khảo sát thành phần hóa học của cao ethyl acetate cây bảy lá một hoa paris polyphylla sm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HÓA HOÀNG THỊ THU HỒNG KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CAO ETHYL ACETATE CÂY BẢY LÁ MỘT HOA PARIS POLYPHYLLA SM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Thành phố Hồ Chí Minh 2013 MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Phân loại .5 1.2 Cây bảy hoa 1.2.1 Khái quát 1.2.2 Mô tả thực vật 1.3 Phân bố sinh thái 1.4 Các nghiên cứu bảy hoa 1.5 Tác dụng dược lý .21 1.6 Tính vị, công 22 Chương THỰC NGHIỆM 24 2.1 Nguyên liệu 24 2.2 Điều kiện thực nghiệm .24 2.2.1 Hóa chất 24 2.2.2 Trang thiết bị 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Chiết xuất .25 2.3.2 Lắc phân đoạn 25 2.3.3 Sắc kí cột silica gel pha thuận 25 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .28 3.1 Kết trình chiết .28 3.2 Kết lắc phân đoạn 28 3.3 Kết cô lập 30 3.4 Biện giải cấu trúc hợp chất thu .31 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .36 4.1 Kết luận 36 4.2 Kiến nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO .37 TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT .37 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 37 LỜI MỞ ĐẦU Nước ta thiên nhiên ưu ban tặng cho thảm thực vật phong phú, có nhiều loài có khả chữa nhiều loại bệnh Theo thống kê chưa đầy đủ Viện Dược liệu (Bộ Y tế) cho thấy, nước ta có khoảng 3.800 loài thực vật làm thuốc Trong có loại quý mà y học giới cần như: hoàng liên, lan kim tuyến, thạch tùng cưa, sâm ngọc linh, thất diệp chi hoa, Từ xưa, dân gian biết dùng loại cỏ kết hợp với để chữa bệnh Theo thời gian, với phát triền khoa học, kĩ thuật, có nhiều công trình nghiên cứu loài thực vật, thuốc đời nhằm bổ sung phục vụ cho việc tìm hiểu nghiên cứu thuốc, bên cạnh nhà nghiên cứu dược liệu tạo sản phẩm có nguồn gốc thiên nhiên có lợi an toàn cho sức khỏe người, chữa số bệnh Cây bảy hoa hay gọi thất diệp chi hoa loại thảo dược nhận nhiều quan tâm Kết nghiên cứu đại cho thấy bảy hoa có tác dụng kháng khuẩn nhiều loại vi khuẩn trực khuẩn lỵ, trực khuẩn coli, liên cầu khuẩn, ; kháng virut cúm; chống co thắt, trừ đờm giảm ho; trấn tĩnh giảm đau; chống viêm cầm máu; làm giảm mỡ máu; đặc biệt có tác dụng ức chế trực tiếp phát triển tế bào ung thư Nhiều nghiên cứu tác giả Trung Quốc cho thấy, dịch chiết thất diệp chi hoa góp phần kéo dài thời gian sống bệnh nhân bị ung thư dày ung thư phổi Tuy nhiên, thuốc chưa nhiều người biết đến chưa di thực trồng hái nhiều nước ta Việc nghiên cứu, khảo sát thành phần hóa học nghiên cứu tác dụng dược lý loài Việt Nam Bên cạnh đó, việc khai thác bừa bãi người dân làm nguy hại đến nguồn dược liệu quý Vì lí , định thực đề tài: “ Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate bảy hoa Paris Polyphylla Sm.” với mong muốn đóng góp phần nhỏ vào việc tìm hiểu thành phần hóa học loài Chương TỔNG QUAN 1.1 Phân loại [4] Theo trung tâm liệu thực vật Việt Nam, bảy hoa có vị trí phân loại sau: - Giới: Thực vật - Ngành: Magnoliophyta (Mộc lan, Hạt kín) - Lớp: Liliopsida (Hành) - Bộ: Dioscoreales (Củ nâu) - Họ: Trilliaceae (Trọng lâu) - Chi: Paris 1.2 Cây bảy hoa 1.2.1 Khái quát [3] - Tên khoa học: Paris polyphylla Sm - Tên đồng nghĩa: Daiswa polyphylla (Smith) Raf - Thuộc