SV: Vũ Hải My Khỏa luận tốt nghiệp 2015LỜI MỞ ĐÀU Tir xa xưa loài người không những biết sử dung cây có đẻ làm thức ăn màcòn biết dùng chúng dé làm thuốc chữa bệnh, việc tim va phát minh
Trang 1BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH
KHOA HÓA HỌC
wiles
KHOA LUAN TOT NGHIEP
CU NHAN HOA HOC
Chuyên ngành Hóa Hữu Co
Tên dé tài:
KHAO SÁT THÀNH PHAN HÓA HỌC CAO ETHYL ACETATE CÂY CỎ SỮA LÁ LỚN
EUPHORBIA HIRTA L.
Ho thau dau (Euphorbiaceae)
Hướng dẫn khoa học: Th.s Lê Thị Thu Hương
Sinh viên thực hiện: Va Hai My MSSV: K37.201.057
Niên khóa: 2071 —- 2015
Tp Hồ Chi Minh, tháng 5 năm 2015
Trang 2SV: Vũ Hải My Khoa luận tốt nghiệp 2015
LỜI CẢM ƠN
Luận văn được thực hiện tại phòng thí nghiệm hoá học hợp chất thiên nhiên,
thuộc khoa Hóa Học, trường đại học Sư Phạm thành pho Hô Chí Minh
Với lòng trân trọng và biết ơn sấu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành
đến cô Th.s Lê Thị Thu Hương, người luôn hết lòng, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ
tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp em hoản thành tốt khóa luận nay
Em xin cảm ơn thay Dương Thúc Huy, cô Nguyễn Thị Ảnh Tuyết, thay Bùi
Xuân Hảo đã giúp đỡ vả cho chúng em những ý kiến quỷ báu để em hoàn thành
dé tải của minh
Cam ơn các bạn phòng thi nghiệm hoá học hợp chat thiên nhiên trường đạihọc Sư Phạm thành phố Hồ Chi Minh đã quan tâm, va tao mọi điều kiện giúp đỡ
trong suốt quá trình thực hiện dé tải
Cuỗi cùng, em xin bảy tỏ lòng cám ơn sâu sắc đến ba mẹ, người đã tạo mọi điều kiện vật chất, luôn là điểm dựa tin thần cho em trong quá trình học tập và
nghiên cứu tại trường.
Rất mong nhận được sự góp ý của thay cô và các bạn dé dé tài này được
hoàn chỉnh hơn.
Em xin chân thành cảm on!
Trang 3SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
DANH MỤC CAC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIET TAT
‘H-NMR: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân của proton (Proton Nuclear Magnetic
Resonance),
'°C-NMR: Phé cộng hưởng từ hạt nhân của carbon (Carbon Nuclear Magnetic
Resonance).
DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer.
HSQC: Phé tương tác dị hạt nhân qua một liên kết (Heteronuclear Single
Quantum Correlation).
HMBC: Pho tương tac dị hạt nhân qua nhiều liên kết (Heteronuclear Multiple
Bond Coherence).
s; Mùi don (singlet),
d: Mũi đôi (doublet).
t: Mũi ba (triplet).
dd: Mũi đôi đôi (double of doublet).
m: Mũi da (multiplet).
br s: Mũi đơn rộng (broad singlet).
8: Độ dich chuyển hoá hoc (Chemical shift).
J: Hang sé ghép spin (Coupling constant)
ppm: Một phan một triệu (Par per million)
TLC: Sắc kí ban mỏng.
DMSO: Dimethy! Sulfoxide
EA: Ethyl Acetate
ED: Ete dau hoa
Trang 4SV: Vũ Hải My Khoa luận tốt nghiệp 2015
DANH MỤC CAC BANG, HÌNH ANH, SƠ DO
Bảng 2.1: Sắc ky cột silica gel cao ethyl acetate
Bang 2.2: Sắc ký cột phân đoạn EA.3
Bang 2.3: Sắc kỷ cột phân đoạn EA.3.4
Bảng 2.4: Sắc ký cột phân đoạn EA 3.4 I.
