Khóa luận tốt nghiệp Hóa học: Khảo sát thành phần Hóa học phân đoạn B cao Chloroform của lá và thân dây leo cây Hà Thủ Ô trắng (Streptocaulon juventas. MER.) thuộc họ Asclepiadaceae

Người ta đã cô lập các hợp chất trong rễ cây và thử các hoạt tính sinh học thì thấy được kha năng ức chế các loại tế bào như tế bao u xơ tử cung HT-1080, tế bao ung thư biểu mô tuyến giá

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRUONG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA HÓA

Phạm Huỳnh Phú Nhã

KHAO SÁT THÀNH PHAN HÓA HỌC PHAN

DOAN B CAO CHLOROFORM CUA LA VA

THAN DAY LEO CAY HA THU O TRANG

(Streptocaulon juventas.MERR.)

THUOC HO ASCLEPIADACEAE

Thanh phố Hồ Chi Minh — 2022

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH

KHOA HÓA

Phạm Huỳnh Phú Nhã

KHẢO SÁT THÀNH PHAN HOA HỌC PHAN

DOAN B CAO CHLOROFORM CUA LA VÀ

THAN DAY LEO CAY HÀ THU Ô TRANG

(Streptocaulon juventas MERR.)

KHOA LUAN TOT NGHIEP

Chuyên ngành: Hóa hoc hữu cơ

GV hướng dẫn: TS Bùi Xuân Hào

Thanh phố Hồ Chí Minh — 2022

LỜI CÁM ƠN

Tôi xin bảy tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thay TS Bai Xuân Hào đã luôn nhiệt tình

hướng dan, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm và tạo mọi điều kiện thuận lợi dé tôi có

thé hoàn thành khóa luận này Những bai học, những góp ý chia sẻ chân thành của

thay là động lực dé tôi tiếp tục có gắng trong quá trình nghiên cứu khoa học.

Tôi xin cảm ơn quý Thầy Cô trong phòng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên nói

riêng cũng như quý Thay Cô khoa Hóa học — Trường Đại học Sư phạm Thanh phố Hồ

Chí Minh đã tận tâm trong công tác giảng dạy, truyền thụ cho tôi nhiều kiến thức khoa

học quý báu trong thời gian học tập tại trường.

Các bạn sinh viên K43 chuyên ngành hữu cơ, cùng các ban sinh viên khoa Hóa —

Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chi Minh đã trao đối kinh nghiệm và tận tinh

cộng tác giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu.

Con xin cảm ơn gia đình đã tạo điều kiện tốt nhất về vật chất lẫn tinh than dé con

có thê hoản thành khóa luận

Cuối cùng, xin gửi những lời chúc tốt đẹp nhất đến quý thay cô, các anh chị và các

bạn Xin chân thành cảm ơn tất cả mọi người!

Tp Hồ Chi Minh, thang 5 năm 2022

Phạm Huỳnh Phú Nhã

CHƯƠNG 1 TONG QUAN

1.1 Các nghiên cứu về đặc điểm thực vật

1.2 Công dung của hà thủ 6

1.3 Các nghiên cứu vẻ thành phần hóa học

1.3.1 Các nghiên cứu trên thé giới

1.3.2 Các nghiên cứu trong nước

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM

2.1 Hóa chất, thiết bị, phương pháp

2.1.1 Hóa chất

2.1.2 Thiết bị2.1.3 Phương pháp tiên hành

2.2 Nguyên liệu

2.3 Điều chế các loại cao

2.4 Phân lập một số hợp chất hữu cơ trong cao chloroform

2.4.1 Phân lập một số hợp chất hữu cơ trong phân đoạn B

2.4.2 Phân lập một số hợp chất hữu co trong phân đoạn B6 CHƯƠNG 3 KET QUA VÀ THẢO LUẬN

3.1 Khao sát cau trúc hợp chất LI

3.2 Khảo sát cau trúc hợp chất L9

CHUONG 4 KET LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ

DANH MỤC TAI LIEU THAM KHAO

MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIET TAT

Ác : Acetone

AcOH : Acetic acid

br : Broad (rộng)

