Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Khảo sát thành phần hóa học của gỗ cây thông đỏ Taxus Wallichiana Zucc. Thuộc họ thanh tùng (Taxaceage) phân đoạn 4 và phân đoạn 5

Khóa luận tốt nghiệp Danh mục các hìnhDANH MỤC CÁC HINH Hình 1.1Thân cây thông đỏ Taxtus wailichiana ZUCC....‹..sSc... Một số hợp chất có tác dụng chữa bệnh có nguồn gốc thiên nhiên đã đ

20 /!»0

oe BỘ GIAO DỤC VA ĐÀO TẠO

Sp TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHAM TPHCM

KHẢO SÁT THÀNH PHAN HÓA HỌC CUA GO

CÂY THONG ĐỎ TAXUS WALLICHIANA ZUCC.

THUOC HO THANH TUNG (TAXACEAE)

PHAN DOAN 4 VA PHAN DOAN 5

Người hướng dẫn khoa học: Th.S Lê Ngoc Tứ

Cô Phạm Thị Thảo Uyên

Người thực hiện: Đặng Trọng Nghĩa

Khóa luận tốt nghiệp Lời cảm ơn

LỜI CẢM ƠN

Con xin kính gởi đến Ba, Mẹ lòng biết ơn sâu sắc Công ơn dưỡng dục và

những lời động viên của Ba, Mẹ chính là động lực giúp con vững bước trong cuộc

sông

Em xin kính gửi lời cảm ơn đến tất cá quý thấy cô trong Khoa Hóa học,

trường Đại học Sư phạm TP.HCM đã tận tinh dạy dỗ truyền đạt kiến thức cho em

trong suốt khóa học

Em xin tỏ long cảm ơn thay ThS Lê Ngọc Tứ và cô Phạm Thị Thảo Uyên

đã tận tinh hướng dẫn, truyền đạt những kinh nghiệm quý báu, tạo mọi điều kiện dé

em thực hiện tốt công việc nghiên cứu khoa học

Em xin cảm on thay ThS Mai Anh Hùng thay Nguyễn Trung Kiên, đãgiúp 40, động viên và chỉ din cho em trong suốt thời gian thực hiện khóa luận

Em xin tỏ lòng biết ơn quý thay cô trong Hội đồng bảo vệ Khóa luận tốt

nghiệp đã xem xét, góp ý cho khóa luận của em.

Cảm ơn các bạn lớp Cử nhân Hóa K.32 đã động viên, giúp đỡ tôi trong suốt

những năm học Đại học.

TP.HCM, tháng 5, năm 2010

Đặng Trọng Nghĩa

Khóa luận tốt nghiệp Mục luc

Mục lục

NI 1Ð G2204 ái:G4AG401G69014(0 460006140 SE orion Wren eae TRL LPI URN) OE |

DANH MỤC CAC KỶ HIEU, CHỮ VIET TẮT -<5-5-5c<5<<se 3

DANH MỤC CAC BANG VÀ CÁC SƠ ĐÓ S222 22S-2 -.-L , 4

ĐANH MỤC GAG FINI Go cctc021)00001202020aG01i00i8g866816100x6 §

DM Man cit inact RSS ee sca cea 6

Gương 1s TỐRG cpp ceases esssccacscnsct i ams sSgisilia iakemsacanteokie 7

1.1 Cây Thông đỏ lá dai (Gọi tắt là Thông đỏ) 2225<©cccScceereerrecee T

LÍ PB NI He hngàn it áx0024215021001036414824G026239)/0)101/610G)240030 0020 7

Is Di At MRR TRÔNG Sa 6ián toan kien noe0itreeiddedeteoonieszoarsdseoieyeoy 8

De DEA IMME tt CHR VÀ Go cu 101601Q002606606606011160517c644614/22-6246430076)51664659896629388E4:6 §

Dg °STP Ss ii —— TT [Ặ.Ặ——-.Ặ———— ằ——- 10

9 5 KK- Ÿ;ẪƑ}Ï7;Ƒ}Ï¡ÏƑÏẪ.Ï{ÏĨÏƑ[.—._ Ï[;“}1}1}j~ằẰ~ĂẰ& 12

1/910 0N EBABY, cu 20 ss===satlllccolcuoaoti\diGjosvsosxge 13

1.3.2 Tác dụng được lý theo kinh nghiệm dân gian -.555 13

By (i [ROB REROOPEET I seve IRE INERT ORCS ONCOL Dee CL ee ean a 13

14:1 Eee str tìm ra tamol sii Ris ESE 13

1202 Đadh ii hay quốc là cess ectcasereceic et ica a cna 14

[49 tiên blÂbdu⁄2 2466664006 01v26 G4000 0000246006166 ei bis cc 14

1.4.4 Cơ chế tác dụng chéng ung thur csesscccsssssssessovscssessssecsnessueceanecsnsesseessnsees 15

1.5 Ứng dung của hợp chất có khung lignan 22©22222cszcvxerccecsrreece 15

K4 TRÀ GIẦY hóa NGb»eet0ececeeieodGiiasoekitaetiossiiosaoaesgesasoxe 16 1.6.1 Thanh phần hóa học có trong lá Ăn csieierrrie l6