Bang 2.5: Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.2.
Bang 3.1: Số liệu phô NMR của hợp chất EH7
Bảng 3.2: Số liệu phỏ NMR của hợp chất EH8 và hợp chất so sánh
Bang 3.3: Số liệu phỏ NMR của hợp chất EH10
Hình 1.1: Cây co sữa lá lớn.
Hình 3.1: Một số tương quan HMBC của methyl-a-L-rhamnopyranoside
Hình 3.2: Một số tương quan HMBC của Blumenol C glucoside
Hình 3.3: Một số tương quan HMBC của acid 4,4’-O-bisellagic
Sơ đỏ 2.1: Quy trình cô lập hợp chat EH7, EH8, EH10 từ cao ethyl acetate
Trang 5SV; Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
MỤC LỤC
TATE NRGHAPG:bágoccuGGiobivtogtteeGAviiiGsd 2259.5020 l
CHƯƠNG 1: TONG QUAN, U2 20202 2
l1: ROO wht 2??? i ore cie 3
bã PS he ấm 3
l3 Te Oe NG H da e6 BAe Ca eee RENT TTY TY eee 3
13:0 Host inh chẳng oxy tale ssc acc 5 0tAye ngang 4
1.3.2 Hoạt tinh điều trị bệnh tiểu đường ÍÊ 5-24 2 772127232527 4
VS Firat tials NHI NNakdddoeeedieedsossoonsysyed 4
1.3.4 Hoat tinh chồng viêm ÍÊ®Ỉ S00 210010125215 512121121211 215122Ee 5
1.3.5 Hoạt tính chống ung thu! "*!., , - ccssccssessssessseeseusssnesessesssusssseseeseen 5I.4 Thanh phan hóa học của cây cỏ sữa lá lớn 222-2522 c555ccse 6
14:1 PlRVGBHI S020 G2210162001002Ÿ0((12001(022601120N25 6
154.2: Phicnoliin wil acid iinet eine aR eS Ñ
LAI 5 TURTON SVU ANDGHOASA1666600/004666101)0202010(0 10
1⁄44 AIkeRe o0 set cács¿csagi4 xa 16
{45 ONC c2 6occ200/00222260G00000%CLG3020G0S3G001 A02 -17
2.1 Nguyén liệu, hóa chất, thiết bị, 2-22-2225 csz = 20
2.1.1 Nguyễn liệu i64ttiSi6640663IG%213/22600064013688 To 20
BD a Hi GIÁ ao t6 tt Ha 26001 2066pseragvans»eb 20
1/2 TC 6ocobetbug8ennaiayitovoytdo8c66140001063.86ãx26 85 20
2.2 Cỏ lập một số hợp chat hữu cơ trong cây cỏ sửa lá lớn 2 Í
2.2.2 Sắc ký cột phân đoạn EA 3 4 XU TRỢ ee eC TTT TRE 22
Trang 6SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
92:4 Shc Ký tồi pMSS đoạn EASA 2: ernsevecssssvsccervooysnesevconennsonensesvero cove 24
2.2.5 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.2 2x.eckerkee 24
2.2.6 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.2.1 ng: snnnnsnna 252.2.7 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.3 vn: 6innnnnina 25
CHƯƠNG 3: KET QUA - THẢO LUẬN 27
3.1 Khảo sat cấu trúc hỏa học của hợp chat EH7 22-5222 28
3.2 Khảo sat cau trúc hóa học của hợp chat EH& 2-2222 zseĂ- 293.3 Khảo sat cấu trúc hóa học của hợp chất EH10 X28
CHƯƠNG 4: RET LUẬN- ĐỀ XUẤT SE.
