Bước đầu nghiên cứu enzyme xylanolytic và cellulolytic từ một chủng vi khuẩn ưa nhiệt

Bước đầu nghiên cứu enzyme xylanolytic và cellulolytic từ một chủng vi khuẩn ưa nhiệt

[...]... 4 ml aniline, 200 ml aceton và 30 ml axit phosphoric 80% [33] Đường glucose, cellobiose, xylose và xylooligosaccharide được dùng làm chất chuẩn KẾT LUẬN Từ những kết quả thu được trong quá trình nghiên cứu nêu trên, chúng tôi rút ra một số kết luận như sau: 1 Đã phân lập được một số chủng vi khuẩn, trong đó có chủng NKP13 có khả năng phân giải lignocellulose từ 34 mẫu vi khuẩn thu thập được 2 Đoạn gen... PCR 9700, máy lắc nuôi cấy, nồi hấp khử trùng, tủ ổn nhiệt, máy trộn vortex 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.1.4 Sàng lọc và phân lập vi khuẩn kị khí xylanolytic- cellulolytic ưa nhiệt Vi khuẩn được nuôi cấy trong môi trường cơ bản gồm K2HPO4 0,15g/l, KH2PO4 0,29g/l, urea 0,21g/l, cao nấm men 0,45g/l, muối khoáng 0,02%, resazurin 0,0025%, cystein 0,004% và giấy lọc 1% làm cơ chất Môi trường được xử lý bằng... giải phóng phân tử Dglucose từ đường cellodextrin hòa tan và một loạt các glucoside khác Hình 1.9: Tác dụng của từng enzyme trong cellulose 18 1.1.6 Enzyme xylanolytic Do tính không đồng nhất của xylan, sự thủy phân của nó đòi hỏi các ảnh hưởng của một hệ thống enzyme phức tạp Enzyme này thường bao gồm hai loại: enzyme không phân nhánh (β-1,4-endoxylanse, β-xylosidase) và enzyme phân nhánh (α-arabinofuranosidase,... tự nucleotide và cho thấy sự tương đồng tới 98% so với trình tự của đoạn gen tương ứng từ loài vi khuẩn Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum HM585225 được công bố trong ngân hàng gen thế giới 3 Chủng vi khuẩn NKP13 sinh trưởng được trên môi trường có cơ chất là vỏ ngô trong điều kiện kỵ khí và có khả năng sinh enzyme xylanolytic và CMCase với hoạt động thích hợp ở pH 6.0 và ở nhiệt độ 70 oC... sạch 2.1.5 Nhận dạng chủng vi khuẩn kị khí xylanolytic- cellulolytic ưa nhiệt 2.1.5.1 Kiểm tra hình thái tế bào vi khuẩn Phương pháp nhuộm Gram cải tiến như sau [1]: - Chuẩn bị chủng vi khuẩn sạch: các chủng được nuôi cấy trên môi trường thạch đã nêu ở trên - Tím kết tinh được nhỏ để làm vết bôi và để trong 1 phút - 1-2 giọt dung dịch (lugol) được bổ sung và giữ 30 giây đến 1 phút Tiêu bản được tẩy... vi sinh vật cellulolytic và xylanolytic không ở trong môi trường riêng biệt mà chúng tồn tại cùng với các loài khác như nấm và vi khuẩn Các chủng này sẽ đóng vai trò như trung tâm thủy phân polymer để tạo ra đường và các sản phẩm thủy phân khác 1.1.5 Enzyme cellulolytic Enzyme thủy phân cellulose có khả năng thủy phân chất thải chứa cellulose, chuyển hóa các hợp chất kiểu lignocellulose và cellulose... trùng và ủ ở 60oC, pH 7 Quá trình sinh trưởng của vi khuẩn được quan sát hàng ngày và các bước sàng lọc được tiến hành vài lần cho đến khi thu được kết quả tốt Sau đó 1 ml mỗi mẫu được dàn đều lên đĩa thạch 2,5% với môi trường tương tự như trên có chứa bã giấy 1% rồi ủ ở 60oC từ 2-3 ngày trong buồng cấy kị khí Các khuẩn lạc được sàng lọc vài lần đến khi được tinh sạch 2.1.5 Nhận dạng chủng vi khuẩn. .. các enzyme khác nhau để thủy phân hiệu quả hơn Mỗi polymer bị thủy phân bởi một số vi sinh vật sản xuất các enzyme hoạt động hỗ trợ nhau Nếu đúng như vậy, điều này có thể giúp chúng ta giải thích được tại sao vi sinh vật cellulolytic tổng hợp đặc trưng nhiều enzyme cellulase khác nhau có tính đặc hiệu gối nhau và tại sao một số enzyme xylanase lại mang vùng liên kết cơ chất gần với cellulose Các vi. .. độ đối với hoạt độ và độ bền của enzyme Nhiệt độ tối ưu của enzyme được xác định bằng cách đo hoạt độ ở dãy nhiệt độ 40oC đến 90oC, pH 7 Độ bền nhiệt của enzyme được đo bằng cách ủ enzyme ở pH 7 trong 30 phút ở các nhiệt độ khác nhau Sau đó hoạt độ còn lại được xác định như phương pháp đã nêu ở trên 32 2.1.8 Xác định protein Nồng độ protein được xác định theo phương pháp của Lowry và các cộng sự [22]... được chứng minh là sinh ra từ một số loài vi khuẩn và nấm [20,31] 1.3 Ứng dụng của enzyme lignocellulolytic Thế hệ nhiên liệu sinh học đầu tiên dựa trên đường, tinh bột và dầu thực vật, không có được những ứng dụng rộng rãi trong công nghiệp, vì các nguyên vật liệu này cũng được sử dụng làm thức ăn Lignocellulose được xem là thế hệ nhiên liệu sinh học thứ hai Trong thập kỷ qua, enzyme thủy phân lignocellulose 123doc.vn