Ệ : Chloroform

d : Doublet (mũi đôi)

dd : Doublet of doublet (mũi đôi đôi)

DEPT : Distortionless enhancemement by polarization transfer

DMSO : Dimethyl sulfoxide

EA : Ethyl acetate

H : n-hexane

HMBC : Heteronuclear multiple bond corelation

HR-ESI-MS : Hight resolution electrospray ionization mass spectroscopy

HSQC : Heteronuclear single quantum coherence

Hz : Hertz

ICSO : Nong độ ức chế 50% enzyme (Inhibitory Concentration 50%)

J : Coupling constant (Hang số ghép)

m : Multiplet (mũi da)

Me : Methanol

NMR : Nuclear magnetic resonance ( cộng hưởng từ hạt nhân)

s : Singlet ( mũi don)

SKC : Sắc ký cột

SKLM : Sắc ký lớp mỏng

t : Triplet (mũi ba)

DANH MỤC CAC BANG BIEU

Bang 2.1 Kết quả sắc ký cột silica gel trên cao chloroform

Bang 2.2 Kết quả sắc ký cột silica gel trên phân đoạn B

Bảng 2.3 Kết quả sắc ký cột silica gel trên phân đoạn B6

Bảng 3.1 Dữ liệu phô của hợp chất L1

Bảng 3.2 Dữ liệu phô của hợp chất L9

lồ

17

18

23

DANH MỤC CÁC SƠ ĐÒ

Hình 1.1 Quả cây hà thủ ô trắng mọc ở Tịnh Biên, tinh An Giang

Hình 1.2 Củ cây hà thủ 6 trắng thu hái ở Tịnh Biên, tỉnh An Giang

Hình 1.3 Hoa cây hà thủ ô trắng thu hái ở Tịnh Biên, tỉnh An Giang

Hinh 1.4 Lá và thân cây hà thủ 6 trắng thu hái ở Tịnh Biên, tinh An Giang

DANH MỤC CÁC SƠ ĐÒ

Sơ đồ 1 Quy trình điều chế các loại cao từ lá và thân đây leo cây hà thủ ô trắng l§

MỞ DAU

1 Lý do chọn đề tài

Việt Nam là nước nhiệt đới gió mùa với sự đa dạng về địa hình, kiểu đất, có khí hậu

rat đặc trưng giữa các vùng miễn đã làm nên sự phong phú về thành phần cũng như số

lượng các loài thực vật Trong đó có rất nhiều cây thuốc quý được dùng trong điều trịbệnh Riêng họ Thiên ly (Aslepciadaccac) có khoảng 4.500 loải phân bỗ các khu vực

nhiệt đới châu Mỹ, Án độ, Myanmar, châu Phi, châu Á trong đó có Việt Nam.

Trong y học cô truyền, cây hà thủ 6 trắng thuộc họ Thiên lý (Aselepiadaceae) đượcdùng làm thuốc bô chữa thiểu máu, sốt rét kinh niên, thấp khớp, rối loạn kinh nguyệt,suy nhược than kinh, ăn uống khó tiêu Riêng rễ cây còn ding đẻ giải độc, chữa cảm sốt,trị vết sưng, vết thương do ran can [1]

Ngoài ra cây ha thủ 6 trắng còn cho thay nhiều tiềm năng trong điều trị ung thư

Người ta đã cô lập các hợp chất trong rễ cây và thử các hoạt tính sinh học thì thấy được

kha năng ức chế các loại tế bào như tế bao u xơ tử cung HT-1080, tế bao ung thư biểu

mô tuyến giáp A549 ở phôi người [2] tế bao ung thư bạch cầu HL-60 [3].

Bên cạnh việc khảo sát các hợp chất tự nhiên và thử hoạt tính sinh học của rễ cây thì

chưa thấy có nghiên cứu trong lá và thân cây hà thủ ô trắng Vì vậy tôi quyết định chọn

dé tài “Khao sát thành phần hóa học phân đoạn B của cao chloroform từ lá và thân

day leo cây hà thủ ô trắng (Streptocaulon juventas Merr.), họ Asclepiadaceae” dé

khảo sát và phân lập các hợp chât có trong lá và thân cây này.

