Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat của cây phèn đen Phyllanthus reticulatus poir. Họ thầu dầu (Euphorbiaceae)

BỘ GIÁO ĐỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINHKHOA HÓA HỌC -2 BÉ C- KHÓA LUẬN TOT NGHIỆP KHAO SÁT THÀNH PHAN HÓA HỌC CAO ETYL ACETAT CUA CAY PHÈN DEN PHYLLANTHUS RET

BỘ GIÁO ĐỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA HÓA HỌC

-2) BÉ (C-)

KHÓA LUẬN TOT NGHIỆP

KHAO SÁT THÀNH PHAN HÓA HỌC CAO

ETYL ACETAT CUA CAY PHÈN DEN

PHYLLANTHUS RETICULATUS POIR.

HO THAU DAU (EUPHORBIACEAE)

Giang viên hướng dan: TS Nguyễn Thi Ánh TuyếtXinh viên thực hiện : Bui Huy Hoang

Ma số sinh viên : K37.201.039

Tp Hỗ Chí Minh tháng 5 nam 2014

Khóa luận tốt nghiệp ¬ Bùi Huy Hoàng.

LỜI CẢM ƠN

Nghiên cửu được thực hiện tại phòng thi nghiệm Hap chất thiên nhiên, khoa Hóa học,

trường Dai học Su phạm thành pho 16 Chí Minh.

Với tam lòng tran trọng và biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cam ơn Co Nguyễn Thi

Anh Tuyết, người Cô luôn hết lòng tận tình hướng dan giúp đỡ tạo mọi dieu kiện thuậnlợi giúp em hoàn thành tốt để tai nay Cô không nhừng truyền đạt cho em những kiến thứckhoa học, những kinh nghiệm nghiền cứu quý bau mà còn là tim lòng nghiên cửu khoahọc giúp cho em có những hành trang cần thiết trên hước đường L3” cứu ke học Ki

Cảm ơn Thầy Bui Xuân Hào Thay Duong Thúc Huy và Có Lẻ Thị T

va cho em những ý kiến quý bau để em hoàn thành đẻ tải của minh

Im xin het long cảm ơn quý Thay Cô khoa Hỏa học - trường Dai học Su phạm thành

pho Hỗ Chi Minh, các Thay Có đã hết lòng hướng dẫn giảng day truyền thụ cho em nhiều

kien thức khoa học quy bau trong suốt thon gian em học tại trường.

im xin gui lời cam ơn đến các bạn trong phòng thí nghiệm Hop chất thiên nhiềnTrường đại học Su phạm thành pho Hỗ Chí Minh đã tận tỉnh trao doi những kinh nghiêmquý bau và tạo mọi điền kiện giúp đỡ em trong suốt qua trình thực hiện dé tải

Khoa luận tt nghiện

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIEU VÀ CHỮ VIET TAT

DANH MỤC CAC BANG

DANH MỤC CÁC SƠ ĐÓ

DANH MỤC CÁC HÌNH

DANH MỤC CÁC PHU LUC

LỜI MỜ ĐẦU S§22E%(GS:PESSSS232233984697.0193798W97884075043193629146893909/1728E

HƯỚNG 1 TGNGOUINceccreeeeeeecaeerrererroeeenreroenroree

11 ĐẶC DIEM PHUC VAT CAY PHI NDE N vsevossieanssaveeanasivnvsinveavenasaeees

1.1.1 Mota chung eee

1.1.2 Vùng phản bỏ : 2as8Ss74/7803588180i55 257748178

L2 CÁC NGHIEN COU VÉ DU ac FINI ÿ82/206538048882819ÿ eee

1.2.1 Duge tinh theo y học cô truyền sai

1.2.2 Nghiễn cứu về được tỉnh 88838834358âA3588â388286

13 CAC NGHIÊN COU VE THANE PHAN HOA HOC ¬"ã

CHUONG 2 THUC NGHIEM

2.1 HÓA CHAT THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP ti: ˆN HÀNH

2 212 2 - Thiết bi is ceae seats :

1.3 eda = lien hành

_ Thu hai nguyên liệu

> Nur li mẫu nguyên liệu

“pin CHE CÁC LOẠI CAO

te

iv

44.1 Sắc ky cót sillica gel trên cao ety) acetat

12 Sắc ky cột trên phân đoạn EAA của bảng 2

.#.3 Sắc ký cot trén phản đoạn Í: của bang 3.,

„3.4 Sắc ky cốt trên phản đoạn G của bang \,

CHƯƠNG 3 KET QUA VÀ THAO LUẬN.

31L KHẢO SAL CẤU TRÚC HOP CHAT P6

X3 KHAOSAE CẤU TRÚC HOP CHAL PI

13 KHẢO SÁT CẢI! TRÚC HỢP CHAT PLO

CHƯƠNG 4 KET LUẬN VA DE XUẤT

4.1 KIYT LUẬN coc ccc ccc cece cree case sec Mà

423 DE NUẤT

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

CỔ LẬP CÁC HỢP CHAT HỮU! CÓ LRONG C AOI: ryL ACL TAT

Bia tha: Hoang

tu

w |2 t2 ts

“ws

+ + os

ie Ä&© <<

„l0

Khóa luận tắt nghiện

Proton (1) Nuckear Magnetic Resonance

Carbon (13) Nuclear Maenetic Resonance

Distortionless Enhancement by Polarization

Transter

Correlation Spectroscopy

Ieteronuclear Singke Quantum Correlation

Heteronuclear Mutuiple Bond Coherence

Nuclear Overhauser ¢ftcet spectroseapy

Ihgh-Resolution Electrospray fenization

Mass Spectrometn Singlet

Doubler

Triplet

Double of doublet

Muliplet Broad singlet

Chemical shit

Coupling constant

Par per million

Reversed Phase 1Ñ Uhra Violet

DANH MỤC CAC KY HIEU VA CHỮ VIET TAT

Bùi Huy Hoàng —

Mii da Mai dun rùng:

Do chuyén dich hoá hoe

Hang số phép spin Mat phản mot triệu

Pha dao C-18 Pia cực tim

Vier dâu tod

fivl acetat Cloroform

Metane!

