Luận văn tốt nghiệp khảo sát thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của tinh dầu diếp cá

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ BỘ MÔN CƠNG NGHỆ HĨA HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA TINH DẦU DIẾP CÁ Houttuynia cordata Thumb CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Th.S Nguyễn Thị Bích Thuyền Phùng Văn Hồng Nhỏ MSSV: 2063990 Lớp: Cơng nghệ Hóa học K32 Cần Thơ, tháng 11/2010 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ BỘ MÔN CÔNG NGHỆ HÓA HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA TINH DẦU DIẾP CÁ Houttuynia cordata Thumb CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Th.S Nguyễn Thị Bích Thuyền Phùng Văn Hồng Nhỏ MSSV: 2063990 Lớp: Cơng nghệ Hóa học K32 Cần Thơ, tháng 11/2010 Trường Đại học Cần Thơ Khoa Cơng Nghệ Bộ mơn Cơng nghệ hóa học Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc -Cần Thơ, ngày tháng năm 2010 PHIẾU ĐỀ NGHỊ ĐỀ TÀI TỐT NGHIỆP CHO SINH VIÊN NĂM HỌC: 2010 – 2011 Họ tên cán hướng dẫn Th.S Nguyễn Thị Bích Thuyền MCB: 1683 Tên đề tài: Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá (Houttuynia cordata Thumb) Địa điểm thực hiện: Phịng thí nghiệm Bộ Mơn Cơng nghệ Hóa học – Khoa Cơng Nghệ – Trường Đại Học Cần Thơ Số lượng sinh viên thực hiện: 01 sinh viên Họ tên sinh viên: Phùng Văn Hồng Nhỏ MSSV: 2063990 Lớp: Cơng Nghệ Hóa Học Khóa: 32 Mục đích đề tài - Khảo sát thành phần hóa học tinh dầu diếp cá - Thử số hoạt tính sinh học tinh dầu Các nội dung giới hạn đề tài  Chưng cất tinh dầu theo phương pháp vi sóng cổ điển để có so sánh  Khảo sát hoạt tính sinh học tinh dầu: kháng vi sinh vật kháng oxi hóa  Nhận danh cấu phần tinh dầu phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ Các yêu cầu hỗ trợ cho việc thực đề tài Các hóa chất để thực Kinh phí dự trù cho việc thực đề tài: 250.000 đồng DUYỆT CỦA CB TẠI CƠ SỞ DUYỆT CỦA CBHD Th.S Nguyễn Thị Bích Thuyền DUYỆT CỦA BỘ MÔN DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG THI & XÉT TỐT NGHIỆP NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN  NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN  LỜI TRI ÂN  Con xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc gia đình, người ln bên cạnh động viên, tạo điều kiện thuận lợi điểm tựa vững cho Em xin chân thành cảm ơn đến quý Thầy Cô Bộ môn Cơng nghệ Hóa học – Khoa Cơng nghệ - người bước truyền đạt kiến thức kinh nghiệm năm tháng học tập vừa qua Trường Đại học Cần Thơ Cùng với lòng thành kính nhất, em xin bày tỏ lịng biết ơn Cơ – ThS Nguyễn Thị Bích Thuyền – Người hướng dẫn, truyền đạt cho em kiến thức vô quý báu suốt thời gian thực Luận văn tốt nghiệp bảo lời khuyên chân thành Em xin chân thành cảm ơn Thầy Chủ Nhiệm Phịng Thí Nghiệm Hóa Hữu Cơ – Lương Huỳnh Vũ Thanh giúp đỡ em suốt thời gian làm việc phịng thí nghiệm Cảm ơn bạn – lớp Cơng Nghệ Hóa K32 người tơi vượt qua khó khăn, thử thách để đến ngày hôm Cần Thơ, ngày 03 tháng 11 năm 2010 Phùng Văn Hoàng Nhỏ LỜI MỞ ĐẦU  Ngày nay, bên cạnh y học đại với tích hợp đầy đủ phương tiện vật chất, kỹ thuật y học cổ truyền cịn số giá trị bất hủ, đặc biệt đóng góp lĩnh vực dược liệu Khuynh hướng dùng thuốc giới quay với việc sử dụng sản phẩm có nguồn gốc từ thiên nhiên Ngành Hóa học hợp chất thiên nhiên với vai trị nghiên cứu thành phần hóa học tìm hiểu hoạt