CHƯƠNG 1 TONG QUAN1.1 Các nghiên cứu về đặc điểm thực vật

-Tén khoa học: Streptocaulon juventas Merr [4].

- Ho: Asclepiadaceae [4].

- Tên thường gọi: Cây hà thủ ô trắng còn có tên là hà thủ 6 nam, bạch hà thủ 6, củ

vú bò, dây sữa bò, day móc [4]

- Nguồn gốc phân bố:

+ Hiện tại có khoảng 10 loài thuộc chi Srepfocawlon ở vùng nhiệt đới châu A

+ Loài hà thủ 6 trắng phân bé chủ yếu ở 3 nước Việt Nam, Lao Campuchia va

một sé vùng phía nam Trung Quốc.

+O Việt Nam, ha thủ 6 trắng phân bố rải rac khắp tỉnh niềm núi, trung du và đôikhi cá ở đồng bằng Thường thấy ở Vĩnh Phúc, Hà Tây, Tuyên Quang [4]

- Mô tả thực vật: Hà thủ 6 trắng thuộc họ dây leo, day dai từ 2-5m Thân va cànhmàu nâu đỏ, có nhiều lông, dày hơn ở ngọn non, khi già nhẫn dan Lá mọc đối, hìnhtrứng ngược, mặt trên màu xanh sim, mặt đưới mau trắng nhạt có nhiều lông mịn Hoamau nâu nhạt hoặc vàng tia Quả hình thoi, mau xám nhiều lông Ré củ dài có mau

trắng, giữa có lõi trong như củ sắn nhưng có vị đắng [1] (Hình 1.1 đến 1.4)

Hình 1.3 Hoa cây hà thủ ô trắng Hình 1.4 Lá và thân cây hà thủ ô trắng

1.2 Công dụng của hà thủ ô

Ha thủ 6 trắng có vị ngọt đăng, chát, tinh mát, có tác dụng bộ máu, b6 gan và thận

Một số bai thuốc dùng trong đông y [1]

© Chữa cảm sót, ra mô hôi nhiều, chữa vết thương sưng đau: dùng dang cao thuốc

hoặc rượu uống Ngày 12-20g

© Chữa dai rat, đái budt: hà thủ ô trắng sắc nước hang ngày.

e Chữa rin cắn: rễ hoặc lá hà thủ 6 trắng nhai nuốt nước, bã đắp lên vết thương.

© Chữa lở, ngứa: lá và cành ha thú 6 trắng đun nước tắm.

1.3 Các nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học

1.3.1 Các nghiên cứu trên thế giới

1.3.1.1 Cây hà thủ 6 tring

Năm 2003, Jun-ya Ueda và cộng sự đã phân lập được mười sáu hợp chất

cardenolide, hai hợp chất phenylpropanoide và phenylethanoide từ rễ củ hà thủ 6 trăng

Tiến hành thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bao trên ba dòng tế bào ở người đó là u xơ tử

cung HT-1080, ung thư biểu mô tuyến giáp A549, ung thư cô tử cung HeLa và trên ba

dong tế bao ở chuột là ung thư đại tràng 26-L5, ung thư phôi Lewis, các khối u ác tính B16-BL6 Kết quả nghiên cứu cho thấy cả mười sáu hợp chất cardenolide phân lập được

đều có kha năng ức chế mạnh và có chọn lọc đối với sự phát triển của dòng tế bao

HT-1080 (ICso = 0,054-1.6 HM) và A549 (ICsa= 0,016-0,65 uM) [5] Cấu trúc của mười

sáu hợp chất cardenolide được xác định là : acovenosigenin A digitoxoside (1);

3

acovenosigenin A (2); digitoxigeningentiobioside (3); digitoxigenin glucopyranosyl-(1> 6)-O-/-glucopyranosyl-(1>4)-3-O-acetyl-B digitoxopyranoside]

3-O-[-O-B-(4): digitoxigenin

3-O-[glucopyranosyl-(16)-O-/-glucopyranosyl-(1—4)-đigitalopyranosyl-(Í—>4)-/- cymaropyranoside] (5); periplogenin = 3-O-(4-