4.1 KÉT LUẬN Ea < - 36
GD XUẤT G›sávodcccii6ck6áitaci6C056000560061áiGG021610465 37
TAL LIỆU THAM KHẢO 38
NT UDE toc tintibctiuttiaccGGGG000Ll0000G218àu4/0ã60600x660 2064 42
Trang 7SV: Vũ Hải My Khỏa luận tốt nghiệp 2015
LỜI MỞ ĐÀU
Tir xa xưa loài người không những biết sử dung cây có đẻ làm thức ăn màcòn biết dùng chúng dé làm thuốc chữa bệnh, việc tim va phát minh ra thuốc tircây cỏ đã đóng góp một vai trỏ hết sức quan trọng cho cuộc sông của con người.Ngày nay cùng với sự phát triển của xã hội, sức khỏe con người ngảy cảng được
chủ trọng va quan tâm chính vi thé dược tính va hóa tinh của nhiều loại thảo mộc
ngày càng được nghiên cứu va không ngừng phát triên với mục đích tạo ra những
loạt được phẩm có nguồn gốc thiên nhiên an toản với sức khỏe của con người.
Trong đó cây có sữa lá lớn là một trong những loại thảo mộc có lợi va
được sử dụng rộng rãi trong Y học cô truyền dé chữa bệnh ly, ngăn ngừa bệnh
tiểu đường hoặc ding cho phụ nữ sau khi sinh it sữa hoặc tắc tia sửa Ngoài ra cỏ
sữa lá lớn còn ding dé trị bệnh giun ở trẻ em, bệnh đường ruột và ho; dịch lá
ding trị ly va cơn đau bụng, nước sắc của cây ding trị bệnh vẻ phế quản và hen;
nhựa cây đắp trị hột cơm, mụn cóc.
Cỏ sữa lá lớn là loại cây có nhiều được tính, hóa tỉnh quý giá nhưng chưa
được nghiên cứu nhiều ở nước ta Do đó, chúng tôi đã chọn đẻ tải “Khảo sátthành phần hóa học cao ethyl acetate cây có sữa lá lớn - Euphorbia hirta L
họ thầu đầu Euphorbiaceae” nhằm mục đích góp một phần nhỏ vao việc tìm
hiểu thành phân hóa học trong cây cỏ sữa lá lớn được thu hái ở tinh Đẳng Nai
Trang |
Trang 8SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 201 5
CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN
Trang 9SV; Vũ Hai My Khóa luận tốt nghiệp 2015
6 tả ậ 5.23,
1.1 Mô tả thực vật l***3**#
Cây co sửa la lớn hay còn gọi là có sửa
lông, thiên căn thao, cây mu, cây vú sữa đất, có
tên khoa học lá Euphobia hirta L thuộc họ thâu
đầu Euphorbiaceae.
Cây có thân bò hoặc hơi đứng, cao
khoảng 15-40 cm, cây có nhiều rẻ phụ hơi đó
hoặc tim, toan cay có lông vang va nhựa mu
trang Hình 1,1; Cây có sửa lá lớn
Lá màu xanh lẫn màu đỏ mọc đổi, cuồng ngăn, phiến lá hình mũi mác, dài
|-4 em, rộng 1-1.5 em, mép có răng cưa nhỏ Gốc cudng lá có 2 lá kém nhỏ, hình
long cưng
Nhiều cụm hoa máu trang đó nhạt, hình chén nhỏ ở các nách lá
Qua lúc dau đó sau đó xanh rồi chuyển dan sang nâu, rất nhỏ, đường kính khoảng l.Š mm, khi gia nứt thành 3 manh vo, có 3 hạt rat nhỏ.
