L ỜI MỞ ĐẦU
2.3.3.Sắc kí cột silicagel pha thuận
Nạp cao ethyl acetate (EA) vào cột silica gel , rửa giải lần lượt với hệdung
môi giải ly EA:MeOH có độ phân cực tăng dần (100% EA → 95:5 → 9:1 → 8:2 → 7:3 → 5:5 → 100% MeOH), dựa trên SKLM hiện màu bằng dung dịch H2SO4
10%/EtOH thu được 8 phân đoạn.
Sử dụng cột sắc kí với các thông sốsau (CỘT 1): Chất hấp phụ: Silica gel 60
- Quy cách cột: 7,5 cm x 60 cm
- Chiều cao cột silica gel: 40 cm.
- Tốc độdòng: 40 giọt/phút.
- Thểtích mỗi phân đoạn: 50 ml.
- Tổng sốphân đoạn: 8
Đểkiểm tra thành phần tách của các phân đoạn hứng trong quá trình chiết
tách, chúng tôi dùng SKLM, khai triển với hệ dung môi: CHCl3:MeOH (9:1, 8:2). Thuốc thửphát hiện là dd H2SO4 10% /EtOH, phun sấy 110 oC trong 5 phút.
Bảng 2.1: Các phân đoạn CỘT 1
Hệdung môi
EA:MeOH Phân đoạn tập hợp Phân đoạn
EA 100% I1 I2 1-12 13-47 95:5 I3 48-77 9:1 I4 78-106 8:2 I5 107-134 8:2 I6 135-147 7:3 I7 148-164 7:3 I8 165-185
Sau khi qua cột silica gel phân đoạn EA của cây bảy lá một hoa, tách thành
những phân đoạn tập hợp. Để phân lập được đơn chất, phải tiếp tục tách và tinh
a) Phân đoạn I3 xuất hiện tủa trắng sau khi để một thời gian ởđiều kiện
thường. Lọc tủa, rửa tủa bằng MeOH. Sau khi lọc thu được hai phân đoạn là dịch
lọc DI3 và tủa TI3.
b) Tiếp tục tiến hành SKC silica gel phân đoạn tủa TI3 với hệ dung môi CHCl3:MeOH có độ phân cực tăng dần (100% CHCl3 → CHCl3:MeOH 95:5), thu được chất tinh sạch FE9.
Sử dụng cột sắc kí với các thông sốsau:
− Chất hấp phụ: Silica gel 60 F254 (60 g). − Quy cách cột: 2 cm x 50 cm.
− Chiều cao cột silica gel: 30 cm. − Tốc độdòng: 25 giọt/phút.
− Thểtích mỗi phân đoạn: 15 ml. − Tổng sốphân đoạn : 67.
Bảng 2.2: Các phân đoạn của CỘT 2
Hệ dung môi
CHCl3:MeOH Phân đoạn tập hợp Phân đoạn
CHCl3 100% II1 1-10
100:5 II2 10-25
Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});