O-f-glucopyranosyl-f-digitalopyranoside) (6); periplogenin 3-O digitoxoside (7);

periplocymarin (8); periplogenin (9): 17a- digitoxigenin (10); digitoxigenin

Năm 2008, từ thân hả thủ 6 trắng mọc ở vùng tây nam Trung Quốc, Ahihui Liu va cộng sự đã phân lập được bảy hợp chất có cấu trúc được xác định là syringaldehyde(I7), isoffaxidin (18), ferulic acid (19), scopoletin (20), syringic acid (21),

salicylaldehyde (22) scoparone (23) cùng với 2 hợp chất đã biết đó là /-sitosterol và

daucosterol Khi tiễn hành thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chat phan

lập được ở trên, thay rằng đa số chúng có kha năng ức chế tế bảo ung thư bach cầu

Năm 2013, từ rễ ha thủ 6 trắng mọc ở vùng tây nam Trung Quốc, Jun Yin và cộng

sự đã phân lập được sáu hợp chất cardenolide (24 -29) cùng với mười tám hợp chất

cardenolide đã được tìm thay trước đó Các hợp chat phân lập được đánh giá là có tính gây

độc đối với dòng tế bảo ung thư biểu mô tuyến giáp A549 ở người [6] Cau trúc của sáu

hợp chất cardenolide mới được xác định là: 1z,14/-dihydroxy-5/-card-20(22)-

enolide-[O-f-D-glucopyranosyl-(1>6)-O-f-D-digitalopyranoside] (24); acovenosigenin A

3-O-[O-/-D-glucopyranosyl-(14)-/-D-digitalopyranoside (25);

16-O-acetyl-$

hydroxyperiplogenin-3-O-8-digitoxopyranoside] (26); digitoxigenin

Năm 2015, Chun Ye và cộng sự đã phân lập được mười hợp chat cardenolide từ rễ

cây hà thủ 6 trắng bao gồm sáu hợp cardenolide glycoside (30-35) và bốn hợp chất

(36-39) được xem là tìm thay lan đầu tiên trong chỉ Streptocaulon [2] Câu trúc của mười

hợp chất được xác định là: periplogenin

f-D-glucopyranosyl-(16)-O-f-D-glucopyranosyl-(14)-2-@-acetyl D-digitalopyranoside] (30); periplogenin

3-O-[O-B- D-glucopyranosyl-(-O-Ø-D-glucopyranosyl-(1>4)-/-D-digitoxopyranoside] (31);

acovenosigenin A D- cymaropyranoside] (32); acovenosigenin A 3-Ø-[O-/-D-glucopyranosyl-(1>6)-OÓ-/-

3-Ó-[Ø-/-Ð-glucopyranosyl-(I16)-Ó-6-D-glucopyranosyl-(I4)-/-D- glucopyranosyl-(14)-2-O-acetyl 3-Ó-[Ø-/-Ð-glucopyranosyl-(I16)-Ó-6-D-glucopyranosyl-(I4)-/-D-digitalopyranoside] (33): hydroxyacovenosigenin 3-Ø-[O-/-D-glucopyranosyl-(16)-Ó-/-D-glucopyranosyl-

16-O-acetyl-(I1 4)-2-Ó-acetyl-0-D-digitalopyranoside} (34); acovenosigenin A 3-O-[O-

/-D-6

glucopyranosyl-(1>6)

glucopyranosyl-(1-6)-O-/-D-glucopyranosyl-(1-4)-O D-digitalopyranosyl-(1-4)-8-D- cymaropyranoside] (35): odoroside G (36);

digitoxigenin 3-O-/-D-cellobioside (37);

1.6.1.2 Các cây thuộc chi Streptocaulon

Bên cạnh các nghiên cứu trên cây hà thủ ô trắng (Streptocaulon juventas) còn

có một số nghiên cứu trên các loài cùng chỉ như: Streptocaulon griffithii;

Streptocaulon tomentosum; Streptocaulon baumii; phân bỗ chủ yếu ở các nước

Myanmar, Philippines, Trung Quốc.

