TỔNG QUAN
Tổng quan về chi Lumnitzera
Chi Lumnitzera là một chi sống trong rừng ngập mặn Theo tác giả Phạm Hoàng
Hộ [25] , ở Việt Nam chi Lumnitzera gồm hai loài là Cóc đỏ (Lumnitzera littorea) và Cóc trắng (Lumnitzera racemosa)
- Loài: Cóc đỏ (Lumnitzera littorea) và Cóc trắng (Lumnitzera racemosa)
Cây ưng sáng sinh trưởng tốt tại vùng rừng ngập mặn ven biển, cửa sông và đảo, đặc trưng bởi khả năng chịu mặn và ưa sáng Quá trình tái sinh của cây diễn ra thuận lợi cả qua hạt lẫn chồi Mùa hoa diễn ra từ tháng 6 đến tháng 8, trong khi mùa quả kéo dài từ tháng 8 đến tháng 10 Trong họ ưng sáng có hai loài tương đồng về hình dạng thực vật, đó là cây cóc đỏ (Lumnitzera littorea) và cây cóc trắng (Lumnitzera racemosa), điểm khác biệt chủ yếu nằm ở màu cánh hoa, mùa lá và màu vỏ cây.
Cây thân gỗ, cao 10 – 20 m, vỏ màu nâu thẫm, có vết nứt, mặt trong vỏ màu nâu đỏ,phần giác màu vàng,lõi màu nâu thẫm, cành nhánh hình khúc khuỷu, vuông, khi non màu đỏ nhạt, có nhiều mặt do những vết sẹo của lá rụng để lại [15]
Lá mọc cách, tập trung ở đầu cành,phiến lá hình trứng ngược, mặt trên lá bóng, dài 2 – 8 cm, rộng 1- 2.5cm, đỉnh tròn có khía tai bèo, gốc hình nêm, ít gân, cuống đài 0.5 – 1 cm, lá tích nhiều muối [3]
Rễ có khả năng đâm sâu vào lớp mùn dày Rễ khí thường không phát triển thành hệ rễ trên mặt đất như các cây khác Tuy nhiên trong môi trường ẩm thấp, rễ khí có thể phát triển thành hệ rễ vòng trên mặt đất dạng mẫu rễ nhỏ
Cụm hoa hình chum ở đầu cành, dài 1.5 – 3 cm Hoa có cuống ngắn, đài 1.5 – 2cm Đài hình ống tạo thành đĩa chứa mật Tràng 5 thùy, hình bầu dục thuôn, dài 5 – 6 mm, đứng, màu đỏ, rụng Một cặp bao hoa dạng vảy đính vào ống đài Nhị 5 – 10, dài gấp đôi cánh hoa, nhụy hơi nhô ra khi hoa nở, vòi nhụy và đài bền Bầu lô 5 lá noãn hợp, noãn nhỏ 3 – 5, đính noãn treo Hoa thụ phấn nhờ chim đặc biệt là chim hút mật và những loài ăn mật Ong mật và ong vò vẽ cũng tham gia vào sự thụ phấn của hoa [3] Quả hạch, 1 hạt, hình trứng dài 3 – 4cm, với nhiều sự cương mô của vỏ quả nằm rải rác, vỏ quả trong cứng Quả non màu nâu đỏ, quả chín rụng, mùa ra hoa vào tháng 6 đến tháng
8, mùa quả chín vào tháng 8 đến tháng 10
Cây Cóc đỏ (Lumnitzera littorea) và cây Cóc trắng (Lumnitzera racemosa) là loài cây ngập mặn, phân bố ở Châu Á và Châu Úc thuộc vùng nhiệt đới [3] Ở Việt Nam, hai loài cây này phân bố ở các rừng ngập mặn cửa đông, ven biển nơi chỉ ngập triều cao hoặc ít ngập mặn như Cần Giờ, Cà Mau, Phú Quốc,
Trước năm 2001, Cóc đỏ đã bị nhiều người dân khai thác rất nhiều Vì thân cây Cóc đỏ khi già thường bị rỗng hoặc mối ăn, nên trước khi chặt cây, người ta thường đục lỗ trên thân cây để kiểm tra Nhiều cây Cóc đỏ già nhưng không bị chặt, nhưng cũng bị chết do các vết đục quá sâu Sau khi Vườn Quốc Gia Phú Quốc và khu dự trữ sinh quyển rừng ngập mặn Cần Giờ được thành lập thì công tác bảo vệ rừng đã thực hiện khá tốt, phần nào ngăn chặn được việc khai thác cây Cóc đỏ tại Phú Quốc và Cần Giờ