1.2 Phan bố và sinh thái
Cây có sửa lá lớn mọc hoang khắp nơi ở Việt Nam, ở những chỗ đất có
sỏi đá, bai có, đường đi, ở miễn Bắc cũng như ở miễn Nam Cây còn mọc ở
Trung Quốc, Malaysial?'!, An Độ, Australian, châu Phif**?*Ì, châu Mỹ
I.3 Tác dụng được li
Nhiều nghiên cứu chi ra rằng Euphorbia hirta L chửa nhiều chất trị rồi
loạn tiêu hóa, tiêu chảy |, loét da day, ợ nóng, nôn mira ©’, bệnh ty"), bệnh cao
huyết áp '””/, chống ngứa, thông sửa, rối loạn kinh nguyệt, vô sinh va các bệnh
hoa liễu |”, cây cũng được sử dung trong điều trị các rồi loạn phế quan va đường
hồ hap bao gém ca bệnh hen suyễn "|, viêm phế quản, sốt mia he '“ ' va viềm
Trang 10SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
Có sửa lá lớn có các hoạt tính chống oxy hóa, kháng khuẩn °*, kháng nắm,
(1) chong viêm và chồng ung thư !!*?°,
lợi tiêu '”Ì, giải lo âu
Ngoài ra người ta còn nghiên cứu tác dung của có sữa lá lớn trong việc điều
trị bệnh tiêu đường 124)
1.3.1 Hoạt tính chống oxy hóa '*!
Năm 2011, Abu Arra Basma, Zuraini Zakaria vả các cộng sự đã nghiên
cứu vẻ kha nang chống oxi hóa từ các bộ phận khác nhau của cây có sữa lá lớn
dé tìm kiếm nguồn mới của chat chong oxy hóa an toan và không tôn kém Tử
các mẫu lá, cành, hoa và rễ người ta đã tim ra các hợp chat phenolic và flavonoid
có khả năng chống oxy hóa mạnh
1.3.2 Hoạt tính điều trị bệnh tiểu đường !**
Năm 2014, Quy Trinh, Ly Le đã có nghiên cứu vẻ hoạt tính sinh học của
một số chất trong cây có sữa lá lớn có tác dụng trị bệnh tiểu đường bằng phương
pháp gắn kết các chất tìm được trong cây cỏ sửa lá lớn với một số protein liên
quan tới bệnh tiểu đường loại 2 Các chất này bao gồm quercetrin, rutin,
myricitrin, cyanidin 3,5-O-diglucoside, pelargonium 3,5-diglucose thuộc họ
flovonoid va a-amyrine, Ø-amyrine, taraxerol thuộc họ terpene Kết quả nghiền cứu cho thấy sự liên kết của các chat trong cay cỏ sữa lá lớn với các protein có kha nang điều trị hiệu quả bệnh tiểu đường.
1.3.3 Hoạt tính kháng khuẩn '®'!
Năm 1995, Vero, K Vijaaya, S Ananthan va các cộng sự đã nghiên cứu
tác đụng kháng khuẩn của các hợp chất chiết xuất tir Camellia sinensis L va chiết xuất methanol của cỏ sữa lá lớn chống lại bệnh ly - một loại bệnh do Shigella spp gây nên Các tác dụng kháng khuẩn của địch chiết methanol của có
sữa lá lớn đã được chứng minh trong phỏng thí nghiệm bảng cách sử dụng loài vị
khuẩn Shigella Thực nghiệm cho thấy chiết xuất không gây độc tế bảo và có
hoạt tính kháng khuẩn
Trang 4
Trang 11SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
Năm 2013, A Annamalai, V.L.P Christina cùng các cộng sự đã nghiên
cứu vé hoạt tinh kháng khuân của cây cỏ sữa lá lớn băng việc tông hợp các hạt
nano vàng không độc hại (Au NPs) bằng cách sử dụng các chất chiết từ lá của
cây có sửa lá lớn Các Au NPs này có kha nang chồng lại các chủng vi khuẩn
như Escherchia coli, Pseudomonas aeroginosa va Klebsiella pneumonia.