Năm 2005, từ rễ của loài S griffithii thu hái ở tỉnh Yunnam Trung Quốc, Ma

Chunhui va cộng sự đã phân lập được mười ba hợp chất gồm có periplogenin

(40); periplogenin-3/-acctate (41); periplogenin 3-O-/-D-glucopyranoside ( 42); uzarigenin (43); a-amyrolacetate (44); a-amyrol tridecanoate (45); ursolic acid

(46): 9.19-cyclolart-2S5-en-3/.24R-diol (47); 9,19-cyclolart-25-en-3/,24S-diol

(48); cycloeucalenol (49); 9,19-cvclolart-23E-en-3/,diol (50);

25-methoxy- 9,19-cyclolart-23E-en-3f-ol (S1); | la,

12a@-epoxytaraxer-14-en-3f-acetate (52); cùng với 3 hợp chat là oleanolic acid (53); f-sitosterol (54);

Năm 2007, Từ rễ của loài S tomentosum phân b6 ở quận Mawlamyine,

Myanmar, Myint Myint Khine và các cộng sự đã phân lập được một hợp chất

cardenolide Cau trúc của hợp chat này được xác định là pregnene-3/-16a-diol-

3-O-[2,4-O-diacetyl-#-digitalopyranosyl (134) D- glucopyranoside] (56) [9].

Năm 2011, Từ rễ của loài S tomentosum sâu hợp chất cardenolide đã được

phân lập bởi Luay J Rashan và cộng sự [10] Cau trúc của sáu hợp chất được xác

định: 17a -H- periplogenin (57), 17a-Hperiplogenin-3-O-f-D-digitoxoside (58),

1.6.2 Cac nghiên cứu trong nước

OH OH OH OH OH

Năm 2002, Phạm Thanh Tâm va Tran Hùng nghiên cứu về tác dụng ha lipid

huyết của rễ củ hà thủ ô trắng Các phân đoạn cao chiết được thử nghiệm trên mô

hình gây tăng cholesterol huyết nội sinh và ngoài sinh trên chuột Kết quả cho thấycao chiết n-butanol cho đáp ứng tốt trên mô hình nay và là một tín hiệu kahr quancho việc phân lập các thành phần có tác dụng sau này [11]

10

Năm 2007, từ phân đoạn cao dichloromethane của rễ hả thủ ô trắng, Nguyễn Đức

Tuấn và cộng sự đã phân lập được sáu hợp chất [12] Cấu trúc của sáu hợp chất được

xác định là: 17-z-periplogenin (63); 17-/-periplogenin (64); 17-a-digitoxigenin (65); 16-dehydropregnenolon (66), 5-pregnen-3,17,20-triol (67) và z-amyrin acctate (68).

Năm 2009, từ phân đoạn cao chloroform của rễ hà thủ ô trắng, Nguyễn Thị

Hong Yến và cộng sự đã phân lập được hợp chất acovenosigenin A 3-O-glucoside (69) cùng với hai hợp chat đã biết là periplogenin glucoside và 17a-periplogenin

Năm 2011, từ địch chiết methanol của rễ cây ha thu 6 trang, Bùi Xuân Hào và

cộng sự đã phân lập được ba hợp chất khung cardenolide, trong đó

17a-H-

periplogenin-3-Ó-/-D-glucopyranosyl-(I4)-2-Ó-acetyl-3-(-methyl-/-fucopyranoside (70) và periplogenin-3-

O-/-cymaropyranosyl-(I>4)-/-glucopyranoside (71) là các hợp chất lần đầu tiên được tìm thấy trong rễ cây hà thủ

ô trắng [14]

12

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM

2.1 Hóa chất, thiết bị, phương pháp

2.1.1 Hóa chất

e Dung môi: n-hexane, chloroform, ethyl acetate, acetone, methanol, cthanol,

n-butanol (chemsol, Việt Nam)

e Thudc thử hiện vết trên bang sắc ký lớp mong: dung địch H2SOx 20%, ho

nong.