chi Paris, họ Hành tỏi (Liliaceae) - Tên khác: Thất diệp chi hoa, tảo hưu, độc cước liên, thiết đăng đài, thảo hà sa, cúa dô (H’Mông) - Tên nước ngoài: Parisette, Herbe – Paris (Pháp) Hình 1.1: Cây bảy hoa 1.2.2 Mô tả thực vật [3] Hình 1.2: Thân rễ bảy hoa Bảy hoa loại thảo, sống lâu năm, cao 0,5 – 0,7m Thân rễ mập, chia nhiều đốt, có ngấn ngang sẹo to Thân thẳng đứng, cao đến 1m, không phân nhánh, màu lục tím, thân có tầng mọc vòng từ 68 cái, thường 7, hình trứng – bầu dục mác thuôn, dài 15 – 20cm, rộng – 10cm, gốc tròn hình tim, đầu nhọn, mép nguyên, mặt màu lục nhạt tím đỏ; có gân; cuống dài Hoa mọc đơn độc thân, cách tầng khoảng 15 – 30cm; đài hình mác màu lục; rời trông lá; cánh tràng hình sợi màu vàng; ngắn đài, nhị nhiều; mảnh, có bao phấn màu vàng nâu, bầu màu tím đỏ có ngăn Quả mọng, màu tím đen, hạt to màu vàng Mùa hoa vào tháng – 7, mùa quả: tháng – 12 1.3 Phân bố sinh thái [3] Loài bảy hoa, có tên khoa học Paris polyphylla Sm., thực gặp Việt Nam Các điểm thu mẫu vật gồm có Mộc Châu ( Sơn La), Đồng Văn (Hà Giang), số điểm phân bố khác Trên giới, phân bố Trung Quốc (bao gồm An Huy, Phúc Kiến, Quảng Đông, Quảng Tây, Hà Nam, Hồ Bắc, Hồ Nam, Giang Tô, Giang Tây, Tứ Xuyên ), Ấn Độ, Nê Pan Myanma Bảy hoa đặc biệt ưa ẩm ưa bóng, thường mọc rải rác tán rừng kín thường xanh, dọc theo bờ khe suối, đất ẩm nhiều mùn Phần thân mặt đất lụi hàng năm vào cuối mùa thu Thân rễ mang -2 chồi ngủ tồn qua đông mọc lại vào mùa xuân năm sau Trong tự nhiên, thường có lớn với chiều dài thân rễ cm thấy có hoa Bảy hoa thích nơi có khí hậu ẩm mát, gió, không chịu úng Cây chưa trồng quy mô lớn mà phạm vi vườn thuốc số địa phương Cây nhân giống hạt thân rễ Hằng năm, vào tháng 10 -11, thu lấy chín đem gieo vườn ươm phơi khô để đến mùa xuân năm sau gieo Mỗi có hoa, hoa có hạt nên hệ số nhân giống hạt không cao Thân rễ bảy hoa có nhiều đốt chứa mắt ngủ, tách đoạn để trồng Thời vụ trồng chủ yếu mùa xuân mùa thu Mùa thu hoạch thường vào tháng -7 Khi thu, đào thân rễ rửa sạch, để nguyên đem phơi thái mỏng phơi khô Bảy hoa loài khác chi thuốc thuộc diện quý Việt Nam Do nạn phá rừng làm thu hẹp môi trường sống, gần lại bị thu gom bán qua biên giới, nguy tuyệt chủng chúng thêm gay gắt Bảo tồn loài Bảy hoa yêu cầu cấp thiết 1.4 Các nghiên cứu bảy hoa Trên giới Năm 1982, Sheo B.Singh cộng cô lập hợp chất spirostanol saponin gồm Polyphyllin C (1), D (2), E (3) F (4) [12] O O OH OH CH2OH OH O RO O O O OH OH Polyphyllin C (1): R = H H OH HO HOH2C O Polyphyllin D (2): R = OH O Polyphyllin E (3): R = OH Me OH Me H O O OH O O OH OH Me O O O OH O OH OH Me OH Me O O O OH O OH OH CH2OH Polyphyllin F (4) Năm 2002, Hisashi Matsuda cộng phân lập loại spirostanol saponin steroid gồm pennogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)- [α-L-arabinofuranosyl(1→4)]-β-D-glucopyranoside (5), pennogenin 3-O-α-L- rhamnopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-β-D-glucopyranoside (6), diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)- [α-L-arabinofuranosyl(1→4)]-β-D-glucopyranoside (7), diosgenin 3-O-α-L- rhamnopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-β-D-glucopyranoside (8), furostanol saponin steroid parisaponin I (9), với furostanol saponin steroid biết trigofoenoside A (10) protogracillin (11) [6] O O OH HO O