1.6.2 Thanh phan hóa học có trong vỏ, rễ vả hạt 5 5555555222 20

1.6.3 Thanh phân hóa học có trong 8Õ 5 55-22stxvverxecreeecreerrreeee 21

CCRC Ze 10C TION veces vensosin err rernorenanenergsssinsyipessouamasemnonsersss sarenpsemenaseonsonsal 25

"HT ằ ——— ae 25

Khóa luận tốt nghiệp Muc lục

3:3 Phương pháp thực nGh†iỆN::.s 22c ascii its ste aceasta a anaes 25

9:4 Thu lỗi và xử: HIẾN ¿22:2 20626 CG200 6 Gùn0110cGcck281coildissbiodzibecodiai 26

3/4 Cổ Tận các cầu từ hỗn lộpc:cooccácc 202001200 0CLi026//0000003566đu2G65a63 27

25:1: Kao sát phiên Megan BG ssc nv6220 064002106 0cácczssaaaei 27 5:0; Khảo sắt phu dOẠN K tá tosdxedbcx0)00006400266442914006420ssscgksag 28

ChưØnNG 3: NGHỊ CEN nay nc6xscBicdeit0c226tecác¿au1u6nivedesesssaa 29

SB A: Ce 0 CƯ HS SÏ Ằ ẳ- AUDI ONINTO NNT 29

3,2 Phương pháp nghiên cỨH - ——— cae psarscanscaactsastucesscuiuyecaatdsensensincaass 29

Khóa luận tốt nghiệp Mục lục

LOE a TL TT LT LT LE TE rn 25

2.3 Phương pháp thực nghiệm «ng 0111 xey 25

SoM Teas hÁÌ Và pel N HẦU c0 0666G6cg 0100240 S6x6(x24422u46/x66reszsem 263.5 Cô lập các cần từ hóa hoe 22k eso oe eis 27

2.5.1 Kháo sát phân: đoạn EÂt¿i6c.-<5 2040200002010 2020 0S0001ả/100606636 27 Dae PLN GEENINH)UDNN Bs (1i(002426G((00ì60000( 1260016000026 28

Chnng/3::N NHIÊN OU iss 6212020066222 000100466 29 DeVito sehen ss (046G (00AG66001000G21G30301(020A46ã2401/011222đI 29 2/2096 0€ nGIIÊN G Na 66t 0k0 G200 2cbccooooo 6c 29

3.3 ;KẾt giả và Bội NẪTkscncng2oscjcceitttattet6A100áuã0xás4606000100s0636 29

3:4ct:Ð-GonRNendiiD: (2D) xu enn aie ON ee EOC Ee een ERENT a 066 30

32:2 6ncewin TE Coy «<0 pei toeetaaaaecdenanalinetitdaeset -34

Chương: KẾ NÊN: con con 06c ckSicc0 00020466 ipsa AS akan Daca 38

BD PRON Da ec G1200 ECGRGESGEQGSGGGUEAGiiEiildilGG2tSE4 it) 2g 38

4.2 Đề xuất hướng nghiên cứu tiếp theo s2 062222 22211211110212012ce6 38

TART TEU TRAN NÀO ae edeeiieiaaedeeeeeroreardeeaemeisee 39

PHỤ LỤC

Khóa luận tốt nghiệp Danh mục các ký hiệu, chữ viết tắt

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIET TAT

( 00059925005005101/001010090090013808/671520/0097005/00090900951359512005208099/13570 Single, mũi đơn

- 8m Doublet, mũi đôi

"mix Doublet of doublet, mũi đôi đôi ;mm ma aa aMA Doublet of doublet of doublet, mũi đôi đôi đôi

l2 S6 sxanrssdssnscesdiiloiisGGsszevsskeallkssollssllsivix0 Quartet, mũi bốn

TYR sca 0610/4672 1406/86106di10e08)))(001462//00Ga0590/600611071)/29306244x549 eli Multiplet, mũi da

1 Lepper RE et SE AAS DCE ỤP CON Peed 21922210) RNR REN RPI Hang số ghép spin

CON EN a a PRUs I oS CERCLA One APRESS ICC Correlation Spectroscopy

DĂH (Ri ROM ND n eee Bee ROSANA LY LOR NEO PNY LYCOS Rae IN Dihydrotestosterone DEP (6406000262 Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

hy bo \ít(014A941040i00ã0I04G(08940.ãA(01060(0((084cxtiwd Dai hoc su pham

HMNA000/2000101)(2022/425646010/0iL0002L642-ä Heteronuclear Multiple Bonds Correlation

Fans acca bs ict 0)07101 7127114 1520 sa 11) rìvƑ Heteronuclear Multiple Quantum Correlation

NEM cseue Liên minh Quốc tế Bao tôn Thiên nhiên va Tài nguyên Thiên nhiên

(Internationa! Union for Conservation of Nature and Natural Resources.

tử thập niên 90 được gọi là World Conservation Union)

NI kg x0000011áw4ianuøeeä Nuclear Magnetic Resonance, cộng hưởng tir hạt nhân

ND cua 006 (xaaa Viện Ung thư Quốc gia Hoa Kỷ (National Cancer Institute)

NT G:áeenngenGionotcoigi2116nài8300556066218-30.06100330666430 6301630161010 Nhà xuất bản

NI o6 an a eee Sắc ký cột

mm Sắc ký điều chế

SE Di kuaannnsnounavasnnnrgaasiinigi Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography)

eye VNHNANNAHOAAOIAAIOAIHIAIERNEINGINENAsbINN Hệ số trễ (Ratio of Flow)

