Khóa luận tốt nghiệp khảo sát thành phần hóa học cây me rừng phyllanthus emblica linn họ thầu dầu (euphorbiaceae

23 Trang 6 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU NMR Nuclear magnetic reasonance spectroscopy COSY Homonuclear shift correlation spectroscopy HMBC Heteronuclear multiple bond correlatio

TỔNG QUAN

ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT

Tên thường: cây me rừng

Tên gọi khác: chùm ruột núi, dư cam tử, ngưu cam tử, du cam tử

Tên khoa học: Phyllanthus emblica L

Cây cao khoảng 3m, có nhiều cành nhỏ mềm và dài 20cm, được bao phủ bởi lông Lá cây xếp thành hai dãy trên các cành nhỏ, tạo hình dáng giống như lá kép lông chim với cuống lá rất ngắn Ngoài ra, lá kèm của cây rất nhỏ và có hình dạng ba cạnh.

Hoa nhỏ, đơn tính cùng gốc, mọc thành cụm xim ở nách lá phía dưới cành Mỗi cụm chứa nhiều hoa đực và hoa cái Thời gian nở hoa kéo dài từ tháng 3 đến tháng 11 hàng năm.

Quả hình cầu Hạt hình ba cạnh, màu hồng nhạt

Khóa luận quản trị nhân lực

Cây me rừng phân bố rộng rãi ở các vùng cận nhiệt đới và nhiệt đới châu Á, đặc biệt là tại Trung Quốc, Ấn Độ, In-đô-nê-xi-a và bán đảo Mã Lai Tại Việt Nam, cây me rừng thường mọc hoang trên các đồi trọc và xuất hiện nhiều ở các vùng rừng núi Việt Bắc và Tây Bắc.

CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH

Hầu hết các bộ phận đều được dùng làm thuốc như quả, lá, thân, rễ

1.2.1 Dược tính theo y học cổ truyền

Quả có vị chua, ngọt, đắng, tính mát, có tác dụng nhuận phế, hóa đờm, sinh tân.Rễ vị đắng, chát, tính mát, có tác dụng hạ áp

Cây me rừng, một trong những thảo dược phổ biến tại Ấn Độ, nổi bật với hàm lượng vitamin C cao Loại cây này không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe mà còn tăng cường khả năng hấp thụ thức ăn, hỗ trợ chức năng phổi, nhuận tràng, và mang lại lợi ích cho da và tóc Ngoài ra, cây me rừng còn có tác dụng chống oxi hóa, kháng viêm, và phòng ngừa ung thư da cũng như gan.

Một số bài thuốc cổ truyền

Chữa cảm mạo, phát sốt, ho, đau cổ họng, miệng khô khát: mỗi ngày dùng 10-30 quả sắc uống

Chữa viêm ruột, đau bụng, cao huyết áp: ngày dùng 15-20g rễ sắc uống

Chữa lở loét, mẩn ngứa: dùng lá nấu nước rửa bên ngoài

Trị tiểu đường: quả me rừng 15-20g ướp muối và uống mỗi ngày

Quả có tác dụng chống oxi hóa, kháng khuẩn, sát trùng, kháng vi rút, kháng viêm

Hợp chất geraniin (52) thể hiện khả năng chống oxi hóa mạnh mẽ với giá trị IC50 là 4,7 μM cho DPPH và 65,7 μM cho quá trình oxi hóa chất béo Ngoài geraniin, các hợp chất khác như quercetin (48) và kaempferol (49) cũng đóng góp vào hoạt động chống oxi hóa.

(50), kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside (51), isocorilagin (53) cũng có tác dụng chống oxi hóa [13]

Nghiên cứu về hoạt tính sinh học của các hợp chất chiết xuất từ quả me rừng cho thấy một số hợp chất, như geraniin và isocorilagin, có khả năng gây độc tế bào ung thư vú với IC50 lần lượt là 13,2 và 80,9 μg/ml Ngoài ra, quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside có IC50 là 15,5 μg/ml, kaempferol 3-O-β-D-glucopyranoside là 31,2 μg/ml, quercetin là 125 μg/ml, và kaempferol cũng cho thấy hoạt tính chống ung thư đáng chú ý.