Hexan

Sắc ky cót

Sắc ký lap móng

Khóa luận tốt nghiệp ¬ _ Bùi Huy Hoàng

DANH MỤC CAC BANG

Bang 1 Một số hợp chất đã được có lap từ cây Phen den PM dt reticudatus Đọà, 5

Bang 2 Sắc kí cột silica gel trên cao ethyl acetate SữïvdöNiiSqz8:460ö5g6i149830g80080i0888 II

Bang 3 Sắc ki cột sillicage! trên phan đoạn EAS (25.4 g) của bảng 2 12

Bang 4 Sắc kí cột sillicavel trên phần đoàn E (2.0g) của bảng 3 2 Bang 5 Sac kỉ cột sillicagel trên phan đoạn G (2.7g) của bàng 3 lầ

Bang 6 Dữ liệu phd của hợp chất P6 óc 2c 16 Bang 7 Da liệu pho của hợp chất PIO và PLD cece ccc ceceeceeceeeseesesnennnensenneans 21

Khóa luận tot nghiệp " Bùi Huy Hoang

DANH MUC CAC SO DO

Sedo | Quy trình điều che cao ether dau hoa va etl AC€EAEC, cccceeeeree iy

Sơ đỏ 3, Quy trình có lập ba hợp chat P6, P10 và PỊT, s55 Sccc cc-reee 13

Khoa luận tot nghiệp - Bùi Huy Hoang

DANH MỤC CÁC HÌNH

IinN:lfL lUÑ'ñnj0fiDHETIDET Liiisiissicesscisnssiiai:s2si2122n6i 5556 12511542452511225ã1445A542ã15ã838ã515388392335A 2

Liitii 3 Cay phén den được trông làm hàng rảo tYiravtrsigtviait¿attdgift2iaErt 3

Hình 3 Một sé tường quan IIMBC của P6 - 5 S2 22c 15

Hình 4 Một so tương quan HMBC của P1N 55 cv 2t ccscrvcrsrrrerrrerrrree l§

Hình 5 Một số tương quan HMBC của P) - So cc cu secriecerrrrrrrerrrrrrrees 20

Hình 6 Một số tương quan NOESY của hợp chat PHI ee |

Hinh 7 Một số tường quan NOESY của hợp chat PIO cece cee ceseeeceseseceeeeneees 21

Khóa luận tốt nghiệp Bùi Huy Hoang

DANH MUC CAC PHU LUC

Phụ lục 1 Phố ‘HENMR eta hợp chất P6

Phụ lục 2 Pho "C-NMR của hợp chất P6

Phu lục 3 Phỏ DEPT-NMR của hợp chất P6

Phụ lục 4 Pho COSY của hợp chất P6

Phụ lục 5 Pho HSQC của hợp chat P6

Phụ lục 6 Phd IIMISC của hợp chất P6

Phụ lục 7 Pho TIR-ESI-MS của hợp chat PII

Phụ lục 8 Pho "H-NMR của hợp chất PH

Phụ lục 9 Pho ' 'C-NMR cua hợp chat P11

Phu lục 10 Pho DEPT-NMR của hợp chat PHI

Phu lục 11 Pho COSY của hợp chat PIM

Phụ lục 12 Phả HSQC của hựp chất PH

Phụ lục 13 Pho HMBC của hợp chất PII

Phu lục 14 Phả NOESY của hợp chất P11

Phu lue 15 Phả HR-ESIEMS của hop chat P10

Phu lục 16 Phé ‘H-NMR của hợp chat P10

Phụ lục 17 Pho “C-NMR của hợp chat PIO

Phu lục 18 Pho DỊP -NMR của hyp chất PHÙ

Phu lục 19 Pho COSY cua hợp chút P10

Phu lục 30 Pho HSQC của hợp chat P10

Phụ due 21, Phố HMBC của hợp chất PHI

Mh lục 33 Pho NÓI SY cua hap chat P10

Khóa luận tốt nghiệp Bùi Huy Hoàng

LỜI MỞ ĐÀU

Từ lâu Y học dan gian đã phát hiện khoảng 20 loại cây cỏ có khả nang chữa trị viêm

gan trong đó dang chú ý là các loài thuộc chỉ Phyllanthus (họ Thầu dau, Euphorbiaceae).

Các loài cay thuộc chi Phyllanthus được sử dụng rong rãi trong y học dan tộc của nhiều nước như chữa bệnh than tiểu đường, viêm gan B, [5] Chi Phyllanthus có trên 700 loài 26m từ những cây thân thảo đến cây bụi hay cây gỗ nhỏ Ở Việt Nam có 44 loài, các loài

dang được chú ý nhiều hơn cá là Phylianthus amarus Schum et Thonn (cây Diệp ha châu

ding) Phyllanthus urinaria L (cây Diệp ha châu ngọU và Phvflanthus reticulatus Poir.

{cay Phén đen) [7]

Cây Phèn den (PAyilanthus reticulatus Poir.) là cay thuộc chi Phyllanthus đã va dang,

được dùng trong Y học cô truyền của Việt Nam va nhiều nước trên thẻ giới Các bộ phận

của cây đều được sử dung lam thuốc: re Phén den thường được dung trị viêm ruột ruột kết hạch viêm gan viêm thận La cay thường dùng chữa sót phủ ứ máu máu nóng sinh

mụn nhọt V6 thân được dùng dé chữa lên đậu có mủ va tiêu tiện khó khăn [3 4] Phèn den

thuộc loại cây ở vùng nhiệt đới châu Á nên có phân bỏ rat rộng có thẻ tim thay ở vùng

Đông Nam A, Nam Trung Quốc, Tây va Nam Phi Ở nước ta Phén den mọc hoang ở ven rừng hay bir bụi khắp mọi miền hoặc được trong lam hang rao [4].

Tuy nhiên các công trình nghiên cứu vẻ thành phan hóa học cua cây Phen den còn chưa

nhiều Chỉnh vi vậy ma cay Phén den được chọn de nghiên cứu trong đẻ tải nảy với mong

muon làm rõ thêm thành phan hóa học, từ đó hiểu thêm vẻ tác dụng chừa bệnh của cây vả

dong góp những chứng cứ khoa học có giả trí vào kho được liệu của Y học dan tộc Việt

Nam.