O Ο OH O OH HO H OH HO H O Pennogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-[α-L- O CH3 H OH OH arabinofuranosyl(1→4)]-β-D-glucopyranoside (5) Chương THỰC NGHIỆM 2.1 Nguyên liệu Nguyên liệu sử dụng để nghiên cứu rễ bảy hoa (Paris polyphylla Sm.) thu hái tỉnh Lâm Đồng 2.2 Điều kiện thực nghiệm 2.2.1 Hóa chất - Methanol (Merck, Trung Quốc) - Diethyl ether (Trung Quốc) - Acetone (Trung Quốc) - Chloroform (Trung Quốc) - Sulfuric acid (Trung Quốc) - Nước cất hai lần - Ethanol (Việt Nam) - Silica gel G 0,06-0,02 mm (Merck) 2.2.2 Trang thiết bị - Tủ sấy KC-65, tủ sấy chân không VWRS/P - Cân phân tích Meltler Toledo AB- 204 - Đèn soi UV-VIS DESAGA SARTEDT GRUPPE - Máy cô quay BUCHI R-114 - Máy ảnh kĩ thuật số - Máy siêu âm Elma LC 60H (Đức) - Bếp cách thủy Memmert (Đức) - Cột sắc kí kích thước : 7,5 cm x 60 cm, cm x 50 cm, cm x 50 cm - Bình phun thuốc thử - Bình triển khai sắc kí - Tủ sấy - Bản nhôm tráng sẵn, loại silicagel 60 F 254 (Merck) - Máy ghi phổ cộng hưởng từ hạt nhân: AVANCE 500 BRUKER [500 MHz (1H) 125 MHz (13C)], đo pyridine 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Chiết xuất Bột nguyên liệu làm ẩm ngâm 24 , chiết ngấm kiệt EtOH 70% (tỉ lệ 1:6), thu dịch chiết Cô giảm áp dịch chiết đến dạng cao sệt thu cao EtOH thô 2.3.2 Lắc phân đoạn Dùng cao EtOH thô hòa với nước lắc với diethylether, sau cô giảm áp dịch diethylether ta thu cao diethylether Dịch nước tiếp tục lắc với ethyl acetate, lắc tiếp với butanol, cô giảm áp dịch lắc ta thu cao ethyl acetate cao butanol 2.3.3 Sắc kí cột silica gel pha thuận Nạp cao ethyl acetate (EA) vào cột silica gel , rửa giải với hệ dung môi giải ly EA:MeOH có độ phân cực tăng dần (100% EA → 95:5 → 9:1 → 8:2 → 7:3 → 5:5 → 100% MeOH), dựa SKLM màu dung dịch H SO 10%/EtOH thu phân đoạn Sử dụng cột sắc kí với thông số sau (CỘT 1): Chất hấp phụ: Silica gel 60 F 254 (100 g) - Quy cách cột: 7,5 cm x 60 cm - Chiều cao cột silica gel: 40 cm - Tốc độ dòng: 40 giọt/phút - Thể tích phân đoạn: 50 ml - Tổng số phân đoạn: Để kiểm tra thành phần tách phân đoạn hứng trình chiết tách, dùng SKLM, khai triển với hệ dung môi: CHCl :MeOH (9:1, 8:2) Thuốc thử phát dd H SO 10% /EtOH, phun sấy 110 oC phút Bảng 2.1: Các phân đoạn CỘT Hệ dung môi EA:MeOH EA 100% 95:5 9:1 8:2 8:2 7:3 7:3 Phân đoạn tập hợp Phân đoạn I2 13-47 I4 78-106 I1 I3 1-12 48-77 I5 107-134 I7 148-164 I6 I8 135-147 165-185 Sau qua cột silica gel phân đoạn EA bảy hoa, tách thành phân đoạn tập hợp Để phân lập đơn chất, phải tiếp tục tách tinh chế phân đoạn a) Phân đoạn I xuất tủa trắng sau để thời gian điều kiện thường Lọc tủa, rửa tủa MeOH Sau lọc thu hai phân đoạn dịch lọc DI tủa TI b) Tiếp tục tiến hành SKC silica gel phân đoạn tủa TI với hệ dung môi CHCl :MeOH có độ phân cực tăng dần (100% CHCl → CHCl :MeOH 95:5), thu chất tinh FE9 Sử dụng cột sắc kí với thông số sau: − Chất hấp phụ: Silica gel 60 F254 (60 g) − Quy cách cột: cm x 50 cm − Chiều cao cột silica gel: 30 cm − Tốc độ dòng: 25 giọt/phút − Thể tích phân đoạn: 15 ml − Tổng số phân đoạn : 67 Bảng 2.2: Các phân đoạn CỘT Hệ dung môi CHCl :MeOH CHCl 100% 100:5 95:5 Phân đoạn tập hợp Phân đoạn II 10-25 II II 1-10 40-67 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết trình chiết Thực phương pháp chiết ngấm kiệt cho 2,5 kg nguyên liệu khô bảy hoa