Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Khảo sát thành phần hóa học cao Etyl Acetat của cây Nam sâm đứng Beorhaavia Erecta L. họ Bông phấn (Nyctaginaceate)

Có đến 80% các hoạt chất đã vả đang sử dụng làm thuốc trong y học hiện đại là các chất có nguồn gốc tự nhiên, các chat tông hợp và bán tông hợp đều dựa trên cau trúc hóa học của các hợp

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH

KHOA HÓA

BỘ MÔN HÓA HỮU CƠ

KHÓA LUẬN TOT NGHIỆP

CUA CÂY NAM SÂM ĐỨNG BOERHAAVIA ERECTA L.

HO BONG PHÁN (NYCTAGINACEAE)

GVHD: GS TS NGUYEN KIM PHI PHUNG

SVTH: NGUYEN THỊ MỸ HƯƠNG LỚP: 4C

HE: CU NHÂN NGOÀI SƯ PHAM

MSSV: 35106019

THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH- THÁNG 5, NĂM 2013

MỤC LỤC

MUETHE ẽ.=-s -ẽ.ẽ.{a ẽ ẽ 7 ẽ ae 2

D0020 1090 3

LI NGA cnnccninniriserosaieeierrsoiroosiirosasississrose 4 DANH MỤC CÁC CHỮ VIET TÁTT .sosscssessscse 5

CHƯƠNG 1: TONG QUAN ccocccccccccoocooooooeooocoooooooee 6

1.1 DAC TINH THUC VAT 1 3544 Ỏ 6

1.2 NGHIÊN CỨU VE DƯỢC TINH CUA CHI BOERHAAVIA 8

CHƯƠNG 2: NGHIÊN CUU VÀ KET QUÁ 19

BN, 2100 7.4108) 300 hệ 0" 20 2.2 DIEU CHE CÁC LOẠI CAO - ¿- ¿222222222 2vsv2vczvcrzrrrrsrres 20

2.3 TRÍCH LY, CÔ LAP MOT SO HỢP CHAT HỮU CƠ TRONG CAY

98760 n1 ốỐÔỐ - Ỷ 21

2.4 KHAO SÁT CÂU TRÚC HOA HOC CUA CAC HỢP CHAT CO

LAP DUOC wi cecscsssessssessseesssesssesssscssvessvessvesssesssvensvensvetsseesseessneesnetsneessneeseeenes 23

CHƯƠNG 3:KET LUẬN sce5-csccseccsccscssersecsscrse 30

3.1 CÔ LẬP CÁC HỢP CHAT HỮU CƠ 5-5555 zvcscxzvzses 30

3.2 CÁC HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO - 5 31

TÀI LIEU THAM KHẢO cccccccccvvvvvessee 32

LỜI CÁM ƠN

` * -Á « 4 i

Em xin tỏ lòng biết on sâu sắc đến:

% Cô GS TS Nguyễn Kim Phi Phụng đã tận tình hướng dan, động viên, truyền

đạt những kiến thức quỷ) bau và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành tốt khóa luận này Cô là một người thay tận tụy, một tam gương nghiên cứu khoa học,

cô không những trang bị cho em kiến thức chuyên môn mà cả những hành trang, kỳ

nắng cho con đường tường lai sau nay

s* Chị NCS Đồ Thị Mỹ Liên- là người chị- đã nhiệt tình hướng dan, giúp đỡ,

động viên, truyền đạt những kiến thức và kinh nghiệm quy báu mà chị tích lũy được trong quá trình nghiên cứu giúp em hoàn thành tốt khóa luận Chị đã truyền tỉnh thân nghiên cứu khoa học, sự ham học hỏi và giúp em định hướng cho những bước

di sau này,

ca Thay NCS Duong Thúc Huy đã cho em kiến thức và cơ hội được học tập,

hoàn thành khóa luận tại Phòng thí nghiệm Hóa hữu cơ- Trường Đại học Khoa

nhiệt tình giúp đỡ, động viên em trong suốt qua trình làm khóa luận.

s* Va cuối cùng là ba mẹ đã ủng hộ, tiếp sức và là nguôn động viên lớn lao trên

suốt con đường học tập của em.