UV An UPAeeRA 3X 802 hinh 44/50605989 546 4909 90.69995X6546956936960%443005asssssiỳ „Tử ngoại (Ultraviolet)

Khóa luận tốt nghiệp Danh mục các bảng và các sơ đỗ

DANH MỤC CÁC BANG VÀ CÁC SƠ ĐÒ

Bảng 1 Kết qua sắc ký cột trên cao etyÌ aC€tAL, 5 211121225525 xe 27

Bảng 2 Số liệu phổ 'H NMR (500 MHZ), °C NMR (125MHz) vả tương quan

HMBC,'H-'H COSY của B3TW trong CDC|: - 2¿ 33

Bảng 3 Số liệu phố 'H NMR (500 MHZ) °C NMR (125MHz) và tương quan

HMBC,'H-'H COSY của BSTW trong CDC| : 37

Sơ dé 1 Điều chế các cao của gỗ cây thông đỏ - 52 52 555ccccscccsvcvsee 26

Sơ đỗ 2 Sơ dé cô lập B3TW tử phân đoạn 4 cao ety] acetate của gỗ cây thông đỏ

(MỜI WOIIIONIONG1)0 7Ì) uy kg gu 61060110164eGG2091040)110610/02G02844 28

Sơ dé 3 Sơ đồ cô lập BSTW từ phân đoạn 5 cao ety! acetate của gỗ cây thông đó

(Fares VIDIISRIONOZUCO:)-.ccsxecceccceco ccocoeticeeceoreerrioissreotoscdasaseesssasedece 28

Khóa luận tốt nghiệp Danh mục các hình

DANH MỤC CÁC HINH

Hình 1.1Thân cây thông đỏ (Taxtus wailichiana ZUCC.) ‹ sSc<cc<c<<<sceee &

Hình 1.2 Mẫu Thông đỏ lá dai (Taxus wallichiana ZUCC.) 5555555555555 <64 9

Hinh 1.3 Chăm sóc Thông đỏ ở vườn quốc gia Bidoup . -‹5-55- 12

Hinh 14 Vườn ươm Thông 0 ian sa ane ess os es tasemroascnnseesananszp uo nnrcotsnveanansasoseast 12

HE |" -aằ-ằăeằ.=.—.-ằằ=.=—=.—=.- -.- =.x 15

Hinh 2.1 Tương quan HMBC trong vòng A của B3TW e- 31

Hình 2.2 Tương quan HMBC va ‘H-'H COSY trong vòng B của B3TW 32

Hình 2.3 Tương quan HMBC trong vòng C của B3TW -~ S- 32

Hình 2.4 Tương quan HMBC vả 'H-'H COSY trong vòng A của B5TW 35Hình 2.5 Tương quan HMBC và 'H-'H COSY trong vòng B và € của BSTW 36

LỜI MỞ ĐÀU

Khóa luận tốt nghiệp Mở dầu

Mở đầu

Ngày nay, căn bệnh ung thư đã không còn xa lạ đối với chang ta nữa Có thé

kế đến một số bệnh ung thư nguy hiểm như: ung thư phổi, ung thư vú, ung thư cô tử cung ung thư buồng trứng Cùng với sự phát triển vượt bậc của khoa học kỹ thuật.

nhiều loại thuốc diéu trị ung thư đã được nghiên cửu và phát triển Một số hợp chất

có tác dụng chữa bệnh có nguồn gốc thiên nhiên đã được phát hiện, một trong số đó

là Paclitaxel (Có tên thương mại là taxol, Taxol” được đăng ký thương hiệu bởicông ty của Mỹ là Bristol-Myers Squibb) Taxol có hoạt tính chong ung thư đáng chú ý và hiện nay là một loại thuốc chống ung thư quan trọng có hiệu quả cao trong

điều trị ung thư vú, ung thư buông trứng và một số bệnh ung thư khác [22]

Ở Việt Nam tôn tại 2 loài Thông đỏ là Thông đỏ lá ngắn Taxus chinensis (Pilg.) Rebd ở miền Bắc va Thông đỏ lá dai Taxus wallichiana Zucc ở Lâm Đồng [5] Các nghiên cứu ban đầu cho thấy loài Thông đỏ mọc ở Lâm Đông có giá

trị cao hơn nhiều loải Thông đỏ lá ngắn khi xem xét về hàm lượng các hợp chất

chính trong lá (10-Deacety! baccatin III-tiền chất cho bản tổng hợp taxol).

Thấy được tầm quan trọng của những chất có trong cây Thông đỏ Taxus

wallichiana Zucc., chúng tôi tiến hành dé tải “ Khảo sát thành phần hóa học của gỗ

cây Thông đó Taxus wallichiana Zucc thuộc họ Thanh tùng (Taxaceae) phân đoạn

4 và phân đoạn 5” với mong muốn chiếc xuất ra được những chất có hoạt tính ức

chế tế bao ung thư dé giúp cho đời sống con người ngày càng hoàn thiện hon Dé tài

được thực hiện với các mục tiêu chính:

- Khảo sát các phương pháp chiết xuất.

- Khảo sát và lựa chọn dung môi chiết hiệu quả trong chiết xuất.

- Sắc ký cột với các hệ dung ly thích hợp va dùng sắc ky bản mỏng gom tách

các phân đoạn nhỏ các phân đoạn tách chat.