Khóa luận tốt nghiệp Bùi Huy Hoàng

CHUONG I

TONG QUAN

1.1 ĐẶC DIEM THỰC VAT CAY PHEN DEN [4]

Tên thong thường: Phén den

Tên gọi khác: nỗ, sáp trang thảo, tao phan diép, diệp ha chau mang, co ranh (tiếng

Thai), may tẻng dam (tiếng Tay), ché noc

Thuộc họ Thau dau (Euphorbiaceae)

Tên khoa học: Phyllanthus reticulatus Poir.

1.1.1 Mô tả chung |4]

Phèn đen là cây bụi mọc tự nhiên ở bờ bụi, ven đường, ven rừng, cây cao 2-4 m, cành

gây mảnh đen nhạt, đôi khi họp từ 2 đến 3 cành trên cùng một đốt dài 10-20 cm.

Lá có hình dang thay đổi, hình trái xoan, hình bầu dục hay hình trừng ngược nhọn, hay

tù ở hai đầu, phiến lá rất mỏng, dai 1,5 - 3 cm, rộng 6 - 12 mm, mặt trên có màu sam hon

mặt dưới, lá kèm hình tam giác hẹp.

Cụm hoa hình chùm, mọc dưới nách lá, riêng lẻ hay xép 2-3 cái một Quả hình câu, khi

chin màu den, dài 5 mm, rộng 3 mm Hạt hình 3 cạnh màu nâu, có những dém rất nhỏ.Cây ra hoa kết qua từ thang 8 -10 hàng năm

1.1.2 Vùng phân bố [4]

Phèn đen thuộc loại cây ở vùng nhiệt đới châu A nên có phản bố rất rộng, có the tìmthay ở vùng Đông Nam A, Nam Trung Quốc, Tay và Nam Phi

Khóa luận tốt nghiệp Bùi Huy Hoàng

O nước ta, Phén đen là loại mọc hoang ở

ven rừng hay bờ bụi khắp mọi miền hoặc đượctrong làm hang rao, làm thuốc nhuộm hoặc làm

thuốc trị bệnh nhở giàu dược tính.

Cây Phèn đen được trông bang hạt

Hình 2 Cây phèn đen được trồng lam hang rao

1.2 CÁC NGHIÊN CUU VE DƯỢC TÍNH

Các loai cây thuộc chi Phyllanthus (Euphorbiaceae) được sử dụng rộng rãi trong y học

dân tộc của nhiều nước như chữa bệnh thận tiểu đường viém gan B [5] Trong đó, cácloài được dùng làm thuốc nhiều hơn cả là Phyllanthus amarus Schum et Thonn (cây Diệp

hạ châu đăng) Phyllanthus urinaria L (cây Diệp ha chau ngot) và Phyllanthus reticulatus

Poir (cây Phẻn đen) [2].

1.2.1 Dược tính theo y học cô truyền [3,4]

Phèn đen vị dang chát, tính mát, có tác dụng làm se, giảm dau, sát khuản, giải độc Chủ

trị làm thuốc cầm máu, chữa đậu mùa, chữa viêm cầu thận, chữa ly, tiêu chảy Trong đó rễ

Phén đen có vị chát, tính lạnh, có tác dụng tiêu viêm Lá Phén đen có tác dụng thanh nhiệt

giải độc, sát trùng, lợi tiểu

Cách dùng: Bộ phận dùng làm thuốc chủ yếu là rể và lá Vỏ thân cũng được dùng làmthuốc Thuốc được thu hái vào mùa thu, đem rửa sạch, thái nhỏ phơi khô cắt sử dụng dan;

lá được thu hái vào mùa hẻ, phơi trong bóng ram (âm can), vỏ thu hoạch quanh nam

Một số bài thuốc theo y học cỗ truyền:

Chita kiết ly: dùng rễ cây Phén đen, dây mơ lông, cỏ seo ga, cỏ tranh bằng nhau, mỗi vị

20g, gừng 2 lát 2g - sắc uống (Nam dược thần hiệu)

Chữa máu tụ trong cơ thẻ: lá Phèn đen già nhỏ, chế rượu vào va vắt lấy nước uống(Bách gia trân tàng) hoặc dùng 40g sắc rồi chế thêm một chén rượu - uống.

Chữa nhọt độc mới phát: lá Phèn đen va lá Bèo van giã nát rồi đắp (Bách gia tran tang)

Chữa nhiệt tả và ly: cay Phén đen cả cành và lá, đậu đen sao, mỗi thir 40g, 46 4 bát nước

sắc lay | bát, chia ra uéng làm 3 lân (Hoạt nhân toát yêu của Hoàng Đôn Hòa).

Chữa đại tiện ra máu: cây Phèn đen cá cảnh và lá, thái nhỏ 3 bát, sắc đặc uống (Bách

gia trần tảng).

~

Khĩa luận tốt nghiệp Bui Huy Hoang

Chữa chay máu nướu rang: la Phen den phot hep với là Lang não và kt Xuyên tiêu phơi khĩ che thành viên rồi ngậm.

Lrị rắn căn: là Phén den tươi nhái nat nuốt hét nước rủi lay ba đắp lên chỗ rắn can

Chữa don đánh ứ máu: lá phen den 40g, giã nát, thêm 1 chén rượi, ép vất lây nước cho trồng,

Trị bệnh trí; Lay lá Phen den | nam, là trắc bách điệp | nắm, la huyệt dụ 7 là Sao váng

ha tho sau sắc lấy nước uống | bát, nước cịn lại dùng đề rửa vùng bị trì ngày 1 - 2 lần

Trị chảy máu nướu rang: Lay lá Phén den khơ ngàm cĩ thẻ phối hợp cả lá long não và

lá xuyên tiếu.

Tr nhọt độc mới phát: Ding lá Phén den cùng với lá bèo ván gii dap vào nơi phat

đình.