Hiện nay, tại Phú Quốc và khu dự trữ sinh quyển rừng ngập mặn Cần Giờ đang tiến hành một số dự án ươm và trồng Cóc đỏ để nhân giống phát triển loài cây này Điều kiện thiên nhiên của hai địa điểm này có môi trường rất phù hợp phát triển Cóc đỏ
Vì những tác động của các yếu tố tự nhiên và con người mà các quần thể của các loài cây này đã bị thay đổi, bị chia cắt và hủy diệt ngày càng cao Ở Trung Quốc, loài Lumnitzera littorea, là một loài đang bị đe dọa, và chúng đã được trồng lại với một vùng nhỏ ở đảo Hainan Ở Việt Nam, loài Lumnitzera littorea là loài có tên trong sách đỏ với cấp báo động V Hiện nay, cây Cóc đỏ được chính thức phát hiện
Cần Giờ - thành phố Hồ Chí Minh, Phú Quốc, Rạch Giá – Kiên Giang, Côn Đảo nhưng số lượng không nhiều [18]
Màu cánh hoa rực rỡ của cây mắm có giá trị trong nghệ thuật và trang trí Gỗ cây mắm bền chắc, chống chịu tốt trong điều kiện ngập mặn, nên được dùng làm cọc, cầu và công cụ lao động như cuốc Ngoài ra, khi đốt trong lò than, cây mắm cho nhiệt lượng cao và lượng muối NaCl thấp, giúp kéo dài tuổi thọ máy móc Trong Chiến tranh thế giới thứ II, than cây mắm đã được sử dụng để vận hành tàu và xe tại Hậu Giang, thay thế cho xăng.
Chiết xuất từ lá dùng để chữa nấm vòm họng ở trẻ con Lá còn được sử dụng như một phương thuốc để chữa bệnh tiêu chảy ở xứ nóng, bệnh viêm ruột, loét miệng Còn ở các vùng miền Nam nước ta người dân dùng chòi non để làm rau ăn
1.1.1 Tình hình nghiên cứu trong nước và ngoài nước
- Năm 2018, Phạm Thị Huyền và cộng sự [2] đã phân lập mười một hợp chất từ lá và thân của Lumnitzera littorea: including β-sitosterol, quercetin), stigmasterol,
1,3-dihydroxy-2-methyl-5-tridecylbenzene, 1,3-dihydroxy-5-nonadecyl benzene, 1,3- di-O-acethyl-2-methyl-5-tridecylbenzene, astragalin, 1-acethyl-D-mannitol, D- mannitol, hexa-O-acethyl-D-manitol, 2,3,4,6-tetra-O-acethyl-α-D-glucopyr anosyl- 2′,3′,4′,6′-tetra-O-acethyl-β-D-glucopyranosyl and 1,3,4,5-tetra-O-acethyl fruc topyranose
- Năm 2019 nhóm nghiên cứu chúng tôi đã cô lập được một loại flavone glycoside mới là lumnitzerone cùng với chín flavonoid được phân lập từ lá của
Lumnitzera littorea: lumnitzerone, quercetin, quercitrin, myricetin, myricitrin, naringenin, chrysoeriol, pilloin, afzelin và myricetin 3-O-(4″-O-galloyl)-α-L- rhamnopyranoside, tất cả các hợp chất đều có khả năng ức chế enzyme α-glucosidase cao hơn so với Arbose là đối chứng dương, trong đó cao nhất là naringenin với IC50 là 1.9 àg/ml
- Năm 2011, Shahbudin S [13] Và cộng sự đã chứng minh hoạt tính n-haxane từ lá cây Cóc đỏ (Lumnitzera littorea) có khả năng kháng khuẩn Khả năng ức chế sự tăng trưởng của vi khuẩn tại nồng độ 0.04 mg/ml.