LỜI MỞ DAU

Từ xa xưa con người đã sử dụng nhiều loại cây cỏ hoặc các hợp chất trích

ly từ cây có dé làm hương liệu, gia vị thực phẩm, màu tự nhiên, đặc biệt là sử

dụng dé làm thuốc chữa bệnh Trong y học cỗ truyền có nhiều bài thuốc giá tri mà

cho đến nay chúng ta chỉ mới khám phá được một phan.

Có đến 80% các hoạt chất đã vả đang sử dụng làm thuốc trong y học hiện

đại là các chất có nguồn gốc tự nhiên, các chat tông hợp và bán tông hợp đều dựa

trên cau trúc hóa học của các hợp chất tự nhiên Vì vậy, việc nghiên cứu tim kiếm

các thuốc mới từ nguồn gốc tự nhiên hiện nay đang rat được quan tâm.

Chi Boerhaavia, họ Bông phan (Nyctaginaceae), có khoảng hơn 40 loài,

trong đó ở Việt Nam, theo tài liệu đã tìm thấy khoảng 3 loài Một số loài cây thuộc

chỉ Boerhaavia đã được sử dụng trong y học cô truyền của nhiều nước trên thé giới

dé chữa trị rất nhiều loại bệnh như viêm nhiễm, kháng u bướu, kháng tế bào ung

thư, kháng virdt,

Các nghiên cứu hóa — được cho thấy chỉ Boerhaavia chứa rất nhiều loại hợp

chất hữu cơ có hoạt tính sinh học hap dẫn như triterpen, steroid, glycoside,

flavonoid, alkaloid, Tuy nhiên, các cây thuộc chí Boerhaavia rất giống nhau về

hình dáng bên ngoài và lại chưa được nghiên cứu và áp dụng vào thực tế ở Việt

phan hóa học cây Nam sâm đứng Boerhavia erecta L thu hái ở Thủ Đức bằng cách

cô lập vả xác định cầu trúc hóa học của các hợp chất hữu cơ cỏ trong cây; tiền hành

so sánh đặc tính hóa thực vật của cây này với các cây cùng chỉ Hy vọng rằng kết quả nghiên cứu sẽ mang lại những hiểu biết mới về mặt hóa — được của cây

Boerhaavia erecta L và làm tăng giá trị ứng dụng của cây vào thực tế cuộc sóng.

DANH MỤC CÁC CHỮ VIET TAT

br: rộng (broad)

C: cloroform

đ: mut đôi (doublet)

dd: mũi đôi - đôi (doublet-doublet)

DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

EA: ety] acctat

ED: eter dau hỏa

H: hexan

HSQC: tương quan H-C qua | nỗi (Heteronuclear Single Quantum Correlation)

HMBC: tương quan H-C qua 2, 3 nối (Heteronuclear Multiple Bond Coherence)

M: metanol

N: nước

NMR: phô cộng hướng từ hat nhân (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy)

s: mũi don (singlet)

CHƯƠNG 1: TONG QUAN

1.1 BAC TINH THUC VAT

1.1.1 Tổng quan về chi Boerhaavia

Í?Ì có khoảng hơn 40 loài, bao gồm cả cây lâu năm và cây

Chỉ Boerhaavia

hằng năm Cây mọc thăng đứng, nghiêng hoặc bò sát mặt đất, được phân bô rộng rãi

ở những vùng có khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới và một số nước vùng ôn đới.

Chúng được tìm thấy ở Úc, Trung Quốc, Ai Cập, Pakistan, Sudan, Sri Lanka, Nam

Phi Mỹ và một vải nước Trung Đông

Trong đó, ở Việt Nam chỉ mới xác định được 3 loài thuộc chỉ Boerhaavia

đó là Boerhaavia diffusa Linn (Nam sâm bò), Boerhaavia erecta L (Nam sâm

đứng) và Boerhaavia chinensis (Nam sâm Trung Quốc)”.

