Thực hiện rửa tủa phân đoạn 4 (F4), sắc ký cột và sắc ký điều chế phân đoạn 5 (F5) trên silica gel với nhiều hệ dung ly khác nhau, tôi đã phân lập được 2 hợp chất Dựa
vào các kết quả phô nghiệm, tôi định danh được các hợp chất nay là œ-conidendrin
(29) và baccatin III (30).
i a-Conidendrin (29)
Baccatin HI (30)
-29-
Khóa luận tôt nghiệp Nghiên cứu
3.3.1 a-Conidendrin (29) { I8|
a-Conidendrin (B3TW) thu được ở dang kết tủa trắng. kết tỉnh ở dạng tỉnh thé hinh kim. Sắc ký bản mỏng với hệ dung ly CHCl;-MeOH (97:3) và hiện hình H;SO,
đậm đặc cho vết tròn màu cam.
Phé 'H-NMR (Phụ lục 1) cho thấy: IH (5, 6.80 ppm, đ, J=8.0 Hz); 1H (Sy
6.64 ppm, dd. J=7.5 và 0.5 Hz): LH (84 6.68 ppm, 3s): LH(6y 6.58 ppm, s), 6.30 TH(Sy
6.30 ppm, s) đặc trưng cho § proton hương phương. Trong đó 2 proton tai 5, 6.68
ppm va 5, 6.30 ppm ở vị tri para với nhau. Proton ở 5), 6.64 ppm ghép cặp với proton
ở ổ„ 6.80 ppm va proton ở 5 6.58 ppm với hing sé ghép lin lượt là 7.5 Hz và 0.5 Hz, chứng tỏ proton nay ở vị tri orto và meta đổi với 2 proton tương ứng kia. H; (5y
3.87 ppm, s); H:(ỗ„ 3.80ppm. s) đặc trưng cho 6 proton metyl của 2 nhóm metoxy
gan trực tiếp với oxy.
Phé !*C NMR kết hợp phổ DEPT 90 va DEPT 135 ( phụ lục 2 và 3). Ta thấy
có 12 carbon hương phương va 6 carbon chỉ phương chứng tỏ có 2 đơn vị CyH,. Với
các dữ liệu trên chúng tôi nhận thấy hợp chất B3TW có khung cơ bản là lignan.Có 7
carbon hương phương tir cấp cộng hưởng tại ồc(ppm): 145.4; 148.0; 144.7: 146.5;
131.8; 134.3, 126.2. Có 5 carbon hương phương mang proton cộng hưởng tai
ðc(ppm): 111.3; 112.1; 116.0; 115.3; 121.5. Và 3 carbon metin tại ðc(ppm): 42.2;
47.7: 50.0. Thờm 2 carbon metylen tại ử¿(ppm): 29.3: 72.5. Va 2 carbon metyl tri
hoán tại 5¢(ppm): 56.11: 56.05. Va 1 carbon carbonyl ồc(ppm): 178.4. Từ kết quả phô nghiệm trên cho thấy hợp chắt này có công thức phân tử C;ol1;yO, với độ bắt bão hòa
II.
Phé HSQC. HMBC (Phy lục 5.6) cho thay: Tại vòng A. pho 'H-NMR của H-
6(ð, 6.68 ppm) và H-3(ð¡ 6,30 ppm) ở vị trí para với nhau. Bén cạnh do, tương quan
-_30 -
Khóa luận tốt nghiệp Nghiên cứu
HSQC va HMBC của 2 proton nay cho biết vòng A chứa các giá trị ỗc(ppm): 112.1
(C-6), 144 7, 146.5, 1160(C-3), 126.2; 131.8. Proton metyl của nhóm metoxy (dy
3.87 ppm) cho tương quan HMBC với carbon ỗc: 146.5 ppm, proton của nhóm -OH
cho tương quan với các carbon dc (ppm): I 16 0(C-3), 144 7 va 146.5. Diéu nay khang định 144 7 và 146.5 lần lượt là của C-4 vả C-5 H-6 tương quan HMBC với carbon 8 29 3 ppm, H-3 tương quan với carbon &¢ 50 0 ppm, nên 2 giá trị nảy lần lượt là của C-
7 và C-7' Các tương quan HMBC còn lại của vòng A được biểu diễn trên hình 2.1
* Tương quan HMBC
Hình 2.1 Tương quan HMBC trong vong A của BTW
Tai vòng B, proton ở 5, 6.64 ghép cặp với proton ở 5y 6.80, J= 8.0 Hz, chứng
tỏ 2 proton nảy ở vị tri orto. Khi so phd COSY (phụ lục 4) thi 2 proton nay cũng
tương quan với nhau, do đó các giá trị 6 80; 6.64 lần lượt ở các vị tri C-S’va C-6'.