Pri chân thương: Lay la Phen den giã nat dap vào nơi sưng dau (theo Hải Thượng Lan

Ong trong “Bach gia trần ting”)

Trị vet thường sưng dau: Dùng là Phén den Kho tain bot rig vie vét thương ngày Ì - 2

lăn sẽ chĩng Minh và nhanh lên da non.

[ri tiêu tiện kho khăn: Lay vo than cây Phen den 20 - 0p sac lẫy nước aịng ngày |

thang cbia 2 - 3 lần trong ngây.

Ngã va dap sưng daw Lay 30g lá Phén den giả nat dip vào vúng bi tốn thương trong

vịng 39 phat Lam 3 npay hen đến khi hết sưng dau

1.2.3 Nghiên cứu về được tỉnh

Năm 1997, E Omulokoki và cộng sự [8| đã sử dụng dich chiết mettnol từ la của lồi

Phyilanthus reticudates Đọr để Khao sát kha năng chong ky sinh trung xĩt rét Pasmodiam

Jaletpartn cho ket qua iC 10ne/ml.

1.3 CACNGHIEN CUU VE THANH PHAN HOA HỌC

Chi Madanthus he (hau dau (Euphorbiaceae) co trên T90 loại gêm từ những cây thần

thao én cây bụi hay cây gỗ nhỏ O Việt Nam cĩ 44 lồi các loại đáng được chú ý nhiều

hơn cả là Phillanthuy amarus Schum et Thonn tedy Tiện ha châu dang) Phyilaashes

wrinavia b (eas Điệp hà châu nwoo và PAvilantins reticidates Poir (cay Phen den} [ 7}.

Các nghiên vưu vẻ thành phan hĩa hoc của lồi Phvtleathay reticulates Poir được trình

bay trong bang sau.

Khoa luận tốt nghiệp Bùi Huy Hoang Bang 1 Một số hợp chất đã được cô lập từ cây Phèn den, Phyllanthus reticulatus Poir.

Khéa luận tốt nghiệ Bùi Huy Hoang

Cac công thức cầu tạo một số hợp chất trong cây Phyllanthus reticulatus Poir

Khóa luận tót nghiệp Bùi Huy Hoang

tag! Yu), H2 cH, ne eH,

Lupeol (17) Taraxerol acetat (18) 'Taraxeron (19)

Khoa luận tot nghiệp

Khoa luận tốt nghiệp Bùi thụ: Hoang

CHƯƠNG 2

THUC NGHIEM

2.1 HOÁ CHAT, THIET BỊ, PHƯƠNG PHÁP

2.1.1. Hoá chất

Silica gel: silica gel 60 0.04-0.06 mm Merek dùng cho cột sắc kí

Silica gel pha dao, RP-18 Merck dùng cho sắc kí cột,

Sắc kí bang móng loại 25DC - Alufolein 20<20, Kiesel gel 60F Merck.

Sắc kí bang mang loại 25DC RP-L& Merek.

Dune mo: dùng cho qua tinh thi nghiệm gồm: ete đầu hoa, etanol,

cloroform, ety] acetal, aceton, metanol và nước cat.

2.1.3.1 Phương pháp phân lập các hyp chat

« NMư dụng AS thuật SKC silica gel pha thương, pha dao RP-1TS ket hợp SKEMI

- Phat hiện chat bang den tử ngoại ở hài bước song 254 nm và 365 nm hoặc dung thuốc

thư kì dung dịch Hiss, 20".

2.1.3.2 Phương pháp xác định cầu trúc hoa học các hợp chat

- Pho công hưởng tứ hạt nhân: 'H-NMR (500 MIH2), C-NMR (135 MHz) 2D-NMRtại Phòng NMR, Viện Hỏa Học, Viện KII-CN Việt Nam, số 18 Hoàng Quốc Việt, Cau

Giấy, Hà Nội và Phong thí nghiệm Phan tích trang tâm Dai hoe Khoa học Tự nhiên, xế

337 Nguyễn Van Cử QS Tp Hỗ Chi Minh

Khoi pho phan piát cao [IR-EƑSI-MS tat Phòng thí nghiệm Phan tích trung tạm Dai

hye Khoa học Tự nhiền, số 337 Nguyên Văn Caos, Tp Hð Chi Minh.

Bùi Huy Hoang

2.2 NGUYEN LIEU

2.2.1 Thu hai nguyên liệu

Mau cay dùng trong nghiên cứu khoa luận là la, thân va rễ cây Phén đen (PAyilanthus

reficulatus Poir.) được thu hái tại huyện Tan Liyên Bình Duong vào tháng 6/2013.

Mau cây đã được GŒS.IS Vé Văn Chỉ nhận đanh tên khoa học là *Phy/nhus

Reticulatus Poir.”, họ Thau dau (Euphorbiaceae).

2.2.2 Xử lý mẫu nguyên liệu

Mau nguyên liệu được rửa sạch loại bỏ phan sâu bệnh phơi khô trong bóng rim rồi xay thành bột mịn Sau đó tiễn hành ngầm chiết và phân lập các hợp chất.

2.3 DIEU CHẾ CÁC LOẠI CAO

La, thân và rẻ cây Phen đen (PhyHanthus reticulatus Poir.} được phơi khô chat nho vanghiền thành bột mịn say khô đến khỏi lượng không đôi (m = 26.0 kg) Nguyễn liệu bột

min được tận trích với etanol 96" bằng phương pháp ngdm dâm lọc và cô quay loại dung

môi dưới ap suất thấp thu được cao efanol tho (534.0 @)

Cao etanol thô được chiết long - long lần lượt với ete dau hoa, etyl acetat thu được cao

ete dâu hoà ($2.0 g), cao etyl acetat (118.0 g) va cao còn lại (294.0) Quá trình thực hiện

được tom theo sơ đỗ 1

Sơ đỗ 1 Quy trình điều chế cao ete dau hoa va ety! acetat

(294.0 gì

Khóa luận tốt nghiệp Bri Huy Hoàng

2.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHAT HỮU CƠ TRONG CAO ETYL ACETAT

2.4.1 Sắc kí cột silica gel trên cao ety! acetat

‘Thue hiện sắc kí cột (SKC) silica gel trên cao etyl acetat (118.0 2) với bệ dung môi rửa

giải ED 100%, CH;CI; 100% và CH›:C];:CH;OH có độ phan cực tăng dân từ 5% đến 100% metanol Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lo Theo đối quá trình giải ly bang sắc kí lớp mong (SKLM) Những lọ cho ket quả SKLM giảng nhau được gộp chung thành một

phan đoạn Kết quả thu được 9 phan đoạn (EAI-EA9) được trình bay trong bang 2.