(49) (IC50 125 μg/ml) Ngoài ra, isocorilagin có khả năng gây độc tế bào ung thư phổi với

Chiết xuất từ cây me rừng được Xiaoli Liu cùng các cộng sự nghiên cứu vào năm

2009 cho thấy có khả năng kháng khuẩn, chống lại các vi khuẩn Gram dương (S aureus,

B cereus và B subtilis), Gram âm (E coli, P aeruginosa, S typhi) và nấm (C abican, C tropicalis và A niger) [14]

Hợp chất 1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-D-glucose (54) được chiết xuất từ cây me rừng đã được thử nghiệm và cho thấy tác dụng kháng virus đối với HSV-1 và HSV-2 Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng hợp chất này có khả năng ức chế sự phát triển của virus HSV với giá trị IC50 là 31,7 μM.

Dịch chiết ethanol từ cây me rừng có khả năng giảm men gan và hỗ trợ phục hồi gan bị tổn thương do ethanol, được chứng minh qua thí nghiệm trên chuột với liều lượng 75 mg/kg/ngày.

Dịch chiết từ cành me rừng có khả năng cải thiện nồng độ tinh dịch ở chuột đực bị tiêm valproic acid, một loại thuốc điều trị bệnh động kinh, nhưng có tác dụng phụ tiêu cực đến khả năng sinh sản của nam giới.

CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC

Các nghiên cứu về thành phần hóa học của Phyllanthus emblica L được trình bày như sau

Các nghiên cứu trước 1998 cho thấy cây me rừng có chứa các hợp chất như zeatin

(1), zeatin nucleotide (2), zeatin riboside (3), chebulic acid (4), chebulinic acid (5), corilagin (6), 3,6-di-O-galloyl-β- D -glucose (7), gallic acid (8), ethyl gallate (9), glucose- gallin (10), ellagic acid (11), giberellin (A1, A3, A4, A7, A9) (12-16), leucodelphinidin

Năm 2000, Ying-Jun Zhang và các cộng sự đã cô lập được các hợp chất phyllaemblic acid (20) và dẫn xuất (21-23) từ rễ của cây me rừng [17]

Năm 2001, Ying-Jun Zhang cùng các cộng sự đã cô lập được 6 hợp chất phenolic mới là L-malic acid 2-O-gallate (24), mucic acid 2-O-gallate (28), 2-O-galloyl mucic acid

The article discusses various compounds, including 1,4-lactone (29), 5-O-galloyl mucic acid 1,4-lactone (31), 3-O-galloyl mucic acid 1,4-lactone (33), and 3,5-di-O-galloyl mucic acid 1,4-lactone (34), along with their methyl ester derivatives (25-27, 30, 32) Additionally, it mentions phyllanemblinin A-F (35-40) derived from the wild tamarind tree.

In 2007, Chun-Bin Yang and his team isolated a new ellagitannin compound named phyllanthunin, alongside eight other known compounds, including gallic acid, ethyl gallate, ellagic acid, β-sitosterol, daucosterol, stearic acid, lauric acid, and cinnamic acid.

Năm 2008, S K El-Desouky và cộng sự đã cô lập được hợp chất mới là apigenin-7-

O-(6”-butyryl-β-glucopyranoside) (46) và các hợp chất khác như gallic acid (8),

1,2,3,4,6-penta-O-galloylglucose (47) [8] Xiaoli Liu và các cộng sự đã cô lập thêm 6 hợp chất từ quả me rừng: quercetin (48), kaempferol (49), quercetin-3-O-β- D -glucopyranoside

Năm 2011, Yangfei Xiang cùng các cộng sự đã cô lập được 1,2,4,6-tetra-O- galloyl- β- D -glucose (54) từ lá và cành của cây me rừng [16]

In 2012, Wei Lou and colleagues isolated several compounds from the bark of the tamarind tree, including chebulagic acid, chebulanin, isomallotusinin, and isocorilagin Additionally, Mahbuba Khatun and her team successfully extracted β-sitosterol-3-O-β-D-glucoside from the tamarind plant.