1.3.4 Hoạt tính chống viêm "
Năm 1991, khi khảo sát chiết xuất n-hexane của các bộ phận của cây cósửa lá lớn và thành phan chính của nó (triterpene, f-amyrin, 24-
methylenecycloartenol, /-sttosterol), M.C Lanhaers và các cộng sự đã đánh giá
hiệu quả kháng viêm ở chuột Chiết xuất dung dịch nước đông khô có khả nănggiám đau, hạ sốt va chống viêm Bên cạnh đó, hoạt động tram cảm trung ương,thẻ hiện bởi tác dụng an than mạnh mẽ kết hợp với hiệu ứng giải lo âu, cũng
được tiền hành nghiên cứu
1.3.5 Hoạt tính chồng ung thư |"
Năm 1995, K Vijaya, S Ananthan và các cộng sự còn nghiên cứu kha
năng gây độc của các chất trong các địch trích khác nhau Các chất chiết xuất nảy
đóng vai trò như một tác nhân kháng khuẩn hiệu quả vả không gây độc tế bảo Riêng chiết xuất của cỏ sữa lá lớn lại có hoạt tính gây độc tế bảo chọn lọc đối với
một số dòng tế bảo ung thư Điều đó cho thấy cây cỏ sữa lá lớn rất hữu ich trong điều trị ung thư, khối u ác tinh vả ung thư tế bao vay.
4+ Một số đơn thuốc dan gian có vị có sữa lá lớn !* **!
~ Chữa ly: Cỏ sửa lá lớn phối hợp với hoảng ding, nấu thánh cao lỏng để
uống
~ Chữa thiểu sửa: Cỏ sữa tươi 100 g, hạt cây gạo 40 g, hai thứ sắc kỳ, lay
nước nau cháo gạo ăn
~ Cam tiêu chảy: Lay khoảng 12 g than lá có sửa lá lớn nghiền hoặc xay
chung với it nước uỏng vảo sé giúp cắm tiểu chảy va ly
Trang 5
Trang 12SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
~ Chita các bệnh nhiễm trùng da: Lấy cây cỏ sửa lá lớn phơi khô nghiền
thành bột trộn thảnh khói nhão sau đó đắp lên vết thương hay vét bỏng
Nó còn hữu hiệu để làm tiêu các mụn cóc bằng cách bôi trực tiếp trênvùng đa bị nhiễm,
— Chữa nứt môi hoặc viêm lười: Lay dich mủ của cây cỏ sữa lá lớn bôi lên
môi giúp mau lành các vết nứt nẻ môi
— Chita ho hen: Cỏ sữa lá lớn 10 g, lá cây bồng bông 3 lá, lá đâu 20 g Sắc
uống ngày một thang, chia 2 — 3 lan
1.4 Thanh phần hóa học của cây cỏ sữa lá lớn
1.4.1 Flavonoid
Nam 1972, Blanc P va các cộng su đã cô lập được euphorbianin (3),
quercitol (4), leucocyanidol (5), quercitrin (6) °Ì
Năm 1991, Chen L bằng các phương pháp hỏa lí và quang phd, da phân
lập các hợp chat tir lá của cây cỏ sữa lá lớn 1a quercitrin (6), myricitrin (7) |"!
Năm 2012, Wu Yi, Qu Wei, Geng Di, Liang Jing-Yu, Luo Yang-Li đã cô
lập các hợp chất là isorhamnetin (8), pinocembrin (9), kaempferol (10), luteolin
Trang 14SV: Vũ Hải My Khoa luận tốt nghiệp 2015
Năm 1972, Blanc P và các cộng sự đã cỏ lập được acid ellagic (15), acid
gallic (16) acid caffeic (17) ”
Năm 1978, Elnagar L và các cộng sự đã cô lập được acid shikimic (18)
từ cao ethanol của cây cỏ sữa lá lớn |"!
Năm 1991, Chen L bằng các phương pháp hỏa lí và quang phổ, đã phânlập hợp chất từ lá của cây cỏ sita lá lớn là acid gallic (16), acid 3,4-di-O-
galloylquime (19), 2,4,6-tri-O-galloyl-D-glucose (20),
1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-£-D-glucose (21) !'”