Chương Ï: TÔNG QUAN TÀI LIỆU

Khóa luận tốt nghiệp Tổng quan tài liệu

Chương 1: Tổng quan

1.1 Cây Thông đỏ lá dài (Gọi tắt là Thông đỏ)

1.1.1 Phân loại [ I | (2) [3] [12] [14] [30]

Tên khoa học: Taxus wallichiana Zuce (Tên đồng nghĩa: Taxus yunnanensis

W.C.Cheng & L.K.Fu).

Tên nước ngoài: Himalayan yew (Anh), Xu mi hong dou shan (Trung Quốc).

Lén Việt Nam khác: Thông đỏ Hymalaya, Sam hạt do lá dài Van Nam Hông

đậu sam.

Thông đỏ lá dài (Taxus wallichiana Zucc.) thuộc họ Thanh Tùng (7axaceae).

Vị trí cây Thông đó trong hệ thống phân loại thực vật:

~ Gidi (Kingdom): Plantae.

+ Austrotaxus(Thanh tùng New Caledonia).

+ Pseudotaxus (Thông tring, Bach đậu sam)

+ Taxus (Thanh tang, Thông đỏ Hồng đậu sam).

* Cephalotaxaceae:

+ Amentotaxus (Dé tùng, Sam bông).

+ Cephalotaxus (Dinh tùng, Phi ba mũi).

+ Torreya (Phi).

~ Loai (Species):

* Chi Austrotaxus: Austrotaxus spicata.

* Chi Pseudotaxus: Pseudotaxus chienii.

* Chi Taxus: Taxus baccata L (Thông đó châu Âu) Taxus brevifolia Nutt.

(Thong đỏ Thái Binh Duong), Taxus canadensis (Thông đó Canada) Taxus

celebrica Taxus chinensis (Thông đó Trung Quốc) Taxus cuspidata Zuce (Thong

= 7 =

Khóa luận tốt nghiệp Téng quan tài liệu

đỏ Nhat) Taxus floridana (Thông đó Florida), Taxus globosa (Thông đó Mexico),

Taxus hunnewelli, Taxus jortunet, Taxus sumatrana (Thông đỏ Sumatra), Taxus

wallichiana Zucc (Thông đỏ Himalaya)

* Chi Amentotaxus’ Amentotaxus argotaenia, Amentotaxus assamica

Amentotaxus formosana, Amentotaxus poilanei, Amentoiaxus yunnanensis.

* Chi Cephalotaxus Cephalotaxus fortunei, Cephalotaxus griffithii,

Cephalotaxus hainanensis, Cephalotaxus harringtoma Cephalotaxus koreana, Cephalotaxus lanceolata, Cephalotaxus latifolia, Cephalotaxus mannii, Cephalotaxus oliveri, Cephalotaxus sinensis, Cephalotaxus wilsoniana

* Chi Torreya’ Torreya californica, Torreya fargesii, Torreya grandis,

Torreya jackii, Torreya nucifera, Torreya taxifolia

1.1.2 Loài Thông đỏ [1], [2] [4], [16], [32]

1.1.2.1 Mô ta thực vật Thông đỏ là một loại cây thân gỗ, thường xanh, kích thước trung bình hoặc

nhỏ, chậm lớn (cây sinh trưởng cả trăm năm chỉ có đường kính không quá 3Š em)

Chiêu cao: 20-30 m; đường kính ngang ngực: 1-1,5 m

Cây mọc đứng.

Khóa luận tốt nghiệp Tẳng quan tài liệu

Hình 1.2 Mẫu Thông đỏ lá dai (Taxus wallichiana 7ucc )

Cảnh: xóe rong, cảnh non mau lục, chuyển sang nâu sau 3 hoặc 4 năm, mọc

phân tán tuy theo điều kiện môi trường

Vỏ cây: phia ngoài mau nâu đỏ nhạt, hơi dày, bóc tách thành từng mang hay

từng tâm nhỏ, thịt mau nâu đỏ

Lá thường có mau xanh, dải 1,5-2,7 cm và rộng 2 mm, sắp xếp theo hình

xoắn ốc, thường vặn xoắn tại gốc lá dé xuất hiện theo kiểu 2 hàng Các lá có dạng thẳng hay hình mũi mắc, mọc cách, thuôn thành đỉnh nhọn, gốc lả mọc xuống, mép

lá phăng, mặt trên xanh vang, mặt đưới xanh nhạt với các dai lỗ khí xanh nhạt hơn ở

hai bên gân giữa Lá của các chôi chỉnh có thé mọc đựng lên hon là xếp day

Nón: phân tính khác gốc Nón cái đơn độc, có một hạt và được bao quanh

nhưng không bao kín băng lớp áo hat mau đỏ, chin trong | năm Non đực tạo thành

hàng ở nach lá nhỏ hình trứng dai 6 mm vả rộng 3 mm nhưng không có cuỗng

hoặc cuông rat nhỏ

Hạt hình trừng, dải 7 mm và rộng Š mm, mau đen khi chin,

1.1.2.2 Phân bố

Thông đỏ phân bố hẹp, ở các dãy phía đông Hymalaya đến tây nam Trung

Quốc (Yunnan, Sichuan, Likiang, Weihai và phía tay Huber) Ngoài ra, loa: này còn

mọc ở vùng đông bắc An Độ, ven biên giới Myanmar va Tibet, Nepal, Bhutan, Dai

<a

Khóa luận tốt nghiệp Tông quan tài liệu

cây cô thụ (Có cây ca ngan năm tuôi, đường kính thân từ 1.5-2 m) trên những sườn

núi, bên khe sudi ở độ cao 1.500 m; còn lớp cây kế cận rất thưa ving yếu ớt.

