Luận văn tốt nghiệp khảo sát thành phần hóa học trên cao etyl acetat cây rau má lá sen (hydrocotyl bonariensis l )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CÔNG NGHỆ  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO ETYL ACETAT CÂY RAU MÁ LÁ SEN Hydrocotyle bonarienasis L HỌ NGÒ (APIACEAE) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Ths Tôn Nữ Liên Hương Phan Thị Trinh MSSV: 2064027 Ngành: Cơng Nghệ Hóa Học-Khóa 32 Tháng 11/2010 Trường Đại học Cần Thơ Khoa Công Nghệ Bộ mơn Cơng nghệ hóa học Cộng hịa xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh phúc -Cần Thơ, ngày tháng năm 2010 PHIẾU ĐỀ NGHỊ ĐỀ TÀI TỐT NGHIỆP CHO SINH VIÊN NĂM HỌC: 2010 – 2011 Họ tên cán hướng dẫn Ths Tôn Nữ Liên Hương MCB: 1410 Tên đề tài: Khảo sát thành phần hóa học cao Etyl acetat rau má sen (Hydrocotyl bonariensis L.), họ Ngò (Apiaceae) Địa điểm thực hiện: Phịng thí nghiệm Hữu Bộ Mơn Hóa học – Khoa Khoa học tự nhiên – Trường Đại Học Cần Thơ Số lượng sinh viên thực hiện: 01 sinh viên Họ tên sinh viên: Phan Thị Trinh MSSV: 206407 Lớp: Cơng Nghệ Hóa Học Khóa: 32 Mục đích đề tài Khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat hydrocotyl bonariensis họ ngị Các nội dung giới hạn đề tài  Điều chế cao tổng phương pháp ngâm dầm, điều chế cao có tính phân cực tăng dần kĩ thuật trích ly rắn lỏng sắc kí cột nhanh  Sắc kí cột phân đoạn cao để tinh chế hợp chất  Đo phổ xác định cấu trúc hợp chất tinh chế Các yêu cầu hỗ trợ cho việc thực đề tài Các hóa chất để thực Kinh phí dự trù cho việc thực đề tài: 250.000 đồng DUYỆT CỦA CB TẠI CƠ SỞ DUYỆT CỦA CBHD Ths Tơn Nữ Liên Hương DUYỆT CỦA BỘ MƠN DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG THI & XÉT TỐT NGHIỆP SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 i LỜI CẢM ƠN  Để có nhiều điều kiện phấn đấu hoàn thành luận văn, trước hết em xin gửi lời cảm ơn trân trọng đến tồn thể q thầy trường, khoa đặc biệt quý thầy cô Bộ môn Công nghệ hóa học khoa Cơng nghệ Q thầy truyền đạt cho em kiến thức vô quý báu năm học tập rèn luyện trường đường đời sau Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc trân trọng đến cô Tôn Nữ Liên Hương khơng tận tình hướng dẫn, bảo kiến thức chuyên sâu nghiên cứu ứng dụng, mà cịn tạo điều kiện động viên dìu dắt em bước qua giai đoạn khó khăn để hồn thành luận văn Cơ cầu nối cho em hiểu biết thêm lĩnh vực Hợp chất thiên nhiên nhiều kinh nghiệm sống Em xin gửi lời ghi ơn đến quý thầy cô Bộ môn Cơng nghệ hóa học – Khoa Cơng nghệ tạo điều kiện truyền đạt kiến thức chuyên ngành Tôi xin cảm ơn tất bạn lớp Công nghệ hóa học K32 động viên giúp đỡ tơi trình học tập rèn luyện Đặc biệt anh chị bạn nhóm thực luận văn hỗ trợ nhiều thời gian thực đề tài Con xin khắc ghi công ơn trời biển cha mẹ cho đến trường, cho hậu phương vững để vững bước đường tiếp cận tri thức khoa học Con xin hứa phấn đấu nhiều để đạt nhiều thành công tương lại Xin chân thành cảm ơn! Phan Thị Trinh SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 ii Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Công nghệ Bộ Mơn: Cơng nghệ Hóa học Cộng Hịa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh Phúc NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Cán