EtOH (1:6), thu dịch chiết EtOH Sau cô giảm áp, thu 300 g cao EtOH thô Sơ đô 3.1: Sơ đồ điều chế cao EtOH Nguyên liệu khô 2,5 kg Chiết ngấm kiệt với EtOH 96% tỉ lệ 1:6 Dịch chiết EtOH Cô chân không, thu hồi EtOH Cao chiết EtOH 300 g cao thô 3.2 Kết lắc phân đoạn Sau hòa 11 nước vào 300 g cao EtOH thô, lắc phân đoạn với khoảng 101 diethyl ether, cô giảm áp dịch trích ta thu 8,8182 g cao diethyl ether Dịch nước lại lắc tiếp với khoảng 101 ethyl acetate, cô giảm áp dịch trích ta thu 51,2075 g cao ethyl acetate Tiếp tục cho lắc dịch nước với khoảng 101 butanol, cô giảm áp dịch trích ta thu 46,5387 g cao butanol Sơ đồ 3.2: Sơ đồ điều chế phân đoạn 300 g cao EtOH Hoà với 11 nước cất Dịch nước Chiết lỏng lỏng với diethyl ether Cô quay chân không thu hồi diethyl Dịch nước Cao diethyl ether (m = 8,8182 g) Chiết lỏng lỏng với ethyl acetate Cô quay chân không thu hồi ethyl Dịch nước Cao ethyl acetate (m = 51,2075 g) Chiết lỏng lỏng với butanol Cô quay chân không thu hồi butanol Dịch nước Cao butanol (m = 46,5387 g) Sau lắc với dung môi theo độ phân cực tăng dần, thu cao phân đoạn diethyl ether, ethyl acetate butanol Các phân đoạn tiếp tục cho qua cột silica gel để phân lập hợp chất tinh 3.3 Kết cô lập Lấy 51,2075 g cao phân đoạn etyl acetate để thực sắc kí cột hấp phụ silica gel pha thường với nhiều hệ dung môi giải li có độ phân cực khác nhau, bước đầu cô lập chất tinh FE9 (12 mg) Quá trình cô lập chất FE9 trình bày sơ đồ Sơ đồ 3.3: Quá trình cô lập hợp chất FE9 Phân đoạn ethyl acetate (51,2075g) SKC silica gel EA : MeOH PĐ I1 (4,3497 g) PĐI2 (2,7338 g) DI3 (97,7 mg) PĐ I3 (1,493 g) PĐ I (2,2751 g) PĐ I5 (2,1618 g) TI3 (30 mg) SKC silica gel CHCl3 : MeOH FE9 (12 mg) PĐ I6 (3,3781 g) PĐ I7 (1,8027 g) PĐ I8 (0,9331 g) Hệ dung môi giải li: CH3Cl:MeOH (85:15) Thuốc thử hình: ddH2SO4/EtOH Hình 3.1: SKLM chất cô lập với phân đoạn I 3.4 Biện giải cấu trúc hợp chất thu Hợp chất FE9 cô lập dạng bột vô định hình, màu trắng Tan hệ dung môi CHCl : MeOH = 1:1 pyridine SKLM pha thường với hệ dung môi CHCl : MeOH = 85:15, hình dd H SO 10% /EtOH, cho vết đậm màu tím với giá trị Rf = 0,6 Biện luận: Phổ 13C-NMR (phụ lục 2a, 2b) kết hợp với phổ DEPT (phụ lục 3a, 3b) cho thấy hợp chất FE9 có 54C, phổ 1H-NMR (phụ lục 1, 1a, 1b) 13C-NMR , ta thấy có tín hiệu cao bất thường, với tín hiệu cặp với nhau, chứng tỏ hợp chất FE9 hỗn hợp chất có cấu trúc gần giống nhau, ký hiệu FE9a FE9b Phổ 1H-NMR hợp chất FE9a xuất tín hiệu proton mũi đơn nhóm methyl δ H 0.70 ppm (3H, s), 0.97 ppm (3H, s) tương ứng với tín hiệu C δ C 12.2 ppm (C-18a), δ C 19.5 ppm (C-19a) Do tín hiệu proton hợp chất phụ có δ gần giống với hợp chất nên thấy rõ số tín hiệu proton nhóm methyl phổ 1H-NMR Dựa vào phổ 13C-NMR phổ DEPT, xác định tín hiệu nhóm methyl vùng trường δ C 20.0 (C-11a, C- 26a), δ C 19.3 (C-27a), δ C 12.6 (C-29a) Các tín hiệu đặc trưng cho khung steroid Phổ 13C-NMR xuất tín hiệu nguyên tử carbon olefin δ C 121.9 ppm (=CH-) δ C 141.0 (=CCH−), C-23a (δ C 129.6, >CH−) phổ 13C-NMR DEPT Đây cặp mũi đặc trưng khung stigmasta-5,22-dien Trên phổ 1H-NMR, tín hiệu proton H-3 dịch chuyển vùng trường δ H 4.01 ppm (1H, m), thay xuất dự đoán δ H 3.50 ppm steroid có nói đôi vị trí số khác, với xuất tín hiệu carbon anome δ C 102.7 ppm (C-1′) phổ 13C-NMR, chứng tỏ chất có