân tử RG28, RM342 không phân biệt được ... bằng chỉ thị RG28 và RM342 kết quả cho thấy: Đối với chỉ thị RG28 và RM342, các sản phẩm điện di ADN của các giống không cho sự đa hình. Điều này cho thấy, sử dụng chỉ thị RG28 và RM342 chưa phân...

... hành thực hiện đề tài “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử phát hiện gen quy định hàm lượng amylose ở lúa” Mục đích và yêu cầu - Khảo sát đánh giá một số chỉ tiêu cơ bản liên quan đến hàm lượng ... lúa gạo ở mức phân tử, đặc biệt hàm lượng amylose. Hiểu rõ bản chất cấu trúc chức năng của các yếu tố quy định sự hình thành và biến đổi của amylose trong hạt gạo ở cấp độ phân tử sẽ cho phép ... nghiên cứu phân biệt các alen trên locus gen waxy cũng như việc xác định tác 9 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 có độ phân huỷ trong kiềm cao, nhiệt độ hoá hồ thấp, chỉ có giống 10115 có độ phân huỷ...

... phép phân tách các phân tử DNA sợi đôi, kích thƣớc 300-10.000 bp. Các nồng độ agarose khác nhau cho phép tăng hiệu quả phân tách các nhóm phân tử có kích thƣớc khác nhau. Bảng 2.2: Sự phân ... DNA thì mối quan tâm hàng đầu là thu nhận đƣợc các phân tử này ở trạng thái nguyên vẹn tối đa, ít bị phân hủy do các tác nhân cơ học (phân tử bị gãy do nghiền, lắc mạnh) hay hoá học (phân tử ... vào giữa các base của phân tử DNA và phát huỳnh quang dƣới tia tử ngoại. Điều này cho phép phát hiện vị trí các đoạn DNA trên gel. Đối với gel polyacrylamide: Các phân tử DNA thƣờng đƣợc đánh...

... thị nh: chỉ thị hình thái, chỉ thị sinh hoá và chỉ thị phân tử ADN. Những chỉ thị này từ lâu đ là những công cụ hữu hiệu trong chơng trình chọn giống. 2.3.1. Chỉ thị hình thái Chỉ thị hình ... các chỉ thị phân tử thì chỉ thị SSR đợc đánh giá là có nhiều u điểm so với các chỉ thị khác, có khả năng cho đa hình cao, có bản chất đồng trội, di truyền theo quy luật Menden. Sử dụng chỉ thị ... Khái niệm về chỉ thị di truyền 25 2.4. Một số chỉ thị phân tử ứng dụng trong nghiên cứu đa dạng di truyền thực vật 31 2.5. Tình hình nghiên cứu đa dạng di truyền sử dụng chỉ thị phân tử SSR trong...

... triển của cá thể, nên các chỉ thị Protein và Isozym hạn chế về mặt ứng dụng. 2.3.3. Chỉ thị phân tử ADN 2.3.3.1. Các chỉ thị phân tử ADN Chỉ thị phân tử ADN là những chỉ thị có bản chất đa hình ... thị nh: chỉ thị hình thái, chỉ thị sinh hoá và chỉ thị phân tử ADN. Những chỉ thị này từ lâu đ là những công cụ hữu hiệu trong chơng trình chọn giống. 2.3.1. Chỉ thị hình thái Chỉ thị hình ... các chỉ thị phân tử thì chỉ thị SSR đợc đánh giá là có nhiều u điểm so với các chỉ thị khác, có khả năng cho đa hình cao, có bản chất đồng trội, di truyền theo quy luật Menden. Sử dụng chỉ thị...