e Sac ký lớp mỏng pha thường: TLC silica gel 60 Foss (250 um, Merck,

Germany)

e Sac ky lớp mong pha đảo: TLC RP-18 F2s4(250 um, Merck,Germany)

« Sắc ký cột pha thường: silica gel 60 (40-63 um, Merck, Germany)

2.1.2 Thiết bị

e Cac cột sắc ký

¢ Binh triển khai sắc ký lớp mỏng

e May cô quay chân không (Heidolph)

e - Bếp cách thuỷ (Memmert)

® - Dèn soi UV: bước sóng 254/ 365 nm (spectroline ENF-240 C/FE, USA)

e Can phân tích (Sartorious BL 210S)

e May cộng hưởng từ hạt nhân (Bruker Avance) tần số 500 MHz, 600 MHz

cho phô 'H-NMR và 125 MHz cho phổ 'ŠC-NMR tại phòng NMR, Viện Hóa

học-Viện Han lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, Hà Nội.

2.1.3 Phương pháp tiễn hành

e - Sử dụng các phương pháp chiết xuất, trích ly dé điều chế các loại cao.

e Str dụng các kĩ thuật sắc ký, kết tinh dé phân lập va tinh chế một số hợp chất

có trong các cao phân đoạn.

e Str dụng phương pháp phổ nghiệm, chủ yếu là phỏ NMR đẻ xác định cấu trúc

của các hợp chất phân lập được.

2.2 Nguyên liệu

e© Mẫu cây dùng trong nguyên cứu đề tai là rễ cây hà thủ 6 trắng (S#epfocaulon

juventas (Lour) Mert.) được thu hai ở Tịnh Biên tinh An Giang vào thang 5 năm

2018.

e© Mau lá và thân dây leo được thu hái và nhận danh bởi lương y Nguyễn Thiện

Chung, cư ngụ xã An Phú, huyện Tịnh Biên, tinh An Giang nhận danh tên khoa học

là Streptocaulon juventas.

se Mau nguyên liệu được rửa sạch, loại bỏ sâu bệnh, phơi khô trong bóng ram, rồi xay

thành bột min (30 kg bột khô).

2.3 Điều chế các loại cao

Mẫu nguyên liệu (thân leo và lá được gộp chung) thu hái được loại bỏ lá sâu

bệnh, phơi khô, và xay thành bột thô (30 kg) Dun hoản lưu nguyên liệu với dung môi

methanol ở nhiệt độ sôi của dung môi (64 - 65 °C) Cô quay dịch chiết methanol ở áp

suất thấp thu được 1.5 kg cao methanol Phân tan cao methanol thô này vào nước và

chiết long — lỏng lần lượt với các dung môi có độ phân cực tang dan: n-hexane,

chloroform, ethyl acetate, n- butanol thu được các dich chiết tương ứng Thu hồi dung

môi ở áp suất thấp các dịch chiết thu được các loại cao n-hexane (285 gam), cao

chloroform (885 gam), cao ethyl acetate (120 gam) và cao n-butanol (110 gam), phan

con lai là địch nước Quy trình thực hiện được tom tắt theo sơ dé 1.

14

Sơ đồ 1 Quy trình điều chế các loại cao từ lá và thân cây hà thủ ô trắng.

Bột thô (lá và thân dây leo)

cây Hà thủ ô trắng (30 kg)

- Đun hoàn lưu với MeOH (3 giờ x 3 lần)

- Cô quay thu hỏi dung môi

- Chiết long-léng lần lượt với n-hexane,

chloroform, ethyl acetate, »-butanol

- Cô quay thu hồi dung môi

2.3.1 Cô lập các hợp chất từ phân đoạn B cao chloroform

Cao chloroform (885 g) được sắc ký cột silica gel (3.0 kg), giải ly với hệ dung môi

n-hexane : ethyl acetate cỏ độ phân cực tăng dân Dịch giải ly qua cột được hứng vao các lọ

theo thứ tự Theo dõi quá trình sắc ký cột bang sắc ký lớp mong, soi đèn tia tử ngoại hiện vết

bằng dung dịch H;SO; 15% và nung nóng Những lọ cho kết quả SKLM giống nhau gộp

chung thành một phân đoạn Kết quả thu được 16 phan đoạn nhỏ, được trình bay trong bảng