Vào năm 2013, Wei-Yan Qi và nhóm nghiên cứu đã thành công trong việc cô lập các hợp chất sterol từ cành và lá của cây me rừng, bao gồm hai hợp chất sterol mới là trihydroxysitosterol và 5α,6β,7α-acetoxysitosterol.

Glu= Glucopyranosy Rha-glu= α-L-rhamnopyranosyl (1→6) –O-β- D - glucopyranosyl

THỰC NGHIỆM

HÓA CH Ấ T, THI Ế T B Ị, PHƯƠNG PHÁP

 Silica gel: silica gel 60, 0,04-0,06 mm, Ấn và Merck dùng cho cột sắc kí

 Silica gel pha đảo, RP-18, Merck dùng cho sắc kí cột

 Sắc kí bảng mỏng loại 25DC - Alufolein 20×20, Kiesel gel 60F

 Sắc kí bảng mỏng loại 25DC, RP-18, Merck

 Dung môi dùng cho quá trình thí nghiệm gồm: hexane, ethanol, acetone, chloroform, dichloromethane, ethyl acetate, methanol và nước cất

 Thuốc thử hiện hình các vết chất hữu cơ trên bảng mỏng: sử dụng H2SO 4 20%

 Các thiết bị dùng để giải ly, dụng cụ chứa mẫu

 Máy cô quay chân không

 Đèn soi UV: bước sóng 254 nm và 365 nm

2.1.3.1 Phương pháp phân lập các hợp chất

Phương pháp sắc kí là công cụ hiệu quả để cô lập và tinh chế các hợp chất hữu cơ Các kỹ thuật sắc kí, bao gồm silica gel pha thường và pha đảo RP-18, kết hợp với sắc kí lỏng micellar (SKLM), giúp tối ưu hóa quá trình phân tách và thu hồi các chất cần thiết.

Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO 4 20%

2.1.3.2 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học các hợp chất

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) bao gồm 1H-NMR (500 MHz), 13C-NMR (125 MHz) và 2D-NMR đã được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Phân tích trung tâm, Đại học Khoa học Tự nhiên, địa chỉ 227 Nguyễn Văn Cừ, Quận 5, TP Hồ Chí Minh.

Khối phổ phân giải cao HR-ESI-MS tại Phòng thí nghiệm Viện Kiểm Nghiệm Thuốc, 200 Cô Bắc, Cô Giang, Quận 1, TP.Hồ Chí Minh.

NGUYÊN LIỆU

Mẫu cây dùng trong nghiên cứu đề tài là lá, thân và rễ cây me rừng (Phyllanthus emblica L ) được thu hái tỉnh Bình Thuận, vào tháng 5/2014

Mẫu cây đã được TS Phạm Văn Ngọt nhận danh tên khoa học là “Phyllanthus emblica L.”, họ Thầu dầu (Euphorbiaceae)

2.2.2 Xử lý mẫu nguyên liệu

Nguyên liệu được rửa sạch, loại bỏ sâu bệnh, phơi khô trong bóng râm, và xay thành bột mịn Tiếp theo, tiến hành ngâm chiết và phân lập các hợp chất.

ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO

2.3.1 Điều chế cao hexane và ethyl acetate của lá

Các bộ phận của cây me rừng (Phyllanthus emblica L.), bao gồm rễ, thân và lá, được phơi khô, chặt nhỏ và nghiền thành bột mịn Sau đó, bột mịn được sấy khô đến khi đạt khối lượng không đổi Nguyên liệu này được chiết xuất bằng ethanol 96% thông qua phương pháp ngâm dầm, sau đó lọc và cô quay dung môi dưới áp suất thấp để thu được cao ethanol thô.

Cao ethanol thô từ lá được chiết xuất bằng phương pháp lỏng - lỏng sử dụng hexane và ethyl acetate, tạo ra cao hexane và cao ethyl acetate Quá trình chiết xuất này được mô tả trong sơ đồ 2.1.

Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế cao hexane và cao ethyl acetate của lá

- Cô quay thu hồi dung

Ethanol thu hồi Cao ethanol

- Chiết lỏng – lỏng với hexane, ethyl acetate

2.3.2 Điều chế cao hexane và cao ethyl acetate của rễ

Cao ethanol thô rễ được chiết xuất bằng cách sử dụng hexane và ethyl acetate, tạo ra cao hexane và cao ethyl acetate Quá trình chiết xuất này được mô tả trong sơ đồ 2.2.

Sơ đồ 2.2 Quy trình điều chế cao hexane và cao ethyl acetate của rễ

CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT TRONG CAO ETHYL ACETATE CỦA LÁ

Phương pháp sắc kí cột (SKC) sử dụng các dung môi có độ phân cực tăng dần để tách các cao hoặc phân đoạn Quá trình giải ly được theo dõi bằng sắc kí lớp mỏng (SKLM), và những lọ có kết quả SKLM tương tự sẽ được gom lại thành một phân đoạn chung.

- Chiết lỏng – lỏng với hexane, ethyl acetate

2.4.1 Sắc kí cột silica gel trên cao ethyl acetate của lá

Cao ethyl acetate từ lá me (143.1g) đã được chiết xuất bằng silica gel SKC với các hệ dung môi H:EA có độ phân cực tăng dần từ 80-100% EA, tiếp theo là hệ dung môi EA:Me (5-100% Me) Kết quả thu được 5 phân đoạn, được ký hiệu từ EA1 đến EA5, như trình bày trong bảng 2.1.

Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel trên cao ethyl acetate của lá

Sắc kí lớp mỏng Ghi chú

1 EA1 H:EA 2:8 16.50 Vệt dài Đã khảo sát

2 EA2 EA 13.28 Nhiều vết Chưa khảo sát

95:5 22.25 Nhiều vết kéo vệt Đã khảo sát

4 EA4 EA:Me 8:2 33.40 Nhiều vết Đã khảo sát

5 EA5 EA:Me 7:3 14.70 Nhiều vết Chưa khảo sát

Ghi chú: H (hexane), EA (ethyl acetate), Me (methanol)

2.4.2 Sắc kí cột sillica gel trên phân đoạn EA3

Phân đoạn EA3 (22.25g) đã được xử lý bằng SKLM và cho thấy nhiều vết tách rõ ràng Do đó, phân đoạn EA3 được thực hiện với kỹ thuật SKC silica gel, sử dụng hệ dung môi rửa giải C:Me (0-30% Me) Kết quả thu được là 7 phân đoạn, bao gồm EA3.1 đến EA3.7, được trình bày chi tiết trong bảng 2.2.

Bảng 2.2 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA3 của cao ethyl acetate

STT Phân đoạn Dung môi giải ly

1 EA3.1 C 1.82 Vệt dài Khảo sát

2 EA3.2 C:Me 95:5 1.23 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát

3 EA3.3 C:Me 9:1 0.85 Nhiều vết, tách rõ Thu được PEH1

4 EA3.4 C:Me 85:15 1.88 Vệt dài Chưa khảo sát

5 EA3.5 C:Me 8:2 2.55 Vệt dài Chưa khảo sát

6 EA3.6 C:Me 8:2 4.86 Kéo vệt Chưa khảo sát

7 EA3.7 C:Me 7:3 3.40 Kéo vệt dài Chưa khảo sát

Ghi chú: C(Chloroform), Me (Methanol)

2.4.3 Sắc kí cột sillica gel trên phân đoạn EA3.3

Phân đoạn EA3.3 (0.85 g) đã được tách rõ ràng bằng SKLM nhiều vết và sau đó được xử lý qua SKC silica gel với hệ dung môi rửa giải C:Me 9:1 Kết quả thu được gồm 5 phân đoạn.