Năm 2012, Wu Yi, Qu Wei, Geng Di, Liang Jing-Yu, Luo Yang-Li đã cô
lập 3 hợp chat 1a scopoletin (22), scoparone (23), isoscopoletin (24) !"!
Nam 2013, Yuya Nomoto, Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami,
Hideaki Otsuka đã cô lập được methyl
3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenypropanoate O-/-D-glucopyranoside (25), syringin (26) '**Ì
HO OH
HO’ "O
(15) (16)
Trang 8
Trang 16SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
Năm 1966, Gupta D R va Gard S K đã cô lap từ thân cỏ sữa lá lớn được
taraxerol (27), friedelin (28), đ-sitosterol (29) !'”Ì
Năm 1972, Ahmed M Attallad, Harold J Nicholas đã cô lập từ lá và thân
có sữa lá lớn taraxerol (27), taraxerone (3Ø), campesterol (31), sugmasterol (32)
| Cùng năm 1972, Blanc P và các cộng sự đã cô lập camphol (33) ®!
Năm 1980, từ thân cỏ sửa lá lớn, Baslas R K., Agarwai R đã cô lập
cycloartenol (34), euphorbol (35).""!
Năm 1984, Sofowora và các cộng sự đã cô lập được các hợp chat
24-methylenecycloarterno] (36), /@amymnn (37), /@GŒamyrin acetate (38),
ingenoltriacctate (39), tinyaloxin (40) I4)
Năm 1999, Mariano Martinez Vazquez đã cô lập hợp chất tetradecanoyl phorbol acetate (TPA) (41) '""!
12-0-Năm 2011, Shijun Yan và các cộng sự đã tim ra 3 hợp chất
2f,trihydroxy-ent-kaurane (42) 2f,16a-dihydroxy-ent-kaurane (43),
16a,19-dihydroxy-ent-kaurane (44), ?"!
Trang 10
Trang 17SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
Nam 2013, Consolacion Y Ragasa, Kimberly B, Comelio đã cô lập
25-hydroperoxyeycloart-23-en-3/đol (45), 24-hydroperoxycycloart-2Š-en-3/ol (46), cycloartenol (47) lupeol (48), œ-amymn (49), cycloartenol fatty acid ester (50),
lupeol fatty acid ester (51), a-amynin fatty acid ester (S2), Z-umyrin fatty acid ester (S3).
(I3)
Năm 2013, Yuya Nomoto, Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami,
Hideaki Otsuka đã cô lập được hirtionoside A (54), hirtionoside B (55),
hirtionoside C (56), blumenol C glucoside (57), citroside A (58), corchoionoside C
(S9) *
Trang !1
Trang 18Khóa luận tốt nghiệp 2015
Trang 19SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
(36) (37)
Hạ
Trang 13
Trang 20SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
—— SSS
(42) (43)
(44) (45)
Trang 22SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
Trang 23SV: Vũ Hải My Khoa luận tốt nghiệp 2015
C<X<XX<Xx CHy
(62) (63)
1.4.5 Glycoside
Năm 2009, Uppuluri V Mallavadhani và Kilambi Narasimhan đã tim ra 2
déng phân anomer: n-butyl-!-O-/-L-rhamnopyranoside (64),
n-butyl-1-O-a-L-rhamnopyranoside (65) 132),
Nim 2013, Yuya Nomoto, Sachiko Sugimoto, Katsuyoshi Matsunami, Hideaki Otsuka đã cỏ lập được 3-hydroxyoctanoic acid glucoside (66), methyl
3-hydroxyoctanoat acid glucoside (67), (Z)-3-hexenyl #-D-glucopyranoside (68),
rutinoside (69), linocinnamarin (70), benzyl /@-D-glucopyranoside (71) '*!
Trang 24SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
(70) (71)
Trang 18
Trang 25SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
CHƯƠNG 2 :
THỰC NGHIỆM
) VIEWN
Trang 26SV: Vũ Hải My Khỏa luận tốt nghiệp 2015
2.1 Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị.