liên kết với nhánh đường vị trí C-3 Phổ HMBC (phụ lục 4) cho thấy tương quan proton có δ H 5.07 ppm (1H, d, J=7.7, H-1′) với carbon có δ C 78.7 (C-3) tái khẳng định kết luận Từ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR so sánh với liệu phổ hợp chất stigmasterol 3-O-β-D-glucopyranoside, thấy có tương hợp nên đề nghị hợp chất hỗn hợp FE9: FE9a stigmasterol 3-O- β-Dglucopyranoside Phổ 1H-NMR hợp chất phụ FE9b hiển thị số tín hiệu methyl có khác biệt rõ rệt so với hợp chất δ H 0.69 ppm (3H, s, H-18b), 0.95 ppm (3H, s, H-19b), 1.01 ppm (3H, d, J=6.35Hz, H-21b) Bên cạnh nhóm methyl có nhóm methyl khác xuất phổ 13C-NMR phổ DEPT, nhiên tín hiệu nhóm methyl không quan sát rõ ràng phổ 1H-NMR giá trị δ chúng gần với hợp chất chính, nhóm methyl δ C 21.3 (C- 11b), δ C 20.0 (C-27b), δ C 19.3 (C-26b) Từ liệu phổ, so sánh với liệu phổ hợp chất β-sitosterol-3-O- β-D-glucopyranoside, nhận thấy hợp chất phụ FE9b hỗn hợp FE9 phù hợp với công thức β-sitosterol-3-O- β-D- glucopyranoside Trên phổ 1H-NMR hỗn hợp hai chất này, tỉ lệ đường tích phân proton δ H 0.70 ppm (3H, s, H-18a) δ H 0.69 ppm (3H, s, H-18b) 3:2 Do xác định tỉ lệ tương đối FE9a FE9b hỗn hợp thu 3:2 Những liệu kết hợp đối chiếu, so sánh với hỗn hợp Sc2 [12] báo cáo trước đó, với liệu phổ stigmasterol 3-O-β-Dglucopyranoside β -sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside phổ 13C-NMR (Bảng 3.1) phổ 1H-NMR (Bảng 3.2), đưa kết luận FE9 hỗn hợp stigmasterol glucopyranoside 3-O-β-D-glucopyranoside β -sitosterol-3-O-β-D- Bảng 3.1: So sánh phổ 13C-NMR FE9 với Sc2, stigmasterol 3-O- β-Dglucopyranoside β-sitosterol-3-O- β-D-glucopyranoside STT 10 11 12 13 Hợp chất FE9 Hợp chất Sc2 12.1 12.0 12.2 12.6 19.1 19.2 19.3 19.5 20.0 21.3 21.4 21.5 23.6 24.6 DEPT CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH δC 12.2 12.6 19.1 19.2 19.3 19.5 20.0 21.3 21.5 22.0 23.5 24.6 DEPT CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH Dữ liệu Stigmasterol-3-Oβ-Dglucopyranoside (A) 12.2 (C-18) 12.6 (C-29) 19.2 (C-27) 19.5 (C-19) 21.3 (C-26), 21.3 (C-11) 21.5 (C-21) β-sitosterol-3-Oβ-Dglucopyranoside (B) 12.0 (C-18), 12.1 (C-29) 19.0 (C-21) 19.2 (C-26) 19.4 (C-19) 20.0 (C-27) 21.3 (C-11) 23.4 (C-28) 24.5 (C-15) 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 24.7 25.7 26.6 28.6 28.8 29.0 29.3 29.5 29.7 30.3 32.1 32.2 34.1 34.3 36.4 37.0 37.6 39.5 39.9 40.0 40.7 42.4 42.6 46.2 50.5 51.5 56.2 56.4 56.9 57.0 63.0 71.9 75.4 78.3 78.5 78.7 102.7 121 129.6 138.8 141.0 CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH C CH CH CH CH CH C C CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH C 24.6 25.7 26.5 28.6 29.3 29.5 29.6 29.6 30.3 32.1 32.2 32.2 34.3 36.4 36.9 37.5 39.4 39.9 40.0 40.8 42.4 42.5 46.1 50.4 51.4 56.1 56.3 56.9 56.9 62.9 71.8 75.4 78.1 78.5 78.7 102.7 121.9 129.5 138.8 140.9 CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH C CH CH CH CH CH C C CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH C 29.4 (C-16) 30.3 (C-2) 32.2 (C-7) 36.9 (C-10) 37.5 (C-1) 39.9 (C-12) 42.4 (C-13) 62.9 (Glc-6’) 71.7 (Glc-4’) 75.4 (Glc-2’) 78.6 (Glc-5’) 78.7 (C-3) 102.6 (Glc-l’) 121.9 (C-6) 129.5(C-23) 138.2 (C-22) 140.9 (C-5) 26.4 (C-23) 28.6 (C-16) 29.4 (C-25) 30.2 (C-2) 32.1 (C-8) 32.2 (C-7) 34.2 (C-22) 36.4 (C-20) 36.9 (C-10) 37.5 (C-1) 