2.4.2 Sắc kí cột sillica gel trên phân đuạn EA4 của bang 2

Phần đoạn EA4 cho SKLM nhiều vết nên phan doạn EA4 được thực hiện SKC sillica

gel với hệ dung môi rửa giải EDA 1:9 Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ Theo

đõi qua trình giải ly bằng SKLM Những lọ cho kết qua SKLM giống nhau được vom

chung thành một phan đoạn Kết quả thu dược $3 phan đoạn (A-M) được trình bảy trong

bang 3.

2.4.3 Sắc kí cột sillica gel trén phan doan E cua bang 3

Phan đoạn E cho SKLM nhiều vét tách rõ nên phan đoàn E được SKC sillica gel với

hệ dung môi rửa giải ED:EA 1:4 Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ Theo dõi qua

trình giải ly bằng SKLM Những lọ cho kết quả SKLM giong nhau được gom chung thành

một nhân đoạn, Kết qua thu được 3 phan đoạn (E1L-E3), được trình bay trong bang 4

Phan đoạn E2 có sắc ki lớp mong cho vét rõ đẹp mau tim an duéi vet do kéo thành đuối đài Fừ phân đoạn E2 (285.0 my) của bang 3 tiếp tục SKC nhiều lin với hệ dung mỏi EDA 1:1 thu được hợp chất kí hiệu là P6 (50.0 mg) có dạng hột mau trang, Quả trình

thực hiện được tóm tất theo sơ do 2.

Khĩa luận tor nehic¢p Bui Huy Hồng

Bang 3 Sắc kí cột sillicagel trên phân đoạn E.A4 (25.4 g) của bang 2

| Phân Dung mơi

đoạn giải ly Ghicke Sac ki lớp mỏng

Nhiều vet - Đã khao sat

Nhiều ver — Đã khào sát |

Nhiều vết Da khảo sát |

_ Nhiều vét Da _— sát

Nhiều vet

Nhiều vết Nhiều vết, tách ro _ Khảo sát

——————- -———-——~—~~~——†—~ OOO OOO ee; - _—_———

PDEA D4 | 05 Nhiều vet Đã khảo sát

EDEAI4 | 1Ơ | Nhiều vết Da khảo sát

| LA 10 | Nhicu vet | Đã Khảo sác |

| FA — | A | 1.5 | “Nhiều vet Dã khảo sát Í

Ghi chủ: EA (eIxi acetat), ED (ete đâu hou)

Bang 4 Sắc kí cột sillicagel trên phân đoạn E (2.0g) của bang 3

2 F2 | ED:EA I:$ | 285.0 | Một vết, tách rũ | Khao sat thu được Po

3 | E3 : É:EA I: 4 305 0 | Nhiễu vet mở | ( ura khao sat

G cha ED (tê dau kơØJ EA fend acetaus

2.4.4 Sắc hí cột sillica gel trên phan đoạn G của bang 3Phân doan G cho SKIM nhiều vet, tách rã nên phan dean G được SKC sillca gel với

hệ dung mỗi rửa giải CoMe 10:1 Dich giải ly qua cot được hứng vào các lọ, Theo doi qua

trình giải ly bằng SKLM, Những lọ cho kết quả SKM giống nhàn được gom chung thành

mot phan đoạn Kết qua thu được 7 phần đoạn (GI-C71 được trình bay trong bàng 4

Trong đĩ, phan đoạn G2 cĩ sắc ki lớp mĩng cho vét rõ dep mau tim an dưới vét de kéo

thành đuơi đái Từ phản đoạn G2 (307.0 mg) của bang 3 tiếp tục SKC nhiều lần với hệ

dung mot PA Me TT thu được hap chất ki hiệu là PE1 {10.0 my) cĩ dang bat mầu trang.

Qua trình thie hiện được tom tat thee sơ dé 2

Khoa luận tốt nghiện Bùi Hay Hoang

Phân đoạn G5 có sắc kí lớp mong cho vết rõ đẹp màu tim ấn dưới vết do kéo thành

đuổi mở Từ phản đoạn GS (50.0 mg) của bang Š tiếp tục SKC nhiều lần với hệ dung môi

Í:A:Me 10:1 thu được hợp chat kí hiệu la P10 {30 my) có dạng bột màu trang Quá trình

thực hiện được tom tất theo sơ đỏ 2

Bangs Sac ki cột sillicagel't trén phan doan G @ 7E) của bảng 3

Trọng

lượng

Dung môi

Sắc kí lớp mỏng

| C:Me 10:1 Nhiều vet mở Chưa Khảo sat

2 : C:Me 10:1 | | Mot vết, có đuôi đài | Khao sát thu được P11

3 ¿ Gd |C:Mel0I 205.0 Nhiều vet mở

Chưa Khao sát

Khảo sát thu được P10

Chua Khao sat

Chua khảo sat

4, G1 | OMe 10:1) 1500 | Nhiều vet me

—— 71 G7 | CMe lãi 1 303.0 | Nhicu vết mở

Ghi chú C tcùora ft, Me (metanol)

Sơ dé 2 Quy trình cô lập các hợp chất P6, P10 và PH

"“ẨỐÔÔôÔÔ

Nic hs ot viltca nel

xuat lì cba Lc blot

CS quay Lầu he dung to

Ifh 1D 1$; I; 2.0g by 37% Sy Ite 4p i Se Ì.ứy Sg

Sav hy ot silted pol Nc k€ cot salicu uel

Cooly drby Cink © Me

r

i GÌ G2 tu et Ga th 2?