hướng dẫn: Ths Tôn Nữ Liên Hương Đề tài: Khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat rau má sen (Hydrocotyle bonariensis L.), họ Ngò (Apiaceae) Sinh viên thực hiện: Phan Thị Trinh MSSV: 2064027 Lớp Cơng nghệ Hóa học – Khóa 32 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN:  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2010 Cán hướng dẫn Tôn Nữ Liên Hương SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 iii Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Công nghệ Bộ Mơn: Cơng nghệ Hóa học Cộng Hịa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc lập – Tự – Hạnh Phúc NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ CHẤM PHẢN BIỆN Cán chấm phản biện: Đề tài: Khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat rau má sen (Hydrocotyle bonariensis L.), họ Ngò (Apiaceae) Sinh viên thực hiện: Phan Thị Trinh MSSV: 2064027 Lớp Cơng nghệ Hóa học – Khóa 32 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN ( Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2010 Cán chấm phản biện SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 iv LỜI MỞ ĐẦU  Xuất phát từ phát triển mạnh mẽ khoa học kỹ thuật nhu cầu người, biệt dược từ nguồn tổng hợp làm giảm tác dụng miễn dịch nhiều tác dụng phụ khác, nên xu hướng tìm hoạt chất thiên nhiên từ nguồn thảo mộc có tác dụng thuốc tổng hợp độc dễ dung nạp, người cao tuổi người có bệnh mạn tính Để ứng dụng tốt hoạt chất thiên nhiên việc tìm hiểu thành phần hóa học cần thiết Ngồi việc nghiên cứu biết rõ tổng thể nhóm chất việc làm rõ thành phần nhận danh cụ thể hợp chất nhu cầu quan trọng Đó nhiệm vụ ngành Hóa học hợp chất thiên nhiên Thuộc khu vực nhiệt đới nên Việt Nam có nguồn thực vật phong phú đa dạng người sử dụng để làm thức ăn, chữa bệnh Trong rau má loài thân thuộc, chúng diện khắp nơi từ vùng hải đảo, ven biển đến vùng núi Theo Trung y, rau má có tính hàn (lạnh), tân (cay), khổ (đắng) Khi ăn dạng tươi loại rau, người ta cho giúp cho việc trì trẻ trung Nước sắc từ rau má coi có tác dụng hạ huyết áp Loại nước sắc coi loại thuốc bổ dưỡng để có sức khỏe tốt (tăng trí nhớ, thị lực) Loại thuốc đắp từ dùng để điều trị chỗ đau, hạ sốt Nó cịn dùng điều trị chứng phù, viêm quản, tĩnh mạch, phế quản, bệnh trĩ, phong, eczema hay vẩy nến, giải ngộ độc sắn lợi tiểu Tuy nhiên rau má sen lồi phát gần đây, chưa có nghiên cứu hóa học Nhằm góp phần nhỏ vào nghiên cứu khoa học, chúng em chọn đề tài “Khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat rau má sen hydrocotyl bonariensis L thuộc họ ngò (Apiaceae)” để thực SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 v MỤC LỤC  PHIẾU ĐỀ NGHỊ ĐỀ TÀI TỐT NGHIỆP CHO SINH VIÊN i LỜI CẢM ƠN .ii NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN iii NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ CHẤM PHẢN BIỆN iv LỜI MỞ ĐẦU v MỤC LỤC vi DANH MỤC HÌNH ẢNH ix DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ PHỤ LỤC x DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TỪ xi CHƯƠNG TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT 1.1 Sơ lược chi Hydrocotyle 1.2 Giới thiệu rau má sen Hydrocotyle bonariensis L 1.2.1 Tên gọi phân loại 1.2.2 Đặc điểm, xuất xứ phân bố 