2.1

15

Bang 2.1 Kết quả sắc ký cột silica gel trên cao chloroform

H:EA 96:4 38.4 Chưa khảo sat

H:EA 95:5 55.6 Nhiều vết Chưa khảo sát

3 H:EA 15:1 130 Nhiều vết Chưa khảo sát

H:EA 12:1 77.2 Chưa khảo sat

H:EA 9:1 125 Chua khao sat

H:EA 1:] Nhiều vét Chua khao sat

H:EA 1:2 Nhiều vét Chưa khảo sát H:EA 1:3 Nhiều vet Chưa khảo sát

H:EA 1:4 Nhiều vết Chưa khảo sát

S EA:Me 9:] Chưa khảo sát

Thực hiện SKC silica gel trên phân đoạn B (18.2 g) bằng hệ dung môi H : Ea với độ phân cực tăng dan (H:EA=100:0 - H:EA=1:1) Dịch giải ly qua cột được hứng vào các lọ, theo đõi quá trình giải ly băng SKLM Những lọ cho kết quả SKLM giống nhau được gop chung

thành một phân đoạn Kết quả thu được 10 phân đoạn nhỏ, được trình bày trong bang 2.2

16

Bảng 2.2 Kết quả sắc ký cột silica gel trên phân đoạn B

STT | Phân đoạn Dung môi Khôi Sắc ký Ghi chú

giải ly lượng (g) lớp mỏng

m1 BI | H: EA 100:0 Vet dai Không khảo sát

B2 | H: EA 99:1 Vết dai Chua khao sat B3 | H:EA 60:1 Vết dai Chua khao sat

B4 H:EA 49:1 Nhiều vết Chưa khảo sát

Phân đoạn B6 (3.2 g) được tiến hành sắc kí cột silica gel, giải ly với hệ dung môi

H: Aceton Kết quả thu được 9 phân đoạn nhỏ, được trình bày trong bảng 2.3.

17

Bảng 2.3 Kết quả sắc ký cột silica gel trên phân đoạn B6

Co) CO) ¬ì| aA UM &) 2| tè B6.9 H: Ac 9:1

STT | Phan doan Dung môi Khoi

Phân đoạn B6.6 (1.1 g) được tiến hành sắc kí cột silica gel nhiều lần, giải ly với

hệ dung môi H : Ac (30:1) kết hợp sắc ký lớp mỏng điều chế, giải ly hệ Hexane : Ac

(30:1, khai triển 2 lần), thu được hợp chất LI.S.IUVENTAS.MERR (20 mg) và hợp

chất L9.S.JUVENTAS.MERR (16 mg).

18

CHƯƠNG 3 KÉT QUÁ VÀ THẢO LUẬN

3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất LI

Hợp chất L1 (20 mg) thu được từ phân đoạn B cao chloroform có những đặc điểm:

- Dạng bột vô định hình mảu trắng, tan tốt trong dung môi chloroform

- Soi dưới đèn UV không hiện vết.

- Sắc ký lớp mỏng cho một vệt duy nhất khi hiện hình băng HạSO¿ 15%, say nóng bảng

mỏng cho vết tròn có màu vàng, có Rr= 0.3 (trong hệ dung môi H:C ti lệ 1:1).

¢ Phô "H-NMR (CDCI): Phụ lục la

¢ Phô !C-NMR (CDCI;): Phụ lục 1b

¢ Pho DEPT (CDCI;): Phụ lục le

¢ Phé HSQC (CDCIH:): Phụ lục Id

e Phd HMBC (CDCI;): Phy luc ¢

% BIEN LUẬN CAU TRÚC

Phé 'H-NMR của hợp chat L1 (phụ lục 1a) cho thay sự hiện điện tín hiệu cộng hưởng

của proton carbinol tại 5y = 3.18 ppm (1H, dd, J = 11.0; 5.0 Hz) Trên pho 'H-NMR còn

thay tin hiệu cộng hưởng của hai proton methylene vòng cyclopropyl tai 5, = 0.66 ppm(1H, J = 5.5 Hz) va 5; = 0.00 ppm Ngoài ra phô 'H-NMR ta thay có tín hiệu cộng hưởng

hai proton mũi đôi tại 6;;= 0.93 (3H, d, J = 6.5 Hz) va ổ;; = 0.86 (3H, d, J= 5.5 Hz) Tin

hiệu cộng hưởng của bay nhóm proton methyl hiện diện trong khoảng 0.77 - 1.14 ppm.