Boerhaavia tetrandra Boerhaavia linearifolia Boerhaavia wrightii

Boerhaavia coccinea Boerhaavia triquetra Boerhaavia erecta

Boerhaavia diffusa Boerhaavia coulteri Boerhaavia gracillima

Boerhaavia herbstii Boerhaavia intermedia Boerhaavia purpurascens

Boerhaavia pterocarpa Boerhaavia repens Boerhaavia chinensis

Hinh 1.1: Mot số cây thuộc chi Boerhaavia

1.1.2 Mô tả thực vật cây Boerhaavia erecta L.Ì**°

Cây Nam sâm đứng có tên khoa học là Boerhaavia erecta L là loại cây

thảo mộc thuộc chi Boerhaavia, họ Bông phan (Nyctaginaceae) (họ Bon giờ), nhóm

Hai lá mầm, thuộc ngành Cây hạt kín.

Nam sâm đứng là loại cỏ mảnh, cao 40-80 cm, mọc thăng đứng hoặc có thé

rủ xuống ở nách chôi có lông min ở chót Lá hình trứng hoặc dạng clip phiến lá

xoan tròn dài đến thon, đáy tròn hay cắt ngang, kích thước 2-3.5x 1-2.5 cm mặt

dưới lá trắng như có bột và có tuyến, mặt phía trên xanh, cudng đài 1-4 cm Chùm

tụ tán dài; nhánh chót mang tụ tán 3 hoa: cong hoa 15-20 mm; bao hoa trắng, hồng

hay đỏ, dài 1,5-2 mm; tiểu nhụy 1-2 thay Hoa quả hình chùy lật ngược, cao 4 mm,

Hình 1.2: Hoa, lá và rễ của Boerhaavia erecta L.

Cây nam sâm đứng được phân bố ở vùng có khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới trên thé giới Là loài liên nhiệt đới, mọc hoang khắp nơi ở vườn, sân, bờ đường

hay bãi cỏ O Việt Nam cây mọc nhiều ở vùng Bình Thuận, Ninh Thuận, Ninh

Hoa, Phú Yên, là những vùng đất cát, khô căn.

1.2 NGHIÊN CỨU VE DƯỢC TÍNH CUA CHI BOERHAAVIA

Cho đến nay, các nghiên cứu và ứng dụng vào y học chỉ tập trung chủ yếu

vào loài cây cùng chi là Nam sâm bò (Boerhaavia diffusa L.), còn cây Boerhaavia

erecta mặc dù cũng đã được sử dụng làm thuốc ở nhiều nơi trên thé giới nhưng

những nghiên cứu cụ thé về được tính của cây này thì còn rất Ít.

Thân lá cây Boerhaavia diffusa đã được người dân ở một số nước như Án

Độ, Sri Lanka, Việt Nam dé nau ăn như rau Lá cây có tác dụng hoạt huyết giải độc.

Ré cây có tác dụng tăng lượng nước tiêu nhưng với liều cao có thể gây nôn mira va

ra nhiều mô hôi; cây còn có tác dụng tran tĩnh (về mặt thần kinh) Rễ cây được dùng

dé chữa các bệnh như gãy xương (Nepan) (dùng toàn cây hay kết hợp với các loại

cây khác); chữa ran căn và thấp khớp (Sri Lanka); ở Đông Phi dùng dé chữa bong

và chữa áp xe; ở Brasil và một số nơi khác người ta dùng cây này dé chữa các bệnh

về gan và lá lách, bệnh về túi mật, các bệnh về thận và chữa viêm nhiễm bên trong.

Ở An Độ người ta dùng cây làm thuốc chữa rat nhiều bénh''! như chữa đau

bao tử, trừ giun san, thuốc hạ sốt, chữa phong chữa bệnh lậu, chứng khó tiêu,

chứng phù nề, vàng đa, thiểu máu, điều hòa kinh nguyệt Rễ cây được dùng làm

thuốc lợi tiểu và nhuận trang với liều dùng 15 g/ngay, ngày dùng hai lần.

Có nơi ding chữa ho dưới dang thuốc bột, thuốc sắc hoặc thuốc pha uống

như trả (10 g/1 lít nước sôi), nêu pha rượu thì chi dùng 2-5 g bột rễ mỗi ngày.