“2S }X§me ThS Ning VN: Ngắn; {Su mi, Meng SiS: Wiäp

| i | © Nậc hs colt xitea ated | Sic Xš OM vi + cel

Nas AS Gel wales ae | `

Khoa luận tốt nghiệp — - lui Huy Hoang

CHUONG 3

KET QUA VA THAO LUAN

3.1 KHAO SÁT CẤU TRÚC HOP CHAT P6

Hop chat P6 (50.0 mg) thu được tir phan đoạn E2 của sơ dé 2 có những đặc điểm sau:

- Dang bot mau trang.

~ ÑKI.M với he giải ly C:Me 19:1 cho mat vét duy nhất, hiện hình với thuộc thứISO, 20% cho vết mau tim, soi đến tử ngoại cho vết mau tím sang rõ

Pho ‘H-NMR (CDChECD,OD phụ lục 1 và bang 6} 6) 807 CIEL» HO)

POGUE v H-3), 6.95/6.94 (1H, ud J = 8.0 Hz HS 681 OTH df 3/0 1z, 2-2" 6.77⁄6.761H1 ddd 8.00.5 Hz H-6') 6.08 và 6.44 (2H, x, 34 -O-CH:-O-) 5.38/5.37 và

ŠS346/5.45 (211 dd 15.0 Hz., H-9) 472(1H.2./- 7 5 eT") 4/05 (3H v S-ÓCH:),

3.79 HL», 4-ÓCH,); các độ chuyên dich khác được trình bay trong bảng 6

Pho “'C-NMR kết hop với DEPT (CDCH-CĐ/OD, phụ lục 2 3 và bang 61:

6, 1704 CO, C-91, 105.6 (OCHO-, C17), 101,1 132450-CH O-I, Độ chuyển địch

cla vác cacbon khác được tình baw trong hàng 6,

Pho COSY HSQC HMBC (CDCL+CD,OD phụ lục 4, Š và 6)+ BIEN LUẬN CẤU TRÚC

Hợp chất P6 (50.0 my) thu được từ phan đoạn E2 của sơ đó 2 có dang bột mau trang.

NKLM vớt he giải ly C:Me 19:1 cho một vet duy nhất khí hiện hình bảng HySO, 20%.

Pho ‘H-NMR của hop chat P6 thể hiện tin hiệu công hướng của Š proton vòng thơm

trong vũng ðy 8.07 =6/76 Trong đó hai proton công hướng dưới dang mùi dem tại ổy 8.07

LINH, xố FeO): 7406 C1 v, HH-3), Tín hiệu cộng hướng của vòng benzen mang 3 nhóm the ở

vị trị |, š và + lố:; 6 096 94J /J[E, 7= 8.0 Hz BRS), @ RT ODL / = 3 Hz DỊ").

O77 O71 da 6.0215 H¿ EO],

Nưoài ra, pho TENMR còn thé hiển su hiển diện của hai nhóm metoxv OCH, (35; 4.08 và 3.79) và của phần tự đường tổn ane 4.72: ða vu $72 3.49),

Pho 'TC-NMR ket hop với DEPT (CDCI) che thay hợp chat P6 có 36 cachon, Trong

đó có Lcacbon +CC O (6, 176.41; Š cacbon vòng benven màng oxy lộ 151.8 150.1 137.4

13 cacheon} và 144.6) 5 cachon metin của vòng thơm (ố, I3, T00, 100, 1105 và

133.4): 6 cacbon tử cấp của vòng thơm (5 )8K., 37/3, 128.2 130.6 1308, 136.31:

I cacbon của nhọm dioxvmeltvlen -O-Chh-O- (6, 101/12 1 cachon metylen mang oxy lồi 677E 2 nhóm metoxy (ốc 50,1 và ŠŠ6) và các cacbon của phản tự đường

(S¢ 66.4, O81, 71.5, 73.3),

14

Khóa luận tốt nphiệp —_ Bùi Huy Hoang

Pho ‘H-NMR, 'ÍC-NMR kết hợp với pho HSQC cho thay hợp chat P6 có nhóm

(Ì-C]Is<O (64 6.08 và 6.04, 61011)

Bên cạnh đó có sự tượng quan HMBC từ hai proton cộng hướng ở 6), 3.58/5.57 và

Š4@ 545 1-9) đến cacbon cộng hưởng ở 6, 1704 (2C OF 144.6 C=) và ốc 130.8

(Cs) Hai proton của nhóm dioxymetylen (6); 6.08 và 6.04) tượng quan đến cacbon cộng

hướng tại do, 47.44 Ce).

lừ các dir liệu pho trên cho phép dự đoán P6 là một lignan dạng arvnaphthalen có

gần một phản tử đường.

Proton của hai nhém metoxy (5) 4.05 và 3.79) cho tường quan HMBC lân lượt đến

har cachon công hưởng ở 6p 181.8 (C-Š) và Lã0,] (CA) Như vậy 2 nhóm metoxy gắn tại

vị tri C-4 và C-Š,

Vir các dữ hiệu pho nghiệm trên ket hợp số sảnh vớt so liệu pho cua các dẫn xuất của

diphyllin cho thay co xự tượng đồng nén chủng tôi de nghị P6 là glycoside có phan

adlveon là diphyllin.

Như đã trình bay ử trên, trong cầu trúc của hợp chat P6 có chứa mot phan tử đường.

Dua Vào su tương quan trong các pho COSY HSQC HMBC có thẻ xác định cúc cachon của phan từ đường (ố, TUS,/6, 73,3, 71.5, 68.1 và 66.41.

lương quan TÍMBC từ proton anomer của phan từ dường tỏi; 4.72) đến cacbon C-7

(3, 144.61 cho phép xác định phan tử dưỡng gan vào aglycon tại C-7.

Hãng so phép của proton anomer là 7.5 Hz cho thay rằng proton này ở vị trí trục.

Proton Ht" tậu 3.93) của phần tu đưỡng cong hưởng dưới dang mỗi đơn rong nên proton

Hes" ở vị trí Xích dạu Do đó phản từ đường nảy dược xác định là

Khĩa luận tốt nghiệp Bui Huy Hoang

Bang 6 Dữ liệu phơ của hợp chat P6

Pĩ (CDCI;:CD:OD) Phyllanthusmin C

F {CDCI} [17]

Vụ tì 8àpnmO hs EMD) =.