tính sinh học thuốc mang ý nghĩa khoa học thực tiễn lớn Để có định hướng sử dụng, bảo tồn phát triển nguồn dược liệu quý báu cách hợp lý hữu ích, việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hợp chất thiên nhiên từ cỏ đề tài hấp dẫn, nhiều mẻ phong phú Trong số dược thảo có diếp cá hay tên khác giấp cá (có tên khoa học Houttuynia cordata Thumb thuộc họ hoa mơi), lồi thực vật ngắn ngày dễ trồng trồng quanh năm Hơn diếp cá loại rau gia vị quen thuộc với người Việt đặc biệt toàn dùng để chữa bệnh Tinh dầu diếp cá loại tinh dầu sử dụng nhiều công nghiệp thực phẩm y học Việt Nam với lợi nước nhiệt đới đặc biệt Đồng Bằng Sông Cửu Long thích hợp cho nguồn ngun liệu việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá để ứng dụng cách có hiệu cần sớm triển khai Vì đề tài “Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá” xin góp phần vào cơng trình nghiên cứu diếp cá để loài khai thác ứng dụng mạnh mẽ MỤC LỤC PHIẾU ĐỀ NGHỊ ĐỀ TÀI NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN LỜI TRI ÂN LỜI MỞ ĐẦU MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii PHẦN I TỔNG QUAN Chương Đại cương diếp cá 1.1 Danh pháp phân loại 1.2 Mô tả thực vật 1.3 Nguồn gốc, phân bố, thu hái 1.4 Tác dụng dược lý 1.5 Những thuốc diếp cá 1.6 Những nghiên cứu nước diếp cá 1.6.1 Nghiên cứu nước i 1.6.2 Nghiên cứu nước Chương Tinh dầu phương pháp sản xuất 15 2.1 Lịch sử phát triển tinh dầu 15 2.2 Trạng thái tự nhiên q trình tích lũy 16 2.2.1 Trạng thái tự nhiên 16 2.2.2 Quá trình tích lũy………… 17 2.3 Công dụng sống người, y học vai trò sinh thái học 17 2.4 Các phương pháp chưng cất 19 2.4.1 Phương pháp chưng cất lôi nước 19 2.4.2 Phương pháp chưng cất lôi nước có hỗ trợ vi sóng 20 2.4.3 Phương pháp chưng cất siêu âm 21 2.4.4 Phương pháp chưng cất dung môi siêu tới hạn 22 PHẦN II THỰC NGHIỆM Chương Thực nghiệm 24 3.1 Thiết bị hóa chất 24 3.1.1 Thiết bị 24 3.1.2 Hóa chất 24 3.2 Nguyên liệu, địa điểm thời gian thực 25 3.2.1 Thu hái nguyên liệu 25 3.2.2 Định danh thực vật 25 3.2.3 Địa điểm thời gian thực 25 ii 3.3 Phương pháp thí nghiệm 26 3.3.1 Chưng cất lôi nước trực tiếp Clevenger 26 3.3.2 Chưng cất lơi nước có hỗ trợ vi sóng 27 3.3.3 Phương pháp xác định tiêu lý - hóa tinh dầu 27 3.3.4 Phương pháp xác định thành phần hóa học tinh dầu 28 3.3.5 Phương pháp khảo sát hoạt tính sinh học 28 3.4 Thực nghiệm 30 3.4.1 Chưng cất lấy tinh dầu 30 3.4.2 Xác định tiêu hóa lý tinh dầu 32 3.4.3 Xác định thành phần hóa học 33 3.4.4 Khảo sát hoạt tính sinh học 34 Chương Kết bàn luận 36 4.1 Đánh giá cảm quan 36 4.2 Hiệu suất chưng cất tinh dầu 36 4.2.1 Chưng cất lôi nước trực tiếp Clevenger 36 4.2.2 Chưng cất lôi nước trực tiếp với hỗ trợ vi sóng 38 Xác định số lý - hóa tinh dầu 41 4.4 Thành phần hóa học tinh dầu 41 4.5 Khảo sát hoạt tính sinh học 42 4.5.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật 42 4.5.2 Hoạt tính kháng oxy hóa 46 iii 1010034-04 Trang 4/8 Library Search Report Data Path Data File Acq On Operator Sample Misc ALS Vial : : : : : : : D:\GCMS\2010\HV010H\THANG10\TD\08\ 34-04.D Oct 2010 20:14 QUOC CUONG 1010034-04 Sample Multiplier: Search Libraries: C:\Database\WILEY.L C:\Database\NIST08.L C:\Database\HOANVU.L Minimum Quality: Minimum Quality: 80 80 Unknown Spectrum: Apex minus start of peak Integration Events: ChemStation Integrator - 34-01.e Pk# RT Area% Library/ID Ref# CAS# Qual _ 5.564 0.13 C:\Database\WILEY.L Nonane (CAS) 20598 000111-84-2 90 6.746 0.50 C:\Database\WILEY.L alpha.