Có rất nhiều các nghiên cứu dược lý về cây Boerhaavia diffusa L đã được

thực hiện trên thé giới cụ thể như: nghiên cứu về khả năng chữa bỏng!””: khả năng

lợi tiêu và điều hòa huyết áp!“””; khả năng nhuận tràng ””: khả năng chống co

giật”; kha năng chong nhiễm độc gan dùng dé chữa các triệu chứng của bệnh

Năm 2003, ở An Độ Rupjyoti Bharali và cộng sự” tiền hành nghiên cứu

khả năng ngăn ngừa ung thư da trên chuột của địch chiết thân lá của cây Boerhaavia

diffusa ban đầu đã cho thay rằng dich chiết thân lá của cây có khả năng ngăn ngừa

sự hình thành các tác nhan gây ung thư da

Năm 2007, đã có các nghiên cứu trên chuột về khả năng chống stress của

[35,51]

dich chiết metanol của cây và nhận thay cao metanol có khả nang chống stress,

các nghiên cứu di sâu tiếp tục được tién hành Ngoài ra người ta cũng đã nghiên cứu

[28]

trên chuột kha năng làm giảm đau'”” của dịch chiết lá tươi của cây.

Năm 2008, ở Nigeria, C.O.Ojowundu và cộng sự!°! tiến hành nghiên cứu

về các chất dinh đưỡng có trong cây Boerhaavia diffusa L và báo cáo cho thay hàm

lượng các vitamin và các khoáng chất trong cây cao (Bang 1.2 va 1.3) Ngoài ra báo cáo còn cho thấy cây Boerhaavia diffusa L có khả năng chống oxy hóa và giảm

SIr€sS cao.

Nam 2009, Tillan Hood và cộng sự đã tiền hành nghiên cứu dé xác định tác

dụng của địch nước chiết xuất từ Boerhaavia erecta L đến chức năng bảo vệ gan

trên cơ thé chuột Kết quả cho thay dich chiết của cây có kha năng chống lại sự tôn

thương gan trên cơ thé chuột gây ra bởi carbon tetracloride'?f1,

Năm 2010, ở An Độ, Rajeswari và Krishnakumari tiến hành nghiên cứu dé

xác định tông lượng phenol và flavonoid trong dịch chiết xuất methanol của lá cây

Boerhavia erecta L., đây là những hợp chất quan trọng đóng vai trỏ là chất chong oxy hóa, chống ung thu, Kết quả nghiên cứu cho thay trong lá cây có một lượng

đáng ké phenol và flavonoidff°

Bang 1.1: Tông hàm lượng phenol và flavonoid

Tông lượng phenol 85.90 + 1.97 Tông lượng flavonoid 11.39+0.86

GO nước ta, tuy trong dân gian, cây Nam sâm bò đã được sử dụng dé chữa hen suyén, phù thing, thiểu máu, ho và làm thuốc nhuận tràng!” nhưng vẫn chưa

có nhiều nghiên cứu về thành phan hoa học cũng như dược tính của cây mọc ở Việt

Nam.

1.2 NGHIÊN CỨU VE THÀNH PHAN HÓA HỌC

1.2.1 Hàm lượng các thành phần, các vitamin và khoáng chất trong cây Nam

sâm bò ở Nigeria''?!

Bảng 1.2: Hàm lượng các thành phan có trong cây Nam sâm bò

Carbohydrat 10.56 + 0.12

Chat xơ 2.40 + 0.03

Bang 1.3: Hàm lượng các vitamin có trong cây Nam sâm bò

Loại vitamin Hàm lượng (mg/100g)

Vitamin C 44.80 + 5.78Vitamin B3 97.00 + 8.01Vitamin B2 22.00 + 4.25

Bang 1.4: Hàm lượng các khoáng chất có trong cây Nam sâm bò

Khoáng chất Ham lượng (mg/100gr)

162.50 + 4.56

0.02 +0.00

Không phát hiện Không phát hiện

1.2.2 Cau trúc hóa học của một số hợp chất cô lập được từ chỉ Boerhavia.

5,7-Dihydroxy-3'4'-dimethoxy-6,8- 4',3,7-Trihydroxy-3'- 3',3,5-Tnhydrox

y-7-dimethylflavone! methylflavone! H methoxyflavone! Hy

2'-0-Methylabronisoflavone!"! J Eupalitin'' 1,50) Kaempferolt””Ì

Eupalitin 3-Ó-/-D- Quercetin 3-O-robinobioside!! 7!