¡ (ppm) Š.-(ppm) ốc (ppm) (./-Hz)

* “Tin hiệu xuất hiện dạng cáp đo sự xoay quanh trục liền ket đơn C7+C1*[{111.

"Vin hiệu bị chồng chap,

3.2 KHAO SÁT CẬU TRÚC HỢP CHAT P11

Hop chất PU (100 mg) thu được từ phân đoạn G2 của sơ dị 2 cĩ những đặc diém sau:

- Dạng bột mau trăng.

SKLM với hệ giải ly C:Me 10:1 cho một vết duy nhất hiền hình với thuốc thứ

H-SO, 20% cho vết màu tím, soi đèn từ ngoại cho vết mau tím sang rõ

- Phơ 'H-NMR (CI,QD phụ lục 8 và bảng 7}: ð¿ 8.134 (TH ss, H6) 7.03/6.99 (1H s,

H-3), 6.93 CHỊ, d/o BO Via, H-YI, 6756/67 (CHÍ: ad J © 15 H¿ L2), 6.71

(1H edd f= 8.0/1.5 Hz H-G') 6.04 va 6.03 4H df L5, 3 A-O-CHL-O-), 5.54/5.53 va

16

Khoa luận tot nghiệp Bri Hav Hoàng

345/544 (2H, df = 15.0 H2, H9), Š.18 CITE bros, H47} 4.83 (TH, £/£ 9.5 EZ ED"),

4.501111 dd 6.5 Hữ TD") 3.73.70 HL OCH 3.17 0111 x, 3ˆ”-QCOCH,:: các

đỗ chuyên địch Khác được trình bảy trong bảng 7

- Pho “C-NMR kết hợp với DEPT (CD,OD, phụ lục 9 1Ò và bang 7}: 6 172.5

(°C OL 4"-OAe) 172.1 (eC O C-9), 107.0 (OCHO-, C-1} ốc 106.5 (-OCHO- C-1"").

102.6 (3⁄.4'-Ó-CH O-], 31.1 (CH:-, 4"-OAc) DO chuyên dịch của các cacbon khác được

trình bay trong hàng 7.

- Phố COSY ISỌC HMBC NOESY (CD,OD phụ lục L1 12 13 14).

- PhOTIR-ESI-MS (phụ lục 7) cho mũi ion giả phan từ ở m/s = 769,1759 [M+Nal

*% BIEN LUẬN CÁU TRÚC

lợp chat PED (10.0 my) thu dược từ phản đoạn G2 của sơ đỏ 2 có dang bot mau

trăng SALEM với hệ giải ly C:Me TU:] cho mốt vét duy nhất khí hiện hình bing TSO,

30%a,

Phố NMR của hợp chất PIL có các tin biệu thẻ hiển tượng tự như pho NMR của chat

Po chứng tỏ hợp chat PHP cũng: là một lignan.

Phê ‘H-NMR của hợp chat PLE cũng the hiện tín hiệu cộng hướng của Š proton vòng

thơm khủng Hpnan trong vũng ấy 8.14 - 6/71 Har proton không tượng đương cua nhóm

metylen trong vòng Licton công hướng tại dy, ŠŠ4/Š 53 (1H: df 1S0 The H‹9a) và

3.44/5.44 (TH 2 — 15.0 Hz H-9b), Ngoai ra pho'TENMR cũng thé hiện sự hiện diện

của nhom dioxxmetvlen -O-CH O- (ð;6 G vào 03) và hại nhom metoxv -OCH, (6); 3.99

và 3.7143, 70)

Bến cạnh đó, phố độ cùng cho thay sự hiện diện của hai phản tử đường được the hiệnqua tin hiệu công hương của hai proton anomer od), 4.83 và 4.50 cũng cúc proton +CH-O-

của phản tứ đường công hướng trong vũng dy 3.18 - 3.54, Ben cạnh đó, nhỏ 'H-NMR xuất

hiện un hiệu cone hương cua proion nhóm acetoxs L+OCOCH:| aay 2.17

Pho CC-NMIR kết hợp với DEPT (CD OD) cho thấy hep chất PHI có 33 cacbon,

Trên phố cảng suat hiện các tín hiệu tượng tự hep chat P6, do là các tin hiệu công hương

của cachon CO (ð, 172.16 Š cacben vòng benzen mang oxy [be 153-4, 157.7 149.0

12 cacBon) và 146.3): 5 cacbon metin cua vòng them (4 102.8 107,1, 109/0, 111.2721118

và 124.7): 6 cuchan tứ cập của vòng thơm (3, 120.0, 128.8 129,9, 131.9, 132.1, 137.61: | cachon của nhóm dioxvmetylen -O-CH;-O- (ð- 103,61; 1 cacbon metylen mang oxy (6,

ñ9 1Ị: 2 nhằm metoxy tả, 36.7 va 36.0) Bén cạnh đó phố đồ còn cho thấy tín hiệu cộng

lượng vực cacbon của phan từ đường (ò, 65,1, 66.9, 09.5, 73.5, 72,5, 72.7, 14,1, 81.6),

Ngớặi ra, phố để com suit hiển tia hiệu củng hướng cua} cacbon CC Khác tại, 173,5

43 7-CKXÁcT xà | cachon a6 +, CH 3”-ÐÁe),

17

Khóa luận tốt nghiệp Bui Huy Hoàng

Các tương quan HSQC, HMBC của hợp chat PIL có nhiều điểm tương đồng với hyp

chất P6 Tuy nhiên như đã trình bay ở trên trong cấu trúc của hợp chất P11 có chứa hai

phân tử đường Dựa vao sự tương quan trong các pho COSY, HSQC HMBC có the xác

định các cachon công hưởng tại ốc 107.0, 81.6, 72.2, 72.5 và 65.3 thuộc phân từ đường thứ nhất va các cachon cộng hưởng tại d¢ 106.5, 74.1, 72.7, 69.5 va 66.9 thuộc phân tử đường

thử hai.

Tương quan HMBC từ proton anomer của phân từ đường thứ nhất (õ¡ 4.83) đến

cacbon C-7 (ỏ 146.3) cho phép xác định phan từ đường thứ nhất gắn vào aglycon tại C-7.