Phố “C-NMR của hợp chất LI (phụ lục 1b) cho thấy sự hiện của 30 carbon trong

khoảng 13.3 - 79.1 ppm, bao gồm các tín hiệu cộng hưởng của bảy nhóm carbon methyl

trong vùng 13.3 - 28.2 ppm, mudi một carbon methylene, sáu carbon methine trong đó có

một carbon carbinol ở ổ¿= 79.1 ppm (C-3) va sáu carbon tứ cấp.

Từ các dữ liệu phô NMR và tai liệu tham khảo [15], hợp chất L1 được dự đoán là

triterpenoid có một vòng cyclopropane và một nhóm hydroxyl.

Phê HMBC của hợp chất L1 (phụ lục Id) cho thay sự tương quan của proton carbinol

Sy 3.18 (H-3) với carbon S¢ 27.9 (C-23) và ốc 15.3 (C-24) Sự tương quan giữa proton

methylen vòng cyclopropyl 0.00 và 0.66 (H-27) với các carbon lần lượt tại ổc 37.0 (C-8),

đc 35.2 (C-12), ốc 26.6 (C-13), đc 32.2 (C-14), ốc 21.3 (C-15) Xác định nhóm cyclopropyl

gắn tại (C-13) và (C-14) Một số tương quan khác được trình bày ở hình 3.1 và bảng 3.1

19

Từ các số liệu pho trên, kết hợp so sánh tai liệu tham khảo (bảng 3.1) [15], sau đây là

cầu trúc đề nghị của LI.

Hình 3.1 Cấu trúc của hợp chất LI

oom 8

Hình 3.2 Tương quan HMBC quan trọng của hợp chất LI

Bang 3.1 Dữ liệu phổ của hợp chất LI

0.86 (3H d/= 5.5 Hz)

21

3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất L9

Hop chất L9 ( 16 mg) thu được từ phân đoạn B của cao chloroform có những đặc điềm:

- Dạng bột vô định hình mau trắng, tan tốt trong dung môi choloroform.

- Soi dưới dén UV không hiện vét,

- Sắc ký lớp mỏng cho một vệt duy nhất khí hiện hình bằng HạSO¿ 15%, ho nóng bảng mỏng cho vết có mau tim.

Phô 'H-NMR của hợp chất L9 (phụ lục 2a) cho thấy sự hiện điện tín hiệu cộng hưởngcủa proton carbinol tại ổ„ = 3.22 (1H, dd, J = 11.4; 4.8 Hz) Trên phô 'H-NMR còn thay tín

hiệu cộng hưởng của proton olefin ở ổy;= 5.26 ppm (LH, t, / = 3.3 Hz) Ngoài ra còn có tín

hiệu cộng hưởng proton của bảy nhóm methyl trong vùng 0.77 - 1.14 ppm.

Pho !3C-NMR của hợp chất L9 (phụ lục 2b) cho thấy sự hiện của 30 carbon Trong đó

bao gồm các tín hiệu cộng hưởng của bảy nhóm carbon methyl trong vùng 15.8 - 28.5 ppm,

chin carbon methylene, bảy carbon methine trong đó có một carbinol ở ổc = 76.9 ppm (C-3)

va bay carbon tứ cấp, trong đó có một carbon carbonyl tại ổ¿= 179.0 ppm (C-28) Trong đó

có hai carbon olefin tại ổ¿= 125.6 ppm (C-12) va ổc= 138.0 ppm (C-13).

Từ các dữ liệu phô NMR và tai liệu tham khảo [16], hợp chat L9 được dự đoán là hợp