Proton H 546.58 tương quan HMBC với C dc (ppm): 500. 121.5, 134.3, 145.4, 148.0 do đó proton nảy ở vị trí C-2’. Proton metyl của nhóm metoxy (3.80 ppm) cho tương
quan HMBC với carbon ỗc 148.0 ppm. Diéu này khẳng định C(dc 148.0 ppm) la của
C-3' Cac proton 5, 6 64, 6,82 và 6.58 cùng tương quan HMBC với C dc 145.0 va 134.3 ppm. Ma C & 134 3 tương quan HMBC với proton 543.87. Do đó C &¢ 145.0
và 134.3 pmm lan lượt la C-4` va C-1°. Các tương quan HMBC va COSY của vòng B
được biểu điển ở hình 2 2
-35 -
Khóa luận tốt nghiệp Nghiên cứu
* Tương quan HMBC
mm Tương quan COSY
Hình 2.2 Tương quan HMBC và COSY trong vòng B của B3TW
H-7°(Sy 3.87 ppm) và H-7(õ 3.10 ppm) cùng có tương quan với các giá trị 5c
(ppm): 126.2 (C-1), 131.8 (C-2), 47.7, 42.2, do đó C-1, C-2, C-7, C-?', C-§ (47.7 ppm), C-§' (42.3 ppm) tạo nên một vòng 6. (hình 1, hình 3). H-7' cũng tương quan
với giỏ trị dc (ppm): 72.3 nờn giỏ trị này là của C-9°. H-7(ử„ 2.90 ppm) cú tương quan
HMBC với C(ô, 178.4 ppm) giá trị (&¢ 178.4ppm): 178.4 là của C-9. Vòng C tên tại
cầu nối oxi cho bởi tương quan HMBC giữa H-9'(Š; 4.20 ppm) với carbon C-9
(8¢178.4 ppm). Các tương quan HMBC còn lại được biểu dién trên hình 2.3.
Y Tương quan HMBC
Hình 2.3 Tương quan HMBC va COSY trong vòng C của B3TW
a. ye
Khóa luận tôt nghiệp Nghiên cứu
Bang 2. Số liệu phố 'H NMR (500 MHZ), "C NMR (125MHz) và tương quan HMBC, 'H-`H COSY của B3TW trong CDCI3 (trị số trong ngoặc là J tính bằng Hz)
Vị Trí & COSY __ HMBC (H+€)
L _—| (H.m | J |
l | 126.2 (s) 2 | aC< 131.8 (s)
3 =CH- 630(s) | 116.04) lá2 |374
|4 C< | 144.7 (s)
5 =C< 146.5 (s)
6 CH- 6.68 (s) 112.14) 1.5 2.4.7
7a '.CH;- 2.92(đ#(a) |293() | H-7b; H-8 1 9, 8”
Tb 3.10 (m) (b) H-7a: H-8 1.8 2.6, 8°
| 8 >CH- 2.50(m) 47.7 (d) | H-7a: H-7b 98 (9
9 | >C=O 178.4 (s)
| 1 =C< 134.3 (s)
# “CH- 6.58(s) 111.3(đ) I,3` |4,6,7
Ey =C< 148.0 (s) 4" aC< 145.4 (s)
5° =CH- 6.80 (d) (8.0) | 115.3 (d) | H-6' 4° as
6` “CH- 6.64(dd) 121.5 (2) | H-$' 5° 21.497
(7.5, 0.5)
vải -CH< 3.87 (d) 50.0(d) | H-8" I',2,8' | 1,8,2°,6', 9°
8" -CH< 2.51 (m) 42.2(d) |H-9a:H-9b:H7
-9*a -‹CH- 404(m)(a) |?723() H-9'b:H-&' 8
Ob 4.20 (m) (b) H-9'a:H-R' 8° 8,9
'§-OCH; |-CH; 3.87(s) — |5611(4) K
| 3°-OCH, | -CH, 3.80) 56.05 (q) 3
iz ___ | : -
.13.
Khóa luận tôt nghiệp Nghiên cứu
3.3.2 Baccatin HI (30) [28|
HC ÕBz
Baccatin Il] (BSTW) thu được ở dang dau không mau, sắc ký bản mỏng với hệ dung ly CHCI;-MeOH (92:8) và hiện hình H;SO, đậm đặc cho vết tron mau đen.