Các alkaloid chiếm ham lượng lớn trong cây nam sâm bò (2%).

Gồm các chất Punarnavine-1, Punarnavine-2, Hypoxanthine-9-L-arabinofuranoside,

Punarnavoside , Neobetanin-5-B-D-glucopyranoside và Amarantin.

;a (8,11,27

Punarnavoside!*!!?”!

> Lignan'!Š đè Nam 1991, Lami va cộng sự đó cụ lập được từ rễ cõy nam sõm

bũ hai hợp chat lignan là liriodendrin và syringaresinol

> Carbohydratef°""l: Fructose, Galactose, Glucose, Xylose, Sucrose.

> Xanthonel*

(Dihydroisofuroxanthone)

> Amino acid” Cystine, glycine, histidine, lisine, methionine, phenylalanine,

proline, tryptophan, alanine, acid aspartic, acid glutamic, leucine, serine,threonine, tyrosine, valine

> Các acid béo!!

CH:—(CH;);;—COOH : Acid hexadecanoic (Acid palmitic)

CH:—(CH;);¿—COOH : Acid octadecanoic (Acid stearic)

CH+—(CH;);¿—COOH : Acid eicosanoic ( Acid arachidic)

CH;—(CH)>)29—COOH : Acid docosanoic (Acid behenic)

CH;—(CHạ);+—CH=CH—(CHạ);—COOH : Acid 9-octadecenoic (Acid oleic)

CHƯƠNG 2: NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUÁ

Phan thân lá tươi

| Phơi khô, xay nhuyễn

Bột thân lá khô (3.8 kg)

- Ngâm đảm với metanol

- Lọc, cô quay thu hồi dung môi

Cao metanol thô (245 g)

Trích lỏng- lỏng với ete đầu hóa và etyl acetat

Sơ đồ 2.1: quy trình điều chế các loại cao

2.1 THU HAI VÀ XỬ LÝ MAU

Mau cây tươi Nam sâm đứng được thu hai tại Thủ Đức vào thang 9 năm

2009 Cây đã được nhận danh tên khoa học là Boerhaavia erecta L bởi Dược sĩ

Phan Đức Bình, Phó Tổng biên tập Tạp chí Thuốc và Sức Khỏe, Hội Dược học Việt

Nam

Sau khi thu hái cây được rửa sạch sấy khô xay nhuyễn thu được bột khô

(3.8 kg).

2.2 DIEU CHE CAC LOAI CAO

Bột cây khô phan thân lá (3.8 kg) được trích kiệt bằng metanol theo phương

pháp ngâm đầm ở nhiệt độ phòng, lọc, cô quay thu hồi dung môi, thu được cao

metanol thô (245 g)

Từ cao metanol thô, tiễn hành trích lỏng- long lần lượt với ete đầu hòa va

etyl acetat thu được cao eter dau hỏa (38.1 g), cao etyl acetat (25.1 g) và phan cao

metanol còn lại (160.0 g)

Quy trinh điều chế các loại cao được trình bày trong sơ đồ 2.1

Bang 2.1: Khối lượng và thu suất các loại cao thu được so với cao metanol ban đầu

Loại cao (ký hiệu ) Trọng lượng (g) Thu suất (%)

Eter dầu hỏa (ED) 15.55

Etyl acetat (EA) 10.24

Metanol (M) 65.31

Tong cong

2.3 TRÍCH LY, CÔ LẬP MOT SO HOP CHAT HỮU CƠ TRONG CAY

NAM SÂM ĐỨNG

2.3.1 Sắc ký cật trên cao etyl acetat của sơ đồ 2.1

Thực hiện sắc ký cột trên cao etyl acetat (25.1 g) với silica gel pha thường

bằng hệ dung môi phân cực tăng dan từ hệ hexan: etyl acetat (8:2 - 0:10), etyl acetat: metanol (10:0 — 5:5) thu được 6 phân đoạn được trình bày trong sơ đồ 2.1.

2.3.2 Sắc ký cột trên phân đoan EA.E của cao etyl acetat

Phân đoạn EA.F (3.5 g) của cao etyl acetat được sắc ký cột silica gel, giải ly bằng hệ dung môi phân cực cloroform: metanol: nước (8:2:0.1).

Kết quả sắc ký lớp mỏng cho thay phân đoạn EA.F1 và EA.F3 có các vết chính rõ, đẹp Do đó được chọn dé sắc ký cột Các phân đoạn còn lại sẽ được tiếp

tục khảo sát sau.

2.3.2.1 Sắc ký cột trên phân đoạn EA.F1 của cao etyl acetat

Phân đoạn FI của cao ctyl acetat (580 mg) được sắc ký cột silica gel nhiều

lần, giải ly bằng hệ dung môi cloroform: metanol: nước (8:2:0.1), kết qua sắc ký cột

được trình bay trong bang 2.2

Bang 2.2: Kết quả sắc ký cột silica gel trên phân đoạn EA-FI

Dung môi Trọng lượng Nhận xét

*

C:M:N (8:2:0.1) 68 Vết đài Không khảo sát C:M:N (8:2:0.1) Một vết chính Sẽ khảo sat sau

C:M:N (8:2:0.1) › Cô lập được EREC-EA2S

39- SĨ C:M:N (8:2:0.1) Nhiều vết Không khảo sát

Hợp chất EREC-EA25 (10 mg) có dạng tỉnh thê hình kim màu vàng tan

trong metanol

2.3.2.1 Sắc ký cột trên phân đoạn EA.F1 của cao etyl acetat

Phân đoạn E3 của cao etyl acetat (720 mg) được sắc ký cột silica gel nhiều

lần, giải ly bằng hệ dung môi cloroform: metanol: nước (8:2:0.1), kết quả sắc ký cột

được trình bày trong bảng 2.3

Bảng 2.3: Kết quả sắc ký cột silica gel trên phân đoạn EA-E3

Phan | Số thứ Dung môi Trọng lượng Nhận xét

2.4 KHẢO SÁT CÁU TRÚC HÓA HỌC CỦA CÁC HỢP CHÁT CÔ

LẬP ĐƯỢC

2.4.1 Khảo sát cầu trúc hóa học của của hợp chất 1 (EREC- EA25)

Hợp chat 1 thu được từ phân đoạn EA.F của cao etyl acetat, có đặc điểm sau:

- Hop chất 1 có dang tinh thé hình kim, mau vảng, tan trong dung môi

metanol.

- Nhiét độ nóng chảy: 231- 232 °C.

- Sắc ký lớp mỏng giải ly bằng hệ dung môi cloroform: metanol: nước (8: 2:

0.1) hiện hình bằng dung dich acid H;SO; 30%, say ban ở 100°C cho một vết màu vàng có giá trị Re= 0.5; và hiện hình bằng dung dịch FeCl;/ ancol, sây nhẹ cho một vết mảu xanh đen.

Phô 'H-NMR (CD;OD) (Phụ lục 1, 1A, 1B), phé 'C-NMR (CD,OD) (Phụ luc 2), pho HSQC (Phu luc 3), pho HMBC (Phu lục 4, 4A, 4B, 4C) được

trinh bay trong bang 2.4

s* Biện luận cau trúc:

Hợp chat 1 có sắc ký lớp mong khi hiện hình băng dung dịch acid H,SO, cho một vết màu vàng hiện hình bang dung dich FeCl;/ ancol, cho màu xanh den, nên hợp chat 1 có thé là một flavon.

> Pho 'H-NMR có năm tín hiệu proton nằm trong vùng từ trường 8, 6.5-§

ppm, là tín hiệu của proton gắn với vòng thơm.