1.2.3 Thành phần hóa học CHƯƠNG GIỚI THIỆU Về STEROID GLYCOSID 2.1 Steroid 2.2 Glycosid 2.2.1 Khái niệm glycosid 2.2.2 Phân loại glycosid 2.2.3 Lý tính glycosid 2.2.4 Steroid glycosid 2.2.4.1 Glycosid trợ tim 2.2.4.2 Saponin 10 2.2.5 Quy trình tách chiết glycosid khỏi 10 2.2.6 Phương pháp thủy giải glycosid 12 SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 vi 2.2.6.1 Thủy phân men (enzym) 12 2.2.6.2 Thủy phân dung dịch acid (HCl, H2SO4 ) 13 2.2.6.3 Thủy phân dung dịch kiềm 13 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Dụng cụ 14 3.2 Hóa chất 14 3.3 Phương pháp sắc kí 14 3.3.1 Phương pháp sắc kí cột 14 3.3.1.1 Chuẩn bị cột sắc kí 14 3.3.1.2 Giải ly sắc kí cột pha thường 16 3.3.1.3 Theo dõi trình giải ly cột sắc kí 16 3.3.2 Sắc kí lớp mỏng 17 3.3.2.1 Nguyên tắc 17 3.3.2.2 Giải ly mỏng 18 3.4 Phương pháp chuẩn bị cao 19 3.4.1 Dung môi 19 3.4.1.1 Dung môi để chiết tách hợp chất khỏi mẫu 19 3.4.1.2 Lựa chọn dung môi để chiết tách 20 3.4.1.3 Một số điều cần biết sử dụng dung môi để chiết tách hợp chất 20 3.4.2 Các kỹ thuật chiết tách hợp chất khỏi 21 3.4.2.1 Kỹ thuật chiết rắn lỏng 21 a Kỹ thuật chiết ngấm kiệt 21 b Kỹ thuật chiết ngâm dầm 22 c.Kỹ thuật chiết máy Soxlet 23 3.4.2.2 Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng 24 3.5 Phương pháp xác định cấu trúc 27 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 28 SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 vii 4.1 Điều chế loại cao 28 4.1.1 Sắc kí cột nhanh 28 4.1.2 Điều chế cao metanol tổng 29 4.1.3 Điều chế cao PE 30 4.1.4 Điều chế cao DC 30 4.1.5 Điều chế cao Ea 30 4.1.6 Điều chế cao Me 30 4.2 Sắc kí cột cao Ea3 32 4.2.1 Khảo sát phân đoạn Ea3.3 33 4.2.2 Biện luận cấu trúc Ea8 36 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC 49 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP 59 SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 viii DANH MỤC HÌNH ẢNH  Hình 1.1 Một số thuộc chi Hydrocotyle Trang Hình 1.2 Lá hoa Hydrocotyle bonariensis Hình 2.3 Sơ đồ quy trình tách chiết glycosid khỏi 11 Hình 3.4 Triển khai SKLM 18 Hình 3.5 Cách tính giá trị Rf 19 Hình 3.6 Kỹ thuật chiết ngâm dầm 22 Hình 3.7 Kỹ thuật chiết máy Soxhlet 23 Hình 3.8 Bình lóng 24 Hình 3.9 Sơ đồ tổng quát trình điều chế cao 26 Hình 4.10 Sắc kí cột nhanh 29 Hình 4.11 Sơ đồ điều chế cao phương pháp trích ly rắn lỏng sắc kí cột nhanh 31 Hình 4.12 SKLM cao Ea giải ly Ea:Me = 9:1 32 Hình 4.13 SKLM kết xử lý Ea3.12 35 Hình 4.14 SKLM hợp chất Ea8 35 Hình 4.15 SKLM Ea8 với hệ dung môi khác 35 Hình 4.16 Tinh thể hợp chất Ea8 35 Hình 4.17 Cấu trúc hỗn hợp hợp chất Ea8 45 SVTH Phan Thị Trinh-MSSV 2064027 ix TÀI LIỆU THAM KHẢO  Nguyễn Ngọc Hạnh Giáo trình cao học tách chiết cô lập hợp chất tự nhiên, 2002, Viện công nghệ hóa học TP HCM Đỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam, 2004, NXB Y Học Nguyễn Kim Phi Phụng Phổ NMR sử dụng phân tích hữu cơ, 2005, Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Nguyễn Kim Phi Phụng Phương pháp cô lập hợp chất hữu , 2007, Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Tơn Nữ Liên Hương Bài giảng Hóa học hợp chất thiên nhiên, 2008, Trường Đại học Cần Thơ Tôn Nữ Liên Hương Khảo sát nhóm hợp chất