39.32 (C-12) 39.9 (C-4) 42.5 (C-13) 46.0 (C-24) 50.3 (C-9) 56.23 (C-17) 56.8 (C-14) 62.8 (Glc-6’) 71.6 (Glc-4’) 75.3 (Glc-2’) 78.1 (Glc-5’) 74.5 (Glc-3’) 78.6 (C-3) 102.5 (Glc-l’) 121.9 (C6) 140.8 (C-5) Bảng 3.2: So sánh phổ 1H-NMR FE9 với Sc2, stigmasterol 3-O- β-Dglucopyranoside β-sitosterol-3-O- β-D-glucopyranoside STT Hợp chất FE9 Hợp chất so sánh Sc2 0.67 (s,H-18) 0.69 (s, H-18) 0.92 (d, J=6.5Hz, H-26) 10 0.69 (s,H-18b) 0.70 (s, H-18a) 0.92 (d, J=6.5Hz, H-26) 0.95 (s, H-19b) 0.97 (s, H-19a) 1.10 (d, J=6.65Hz, H-21a) 4.01 (m, H-3) 5.10 (dd, J=9, 15.3 Hz, H-23a) 5.25 (dd, J=8.65, 15,15Hz, H-22a) 5.37 (br, H-6) 0.95 (s, H-19) 1.09 (d, J=6.5Hz, H-21) 4.00 (m, H-3) 5.09 (dd, J=8.25, 11.75 Hz) 5.23 (dd, J=8.75, 15.25 Hz, H-22) 5.36 (br, H-6) Dữ liệu Stigmasterol-3-Oβ-Dglucopyranoside (A) 0.69 (s, H-18) 0.92 (d, J=6.5Hz, H-26) 0.95 (s, H-19) 1.09 (d, J=6.4Hz, H-21) 4.30 (m, H-3) 5.09 (dd, J=8.9, 15.1Hz, H-23) 5.23 (dd, J=8.7, 15.1Hz, H-22) 5.36 (H-6) β -sitosterol3-O- β-Dglucopyranos ide (B) 0.67 (3H, s) 0.93 (s) 5.36 (m, H-6) Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Trong khóa luận này, tiến hành khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate thân rễ bảy hoa Paris polyphylla Smith, thuộc chi Paris, thu hái tỉnh Lâm Đồng Bằng kĩ thuật SKC sillica gel pha thường kết hợp với SKLM, phân lập hợp chất FE9 Dựa vào kết phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT 90 135, HMBC tài liệu tra cứu cấu trúc hợp chất xác định hỗn hợp stigmasterol 3-O- β-D-glucopyranoside β -sitosterol-3O- β-D-glucopyranoside OH OH O HO HO O O OH stigmasterol 3-O- β-D4.2 Kiến nghị HO HO O OH β -sitosterol-3-O- β-D-glucopyranoside Tiếp tục cô lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân đoạn chưa khảo sát Thử nghiệm hoạt tính chuyển hóa đường huyết hỗn hợp chất phân lập TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Nguyễn Kim Phi Phụng (2005), “Phổ NMR sử dụng phân tích hữu cơ” NXB Đại Học Quốc Gia TPHCM [2] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), “Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ” NXB Đại Học Quốc Gia TPHCM [3] Viện dược liệu (2003), “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam” - tập I NXB KH & KT, Hà Nội, 182-184 [4] http://botanyvn.com/default.asp TÀI LIỆU TIẾNG ANH [5] Dawei D., Denis R L., Janine M C., Dwayne J J., Kirstin V W., Jenine E U., Richard D C., Ming Z W., Ming Z L (2008), “Antifungal saponins from Paris Polyphylla Smith”, PlantaMed,Vol 74, 1397–1402 [6] Hisashi M., Yutana P., Toshio M., Akinobu K., Shinya K., Masayuki Y (2003), “Protective Effects of Steroid Saponins from Paris polyphylla var yunnanensis on Ethanol- or Indomethacin-Induced Gastric Mucosal Lesions in Rats: Structural Requirement for Activity and Mode of Action”, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 13, 1101–1106 [7] Li P K., Yi X L., Tolga E., Else D., He S Y., Yang Z., Cheng Q X., Chao L., Thomas E., Bai P M (2012), “Polyhydroxylated Steroidal Glycosides from Paris polyphylla”, Journal of Natural Products, 75, 1201-1205 [8] LuLu Y., Wen Y G., Yan J Z., Yu W (2008), “A new phenylpropanoid glycosides from Paris polyphylla var yunnanensis”, Fitoterapia 79, 306-307 [10] Liancai Z., Jun T., Bochu W., Luhan G., Yuping L., Chao Z (2011), “In-vitro