Tổng Quan Về Đông Trùng Hạ Thảo
1.2.1.1 Phân loại [9] Đông trùng hạ thảo (Chinese caterpillar fungus), còn gọi là trùng thảo, hạ thảo đông trùng hay đông trùng thảo, là một loại đông dược quý có bản chất là dạng ký sinh của loài nấm Cordyceps sinensic (thuộc nhóm
Ascomycetes) trên cơ thể sâu Hepialus fabricius Phần dược tính của đông trủng hạ thảo đã được chứng minh là do các chất chiết xuất từ nấm Cordyceps sinensic
Hình 1 2: Đông trùng hạ thảo
Tên gọi "đông trùng hạ thảo" là xuất phát từ quan sát thực tế khi thấy vào mùa hè nấm Cordyceps sinensic mọc chồi từ đầu con sâu nhô lên khỏi mặt đất Vào mùa đông thì nhìn cặp cá thể này giống con sâu (côn trùng), còn đến mùa hè thì chúng trông giống một loài thực vật (thảo mộc) hơn
Riêng tên “Đông trùng hạ thảo” được ghi chép là vị thuốc xuất hiện lần đầu tiên trong cuốn “Bản thảo cương mục” vào đời nhà Minh của danh y Lý thời Trân (năm 1575), Đông Trùng Hạ Thảo được xếp ngang với nhân sâm về công năng chữa bệnh – thuộc vào loại toàn
Đông trùng hạ thảo được hình thành khi sâu non của loài Hepialus, thường là Hepialus Fabricius hoặc Hepialus Armoricanus, bị nhiễm một loại nấm túi tên là Cordyceps sinensis Loài nấm này thuộc tổng họ Nang Khuẩn và phân bố rộng khắp châu Á và châu Úc, tập trung nhiều ở các vùng cao nguyên cao hơn mực nước biển từ 4000 đến 5000m tại Tây Tạng, Tứ Xuyên, Thanh Hải, Cam Túc, Vân Nam.
1.2.1.3 Ứng dụng đông trùng hạ thảo trong lâm sàng: Đông trùng hạ thảo được dùng để điều trị ho, viêm phế quản mạn tính, bệnh thận, tiểu đêm, suy nhược sinh dục nam, thiếu máu, tăng cholesterol, rối loạn chức năng gan, mệt mỏi, ù tai, sụt cân…
Tăng chức năng hệ miễn dịch, tăng lực cho vận động viên, chống lão hoá sớm, cải thiện chức năng gan với người viêm gan siêu vi B
Một số người dùng đông trùng hạ thảo như một “adaptogen” để tăng thể lực và chống mệt mỏi
Trên hệ tim mạch: đông trùng hạ thảo tốt cho hoạt động của tim và mạch máu, điều hoà nhịp tim, hạ cholesterol máu, ức chế kết tụ tiểu cầu, có tác dụng chống viêm, cải thiện tuần hoàn bàng hệ
Myriocin và thermozymocidin (1 acid amin không điển hình) ức chế hữu hiệu serine palmitoyltransferase, chất hình thành trong giai đoạn đầu của sự sinh tổng hợp sphingosin (Zhao et al., 2013)
Myriocin có tác dụng ức chế miễn dịch (immunosuppressant) gấp 10-100 lần cyclosporine
Các phân tích hoá học cho thấy trong sinh khối (biomass) của đông trùng hạ thảo có 17 đến 19 loại acid amin khác nhau, có D-mannitol, có lipid, có nhiều nguyên tố vi lượng (Na, K, Ca, Mg, Al, Mn, Cu, Zn, Bo, Fe trong đó cao nhất là phospho)
Quan trọng hơn là trong sinh khối đông trùng hạ thảo có nhiều chất hoạt động sinh học mà các nhà khoa học đang khám phá dần, nhờ tiến bộ của ngành hoá học các hợp chất tự nhiên
Nhiều hoạt chất trong đông trùng hạ thảo có giá trị dược liệu thần kỳ Trong đó phải kể đến là cordiceptic acid, cordycepin, adenosine, hydroxyethyl-adenosine Đáng chú ý hơn cả là nhóm hoạt chất HEAA ( Hydroxy-Ethyl-Adenosine- Analogs) Đông trùng hạ thảo còn chứa nhiều loại vitamin (trong 100g đông trùng hạ thảo có 0,12 g vitamin B12; 19 mg vitamin A; 116,03 mg vitamin C, ngoài ra còn có vitamin B2 (riboflavin), vitamin E, vitamin K ), ngoài ra còn có khoảng 25 - 30 % protein, 8% chất béo và đường mannitol
Theo Holiday và Cleaver (2004), đông trùng hạ thảo đã được sử dụng như một loại “thần dược” từ những năm 620 sau CN, vào thời nhà Đường ở Trung Quốc (618- 907)
Năm 1994, Trung Quốc đã chính thức xếp loại đông trùng hạ thảo như một dược phẩm Sau đó, đông trùng hạ thảo được sử dụng rất nhiều khi dịch SARS xuất hiện ở Trung Quốc vào năm 2003
Theo các nghiên cứu của Chen và cộng sự (2006), Kuo và cộng sự (2006) và Wang & Shiao (2000), đông trùng hạ thảo đã chứng minh hiệu quả trong việc điều trị các bệnh về tim mạch, hô hấp, gan, thận cùng khả năng ức chế sự hình thành khối u.