-PINENE 26338 000080-56-8 94 0.30 C:\Database\WILEY.L Camphene 26289 000079-92-5 95 0.53 C:\Database\WILEY.L 2-.beta.-PINENE 26369 000127-91-3 93 8.580 22.37 C:\Database\WILEY.L beta.-Myrcene 26044 000123-35-3 87 7.251 8.186 9.919 10.065 10.331 10.753 0.35 C:\Database\WILEY.L Cymene 24421 025155-15-1 94 1.73 C:\Database\WILEY.L dl-Limonene 26172 000138-86-3 96 2.11 C:\Database\WILEY.L cis-Ocimene 26012 006874-10-8 97 0.18 C:\Database\WILEY.L Trans-Ocimene 25996 003779-61-1 96 10 11.065 0.58 C:\Database\HOANVU.L No matches found 11 11.275 0.16 C:\Database\WILEY.L gamma.-Terpinene 12 12.027 0.36 C:\Database\HOANVU.L No matches found 13 12.696 0.40 C:\Database\HOANVU.L No matches found 14 12.898 0.22 C:\Database\HOANVU.L No matches found 26144 000099-85-4 94 1010034-04 15 16 12.971 13.081 1.00 C:\Database\WILEY.L Linalool 0.81 C:\Database\WILEY.L Furan, 3-(4-methyl-3-pentenyl)- (C AS) Trang 5/8 43309 000078-70-6 81 38167 000539-52-6 83 17 13.677 0.70 C:\Database\HOANVU.L No matches found 18 14.017 0.33 C:\Database\HOANVU.L No matches found 19 14.842 0.37 C:\Database\HOANVU.L No matches found 20 15.979 0.22 C:\Database\HOANVU.L No matches found 21 16.153 0.22 C:\Database\HOANVU.L No matches found 22 18.646 0.22 C:\Database\HOANVU.L No matches found 23 19.857 0.19 C:\Database\HOANVU.L No matches found 24 19.921 0.19 C:\Database\HOANVU.L No matches found 25 20.187 0.31 C:\Database\HOANVU.L No matches found 26 20.443 0.55 C:\Database\HOANVU.L No matches found 27 20.920 0.63 C:\Database\HOANVU.L No matches found 28 21.287 0.54 C:\Database\HOANVU.L No matches found 29 21.470 9.47 C:\Database\WILEY.L Bornyl acetate 90659 005655-61-8 96 21.626 17.96 C:\Database\WILEY.L 2-Undecanone (CAS) 61190 000112-12-9 97 30 31 32 24.816 25.284 0.50 C:\Database\WILEY.L Nerol 43274 000106-25-2 83 0.35 C:\Database\WILEY.L Decanoic acid (CAS) 62935 000334-48-5 91 33 25.421 0.37 C:\Database\HOANVU.L No matches found 34 25.541 0.33 C:\Database\HOANVU.L No matches found 1010034-04 35 25.669 5.09 C:\Database\WILEY.L Neryl acetate 36 26.622 0.28 C:\Database\HOANVU.L No matches found 37 27.402 1.29 C:\Database\WILEY.L trans-Caryophyllene 38 28.099 0.59 C:\Database\HOANVU.L No matches found 39 28.713 0.25 C:\Database\NIST08.L Beta-Farnesene 40 29.767 0.23 C:\Database\HOANVU.L No matches found 41 30.216 4.34 C:\Database\HOANVU.L No matches found 42 30.317 7.87 C:\Database\WILEY.L 2-Tridecanone (CAS) Trang 6/8 90525 000141-12-8 90 100683 000087-44-5 99 62355 018794-84-8 86 93613 000593-08-8 94 43 30.583 0.66 C:\Database\HOANVU.L No matches found 44 30.647 0.81 C:\Database\HOANVU.L No matches found 45 31.307 0.41 C:\Database\HOANVU.L No matches found 46 31.637 0.47 C:\Database\WILEY.L ALPHA-PANASINSEN 101215 000000-00-0 86 0.32 C:\Database\WILEY.L Calamenene 98313 000483-77-2 91 1.69 C:\Database\NIST08.L Nerolidol 76465 1000285-43-6 91 47 48 31.811 33.196 49 34.140 0.42 C:\Database\HOANVU.L No matches found 50 34.351 1.66 C:\Database\WILEY.L Caryophyllene oxide 51 34.635 5.76 C:\Database\HOANVU.L No matches found 52 34.819 0.21 C:\Database\HOANVU.L No matches found 53 35.405 0.53 C:\Database\HOANVU.L No matches found 54 37.404 