Ở Việt Nam, có hai loai Thông đỏ là Thông đỏ Trung Quốc Taxus chinensis

(Pilger) Rehder thường gọi là “Théng đỏ lá ngăn" va Thông đỏ Hymalaya Taxus

wallichiana Zucc., thường gọi la “Thong do lá dai”.

Thông đó lá ngắn: phân bổ ở Trung Quốc, An Độ, Malaysia va Việt Nam ỞViệt Nam, cây phân bé rải rác ở ving núi thuộc các tính Lao Cai (Hoàng Liên Son),

Hà Tây (Ba Vi), Nghệ An (Quỷ Châu) Hòa Bình (Mai Châu) độ cao 900-1.600 m.

Thông đỏ lá dài: đến tháng 7/2006 t6 chức IUCN đã tìm thấy loài Thông đỏ

li dai tại Afghanistan, Bhutan, tây nam Trung Quốc (Sichuan, Xizang, Yunnan), An

Độ (Arunachal Pradesh, Assam Himachal Pradesh, Jammu-Kashmir, Manipur,

Sikkim, Uttar Pradesh), phía bắc Myanmar Nepal (Vùng núi Hymalaya) Pakistan, Indonesia Philippin Việt Nam Ở Việt Nam loài này được tìm thay ở một sô vùng núi cao thuộc các tinh Lao Cai (Hoàng Liên Sơn), Khánh Hòa Lâm Đông (Da Lạt,

Đơn Dương Đức Trọng Lạc Dương ) Hà Giang (Thái An - Quản Ba) độ cao

phân bô khoảng 1.400- 1.600 m hoặc hơn.

Sự phân bổ của Thông đỏ khá đa dang trong khu vực Lâm Đồng, nhưng số

lượng cá thể ở mỗi nơi lại ít Số lượng cá thể nhiều nhất tại khu vực Núi Voi (100

cây), tại đây cây không bị che phủ và phát triển tương đối tốt Ở những nơi bị che phủ như Lán Tranh thì số lượng cá thể ít (1 cây) Có nơi cây lại giả cỗi chăng hạn như khu vực Cổng Trời số lượng cá thé là 20 cây nhưng lại gia cỗi, gần như không

phát triển nữa.

1.1.2.3 Sinh thái

Pham vi độ cao: 2.000-3.500 m so với mặt biên

Dạng rừng: rừng nhiệt đới thường xanh, trên dat phong hóa từ granit.

Cây càng lớn đòi hỏi ánh sáng cảng cao Trong ting ưu thé sinh thai, nơi nào

có khoảng trồng, lượng ánh sáng nhiều thi cây phát triển mạnh và ngược lại thi tán

cây phát triển lệch nơi có ánh sáng cao.

Khí hậu: nhiệt đới gió mùa nhiệt độ trung bình năm 20-25 “C Thông do

phan bê ở vùng khi hậu nhiệt đới núi thắp và trung bình có hai mùa rõ rệt trong

Khóa luận tốt nghiệp Tổng quan tài liệu

nam mùa mưa kéo dai tử thang 4 đến tháng 10, lượng mưa trung bình 1.600-1.800

mm (Tai liệu của Dai khí tượng - thủy văn Lâm Đồng 1980).

Thẻ nhường: thích hợp với đất có thành phan cơ giới nhẹ, thoát nước, phát triển trên đất nâu vàng phiến thạch hay đất nâu đỏ trên đắt bazan.

Tham thực vật: ở Lâm Đồng Thông đỏ thường phân bó rải rác hỗn giao với các loai cây lá rộng thường xanh và cây lá kim với kiểu rừng chính là hỗn giao cây

lá rộng - cây lá kim Trong kiểu thảm nay chúng phân bé ở tang ưu thé sinh thái hợp

với các loài đỉnh tùng (Cephalotaxus mannii), kim giao nam (Nageia wallichiana),

thông tre lá đài (Podocarpus neriifolius), thông nàng (Daerycarpus imbricatus), du

sam (Keteleeria evelyniana) và một số loài thuộc Fagaceae, Ericaceae,

Euphorbiaceae

Hat phát tán không xa (Với bán kính 6-8 m so với tâm cây); nảy mam và phát triển nơi có độ 4m cao cường độ ánh sáng trung bình Tỷ lệ nay mam trong tự

nhiên rất thắp so với sô lượng hạt cây mang hàng năm.