Trên thực nghiệm: dịch chiết bằng nước và rượu, cả cordyceps tự nhiên và nuôi cấy cho thấy tác dụng chống oxy hoá: Ức chế khả năng oxy hoá acid linoleic Khử hoạt tính của chất 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DDPH), hydrogen peroxide, gốc tự do hydroxyl, anion superoxide, hoạt tính bắt giữ kim loại
Poly phenolic và flavonoid có trong Cordyceps là chất anti oxidants
1.2.3.2 Tác dụng kháng tế bào ung thư:
Nghiên cứu trên các loại tế bào ung thư khác nhau như: hạch, gan, đại tràng, tuyến tiền liệt, và vú, cho thấy dịch chiết rượu từ cordyceps có tác dụng chống tăng sinh của các loại tế bào ung thư này
Một nghiên cứu khác cho thấy cordyceps ức chế tăng sinh tế bào ung thư đại tràng qua con đường ức chế sự thoái giáng của chất I-kappa B-alpha trong tế bào và ức chế hoạt tính của NF-Kappa B
1.2.3.3 Tác dụng chống mệt mỏi và stress:
Dịch chiết bằng nước nóng của Cordyceps sinensis có tác dụng chống mệt mỏi và stress trên chuột ICR và chuột Sprague-Dawly
1.2.3.4 Tác dụng trên hệ hô hấp:
Dịch chiết bằng cồn cho kết quả:
Ức chế sự tăng sinh những tế bào BALF (Bronchoalveolar lavage fluids) được hoạt hóa bởi lipopolysaccharide (LPS),
Ức chế sự sản xuất IL-1 beta, IL-6, IL-8, IL-10 và INF – alpha trên BALF
1.2.3.5 Tác dụng chống sợi hoá gan:
Tổng Quan Về Atiso
- Tên Khoa học: Cynara scolymus
Cây atisô là loại cây lá gai lâu năm có nguồn gốc từ miền Nam châu Âu, đã được người Cổ Hy Lạp và Cổ La Mã gieo trồng để lấy hoa dùng làm rau ăn Ngày nay, cây atisô không chỉ được tận dụng lá bắc và đế hoa trong ẩm thực mà còn được sử dụng như một loại thuốc.
Atiso là loại thảo mộc có thân lớn, sống nhiều năm, thân atiso cao từ 1 đến 2m, ngắn và thẳng, cứng, có khía và lông phủ trắng như bông
Lá Atiso to, dài, mọc so le nhau, mặt trên lá màu xanh lục, mặt dưới lá atiso có lông, cuống lá to và ngắn Lá cây atiso dài từ 1m đến 1m2, rộng khoảng 50cm Thời điểm thích hợp nhất để hái lá atiso làm thuốc khi sắp ra hoa hoặc vừa mới ra hoa Bởi vì khi cây atiso ra hoa thì hàm lượng dưỡng chất giảm Thông thường lá atiso được người dân Đà Lạt thu hái vào thời kỳ trước tết âm lịch tháng 1 hàng năm
Hoa atiso là loài hoa hình trái tim, kích thước lớn, mọc ở ngọn cây Hoa có màu đỏ tím hoặc tím lơ nhạt với lá bắc ngoài rộng, dày và nhọn Đế hoa mềm và phủ đầy lông, chứa toàn hoa hình ống Phần gốc hoa và lá bắc mềm, ăn được, thường sử dụng làm rau hoặc thuốc Nụ hoa atiso hình trái tim, có kích thước khoảng 8-15 cm, bao gồm lá đài, cánh hoa và nhị hoa xếp chặt như bắp cải Đây là phần chứa nhiều chất bổ dưỡng và được sử dụng chủ yếu làm rau ăn.