- Tin hiệu mũi đối tại õ;; 6.21 (1H d, J = 1.5 Hz) và mũi đơn tại 4;; 6.39 (1H,

s) thể hiện 2 proton ghép cặp mera của vòng A là H-6 và H-8.

- Hai tín hiệu mũi đôi tại ồ;; 7.71 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-2’), 5, 6,84 (1H, d, J =

8.5, H-5°) va một mũi đôi-đôi tai 8), 7.59 (1H, dd, J = 6.5; 2.0, H-6”) của hệ

thong ghép ABX cho biết rằng có nhóm thể tai vị trí 3° va 4° trên vòng B.

- Pho ‘H-NMR còn có | mũi đôi tại 5, 5.24 (1H, đ, J = 7.5) là tín hiệu của

proton anomer H-1”’, kết hợp với các tín hiệu trong vùng từ trường ð¡; 3.8 ppm cho biết có sự hiện điện của một đơn vị đường.

3.2-> Phố 'ÌC-NMR cho thay hợp chất 1 có 21 carbon.

nghiệm của hợp chất quercetin 3-0-/-D-glucopyranoside!

Có 15 tín hiệu carbon nằm trong trường thấp (>90ppm) Trong đó có 14

carbon thơm của phan aglycon trong vùng tir trường 5¢ 90-170 ppm, một

carbon carbonyl >C=O tại õc 179.6 4) một carbon acetal õc 104.5

(C-1”) Các tín hiệu còn lại nằm trong vùng trường cao (60-80 ppm) củng cô nhận định hợp chất có mang một đơn vị đường.

Carbon metylen -CH,— mang oxy tại ðc 62.7 ppm là C-6 của đường glucose

Tín hiệu carbon tứ cap tại d¢ 135.7 ppm là tin hiệu đặc trưng của C-3 của

khung flavonol

Phỏ HMBC cho thay tín hiệu tương quan của proton anomer C-]*` của đơn

vị đường với C-3 của khung flavonol ở ồc 135.7 ppm, chứng to flavonol này

có mang nhóm đường ở C-3

Phân tích các dữ liệu pho nghiệm của hợp chat 1 và so sánh với số liệu phd

5153343) được trình bày

trong bảng 2.4, cho thay sự tương đồng.

Vậy, cau trúc của hợp chat 1 được đẻ nghị là quercetin 3-Ó-/@-D-glucopyranoside.

Bang 2.4: Pho 'H, '°C-NMR và HMBC của hợp chất 1.

Hợp chất có dang bột vô định hình mau vàng, tan trong dung môi metanol.

Sắc ký lớp mỏng giải ly bằng hệ dung môi cloroform: metanol: nước (8: 2:

0.1) hiện hình bằng dung dịch acid H;SO; 30%, say ban & 110°C cho mét vết mau vàng có giá trị Re= 0.4; và hiện hình bang dung địch FeCl;/ ancol, sây nhẹ cho một vết mau xanh den.

Phổ 'H-NMR (CD:OD) (Phụ lục 5, SA, 5B, 5C), phố C-NMR (CD,OD)

(Phụ lục 6, 6A), phô DEPT-NMR (Phụ lục 7) phô HSQC (Phụ lục 8, 8A), phô HMBC (Phụ lục 9, 9A, 9B, 9C, 9D) được trình bày trong bảng 2.5.

Biện luận cầu trúc:

Phô 'H-NMR của 2 tương tự với phô của hợp chất 1, cũng chia ra hai vùng

tín hiệu rõ rệt

Trong vùng từ trường 5), 6.5-8.0 ppm, có sự khác biệt ở cấu trúc nhân thơm của vong B Phé 'H-NMR của 2 xuất hiện hai tin hiệu mũi đôi, ghép cặp

orto với nhau tại ồy 8.08 (2H, d, J = 8.5 Hz) và 6.92 (2H, d, J = 9 Hz) lần

lượt là tín hiệu của proton H-2’, 6` và H-3`, 5°

Trong vùng từ trường 5y 3.0-5.0 ppm xuất hiện thêm các tín hiệu khác Tin

hiệu ở 5); 4.53 (1H d, J = 1.5) là tín hiệu của proton anomer thứ hai H-1``",ngoài ra tai 6, 1.14 (3H, đ, J = 6.5 Hz) là tin hiệu đặc trưng của proton nhóm

metyl H-6'*` của đường rhamnopyranose Từ đây, có thé xác định hợp chất 2

có thêm một đơn vị đường ơ-L-rhamnopyranose

>» Pho “C-NMR kết hợp phô DEPT-NMR cho thấy hợp chất có 27 carbon.