Tái sinh tự nhiên: ít gặp cây mắm và cây non chịu bóng tốt

Nhin chung chúng được coi là cây khỏa tử chịu bóng hoặc ưa sáng thường

mọc dưới tan một số cây gỗ thuộc các họ Long não (Lauraceae), Mộc lan

(Magnoliaceae), Hồi (Illiaceae)

Thông đỏ thường ra lá non vào mùa Xuân- Hè, nón đực xuất hiện sớm hơn

nón cái từ cuối mùa đông nhưng đến mùa xuân năm sau cả nón đực và nón cái mới

nở Thông đỏ sinh trưởng cham, tái sinh tự nhiên từ hạt khó.Tuy vậy, nếu trên đỉnh núi có vai cây to, vẫn có thể thấy những cây con mọc từ hat Vai năm gần đây, một

số cơ sở nghiên cứu ở Hà Nội và Đà Lạt đã thí nghiệm thành công việc nhân giống

thông đỏ bang cành

1.1.2.4 Trồng trọt và thu hoạch

Ra hoa vào thang 8-12 va đến tháng 6-7 năm sau thì kết trái Mùa quả chinvào tháng 10-12, Điểm đặc biệt ở đây là mùa quả chin cùng chỉnh là mùa ra hoa

Khóa luận tốt nghiệp Tẳng quan tài liệu

1.2 Bao tồn [11]

Bảo tồn tại chỗ: vườn Quốc gia Bidoup-Núi Ba, Lâm Đồng, nơi có quản thé

Thông đỏ còn sống sót, được thành lập đầu năm 2005 theo quyết định của Thủ

tướng nhằm bảo vệ khu rừng cổ, đa dang về sinh học và còn nguyên vẹn nhất ở Việt

Nam này.

Hình 1.3 Chăm sóc Thông đỏ

ở vườn quốc gia Bidoup

Bảo tồn chuyến vị: không thé chỉ trông chờ vào Thông đỏ tự nhiên mà phải

khẩn trương gây trồng, nhân giống quy mô lớn Hơn 10 năm qua, Phân viện Sinh

học Đà Lạt và một số cơ quan khác đã day công nghiên cứu và đã hoàn chỉnh quy

trình nhân giống Thông đỏ bằng nhiều biện pháp như chiết cành, giâm hom, nuôi

cấy mô tạo nên thế hệ kế cận cho loài cây cực kỳ quí hiếm này

-

12-Khóa luận tốt nghiệp Tổng quan tài liệu

Vỏ cây, lá va hạt thông đỏ có tác dụng độc như: nôn ,tiêu chảy, mê sang, có

tác dụng ức chế tim làm giảm lực co tim, giảm nhịp tim và phong bế nhĩ thất do tácdụng ức chế kênh natri và canxi

Là loài cây có độc gồm I1 alkaloid gọi chung lả taxin, nhiều trường hợp gây

ngộ độc cho gia súc khi ăn phải lá của cây thông này.

1.3.2 Tác dụng dược lý theo kinh nghiệm dan gian

Thông đỏ là nguồn được liệu rất quý trong y học.Từ lâu, trong y học cổ truyền Án Độ, cao lá khô va cao vỏ thông đỏ được dùng trị hen, viêm phé quan,

nic, tiêu hóa ; cảnh và vỏ ding trị bệnh thực tích, giun đũa; nước sắc của thân non

dùng trị bệnh đau đầu

Trong y học dân gian Trung Quốc, thông đỏ được coi là có tác dụng tiêu ích,

thông tim mạch, giảm đau, cành và lá được dùng dé trị thực tích, bệnh giun đũa.Nước sắc của thân non được dùng trị đau đầu, nhiều mật

Ở Thế Nhĩ Kỷ, nhân dân dùng đẻ trị bệnh tim.

Đặc biệt gỗ cây thông đỏ được dùng để trị bệnh tiêu đường.

1.4 Taxol (15), (24), [25]

1.4.1 Lược sử tim ra taxol

Vào đầu những năm 1960, NCI đã phát triển một chương trình nghiên cứu

dịch chiết từ các nguồn khác nhau trong tự nhiên Năm 1962, một trong những dịch chiết đã được phát hiện có hoạt tính chống ung thư rõ rệt, có khả năng cô lập những

khối u Tuy nhiên, công trình này đã không được phát triển cho tới khi 2 nhà nghiên

cứu Wall và Wani của Viện nghiên cứu Triangle, Bắc Carolina, tách ra được mộthợp chất có hoạt tính chống ung thu từ cây Thông đỏ Thái Binh Duong Taxus

brevifolia, Năm 1971, Wall và Wani đã công bế cấu trúc của hợp chất này, gọi là

paclitaxel.

-13-Khóa luận tốt nghiệp Tầng quan tài liệu

KH HP In tr 9 CC! BEERERRERGOGSGENEGRRGGGGRRRRGREEEESEEGSSEE===e

1.4.2 Danh pháp quốc te

5-2epoxy-1a.2a.4B.7B 10B I 3a-hexahydroxytax- | l-en-9-one-4, |

0-diacetate 2-benzoate- | 3-ester với (2R.3S)-N-benzoyl-3-phenylisoserin.

1.4.3 Cấu trúc

Phân tử taxol được chia làm 2 phân: mạch bên va khung

- Mạch bên: có vai trò then chốt trong việc duy trì hoạt tính Hoạt tinh của

cau trúc nay đã được nghiên cứu bởi hai nhà khoa học là Potier va Swindell:

*Sự che mat đi nhóm C;' hydroxy! sẽ làm mat hoạt tính trong hệ thống

microtublin.