~_ Dung môi: ethyl acetate, ete đâu hỏa, chloroform, methanol, acetone, acid
acetic, hexane, nước.
— Thuốc thứ hiện hình các vết hữu co bằng sắc ky bang mong: H;SO; 20%,
~ Các thiết bị dùng dé giải li, chửa mẫu
— Máy cô quay chân không Heidolph, máy sấy, bếp cách thủy
— Cột sắc kí
~ Máy soi UV
— Cân điện tử Sartorius Mass 620g
~ Phổ cộng hướng từ hạt nhân 'H-NMR, 'ÌC-NMR , 2D-NMR được thực hiện
trên máy cộng hưởng từ hạt nhân Bruker Advance 500, tân số cộng hưởng
500 MHz cho pho 'H-NMR va 125 MHz cho pho C-NMR
~ Các phô được ghi tai phòng phân tích cấu trúc, Viện Hóa Học - Viện Khoa
Học và Công Nghệ Việt Nam, 18 - Hoang Quốc Việt, quận Cau Giấy, Ha
Nội va phòng Phân Tích Trung Tâm trương dai học Khoa Học Tự Nhiễn
thành phỏ Hỗ Chi Minh, số 227 Nguyễn Văn Cir, quận 5, thành phố Hỏ Chí
Minh.
Trang 20
Trang 27SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
3.2 Cô lập một số hợp chất hữu cơ trong cây có sữa lá lớn
12 kg mẫu cây khô được ngâm với ethanol 96°, địch chiết được gom lại
roi cô đặc bằng máy cất quay dưởi áp suất giảm thu được 635 gam cao thô Cao
ethanol thô được chiết lỏng - lỏng lần lượt với ether đầu hoá, ethyl acetate thu
được cao ether dau hoa (60.4 gam), cao ethyl acetate (335,27 gam)
Sắc ký cót silica gel phan cao ethyl acetate (335,27 gam) với hệ dung môi ED:EA va EA:M có độ phan cực tăng dân Dịch từ cột sắc ky được hứng vào các
binh tam giác 250 ml Sau đó, cô quay thu hôi dung môi, phan cao thu được đựng
vào các hũ bi Dùng sắc ký bảng mỏng dé kiếm tra phan cao thu được, những
phan giéng nhau gom lại thành một phân đoạn Kết qua thu được 5 phân đoạn ki
kiệu la EA I-Š, các phân đoạn được trình bảy trong bảng 2.1
Bang 2.1: Sắc ký cột silica gel cao ethyl acetate
Phân Khối lượng
chỉnh, có vét do
Khảo sát thuNhiều vết, có ba vết
EA 100% ` được EH7,
chính, có vet do
EH8, EH10
EA:M (10:1) Nhiều vét, kéo dai Chưa khảo sát
EA:M (5:5) Nhiéu vết Chưa khảo sát |
i
— J
Trang 21
Trang 28SV: Vũ Hai My Khoa luận tốt nghiệp 2015
2.2.1 Sắc ký cột phân đoạn EA.3
Phan cao thu được tit phân đoạn EA.3 tiếp tục sắc ký cột silica gel với hệ
dung môi C:M tỉ lệ 10:1 Kết quả thu được 6 phân đoạn, các phân đoạn được trinh bay trong bảng 2.2.
Bang 2.2: Sắc ký cột phân đoạn EA.3
|
——— —
Sắc ký bảng mỏng
Phân Khối lượng | Dung môi
| (với thuốc thử hiện Ghi chú
| Base 2004 |C:M(10:1)| Nhiều vết kéo dai Chưa khảo sắt
C:M Hai vết đen rõ, vết dơ
EA.3.4 3,567 Khao sat
(10:1) mờ
Ba vết đen tròn, vết do
EA.3.5 1,789 C:M (10:1) Chua khảo sát
EA.36 5,987 C:M (10:1) Hai vết den tron, rỗ Chưa khảo sat
2.2.2 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4
Sắc ký cột silica gel phân đoạn EA.3 4 (3,567 g) với hệ dung môi C:M ti
lệ 12:1 Kết quả thu được 3 phân đoạn, các phân đoạn được trinh bay trong bảng
2.3.
