... giá bằng chỉthịphântử tính kháng đạo ôn và chất lợng gạo:
- Tách ADN genome từ 92 dòng cây gồm các dòng đơn bội kép, các dòng cây ở các
thế hệ khác nhau và các giống/dòng bố mẹ để phân tích ... WAB56-125
3. Kết quả sử dụng cácchỉthịphântử để phát hiện sớm các dòng lúa kháng
bệnh đạo ôn chất lợng cao
Phản ứng PCR với cặp mồi RG64 431, RG64 432 và các mồi liên quan đến chất
lợng ...
t
t
h
h
u
u
ầ
ầ
n
n
+ Sử dụng chỉthịphântử đà xác định để đánh giá sớm các con lai có tính kháng đạo ôn
và chất lợng cao.
+ Trồng và theo dõi các đặc điểm nông sinh học các thế hệ con lai
7. Công...
... PCR
Bước 6:Cho 600 µl hỗn hợp Chlorofom :
Isoamylalcohol(24:1),lắc đều va ly tâm 7 phút với tốc độ
13000 vòng/phút rồi hút phần dung dịch ở trên vào ống
eppendorf mới đã đánh dấu tương ứng.
Bước 7: Cho 800 µl Ethanol(96%)(hoặc 600 µl
Isopropanol),trộn đều và ly tâm 7 phút với tốc độ 13000
vòng/phút.Sau đó đổ phần dung dịch phía trên giữ lại
phần kết tủa dưới đáy ống nghiệm.
Bước 8: Rửa kết tủa bằng Ethanol 70%,làm khô tự nhiên
ở nhiệt độ phòng bằng cách úp ngược ống nghiệm lên giấy
thấm.
Bước 9:Hòa tan kết tủa bằng 50 µl dung dịch TE rồi bảo
quản ở nhiệt độ 20
o
C
+Kiểm tra độ tinh sạch ADN bằng cáchđiện di trên gel
agarose 1%.
+Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi RM11 cho gen tms2.
Bằng việc sử dụng ADN marker (chỉ thịphân
tử) thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút
ngắn .Các chỉthị liên kết chặt với các tính trạng
kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được
các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen
mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính
xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn
vật liệu nghiên cứu.
Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi
tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉthị
phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các
dòng TGMS mới”.
... LIệU
2.1. Hiện tượng ưu thế lai
2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng
Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng
Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng
Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai
dòng(EGMS).
+ Phương pháp truyền thống
+ Chỉthịphântử và ứng dụng
2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉthịphân
tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam
1.2.Mục đích và yêu cầu:
1.2.1.Mục đích:
Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng
chỉ thịphân tử.
Nghiên cứu di truyền gen tms2.
1.2.2 Yêu cầu :
Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai
F
1
Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR
Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp
truyền thống của các tổ hợp lai F
2
.
Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F
2
.
PHầN ... LIệU
2.1. Hiện tượng ưu thế lai
2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng
Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng
Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng
Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai
dòng(EGMS).
+ Phương pháp truyền thống
+ Chỉthịphântử và ứng dụng
2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉthịphân
tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam
1.2.Mục đích và yêu cầu:
1.2.1.Mục đích:
Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng
chỉ thịphân tử.
Nghiên cứu di truyền gen tms2.
1.2.2 Yêu cầu :
Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai
F
1
Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR
Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp
truyền thống của các tổ hợp lai F
2
.
Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F
2
.
PHầN...
... nhiệt 301
DANH SÁCH CÁC BẢNG
Bảng 2. 1. Tỉ lệ của các mô trong các loại thịt (%tính theo khối lƣợng thịt xẻ) 3
Bảng 3. 1 Tỷ lệ các loại thịt trong các hỗn hợp thịt 21
Bảng 3. 2 Thành ... bộ phận
súc thịt và cơ thể học (Nguyễn Ngọc Tuân, Lê Thanh Hiền, 2004).
Bảng 2. 1. Tỉ lệ của các mô trong các loại thịt (%tính theo khối lƣợng thịt xẻ)
Loại mô Thịt bò Thịt heo Thịt cừu
Mô ... đo OD thịt heo, bò, cừu (thịt tƣơi) đƣợc trình bày ở bảng 4.1.