0.36 C:\Database\HOANVU.L No matches found 55 37.972 0.42 C:\Database\HOANVU.L 120907 001139-30-6 90 1010034-04 No matches found 56 40.677 0.41 C:\Database\HOANVU.L No matches found 57 42.355 0.75 C:\Database\HOANVU.L No matches found TINHDAU.M Tue Oct 12 18:28:53 2010 HV.011.H Trang 7/8 1010034-04 Trang 8/8 File :D:\GCMS\2010\HV010H\THANG10\TD\08\34-03.D Operator : QUOC CUONG Acquired : Oct 2010 18:53 using AcqMethod TINHDAU Instrument : HV.010.H Sample Name: 1010034-03 Misc Info : Vial Number: Abundance TIC: 34-03.D\data.ms 8.564 2500000 2000000 21.610 1500000 30.325 1000000 34.651 21.471 500000 6.746 7.2508.189 Time > Abundance 6.00 8.00 10.066 10.330 9.92111.066 10.00 25.665 12.975 13.086 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 TIC: 34-04.D\data.ms (*) 42.363 33.19834.354 34.147 27.403 28.099 21.286 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.00 8.576 21.628 2500000 2000000 21.475 1500000 30.320 1000000 25.669 34.640 30.216 10.328 10.064 500000 6.745 8.187 11.062 33.193 34.347 27.402 12.972 13.084 13.677 42.356 Time > 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.00 42.00 44.00 Phụ lục PHỤ LỤC Phiếu kiểm nghiệm vi sinh phương pháp đĩa giấy SVTT: Phùng Văn Hoàng Nhỏ x Phụ lục PHỤ LỤC Một số hình ảnh thử nghiệm Tinh dầu diếp cá theo phương pháp vi sóng Tinh dầu diếp cá theo phương pháp cổ điển Kháng oxy hóa tinh dầu diêp cá Đo độ hấp thu máy UV - Vis SVTT: Phùng Văn Hoàng Nhỏ xi Phụ lục Kháng vi sinh tinh dầu diếp cá thu phương pháp chưng cất có hỗ trợ vi sóng Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Salmonella typhi ty2 Pseudomonas aeruginosa Candida albicans SVTT: Phùng Văn Hoàng Nhỏ xii Phụ lục Kháng vi sinh tinh dầu diếp cá thu phương pháp chưng cất cổ điển Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhi ty Candida albicans SVTT: Phùng Văn Hoàng Nhỏ xiii TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh Phúc KHOA CƠNG NGHỆ BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HĨA HỌC *********** - Cần Thơ, ngày 05 tháng 08 năm 2010 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Năm học: 2010 - 2011 Tên đề tài: “Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá” Sinh viên thực hiện: Phùng Văn Hoàng Nhỏ MSSV: 2063990 Lớp: Cơng Nghệ Hóa Học Khóa: 32 Họ tên CBHD: Nguyễn Thị Bích Thuyền Đặt vấn đề Ngày nay, bên cạnh y học đại với tích hợp đầy đủ phương tiện vật chất, kỹ thuật y học cổ truyền cịn số giá trị bất hủ, đặc biệt đóng góp lĩnh vực dược liệu Khuynh hướng dùng thuốc giới quay với việc sử dụng sản phẩm có nguồn gốc từ thiên nhiên Ngành Hóa học hợp chất thiên nhiên với vai trị nghiên cứu thành phần hóa học tìm hiểu hoạt tính sinh học thuốc mang ý nghĩa khoa học thực tiễn lớn Để có định hướng sử dụng, bảo tồn phát triển nguồn dược liệu quý báu cách hợp lý hữu ích, việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hợp chất thiên nhiên từ cỏ đề tài hấp dẫn, nhiều mẻ phong phú Trong số dược thảo có diếp cá hay tên khác giấp cá (có tên khoa học Houttuynia cordata Thumb thuộc họ hoa mơi), lồi thực vật ngắn ngày dễ trồng trồng quanh năm Hơn diếp cá loại rau gia vị quen thuộc với người Việt đặc biệt toàn dùng để chữa bệnh Tinh dầu diếp cá loại tinh dầu sử dụng nhiều công nghiệp thực phẩm y học Việt Nam với lợi nước nhiệt đới đặc biệt Đồng Bằng Sông Cửu Long thích hợp