Trang 22
Trang 29SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
Bang 2.3: Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4
Sắc ký bảng mỏngPhân (với thuốc thử hiện
đoạn hình là H;SO,
[_ Một vet vắng hơi
EA.3.4.I C:M (12:1)
đen tròn, vết đenMột vét den tròn
" «i i
cùng với nhiêu vet
C:M (12:1) Vết vàng kéo dai
2.2.3 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.1
Phần cao thu được từ phan đoạn EA.3.4.1 được tiếp tục sắc ky cột silica
gel với hệ dung môi He:EA:Ax (1:5:4 giọt) Kết qua thu được 3 phân đoạn, các
phân đoạn được trình bày trong bảng 2.4.
Bảng 2.4: Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.1
He:EA:Ax | Một vết vàng hơi đen |
EA.3.4.1.2 6.167 | Khảo sat
(1:5:4 giot) tròn vết đen mờ
Trang 30SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
He:EA:Ax ; |
EA.3.4.1.3 0,224 Vét den mo, kéo vệt | Chua khảo sat |
(1:5:4 giọt)
2.2.4 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.1.2
Sắc ký cột silica gel phân đoạn EA.3.4.1.2 (0,167 g) bằng hệ dung môi
EA:M:W tỉ lệ 25:1:1 Kết qua thu được 7 mg chat dạng bột không màu Kiểm tra
bằng sắc ky bản mỏng với hệ dung môi EA:M:W tỉ lệ 16:1:1, giải ly nhiêu lần
hiện hình bang thuốc thử H;SO; 20%, cho một vết tròn, rõ, với Ry = 0,33, Hợp
chất này được ký hiệu là EH7 (7 mg)
2.2.5 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.2
Phần cao thu được từ phân đoạn EA.3.4.2 được tiếp tục sắc ký cột silicagel với hệ dung môi He:EA:Ax (1:5:4 giọt) Kết quả thu được 3 phân đoạn, các
phân đoạn được trình bảy trong bang 2.5.
Bảng 2.5: Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.2Khi Sắc ký bảng mỏng
Phân đoạn | lượng (với thuốc thử hiện
Trang 24
Trang 31SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
2.2.6 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.2.1
Sắc ký cột silica gel tiếp tục trên phan đoạn EA.3.4.2.1 (0.132 g) bằng hệ
dung môi He:C:M tỉ lệ 2:2:0,5 Kết qua thu được 5 mg chất ở dang nhựa kết dính
không màu Kiểm tra bằng sắc ký ban móng với hệ dung môi He:EA:Ac ti lệ
2:1:2, hiện hình băng thuốc thử H;SO, 20%, cho một vết tròn, rõ, với Rr = 0,35.
Hợp chất này được ky hiệu là EH8 (5 mg)
2.2.7 Sắc ký cột phân đoạn EA.3.4.3
Sắc ký cột silica gel phân đoạn EA.3.4.3 (1,121 g) với hệ dung môi
He:EA:Ax (1:5:4 giọt) Kết quả thu được 5 mg hợp chat rin mau tring Kiểm tra
bằng sắc ký bang móng với hệ dung môi He:EA:Ax ti lệ 3:4:1,2 cho một vết
tron, rỗ với R;= 0,38, Hợp chất nay được ky hiệu là EH10 (5 mg).
Trang 25
Trang 32SV: Vũ Hải My Khóa luận tốt nghiệp 2015
Sơ đồ 2.1: Qui trình cô lập hợp chất EH7, EH8, EH10 từ cao ethyl acetate
— Tiên hành sac ký cột silica gel.