antitumor activity and antifungal activity of pennogenin steroidal saponins from Paris polyphylla var yunnenensis”, Iranian Journal of Pharmaceutical Research ,10 (2): 279-286 [11] Madhu K C., Sussana P., Pramod K J (2010), “Ecological study of Paris polyphylla Sm.”, Ecological Society (ECOS), 87-93 [12] N P Rai, B B Adhikari, Arjun P, K Masuda, R D Mckelvey, M D Manandhar (2006), “Phytochemical consituents of the flowers of Sarcococca coriacea of Nepalese origin”, Japan Nepal Chemical, vol 21 [13] Sheo B S, Raghunath S R Hans R S (1982), “Spirostanol saponins from Paris Polyphylla, structures of Polyphyllin C, D, E and F”, Phytochemistry, Vol 21, 2925-2929 [14] Ting Z., Hai L., Xue T L., De-ran X., Xiao Q C., Qiang W (2009), “Qualitative and quantitative analysis of steroidal saponins in crude extracts from Paris polyphylla var yunnanensis and P polyphylla var chinensis by high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry”, Pharmaceutical and Biomedical Analysis 51, 114-124 Journal of [15] Wang G X., Han J., Zhao L W., Jiang D X, Liu Y T., Liu X L (2010), “Anthelmintic activity of steroidal saponins from Paris polyphylla”, Phytomedicine 17, 1102-1105 [16] Xiu F Z, Yan C., Jia J H., Ya Z Z., Zhou N., Lan F W., Bao Z Y., Ya L T., Yang L (2007), “Immuno-stimulating properties of diosgenyl saponins isolated from Paris polyphylla”, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 17, 2408-2413 [17] Yu W., Wen Y G., Tie J Z., Yuan Q G (2007), “A novel phenylpropanoid glycosides and a new derivation of phenolic glycoside from Paris polyphylla var yunnanensis”, Chinese Chemical Letters 18, 548-550 [18] Yu Z., Li P K., Yi X L., Yang Z., Cheng Q X., Bai P M., Fang T D (2007), “Three new steroidal saponins from the rhizome of Paris polyphylla”, Magn Reson Chem 2007; 45: 739-744 [...]... về cây bảy lá một hoa hay chi Paris tại Việt Nam 1.5 Tác dụng dược lý Glucosid α – paristyphnin chiết từ bảy lá một hoa gây một cảm giác râm ran, và có tác dụng ức chế trên huyết áp động mạch cảnh, cơ tim và cử động hô hấp Nó gây co mạch thận, nhưng lại gây giãn mạch lách và các chi và kích thích ruột động vật thí nghiệm Những tác dụng này không bị atropin hoặc ergotoxin làm thay đổi Bảy lá một hoa. .. chiết đến dạng cao sệt thu được cao EtOH thô 2.3.2 Lắc phân đoạn Dùng cao EtOH thô hòa với nước rồi lắc với diethylether, sau khi cô giảm áp dịch diethylether ta thu được cao diethylether Dịch nước tiếp tục được lắc với ethyl acetate, rồi lắc tiếp với butanol, cô giảm áp dịch lắc ta thu được lần lượt là cao ethyl acetate và cao butanol 2.3.3 Sắc kí cột silica gel pha thuận Nạp cao ethyl acetate (EA)... độc và chữa ho Ở Ấn Độ và Nê Pan, thân rễ bảy lá một hoa trị giun sán bằng cách uống bột thân rễ mỗi lần một thìa cà phê, ngày một lần, liền trong 2 ngày Để trị mụn nhọt và nhọt độc, hằng ngày bôi bột nhão chế từ thân rễ bảy lá một hoa một cách đều đặn [3] Thân rễ của Paris polyphylla được sử dụng rộng rãi ở Nepal như chống giun sán, chống co thắt, dễ tiêu hóa dạ dày, thuốc long đờm, và thuốc giun... làm thuốc giải độc rắn cắn và độc do côn trùng cắn và cũng làm giảm ảnh hưởng của thuốc mê [10] Chương 2 THỰC NGHIỆM 2.1 Nguyên liệu Nguyên liệu sử dụng để nghiên cứu là rễ cây bảy lá một hoa (Paris polyphylla Sm. ) được thu hái tại tỉnh Lâm Đồng 2.2 Điều kiện thực nghiệm 2.2.1 Hóa chất - Methanol (Merck, Trung Quốc) - Diethyl ether (Trung Quốc) - Acetone (Trung Quốc) - Chloroform (Trung Quốc) - Sulfuric... 