EA3.3.1-EA3.3.5, được trình bày trong bảng 2.3

Bảng 2.3 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn EA3.3

STT Phân đoạn Dung môi giải ly

1 EA3.3.1 C 132.4 Nhiều vết Chưa khảo sát

2 EA3.3.2 C:Me 9:1 72.0 Nhiều vết, kéo vệt Khảo sát

3 EA3.3.3 C:Me 87:13 54.3 Tách vết rõ Thu được PEH1

4 EA3.3.4 C:Me 8:2 143.4 Kéo vệt Chưa khảo sát

5 EA3.3.5 C:Me 8:2 186.1 Kéo vệt Chưa khảo sát

Ghi chú: C (chloroform), Me (methanol)

Phân đoạn EA3.3.3 (54.3 mg) được SKC silica gel nhiều lần với hệ dung môi C:Me (87:13) thu được 15.0 mg hợp chất dạng dầu, màu vàng, đặt kí hiệu là PEH1.

CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ CÓ TRONG CAO HEXANE CỦA RỄ

2.5.1 Sắc kí cột silica gel trên cao hexane của rễ

Trích 1.1g từ 6.1g cao hexane của rễ, SKC với hệ dung môi giải ly H:DCM có độ phân cực tăng dần (0-100% DCM), tiếp theo giải ly với hệ dung môi DCM:Me có độ phân cực tăng dần (0-30% Me) Kết quả thu được 9 phân đoạn, kí hiệu từ RH1 – RH9 Kết quả được trình bày ở bảng 2.4

Bảng 2.4 Sắc kí cột trên cao hexane của rễ

1 RH1 H:DCM 4:1 18.2 Vệt dài Chưa khảo sát

2 RH2 H:DCM 2:3 378.6 Nhiều vết Chưa khảo sát

5 RH5 DCM 45.4 Nhiều vết kéo vệt Chưa khảo sát

6 RH6 DCM:Me 97:3 158.7 Tách vết rõ Đã khảo sát

7 RH7 DCM:Me 9 :1 72.6 Nhiều vết Chưa khảo sát

8 RH8 DCM:Me 9:1 35.2 Vệt dài Chưa khảo sát

9 RH9 DCM:Me 9: 1 101.2 Vệt dài Chưa khảo sát

Ghi chú: H (hexane), DCM (dichloromethane), Me (Methanol)

2.5.2 Sắc kí cột silica gel trên phân đoạn RH6 của cao hexane của rễ

Phân đoạn RH6 (158.7 mg) đã được tách chiết từ SKC silica gel bằng hệ dung môi H:DCM với độ phân cực tăng dần từ 0-100% DCM Kết quả thu được tổng cộng 5 phân đoạn, được ký hiệu từ RH6.1 đến RH6.5.

RH6.5 Kết quả được trình bày ở bảng 2.5

Bảng 2.5 Sắc kí cột trên phân đoạn RH6 của cao hexane của rễ

1 RH6.1 DCM 22.3 Vệt dài Chưa khảo sát

2 RH6.2 DCM 24.4 Nhiều vết,vệt dài Chưa khảo sát

3 RH6.3 DCM: Me 97:3 26.1 Nhiều vết,vệt dài Chưa khảo sát

4 RH6.4 DCM:Me 95:5 38.8 Tách vết rõ Thu được PEAC1

5 RH6.5 DCM: 95:5 23.1 Nhiều vết Chưa khảo sát

Ghi chú: DCM (dichloromethane), Me (methanol)

Phân đoạn RH6.4 được xử lý bằng SKC silica gel với dung môi DCM:Me (95:5) và SKC silica gel pha đảo RP-18 với dung môi Ac:Me (2:1), thu được 8.0 mg chất rắn màu trắng, được ký hiệu là PEAC1.

Tiêu đề	Khảo Sát Thành Phần Hóa Học Cây Me Rừng Phyllanthus Emblica Linn. Họ Thầu Dầu (Euphorbiaceae)
Tác giả	Nguyễn Long Hải
Người hướng dẫn	TS. Nguyễn Thị Ánh Tuyết
Trường học	Trường Đại Học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh
Chuyên ngành	Quản Trị Nhân Lực
Thể loại	Khóa Luận Tốt Nghiệp
Năm xuất bản	2016
Thành phố	Thành Phố Hồ Chí Minh

Định dạng
Số trang	61
Dung lượng	2,27 MB