Acisô là cây thảo lớn, cao 1 - 1,2m, có thể đến 2m Thân cao, thẳng và cứng, có khía dọc, phủ lông trắng như bông Lá to, dài, mọc so le; phiến lá xẻ thùy sâu và có răng không đều, mặt trên xanh lục mặt dưới có lông trắng, cuống lá to và ngắn Cụm hoa hình đầu, to, mọc ở ngọn, màu đỏ tím hoặc tím lơ nhạt, lá bắc ngoài của cụm hoa rộng, dày và nhọn, đế cụm hoa nạc phủ đầy lông tơ, mang toàn hoa hình ống Quả nhẵn bóng, màu nâu sẫm có mào lông trắng Trong quá trình nấu phần thân cây Atiso non chuyển từ màu xanh sang màu nâu do các enzym oxy hóa chất diệp lục, để chống sự đổi màu có thể cho thêm chất chua như chanh, dấm
Cây có từ miền Nam Châu Âu ( được trồng quanh Địa Trung Hải) được người
Cổ Hy Lạp và Cổ La Mã trồng để lấy hoa làm rau ăn Từ Actiso đã xuất hiện trong các tài liệu tiềng Pháp từ năm 1530 Ngày nay, Actiso được trồng chủ yếu ở Pháp, Ý, Tây Ban Nha, Mỹ, các nước Mỹ Latin và Ý là quốc gia trồng Atisô hàng đầu thới giới, ở mức thu hoạch hơn 750 ngàn tấn/năm Atiso được người Pháp đưa vào Việt Nam đầu thế ký 20, hiện nay trông Sa Pa, Tam Đảo, Nghệ An, Hải Dương và nhiều nhất là ở Đa Lạt Tại đây đất đai, khí hậu, thời tiết, độ cao rất thích hợp cho loại cây nay Trên độ cao 1200m cây Actiso trổ hoa, còn dưới 1200m cây tăng trưởng được nhưng không trổ hoa Vùng trồng nhiều Actiso ở Đà Lạt là Thái Phiên và Sào Nam
1.3.1.3 Gieo trồng và thu hái:
Có 2 cách trồng Atiso là gieo hạt (tiến hành khoản tháng 10-11) hoặc tách cây non từ cây mẹ (khoản tháng 1-2), cay trổ nụ khoảng 90-100 ngày sau khi trồng
Tất cả các bộ phận của Atiso đều được thu hái và sử dụng như một loại dược liều
Là được thu hái trước khi ra hoa vì khi khi trổ hoa hàm lượng hoạt chất sẽ giảm đi, hoa thu hoạch muộn nụ sẽ bị cứng như gỗ nên thu hoạch trước khi lá của hoa nở
Nghiên cứu trước đây cho rằng Cynarrin là hoạt chất chính của atiso, nhưng các nghiên cứu gần đây đã chỉ ra rằng atiso chứa nhiều hoạt chất khác nữa chứ không chỉ riêng Cynarrin (Ernst E Naturamed 1995).
Trong Atisô chứa 1 chất đắng có phản ứng Acid gọi là Cynarin (Acid 1 - 4 Dicafein Quinic) Còn có Inulin, Tanin, các muối kim loại K (tỉ lệ rất cao) Ca, Mg, Na
Dược điển Rumani VIII quy định dược liệu phải chứa trên 1% Polyphenol toàn phần và 0,2% hợp chất Flavonoid
Theo R.Paris, hoạt chất (Polyphenol) tập trung ở lá, có nhiều nhất ở phiến lá (7,2%) rồi đến ho (3,48%), đến cụm hoa, rễ, cuống lá
Lá chứa nhiều hoạt chất nhất: 1,23% Polyphenol, Clorogenic acid 4%, hợp chất Flavonoid (đặc biệt là Rutin), sau đó đến thân (0,75%), rễ (0,54%) Dẫn chất Caffeic như Clonogenic acid, Neoclorogenic acid, Cyptoclorogenic acid, Cynarin Sesquiterpen lacton: Cynarpicrin, Dehydrocynaropicrin, Grossheimin, Cynatriol
Hoạt chất trong phiến lá cao gấp 10 lần trong cuống lá
Lá non chứa nhiều hoạt chất (0,84%) hơn lá mọc thành hình hoa thị ở mặt đất (0,38) Nếu sấy ở nhiệt độ cao thì lá mau khô nhưng lại mau mất hoạt chất Ở nhiệt độ thấp, việc làm khô sẽ lâu hơn Lá cần được ổn định trước rồi mới chuyển thành dạng bào chế Ngọn có hoa chứa inulin, protein (3,6%), dầu béo (0,1%), Cacbohydrat (16%), chất vô cơ (1,8%0, Ca (0,12%), P (0,10%), Fe (2,3 mg/100g), Caroten (60 đơn vị/100 g, tính ra Vitamin A)
Thân và lá còn chứa muối hữu cơ của các kim loại K, Ca, Mg, Na Hàm lượng Kali rất cao
Hoa ác ti sô ăn rất tốt cho sức khỏe, nó cung cấp khoảng 9,3% carbohydrate, 1,5% chất xơ, rất ít chất béo và protein Năng lượng cung cấp rất thấp, chỉ khoảng 40 đến 50 kcal nhưng lại rất giàu vitamin và chất khoáng như kali, phốt pho, canxi, natri, lưu huỳnh và magiê.Hoa đặc biệt thích hợp cho người bị đái tháo đường do có rất ít đường Hoa cũng giúp thải bớt chất độc cho những người mất cân bằng do uống nhiều rượu
The roots contain almost no caffeic acid derivatives, such as Chlorogenic acid and Sesquiterpen lactone According to Herbal Medicine, 1999, the roots only have diuretic effects but do not stimulate bile secretion.