*Nhóm C;' amid-acyl đóng vai trò then chốt ngoài ra nó còn có thé là mộtchat thom hay một alkyl ngoài tự nhiên

*Cy' nỗi nitrogen có thé được thay thé bởi một nguyên tử oxygen mà không

làm mat hoạt tinh

*Sự hiện điện của nhóm C;' aryl 1a rất cần thiết sự thay thé nhóm nảy bởinhóm methyl! sẽ lam giảm hoạt tinh 19 lân

~Khung taxol gồm: một vòng 4 một vòng 6, một vòng 8 và những vòng

ngoại vi Sự thay đôi vong taxol va sự lam sáng tỏ hoạt tinh của cau trúc dẫn tới

những đặc điểm sau của taxol:

*Vong oxetan giữ vai trò chính trong hoạt tính của taxol, sự mở vòng nay

sẽ lam giảm hoạt tinh sinh học nhanh chóng.

*Su co lại của vong 8 thành vòng 7 tao ra những phân tử có đặc tính khử trùng hợp tubulin.

*Su di chuyén của nhóm C j9-acetyl không làm ảnh hưởng tới hoạt tính

*Sự đi chuyến của nhóm C;-O-benzoyl dan tới sự làm giám hoạt tính một

cách mạnh mẽ.

=1

Hình 1.5 Cấu trúc taxol

1.4.4 Cơ chế tác dụng chống ung thư

Một tế bào bình thường phân chia vào kỳ nguyên phân, nhiễm sắc thể tự

nhân đôi tách nhau ở tâm động và di chuyển về hai cực của tế bảo, kết quả hình

thành 2 tế bào giống nhau Nhưng đối với một tế bào ung thư, hay tập hợp những tế

bảo ung thư (Khối u) thì trong quá trình nguyên phân sự phân chia là không kiểm

soát được Một cấu trúc quan trọng trong quá trình phân bao là hệ thống vi ống, hệ

thống vi ống tạo nên bộ khung trong sự phân chia tế bào, và giúp cho sự di chuyến

của các nhiễm sắc thé,

Taxol là một hợp chất có khả năng ngăn chặn sự mắt kiểm soát trong quá trình

phân chia của những tế bào ung thu, chúng tạo ra những vi ống cực kì vững chắc và

vô chức năng Quá trình nguyên phân bị tạm ngừng lại khi những vi ống vững chắc

và vô chức năng mắt khả năng dé tạo thành một hệ thống nguyên phân bình thường.

Taxol giúp nối kết chuỗi vi ống lại với nhau, giúp cho sự tổ chức lại bộ xương tế

bao, những tế bào bị kìm hãm trong sự nhân đôi và trong thời kì nguyên phân.

1.5 Ứng dụng của hợp chất có khung lignan [18], [39]

Lignan là hợp chất polyphenol-chất chống oxi hóa, được tìm thấy ở các loài

thực vật Lignan được dùng để điều trị bệnh tim, khô âm đạo và loãng xương.

Lignan cũng có lợi cho việc duy trì một ty lệ lớn của testosterone Do đó, theo tiến

sĩ Maoshing Ni các hợp chất có khung lignan được gọi là DHT

(dihydrotestosterone).

+ Phòng chống ung thư:

Theo Viện Linus Pauling tại trường đại học Oregon State, các hợp chất

lignan đang được nghiên cứu và sử dụng như điều trị trong phòng chống ung thư.

-Öf!5-Khóa luận tốt nghiệp Tổng quan tài liệu

Những bénh ung thư liên quan dén hormone, bao om ung thu vi, ung thư nội mạc

tử cung và buông trứng va ung thư tuyến tiên liệt

+ Phòng chống dịch bệnh:

Viện Linus Pauling cũng bảo cáo việc sử dụng các hợp chat lignan dé ngăn

ngừa bệnh tim mạch Nghiên cứu đang được tiễn hành cho việc sử dụng các hợp

chất lignan như là một điều trị cho bệnh loãng xương

1.6 Thành phan hóa học

1.6.1 Thành phan hóa học có trong lá

Trong lâ một số thông đỏ chứa các dan xuất của taxan diterpen

Năm 1995, Sunil K.Chattopadhyay va cộng sự đã cô lập được hợp chất

taxacustin (1) [34]

Taxacustin (1)

now

Năm 1997, Lucciano Barboni và cộng sự đã tìm thay được hợp chất taxan

epoxid là Š-deacetyl- !-hydroxybaccatin I (2) [23]

Š-Deacetyl-1-hydroxybaccatin | (2)

Cũng trong năm 1998, Nguyễn Hữu Toản Phan và cộng sự đã công bố tách

được hai hợp chất là 10-deacetylbaccatin II (3) và 19-hydroxybaccatin III (4) [6]

-Khóa luận tốt nghiệp Tổng quan tài liệu

Năm 1999, Sunil K Chattopadhyay và cộng sự tiếp tục công bê hợp chất là

7,10.13-tricetyl- LOdebenzoylbrevifoliol (5) [36]

7.10.13-Tricetyl-] Odebenzoylbrevifoliol (5)

HỒ

Năm 1999, Shashi Bala vả cộng sự đã cô lập được bảy hợp chất đó là taxol

(6) baccatin IV (7) 18-hydroxybaccatin I (8) 2-acetoxybrevifoliol (9), brevifoliol

-17-Khóa luận tốt nghiệp Tổng quan tài liệu

(14) và 2a-acetoxy-2'/-deacetylaustrospicatine (15) có hoạt tính ức chế tế bào ung

thư phôi người [19]