Bảng 4. 1 Tỷ số OD và hàm lƣợng DNA của thịt bò, heo, cừu
Chỉ tiêu
DNA thịt bò
(
X
± SD)
DNA thịt heo
(
X
± SD)
DNA thịt cừu...
... TE
3.1.3. Địa điểm nghiên cứu:tại phòng công nghệ sinh học
ứng dụng và khu thí nghiệm đồng ruộng khoa nông học –
Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội .
3.1.4. Thời gian nghiên cứu :
Đề tài được thực hiện từ tháng 1/2010 đến tháng 5/2010.
Bằng việc sử dụng ADN marker (chỉ thịphân
tử) thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút
ngắn .Các chỉthị liên kết chặt với các tính trạng
kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được
các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen
mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính
xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn
vật liệu nghiên cứu.
Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi
tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉthị
phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các
dòng TGMS mới”.
PHầN ... LIệU
2.1. Hiện tượng ưu thế lai
2.2. Hệ thống lúa lai hai dòng
Khái niệm hệ thống lúa lai hai dòng
Ưu điểm của hệ thống lúa lai hai dòng
Các phương pháp chọn tạo dòng mẹ lúa lai hai
dòng(EGMS).
+ Phương pháp truyền thống
+ Chỉthịphântử và ứng dụng
2.3. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chỉthịphân
tử trong chọn tạo lúa lai hai dòng
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng trên thế giới
Tình hình nghiên cứu và ứng dụng ở Việt Nam
Step ... ĐầU
1.1.Đặt vấn đề:
Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong ba cây
lương thực chủ yếu trên thế giới(lúa mì,lúa
gạo,ngô),có tầm quan trọng sống còn với hơn nửa
dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số
nhanh và sự giảm dần diện tích đất nông nghiệp
đặc biệt là đất canh tác lúa mỗi năm thì vấn đề
đảm bảo an ninh lương thực là yêu cầu cấp thiết
cần quan tâm trước mắt cũng như lâu dài.Do
đó,để tăng năng suất lúa gạo,một trong những
hướng đặt ra có hiệu quả cao đó là sử dụng ưu
thế lai.
*Nghiên cứu ưu thế lai của các tổ hợp lai F
1
so với bố
+Bố trí thí nghiệm:
Thí nghiệm được bố trí theo phương pháp khảo sát tập đoàn ,các con lai F
1
trồng cạnh bố tương ứng .Các tổ hợp lai được bố trí tuần tự không nhắc lại.
Ô thí nghiệm được bố trí theo hình chữ nhật,mỗi ô là 5m
2
.
+Các biện pháp kỹ thuật:
Làm đất cày bừa
Thời vụ: Vụ chiêm xuân 2010
Ngày gieo mạ :01/2010
Ngày cấy: 02/2010
Cấy 1 dảnh/khóm,cây x cây 11cm,hàng x hàng 20cm.
Mật đọ cấy 45 khóm/m
2
.
Lượng phân bón cho 1 ha:
Phân đạm 120 kg
Phân lân 90kg
Phân kali 60kg
+Kỹ thuật bón phân:
Bón lót:100%lân + 30%đạm,bón sau khi bừa.
Bón thúc lần 1:50% phân đạm +40% phân kali,bón vào thời kì bắt đầu đẻ
nhánh.
Bón thúc lần 2:bón hết số đạm,kali còn lại,bón khi lúa làm đòng.
Ưu thế lai của các tổ hợp lai so với bố mẹ :
Ưu thế lai trung bình H
(MP%)
=
MP (mit parent) là giá trị trung bình của hai bố mẹ .
ƯTL trung bình là sự biểu hiện hơn hẳn ở một tính trạng nào đó
ở con lai F1 so với giá trị trung bình dó ở hai bố mẹ.
Ưu thế lai thực H
(BP%)
=
BP(best parent) là bố hoặc mẹ tốt nhất .
Ưu thế lại thực là biểu hiện sự hơn hẳnn ở một tính trạng nào đó
của con lai F
1
so với giá trị đó của bố hoặc mẹ tốt nhất.
Nghiên cứu chỉthịphântử nhằm xác định được gen tms2 có
trong các dòng TGMS , các tổ hợp F
2
.