có hoạt tính sinh học rau má sen, chi Hydrocotyle, họ apiaceae, vài tỉnh đồng sông cửu long Báo cáo Tổng kết đề tài nghiên cứu cấp B2008-16-87, 2010, Đại học Cần thơ Tôn Nữ Liên Hương Sự cô lập đặc điểm hợp chất sterol, phenolic rau má sen hydrocotyle bonariensis L., họ ngị (Apiaceae), Đại học Cần thơ Tơn Nữ Liên Hương Tìm hiểu thuộc chi Hydrocotyle, họ apiaceae Chuyên đề tiến sĩ 1, 2007, Đại học Khoa học Tự nhiên TP HCM Phạm Thị Thanh Nga Khảo sát cao etyl acetat Rau má sen Hydrocotyle bonariensis Luận văn đại học, 2007, Đại học Cần thơ 10 Vũ Thị Nhung Khảo sát cao etyl acetat Rau má sen Hydrocotyle vulgaris Luận văn đại học, 2008, Đại học Cần thơ 11 Đặng Thị Anh Phượng Khảo sát thành phần hóa học cao ete dầu hỏa loài rau má sen (Hydrocotyle vulgaris L.) Luận văn thạc sĩ hóa học, 2010, Đại học Cần thơ 12 Nguyễn Duy Tuấn Phân lập hợp chất phân cực trung bình từ rau má sen Hyrocotyle bonariensis silica gel tái chế Luận văn đại học, 2009, Đại học Cần thơ Tài liệu tham khảo 13 Nguyễn Thị Ánh Tuyết Khảo sát hóa học đinh lăng trỗ Polyscias Gulfoyle Bail Họ cà phê (Rubiaceae), 2007, Đại học Khoa học Tự nhiên thành phố Hồ Chí Minh 14 Alexandra Paulo, Catarina a Dias, M Luı´sa Jimeno Carlos Borges, Jose´ Nascimento Phytochemical communication A new 7,22 sterol from the bulbs of Autonoe madeirensis, Fitoterapia 76 (2005) 765– 767, 2005 15 Guanghai Shen, Sei-Ryang Oh, Byung-Sun Min, Joongku Lee, Kyung Seop Ahn, Young Ho Kim, Hyeong-Kyu Lee Phytochemical Investigation of Tiarella polyphylla, 2007, Archive of pharmacy reseach 16 Karl H Pegel The importance of sitosterol and sitosterolin in human and animal nutrition REVIEW ARTICLE, South African Journal of Science, 1997, 93, 263-268 17 Patrick J.D Bouic, PhD and Johan H.Lamprecht, MD Plant sterols and sterolins: A review of their immune-modulating properties, 1999, Departments of Medical microbiology and pharmacology, Medical Faculty, University of Stellenbosch 18 Simin Shameel, K Usmanghani, M Shaiq Ali and Viqar Uddin Ahmad Chemical constituents from the seeds of pongamia pinnata Pierre, Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences Vol.9(1), January 1996 19 http://australian-insects.com/lepidoptera/plants/apia/apiaceae.html 20 http://duoclieu.net/Dlieuhoc/glycosidch2.html SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 48 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR hợp chất Ea8 Phụ lục SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 50 Phụ lục SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 51 Phụ lục SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 52 Phụ lục Phụ lục 2: 13C-NMR hợp chất Ea8 SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 53 Phụ lục SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 54 Phụ lục SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 55 Phụ lục Phụ lục 3: Phổ DEPT hợp chất Ea8 SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 56 Phụ lục SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 57 Phụ lục SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 58 Trường Đại Học Cần Thơ Cộng hoà xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập - Tự Do - Hạnh phúc Khoa Cơng Nghệ Bộ mơn Cơng Nghệ Hóa Học Cần Thơ, ngày 18 tháng 08 năm 2010 ******** ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP Năm học: 2010 - 2011 Tên đề tài thực hiện: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO ETYL ACETATE CỦA CÂY RAU MÁ LÁ SEN, HỌ NGÒ (APIACEAE) Họ tên sinh viên thực hiện:  Họ tên: Phan Thị Trinh  Mã số sinh viên: 2064027 Họ tên cán hướng dẫn:  Họ tên: Tôn Nữ Liên Hương  Học vị : Thạc Sĩ Đặt vần đề (giới thiệu chung): Hướng tới hợp chất thiên nhiên để phục vụ cho ngành dược học quan tâm nhiều Dựa tác dụng phổ thông, thường ngày cỏ xung quanh mà người ta tiến hành khảo sát thành phần hóa học, thử tiêu hóa sinh, để có sở sử dụng chúng làm dược tá Rau má loài có nhiều tác dụng nhiệt, giải độc… rau má sen hydrocotyl bonariensis loài Những nghiên cứu hóa học hợp chất chi rau má sen hydrocotyle bonraniensis chưa thực giới Do đó, thơng qua đề tài “KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CAO ETYL ACETAT CỦA CÂY RAU MÁ LÁ SEN, HỌ HOA NGÒ”, em mong muốn góp phần làm phong phú thêm từ điển Dược học Đề cương luận văn tốt nghiệp Mục đích u cầu:  Cơ lập định danh chất có cao etyle acetate  Tìm hiểu hướng ứng dụng chúng Địa điểm, thời gian thực hiện:  Địa điểm: Phịng thí nghiệm hóa hữu khoa Khoa học  Thời gian thực hiện: 09/8/2010 – 10/11/2010 Giới thiệu thực trạng có liên quan tới vấn đề đề tài:  Vì lồi nên chưa có nghiên cứu giới  Ở Việt Nam, tách flavol rau má sen Thạc sĩ Tôn Nữ Liên Hương thực Các nội dung giới hạn đề tài: Nội dung chính: Chương 1: Tổng quan 1.1 Mô tả thực vật 1.2 Phương pháp sắc ký cột hở 1.3 Phương pháp sắc ký lớp mỏng Chương 2: Thực nghiệm kết 2.1 Dụng cụ, hóa chất phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Dụng cụ, hóa chất 2.1.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2 Thực nghiệm 2.2.1 Sắc ký mỏng cao etyl acetat 2.2.2 Sắc ký cột cao etyl acetat 2.2.3 Kết Chương 3: Kết luận kiến nghị 3.1 Kết luận 3.2 Kiến nghị SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 60 Đề cương luận văn tốt nghiệp Phương pháp thực đề tài:  Cô lập chất từ cao phương pháp sắc ký cột hở  Tinh chế chất  Xác định cấu trúc (ghi phổ) Kế hoạch thực (ghi rõ tiến độ thực hiện):  Từ ngày 09/08/2010 đến 17/10/2010 tiến hành sắc ký cột hở sắc ký lớp mỏng để phân lập tinh chế hợp chất Gửi Hà Nội đo phổ NMR chất tinh khiết thu  Từ ngày 18/10/2010 viết sửa để hoàn thành luận văn SINH VIÊN THỰC HIỆN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Phan Thị Trinh Tơn Nữ Liên Hương DUYỆT CỦA BỘ MƠN DUYỆT CỦA HĐ LV&TLTN SVTH Phan Thị Trinh – MSSV 2064027 61 ... NĂM HỌC: 2010 – 2011 Họ tên cán hướng dẫn Ths Tôn Nữ Liên Hương MCB: 1410 Tên đề tài: Khảo sát thành phần hóa học cao Etyl acetat rau má sen (Hydrocotyl bonariensis L. ), họ Ngị (Apiaceae) Địa... tài: Khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat rau má sen (Hydrocotyle bonariensis L. ), họ Ngò (Apiaceae) Sinh viên thực hiện: Phan Thị Trinh MSSV: 2064027 L? ??p Công nghệ Hóa học – Khóa 32 Nội... sắn l? ??i tiểu Tuy nhiên rau má sen loài phát gần đây, chưa có nghiên cứu hóa học Nhằm góp phần nhỏ vào nghiên cứu khoa học, chúng em chọn đề tài ? ?Khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat rau má