cho nguồn ngun liệu việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá để ứng dụng cách có hiệu cần sớm triển khai Vì đề tài “Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá” xin góp phần vào cơng trình nghiên cứu diếp cá để loài khai thác ứng dụng mạnh mẽ Mục đích yêu cầu Khảo sát hiệu suất chưng cất tinh dầu diếp cá hai phương pháp cổ điển vi sóng Xác định thành phần hóa học, hoạt tính kháng vi khuẩn gây bệnh hoạt tính kháng oxy hóa tinh dầu diếp cá Địa điểm, thời gian thực Địa điểm: Phịng thí nghiệm Hữu – khoa Cơng Nghệ - trường Đại học Cần Thơ Thời gian thực hiện: Từ ngày 10/08/2010 – 14/11/2010 Giới thiệu thực có liên quan đến vấn đề Cây diếp cá quen thuộc với người Việt Nam với công dụng trội đặc trị bệnh trĩ có mặt hợp chất dioxy-flavonon có diếp cá Ngồi ra, diếp cá có tác dụng lợi tiểu có mặt quercitrin Sự có mặt quercitrin diếp cá cịn có cơng dụng loại trừ gốc tự Chất Houttuynin bisulphat natri chiết xuất từ điều trị viêm tuyến vú Ngồi diếp cá cịn có tác dụng nhiệt, giải độc, sát trùng, mụn nhọt, trẻ lên sởi, viêm phổi phổi có mủ, đau mắt đỏ đau mắt trực khuẩn mủ xanh, viêm ruột, bí tiểu tiện, kinh nguyệt khơng đều… Cơng trình nghiên cứu gần Đại học Koahsiung Đài Loan phát diếp cá có tác dụng ngăn chặn dịng tế bào ung thư máu, chống viêm xoang kinh niên, phục hồi máu sau phẫu thuật Các nội dung giới hạn đề tài Thực hiện: 8.1 Chưng cất tinh dầu diếp cá khảo sát hiệu suất chưng cất hai phương pháp phương pháp chưng cất cổ điển phương pháp chưng cất lôi nước có hỗ trợ vi sóng 8.2 Khảo sát số số hóa lý 8.3 Khảo sát thành phần hóa học 8.4 Khảo sát hoạt tính sinh học (kháng oxi hóa kháng vi sinh vật) Phương pháp thực đề tài: Phương pháp chưng cất lôi nước Cho nguyên liệu nước vào bình cầu, tiến hành chưng cất tinh dầu phương pháp chưng cất lôi nước dụng cụ clevenger, khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất chưng cất Phương pháp chưng cất lơi nước có hỗ trợ vi sóng Tiến hành chưng cất lơi nước có hỗ trợ vi sóng, khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất chưng cất Lấy tinh dầu sau chưng cất: - Xác định thành phần hóa học phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ GCMS - Xác định hoạt tính sinh học: * Hoạt tính kháng oxy hóa phương pháp DPPH * Hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp đĩa giấy MIC (nồng độ ức chế tối thiểu) 10 Kế hoạch thực Tuần Lượt khảo tài liệu       Chưng cất tinh dầu         10 11 12 13 14 15       Xác định thành phần hóa học hoạt tính kháng vi sinh Đo số hóa lý  Xác định hoạt tính kháng oxi hóa Viết                SINH VIÊN THỰC HIỆN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Phùng Văn Hoàng Nhỏ Nguyễn Thị Bích Thuyền DUYỆT CỦA BỘ MƠN DUYỆT CỦA HĐLV & TLTN   ... cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá để ứng dụng cách có hiệu cần sớm triển khai Vì đề tài ? ?Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu diếp cá? ?? xin góp phần vào...TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ BỘ MÔN CƠNG NGHỆ HĨA HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA TINH DẦU DIẾP CÁ Houttuynia cordata Thumb CÁN BỘ HƯỚNG... Khảo sát thành phần hóa học tinh dầu diếp cá - Thử số hoạt tính sinh học tinh dầu Các nội dung giới hạn đề tài  Chưng cất tinh dầu theo phương pháp vi sóng cổ điển để có so sánh  Khảo sát hoạt