Khóa luận tôt nghiệp Tông quan tài liệu

Năm 2006, Sunil K.Chattopadhyay lại tiếp tục công bỗ hợp chất

1-hydroxy-2-I-Hydroxy-2-deacetoxy-Š-decinnamoyltaxinine J (16)

Nam 2007, từ lá thông đỏ Taxus Wallichina Zucc thu hái tai Lâm Đồng, Nguyễn

Thị Thanh Tâm đã cô lập được các hợp chất sau đây: taxinine B (17) taxuspine F

(18) 10-deacetyltaxuspine F (19), 19-Hydroxybacctin III (4), 10-Deacetylbaccatin II

Khóa luận tốt nghiệp Tổng quan tài liệu

Năm 1995 Sunil K Chattopadhyay vả cộng sự đã cô lập được 3 hợp chất là

2-deacetoxy-5-decinnamoyltaxinine J(11), 2-deacetoxytaxinine J (12) vả

2-acetoxy-brevifoliol (9) Ba hợp chất nay cũng được tách ra từ lá năm 1999.

Cùng thời điểm năm 1995 Jun Zeng Zhang va cộng sự công bố them một số

-20-Khóa luận tôt nghiệp Tổng quan tài liệu

Năm 2006, Man Li Zhang và cộng sự đã cô lập được hợp chất 2a, Sa

13a-trihydroxy-7[}, 10ƒ-diacctoxy-2(3—+20) abeotaxa-4(20), 1 I-dien-9-one (28) [26]

-Khóa luận tôt nghiệp Tông quan tài liệu

Năm 2002, Arjun H Banskota, Nguyễn Trung Nhân va các cộng sự đã công bổ

3 hợp chất hongdoushan A (33), hongdoushan B (34) hongdoushan C (35) [13]

Hongdoushan A (33)

Hongdoushan B (34)

ous

-22-Khóa luận tôt nghiệp Tông quan tài liệu

Hongdoushan C (35)

g Ci + ,

; Sec

Năm 2003, Sunil K Chattopadhyay và các cộng sự đã cô lập được 3 hợp chat

là taxtresinol (36) isotaxiresinol (37), secoisolariciresinol (38) [37]

Khóa luận tôt nghiệp Tầng quan tài liệu

Chương 2: THUC NGHIEM

Khóa luận tôt nghiệp Thực nghiệm

Chương 2: “Thực nghiệm

2.1 Hóa chất

+ Dung môi sử dụng:

- Metanol chưng cất thu ở nhiệt độ 64°C,

- Eter dầu hóa chưng cắt ở phân đoạn đoạn 60-90°C,

- Cloroform chung cat thu ở nhiệt độ 61-62°C

- Etyl acetat chưng cat thu ở nhiệt độ 78°C

- Aceton chưng cất thu ở nhiệt độ 56°C

+ Thuốc thứ: dé hiện hình các vết hữu cơ bang sắc ký lớp mỏng phun xịt bằng

dung địch axit sunfuric 20% đun nóng.

2.2 Thiết bị

+ Các thiết bị dùng để ly trích (lọ thủy tỉnh, becher)

* Máy cô quay chân không.

+ Sắc ký cột:

- Silica gel pha thường (Merck, Kielesgel 60).

+ Sắc ky ban mỏng:

- Silicagel pha thường (Merck, Kielesgel 60).

+ Đèn UV: máy CAMAG CH- 4132 MUTTENZ SWITZERLAND hai bước sóng 254nm va 365nm.

+ Các thiết bị ghi phổ:

- Phố 'H-NMR, "C-NMR, phế DEPT- NMR 135 và 90: ghi trên máy cộnghướng từ hạt nhân Bruker ở tan số 500 MHz cho phỏ 'H-NMR và 125 MHz chophô 'ÌC-NMR

2.3 Phương pháp thực nghiệm

- Ly trích cao thé ban đâu bang cách trích nóng với metanol

- Trích cao ety! acetat.

- Sắc ky cột với các hệ dung ly thích hợp va dùng sắc ký ban mỏng gom tách

các phân đoạn nhỏ các phân đoạn tách chat.

- Thuốc thử hiện vết: phun xịt băng axit sunfuric 20% nóng

-2S-Khóa luận tôt nghiệp Thực nghiệm

2.4 Thu hái và xử lý mẫu

Gỗ cây thông đỏ được lấy tại Hồ Tiên huyện Don Dương tinh Lâm Đông vào

ngay 08 thang 03 năm 2008 Mau cây được phơi khô xay nhỏ rồi trích nóng với

metanol, lọc cô quay thu hôi dung môi thu được cao metanol thé, Cao metanol được

đem trích với dung môi ety! acetat thu được cao etyl acetat Sơ đồ diéu chế cao được

trình bay trong sơ đồ 1.(*)

Sơ đồ 1 Điều chế các cao của gỗ cây thông đỏ

-Trich nóng với metanol

-Lọc và thu hỏi dung môi

-Trich với acetat cty

-C6 quay thu hôi dung môi

Thực hiện sắc ký cột trên silica gel cao acetat ety! (100g) với hệ dung ly

CHC];-MeOH cỏ độ phân cực tăng dan, thu được 10 phân đoạn Quá trình sắc ky cột được theo đôi bằng sắc ký bản mỏng.Các phân đoạn cỏ Ry giống nhau trên bản mỏng

được gom lại Kết quả được trình bảy trong bang |

= Bh