1.6 Tính vị, công năng Thân rễ bảy lá một hoa có vị đắng, hới cay, tính hơi lạnh, hơi độc, vào kinh can, có tác dụng xổ hạ, lợi tiểu, tiêu đờm, thanh nhiệt, giải độc Ngoài ra, thân rễ của cây còn chữa sốt, sốt rét cơn, kinh giản, giải độc; nhất là khi bị rắn độc cắn, chữa mụn nhọt, viêm tuyến vú, sốt rét, ho lao, ho lâu ngày, hen suyễn Ở Trung Quốc, thân rễ cây bảy lá một hoa mọc ở miền Tây Nam Trung... diethyl ether (m = 8,8182 g) 1 Chiết lỏng lỏng với ethyl acetate 2 Cô quay chân không thu hồi ethyl Dịch nước Cao ethyl acetate (m = 51,2075 g) 1 Chiết lỏng lỏng với butanol 2 Cô quay chân không thu hồi butanol Dịch nước Cao butanol (m = 46,5387 g) Sau khi lắc với các dung môi theo độ phân cực tăng dần, thu được cao các phân đoạn diethyl ether, ethyl acetate và butanol Các phân đoạn này được tiếp tục... tiếp với khoảng 101 ethyl acetate, cô giảm áp dịch trích ta thu được 51,2075 g cao ethyl acetate Tiếp tục cho lắc dịch nước với khoảng 101 butanol, cô giảm áp dịch trích ta thu được 46,5387 g cao butanol Sơ đồ 3.2: Sơ đồ điều chế các phân đoạn 300 g cao EtOH Hoà với 11 nước cất Dịch nước 1 Chiết lỏng lỏng với diethyl ether 2 Cô quay chân không thu hồi diethyl Dịch nước Cao diethyl ether (m = 8,8182... độ xuống một nửa Trong môi trường nuôi cấy có nồng độ calci thấp, 0,5 mM, nhịp đập của những tế bào cơ tim giảm xuống khoảng 60% nhịp đập của đối chứng trong môi trường tiêu chuẩn Việc cho thêm cao chiết vào môi trường có nồng độ calci thấp với nồng độ 0,1 mg/ml gây nên sự ngừng đập của tế bào, nhưng những cao khác làm tăng nhịp đập ít nhất 10 % [3] Theo y học cổ truyền Trung Quốc, Paris polyphylla. .. liên quan đã được cô lập từ Paris polyphylla Các thí nghiệm dược lý cho thấy Flacarindiol và một số hợp chất saponin trong Paris polyphylla có hoạt tính chống ung thư Số lượng lớn glycoside và vị trí cầu nối của chúng trong cấu trúc của saponin ảnh hưởng mạnh đến hoạt tính chống ung thư của chúng Trong số các saponin, polyphyllin D được nghiên cứu rộng rãi và được đánh giá là một tác nhân chống ung thư... cao EtOH thô Sơ đô 3.1: Sơ đồ điều chế cao EtOH Nguyên liệu khô 2,5 kg Chiết ngấm kiệt với EtOH 96% tỉ lệ 1:6 Dịch chiết EtOH Cô chân không, thu hồi EtOH Cao chiết EtOH 300 g cao thô 3.2 Kết quả lắc phân đoạn Sau khi hòa 11 nước vào 300 g cao EtOH thô, lắc phân đoạn với khoảng 101 diethyl ether, cô giảm áp dịch trích ta thu được 8,8182 g cao diethyl ether Dịch nước còn lại lắc tiếp với khoảng 101 ethyl ... LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Trong khóa luận này, tiến hành khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate thân rễ bảy hoa Paris polyphylla Smith, thuộc chi Paris, thu hái tỉnh Lâm Đồng Bằng kĩ... 1.2 Cây bảy hoa 1.2.1 Khái quát [3] - Tên khoa học: Paris polyphylla Sm - Tên đồng nghĩa: Daiswa polyphylla (Smith) Raf - Thuộc chi Paris, họ Hành tỏi (Liliaceae) - Tên khác: Thất diệp chi hoa, ... đề tài: “ Khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate bảy hoa Paris Polyphylla Sm. ” với mong muốn đóng góp phần nhỏ vào việc tìm hiểu thành phần hóa học loài Chương TỔNG QUAN 1.1 Phân loại