Phỏ 'H NMR (phụ lục 7) cho các mũi cộng hưởng với sự hiện diện của bốn nhỏm metyl tử cap [54 1.10 (3H. s. 16-Me). 1.10 (3H. s. 17-Me). 2.05 (3H. s. 18-Me)
và 1.67 (3H. s. 19-Me)] đặc trưng cho khung taxan điterpen. Hai nhóm -OAc [ô„ 2.22 (3H. s. 4-OAc) và 2.28 (3H. s, 10-OAc)]. năm proton oxymetin [5, 5.60 (1H, d, H-2), 4.98 (1H. d, H-5). 4.46 (1H. dd, H-7). 6.30 (1H. s. H-10) và 4.88 (1H. #, H-13)]. hai
nhóm metylen [ð„ 1.86, 2.55 (H-6a và H-6b) và 2.28 (2H, H-l4)]. một proton metin [Sy 3.88 (1H, d, H-3)], một nhóm metylen gắn carbon có mang oxygen [6 4.16 (1H, d, 1=8 Hz, H-20a) và 4.30 (1H. đ. J=8 Hz, H-20b)], và một nhóm của metyl [ỗ;; 1.67
(s)]
Phé ''C NMR kết hợp phd DEPT 90 va DEPT 135 ( phụ lục 8 và 9) cho các
mũi cộng hưởng img với sự hiện diện của 31 carbon bao gồm một carbon carbonyl
[ôc 204.1 (s, C-9)], ba carbon carbonyl ester [5¢ 170.65 (s, 10-OAc), 171.3 (s, 4-OAc) và 167.09 (s, 2-OBz)], sáu carbon hương phương [ôc 130.1 (s, C-1"), 129.41 (đ, C-2°),
128.64 (đ. C-3') va 133.67 (đ. C-4')], hai carbon olefin trớ hoỏn [ọc131.94 (s. C-11) và 146.35 (s, C-12)|. một carbon nhị hoản mang oxygen [5¢ 76.4 (rf, C-20)]. năm carbon tam hoán mang oxygen [dc 75.0 (đ. C-2), 84.5 (đ, C-5), 72.3 (d, C-7), 76.2 (dd.
C10) va 68.0 (d, C-13)| và hai carbon trí hoản mang oxygen [5¢ 79.12 (s. C-1) và
80.8 (s. C-4)].
Từ kết qué phố nghiệm trên cho thấy hợp chất nay có công thức phân tử C)Hsg0), với độ bat bão hòa 13.Từ các nhóm chức trong hợp chất ta có 9 độ bat bão
hóa do đó hợp chat BSTW phái có 4 vòng. So với dit liệu phd 'H NMR và °C NMR
thi hợp chat này có nhóm metylen gan oxygen [6) 4.16 và 4.29 ( mỗi mũi 1H. đ. 1=
KT a
Khóa luận tôt nghiệp Nghiên cứu
8.0 Hz)] và ôc 76.4 (r) cho sự hiện điện vòng oxetane trong phân từ. Vay hợp chất này
là một taxan diterpen có vòng oxetane tại C-4 và C-5.
Phé HMBC (phụ lục 11) ở vòng A cho thấy hai nhóm metylen cùng tương
quan với nhau { H;-16 (5, 1.10) với C-17 (ôc 27) và H3-17 (ôu 1.10) với C-16 (d¢
20.9) đông thời cùng tương quan với carbon trí hoán [5c 20.9 (s)]. một carbon olefin
tri hoán [ỗc 131.94 (s)| va một carbon trí hoán mang oxygen [ỗ¿ 79.12 (s)}. Vậy
carbon lần lượt là C-15, C-11, và C-1. Ở vị trí C-1 với & 79.12 so sánh với các hợp
chat chứa taxan chứa vòng oxetane thì C-1 gắn nhóm -OH. Nhóm metyl | H;-18 5)
2.28 (đ)| cho tương quan với carbon C-11, một carbon olefin trí hoán [ð¿ 146.35 (s)]
và một carbon tam hoán mang oxygen ô‹ 68.0 (d). Vay carbon olefin trí hoán là C-12
gắn nhóm 18-Me và carbon côn lại là C-13. Mà ta có H-13 có 5, 4.88 ppm va dc 68.0 ppm được dé nghị gắn nhóm -OH. Trong phd COSY (phụ lục 10) H-13 có dy 4.88
ppm (s) ghép cặp với tín hiệu proton mũi da tại 4, 2.28 ppm 1a proton metylen H-14.