%100
1
×
−
MP
MPF
%100
1
×
−
BP
BPF
3.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
* Nội dung nghiên cứu
+) Theo dõi đặc điểm nông sinh học :
Các chỉ tiêu nông sinh học :
+ Thời gian từ cấy đến bắt đầu trổ(10% số bông thoát khỏi lá
đòng).
+ Thời gian trổ từ khi bắt đầu trỗ(10% số bông thoát khỏi lá
đòng) đến khi kết thúc trổ (85% thoát khỏi lá đòng) .
+ Thời gian tự cấy đến chín(85% số hạt chắc màu vàng)
+ Tổng thời gian sinh trưởng từ gieo đến khi thu hoạch .
+ Chiều cao cây (cm) cuối cùng : đo từ mặt đất đến mút đầu bông
dài nhất không kể râu .
+ Chiều dài lá đòng : đo từ gối lá đến đầu mút lá , đo vào giai
đoạn chín sáp.
+ Chiều rộng lá đòng.
+ Góc độ lá đòng .
+ Chiều dài bông : đo từ cổ bông đến hết bông vào thời kì chín
chắc .
Chỉ tiêu các yếu tổ cấu thành năng suất:
+ Tổng số nhánh(số nhánh max)
+ Số nhánh hữu hiệu /khóm : đến toàn bộ số nhánh trổ
thành bông .
+ Tổng số hạt/bông.
+ Số hạt chắc/bông
+ Khối lượng 1000 hạt .
+ Số bông hữu hiệu/khóm: đến toàn bộ số bông có từ 10 hạt
chắc trở lên
+ Năng suất lý thuyết được tính theo công thức :
NSLT = A x B x C x mật độ/đơn vị diện tích(g)
Trong đó: A: số bông hữu hiệu/khóm
B: số hạt chắc/bông
C: khối lượng 1000 hạt
PHầN...
... thu nhận đƣợc các
phân tử này ở trạng thái nguyên vẹn tối đa, ít bị phân hủy do các tác nhân cơ học
(phân tử bị gãy do nghiền, lắc mạnh) hay hoá học (phân tử bị thủy giải do các
enzym (enzym ... phân tách của phântử acid nucleotide:
Gel agarose và gel polyacrylamide.
Gel agrose
Lỗ có đƣờng kính trung bình cho phép phân tách cácphântử DNA sợi đôi,
kích thƣớc 300-10.000 bp. Các ... gắn xen
vào giữa các base của phântử DNA và phát huỳnh quang dƣới tia tử ngoại. Điều
này cho phép phát hiện vị trí các đoạn DNA trên gel.
Đối với gel polyacrylamide: Cácphântử DNA thƣờng đƣợc...
... ln
kháng); 4-9. Các cá th trong t hp BB5/R23 ln lưt t cây 1-6; 10-18. Các cá th trong t hp BB5/Qu
99 ln lưt t cây 1-9
i vi qun th dòng m, 11 qun th
phân tích chn ưc ... không cha gen)
3-11. Các cá th trong qun th BB21/c thanh cây t 1-8
Bảng 1. Tổng hợp kết quả chọn lọc gen kháng bạc lá ở các quần thể dòng bố
Tổ hợp
Số cây
phân tích
Gen Xa4 Gen ... gen kháng bc lá Xa21 là các dòng s 1, 2 thuc t hp lai
BB21/c thanh, ng thi cũng ã chn lc ưc mt s cá th cha hai gen kháng trng
thái d hp t trên các qun th dòng m như:...
... dụng chỉthịphântử để xác định các
Kết quả sử dụng chỉthịphântử để xác định các
dòng lúa mang gen thơm từcác thế hệ sớm
dòng lúa mang gen thơm từcác thế hệ sớm
Việc sử dụng chỉthịphân ... của các giống lúa thơm và không thơm sử dụng
PCR của các giống lúa thơm và không thơm sử dụng
chỉ thị L05 và chỉthị BADH2
chỉ thị L05 và chỉthị BADH2
Kết quả sử dụng chỉthịphântử L05 ... không
thơm cho thấy: Cácchỉthịphântử RG28, RM342
thơm cho thấy: Cácchỉthịphântử RG28, RM342
không phân biệt được các giống lúa mang gen thơm và
không phân biệt được các giống lúa mang...
... dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn
tạo giống lúa thơm
Các chỉthịphântử là RG 28, RM342, L05 và chỉ
thị BADH2 gồm 4 mồi EAP, ESP, IFAP và INSP, cùng
các hóa chất ... Có thể thấy việc sử
dụng chỉthị BADH2 đã xác định được toàn bộ các
giống lúa thơm có mang gen thơm fgr với các
giống lúa không thơm. Điều đó cho thấy chỉthị
phân tử BADH2 có độ tin cậy và ... dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn
tạo giống lúa thơm
Kết quả sử dụng chỉthịphântử L05 và BADH2: Đối
với chỉthị L05, sản phẩm điện di ADN của các giống khác...
... nghĩa:
Chọn lọc dựa trên chỉthịphântử
(Marker assisted selection- MAS) là
sử dụng chỉthị DNA liên kết chặt với
locus mục tiêu để thay cho chọn lọc
đánh giá kiểu hình
Giả định: chỉthị DNA (DNA markers) ... NST theo các cặp) có 2 allel
của một gen, mỗi allel có nguồn từ một bố mẹ
•
Chỉ thịphântử không xem xét như các gen bình thường
khi chúng không có ảnh hưởng sinh học mà xem xét như
các mốc ... AND PRACTICE
SECTION 2
HỆ THỐNG TẠO GIỐNG MAS (MAS
BREEDING SCHEMES)
1. Lai lại dựa trên chỉthịphântử (Marker-
assisted backcrossing)
2. Quy tụ gen (Pyramiding)
3. Chọn lọc những thế hệ đầu...
... nghiên cứu
3.2.1. Đánh giá cácchỉ tiêu chất lượng gạo của một số giống lúa địa phương:
nhiệt hoá hồ, độ bền gel, và hàm lượng amylose.
3.2.2.Sử dụng chỉthịphântử phát hiện gen quy định hàm ... cứu ứng dụng chỉthịphântử phát
hiện gen quy định hàm lượng amylose ở lúa”
Mục đích và yêu cầu
- Khảo sát đánh giá một số chỉ tiêu cơ bản liên quan đến hàm lượng amylose của các
giống địa ... gene Wx, các dạng thể hiện
khác nhau (cấu trúc phântử của gene) của Wx sẽ cho các AC khác nhau, ngoài ra chúng
còn phụ thuộc các kiểu gen phụ Sbe1, Sbe3 tương ứng. Đây cũng là một trong các yếu...
... của cácchỉthị
phân tử liên kết với gen quy định mùi thơm fgr đã được tiến
hành trên 40 dòng, giống lúa thơm và không thơm cho thấy:
+ Cácchỉthịphântử RG28, RM342 không phân biệt được các ... mang gen thơm.
+ Chỉthịphântử L05 có thể phân biệt được giữa các giống lúa
thơm và không thơm, nhưng độ chính xác không cao.
+ Chỉthịphântử BADH2 đã phân biệt chính xác 100% các
giống lúa ... dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn
tạo giống lúa thơm
Các chỉthịphântử là RG 28, RM342, L05 và chỉ
thị BADH2 gồm 4 mồi EAP, ESP, IFAP và INSP,
cùng các hóa chất...
... cứu ứng dụng chỉthịphântử phát
hiện gen quy định hàm lượng amylose ở lúa”
Mục đích và yêu cầu
- Khảo sát đánh giá một số chỉ tiêu cơ bản liên quan đến hàm lượng amylose của các
giống địa ... gene Wx, các dạng thể hiện
khác nhau (cấu trúc phântử của gene) của Wx sẽ cho các AC khác nhau, ngoài ra chúng
còn phụ thuộc các kiểu gen phụ Sbe1, Sbe3 tương ứng. Đây cũng là một trong các yếu ... nghiên cứu phân biệt các alen trên locus gen waxy cũng như việc xác định tác
9
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
có độ phân huỷ trong kiềm cao, nhiệt độ hoá hồ thấp, chỉ có giống 10115 có độ phân huỷ...