Ngoài tín hiệu tương tự như phô C-NMR của hợp chất 1, hợp chat 2 còn

xuất hiện thêm một carbon acetal dc 101.0 (C-1°"’), bốn carbon metin mang

oxy trong vùng õc 65-80 ppm (C-2°**; C-3°"*; C-4°"*; C-S"ˆ'), và một carbon

metyl bão hòa dc 16.5 ppm (C-6"") Đây là tín hiệu đặc trưng của phan

đường L-rhamnose

- Tín hiệu của -CH;ạ- xuất hiện tại ồc 67.2 ppm, kết hợp với ph6 HMBC cho

thay proton anomer thứ hai H-1°" cho tương quan với C-6” chứng tỏ đơn vị

đường thứ hai gắn với đơn vị đường thứ nhất qua cầu nối 1-6.

So sánh số liệu phổ nghiệm của hợp chất 2 với hợp chat 1 và với

kaempferol 3-O-f-D-rutinoside!'****"! được trình bày trong bảng 2.3 cho thấy sự tương đồng.

Vậy cấu trúc của EREC- EA26 được đề nghị là kaempferol 3-O-8-D-rutinoside.

Bang 2.5: Pho 'H, 'ÌC-NMR và HMBC của hợp chat 2.

Kaempferol 3-Ó-/-D-rutinoside

CHƯƠNG 3:KET LUẬN

Quá trình nghiên cứu cây Nam sâm đứng Berhaavia erecta L thuộc họ

bông phan (Nyctaginaccae), thu hái tại Thù Đức, đã thu được kết quả sau:

3.1 CÔ LẬP CÁC HỢP CHÁT HỮU CƠ

Phần thân lá cây Nam sâm đứng tươi sau khi phơi khô, được điều chế thành

cao metanol bằng phương pháp ngâm dầm ở nhiệt độ thường Kế đó sử dụng

phương pháp trích lỏng- long đẻ phân chia cao metanol thành các loại cao khác

nhau Thu suất của các cao so với cao metanol ban dau: cao ete dau hóa (15.55%).

cao etyl acetat (10,24%) và cao metanol còn lại (65,31%)

Cao etyl acetat được lựa chọn đề nghiên cứu trong khóa luận này Từ cao etyl acetat, bằng phương pháp sắc ký cột silica gel đã tách được thành 6 phân đoạn.

Phân đoạn EA.F đã được lựa chọn dé tiếp tục nghiên cứu.

Từ phân đoạn EA.F đã cô lập được 2 hợp chất, ký hiệu là EREC- EA25 và

EREC- EA26

Sử dụng các phương pháp hóa lý hiện đại NMR (một chiều và hai chiều) kết hợp so sánh với các tài liệu tham khảo, đã xác định được cấu trúc các hợp chất

hữu cơ cô lập được như sau:

- EREC- EA25 là quercetin 3-O-§-D-glucopyranoside

- EBREC- EA26 là kaempferol 3-O-/-D-rutinoside.

HO

Quercetin 3-2-/-D-glucopyranoside Kaempferol 3-Ó-ø-D-rutinoside

3.2 CÁC HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO

Vì điều kiện thời gian và vật chat hạn chế, nên trong phạm vi của bài khóa

luận này, chỉ khảo sát một phân đoạn của cao ety! acetat.

Trong thời gian tới, chúng tôi sẽ tiếp tục tiễn hành khảo sát thành phần hóa

học và thử hoạt tính sinh học trên các phân đoạn cao còn lại của cao etyl acetat và

các loại cao khác.