Tương quan HMBC va 'H-'H COSY vòng A minh họa trong hình 2.4:
_* Tương quan HMBC
oes Tương quan COSY
Hình 2.4 Tương quan HMBC va 'H-'H COSY trong vòng A của BSTW
Việc xác định vòng B va C dựa vào phd HMBC va COSY như sau: H-14 tuong
quan C-15, C-13, C-12, C-1 va một carbon tam hoán mang oxygen [8¢ 75.0 (d)] phải
là C-2. H-2 có tương quan với carbony! ester [ỗc 167.09 (s)] ma carbon này cho tương quan với một carbon hương phương [ỗ„ 7.99 (dd, C-2`)]. Vậy C-2 gắn nhóm 2-OBz.
Irong phd COSY, H-2 8) 5.60 (đ, J=7.S Hz) ghép cập proton 5, 3.88 (d, J=7 Hz) là
H-3. Trong HMBC. H-20a tương quan với C-3 và carbon đơn hoán mang oxygen [ỗ
84.5 (đ, C-5)]. đông thời H-20b cho tương quan C-3 va carbon trí hoán mang oxygen
<35<
Khóa luận tôt nghiệp ¡Nghiên cứu
ử, 80.8 so sỏnh với cỏc hợp chất taxan cú chứa khung oxetane thi C-4 mang nhúm -
OAc. Trong phô COSY, H-5 [ô„ 4.98 (đ, J= 8.0 Hz)] ghép cặp với H-6a và H-6b tại
dy) 1.86 và 2.55. H>-6 ghép cặp với proton 5, 4.46 (dd, J= 7.5 Hz) là H-7, Vị trí C-7
với độ dịch chuyển 3, 4.46 va ồc 72.3 vậy C-7 gắn nhóm -OH. Trong HMBC. H-7
tương quan với C-3 va với nhóm —Me là C-19. Mà H;-19 cho tương quan với C-3 va carbonyl [ð¿ 204.1 (s)| phải là C-9. Proton ð„ 6.30 (s) lá H-10 cho tương quan với C-
15. C-12. C-11. C-9 và carbon carbonyl ester [5¢ 170.65 (s)]. Vậy C-10 gắn nhóm
OAc. Hình 2.5 cho thay tương quan HMBC và 'H-'H COSY trong vòng B và C của
Ý Tương quan HMBC
ome Tương quan COSY
Hình 2.5 Tương quan HMBC và 'H-'H COSY trong
vòng B va C của BSTW
So sánh đữ liệu phổ của hợp chất BSTW với Baccatin III thấy sự trùng khớp.
Vậy cau trúc của BSTW là Baccatin III.
Khóa luận tôt nghiệp Nghiên cứu
Bang 3. Số liệu phô 'H NMR (500 MHZ), "°C NMR (125MHz) va tương quan HMBC, 'H-'H COSY của BSTW trong CDCI,
Vị trí | ônu(ppm)
]
|2 5.60 (d. 1= 70 Hz) 3 3.88 (d, 1= 6.5 Hz)
4
$ 4.98 (ở. J= 8.0 Hz) ba 1.86 (4. J= 7.5 Hz) 6b 2.55 (mì
7 4.46 (dẻ, 1=Š.5; 2.5 Hz)
8
9
10 6.30 (3) lt
12
13 4.88 (x) l4 2.28 (m) 1s
16 | 1.10 (s) 17 1.12 (s) 18 2.05 (s) 19 1.67 (s)
20a 4.18 (đ)
20h 4.30 (đ) 4-OAc “
Me 2220)
10-OAc
Me | 2.28 (s)
| 2-OBz
1"
2" | 8.10 (đ, 1=7.0 Hz)
3" 7.48 (1, 1=8 Hz)
l4 7.61 (m)
| ðc(ppm)
79,2 (s)
75.0 (đ)
| 46.17 (d)
80.8 (s) 84.5 (đ)
35.65 ()
72.3 (đ)
$8.77 (s) 204.1 (d)
76.2 (d)
131.94 (s) 146.35 (s) 68.0 (s)
38.69 (d)
| 42.75
20.9 (s) 27
15.5
9.45 (q) 76.4
171.3
20.9 (s) 171.3 (@
22.58 (đ) 167.09 (s) 130.1 (4)
129.41 (s)
128.64 (4)
| 133.67 (s)
|
|
L —