Phan từ đường thử hai gắn vào phân tr đường thứ nhất tại C-3" (Se 81.6) được xác định

qua sự tương quan HMBC từ proton anomer của phân tử đường thứ hai (8), 4.50) đến

cacbon C-3" và ngược lại.

Hang số ghép của hai proton anomer lần lượt là 9.5 va 6.5 Hz cho thấy rằng hai

proton này ở vị trí trục Hai proton H-4" (6), 5.18) va HH-4”” (64 3.80) của hai phan từ

dường cộng hưởng dưới dang mũi đơn rộng nén hai proton H-4" va H-4”' ở vị trí xích đạo.

Pho NOESY giúp xác định thêm điều này qua các tương quan giữa H-1" (8), 4.83) và 13"

tổ 3.87), giữa 11-3" va H-4" Các tương quan NOESY tương ty cũng được the hiện trong

phan từ dưỡng thứ hai Do đó hai phan từ đường nay dược xác định đà

a-L-arabinopyranose.

Pho HMBC của PEI cho thay tượng quan 1% proton cộng hưởng tai dy 5.18 (111 brs.11-4") đến carbon cộng hướng ở &- 172.5 (4"-OAe) nên tại vị ui C-4" của phan từ đườngthử nhật đã được acetvl hóa

Phố HR-ESI-MS cho thấy mũi ion gia phan từ o mes © 709.1759 [M+Na|', phù hợp

với công thức phan từ (C:¡EH¿Ơ,, ® Na) với NI + Na = 709.1745.

Lữ các dữ liệu trên kết hợp với so sánh dữ liệu phố NMR của phyllanthusmin D [12]

thay có sự tương đồng nên cầu trúc của hợp chất PHT được để nghi là phvllanthusmim L),

Phyilanthusmin D (PET) Hình 4 Một so tương quan HMBC của hop chat PH

Khóa luận tốt nghiệp Bùi Huy Hoàng

3.3 KHAO SÁT CÁU TRÚC HỢP CHAT P10

Hợp chat P10 (20.0 mg) thu được từ phân doan GS của sơ đô 2 có những đặc điềm sau:

- Dang bột mau trắng.

- SKILM với hệ giải ly C:Me 10:1 cho một vét duy nhất, hiện hình với thuộc thử

JIsSO; 20% cho vết mau tím, soi đèn từ ngoại cho vet mau tím sang rõ

- Phổ 'I-NMR (CDCh+CD,OD, phụ lục 16 va bảng 7): 8) 8.16 (1H s 1-6), 7.07

(1H s, H-3) 6.96 (1H đ /= 8.0 Hz H-$}) 6.81 (1H, m H-2') 6.78 (1H dd J = 8.0/1.5

liz H-6'), 6.09 va 6.05 (2H s, 3.4-O-CH:-O-)., 3.60/5.59 và ŠS.47/5.46 (2H, d J = 15.5 liz, H-9), 4.74 (111, đ,./C8.0 Hz, H-I*") 4.45 (IIE ¿ J = 7.5 Hz, H-1""), 4.05 (3H, s, Š-

OCH,), 3.80 (311, s 4-QCH;): các độ chuyền địch khác được trình bay trong bang 7.

- Pho “C-NMR kết hợp với DEPT (CDCH;+CDÐ;OD phụ lục 17, 18 và bảng 7):

òc 170.6 (>CEO, C-9), 105.8 (-OCHO- C-["), be 105.1 (-OCHO- C-|”), 101.2

(3'4'-O-CH,-O-) Độ chuyên dich của các cacbon khác được trình bay trong bảng 7

- PhôCOSY, HSQC HMBC NOESY (CDC1,+CD,;0D, phụ lục 19, 20, 31 22)

Pho LIR-E:SI-MS (phụ lục 15) cho mũi ion gia phan tử ở mt = 667.1646 [MtNal]

+ BIEN LUẬN CAU TRÚC

Hop chất P10 (20.0 mẹ) thu được từ phan đoạn GS của sơ để 2 có dang bột mau

trăng SKLM với hè giải ly C:Me 10:1 cho một vét duy nhất khi hiện hình băng H.SO,

20%,

Pho NMR của hợp chat P10 có các tin hiệu the hiện tương tự như pho NMR của chất

PIL chứng tỏ hyp chat PLO cũng là một lignan.

Phỏ 'H-NMR của hợp chất PLO cùng thê hiện tín hiệu cộng hưởng của Š proton vòng

thơm khung lignan trong vũng 6) 8.16 ~ 6.78 Har proton không tương đương của nhóm

metylen trong vòng lacton cộng hướng tat 6; 3.60/5.59 (1H, d2 / = 15.5 Hz, 19a) và

§.47/5.46 OL ed J = 15.5 Hz lI-9b) Hai proton anomer cone hường tại 6, 4.74

H, dd > 8.0 7 HE") và 4.45 (1H ed 2 725 Hi H-E”?), Các proten =CH-O- của phần

tử dường vòng hướng trong vùng 0) 4.74 - 3.49,

Pho C-NMR kết hợp với DEPT (CDCL+CD OD) cho thay P10 có 31 cachon Frênpho cũng xuất hiện các tin hiệu tương tự hợp chat PUL, đó là các tín hiệu cộng hưởng của |

cacbon >C=Ó (ốc 170.6) 5 cachon vong benzen many oxy (ốc 1351.8 150.1, 147.4 (2 cacbon) và 144.8): Š cacbon metin của vòng thơm (6 1OL4 106.0 108.1 110.6 và

123.5); 6 cacbon tứ cap của vòng thơm (óc 118.9, 127.5, 128.3, 130.7, 131.2 136.4): |

cacbon của nhom địoxymetvlen {-O-CH»-O-) tại ốc 101.2: | cacbon metylen của vòng lacton (ốc 67.4%) 2 nhóm metoxy đồ, 36.1 và 53.7} va các cacbon cua phản từ đường (ốc

Gò.l 66.3, 68.0, 68.2 70.1 71.5, 72.7, 8371.

19