Các chất trong atiso còn giúp ngăn ngừa và điều trị bênh ung thư nhờ loại bỏ các tế bào tế bào chết ra khỏi mô mà không ảnh hưởng tới các tế bào khác Ngoài ra còn hạn chế sự nảy nở của các tế bào thành nhiều dạng ung thư khác nhau như ung thư tiền liệt, bệnh bạch cầu và ung thư vú Tăng cholesterol tốt và hạ thấp cholesterol xấu Tốt cho người tiểu đường vì có tác dụng ổn định lượng đường trong máu
Dùng dung dịch atisô tiêm tĩnh mạch, sau 2-3 giờ, lượng mật bài tiết tăng gấp 4 lần ( M.Charbol, Charonnat Maxim và Watz, 1929)
+ Uống và tiêm Atisô đều có tác dụng tăng lượng nước tiểu, lượng Urê trong nước tiểu cũng tăng lên, hằng số Ambard hạ xuống, lượng Cholesterin và Urê trong máu cũng hạ xuống Tuy nhiên, lúc mới uống có khi thấy lượng Urê trong máu tăng lên do Artichaud làm tăng sự phát sinh Urê trong máu (Tixier, De SèzeM.Erk và Picard 1934
Lá atisô vị đắng, có tác dụng lợi tiểu và được dùng trong điều trị bệnh phù và thấp khớp Lá tươi hoặc khô sắc hoặc nấu thành cao chữa bệnh về gan (gan viêm mạn, da vàng), thận viêm cấp và mạn, sưng khớp xương Thuốc có tác dụng nhuận trường và lọc máu nhẹ đối với trẻ em
Giới Thiệu Về Cam Thảo
Tên khoa học: Glycyrrkyza uralensis Fisch
Cây cam thảo hay còn được gọi là cam thảo bắc, sinh cam thảo, quốc bảo, có tên gọi như vậy vì bản thân vị của cam thảo là ngọt, "cam" có nghĩa là ngọt, "thảo" là cây cỏ.
Cây cam thảo trước đây không có ở nước ta Tại Liên Xô cũ, Trung Quốc và nhiều nước khác cây cam thảo mọc hoang và trở thành một thứ cỏ khó diệt trừ, chỉ một mẫu thân rễ có thể trở thành một bụi cam thảo và cứ như vậy lan ra rộng mãi Những khu vực cam thảo mọc hoang là những nơi có đất khô, đất có canxi, đất cát và đất cát vàng Những nơi có đất đen cứng chắc, kiềm tính và ẩm thấp thì chất lượng cam thảo kém hơn, nhiều xơ, ít bột, ít ngọt [11]
Cây cam thảo là một cây sống lâu năm, thân có thể cao từ 1-1,5 m, toàn thân cây có lông rất nhỏ Là cây ưa sang, chịu được khô hạn và điều kiện thời tiết khắc nghiệt
Lá kép lông chim lẻ, lá chét từ 9-17, hình trứng, đầu nhọn, mép nguyên, dài 2- 5,5 cm, rộng 1,5-3 cm
Vào mùa hạ và mùa thu, nở hoa màu nhạt, hình cánh bướm dài 14-22 mm ( cây trồng ở Việt Nam sau 3 năm chưa thấy hoa) Tại Trung Quốc mùa hoa tháng 6-7
Quả giáp cong hình lưỡi liềm dài 3-4 cm, rộng 6-8 cm, màu nâu đen, mặt quả có nhiều lông Trong quả có 2-8 hạt đỏ dẹt, đường kính 2-2,5 mm màu xám nâu hoặc xanh đen nhạt, mặt bóng Tại Trung Quốc mùa quả tháng 7-9
Cam thảo là một vị thuốc rất thông dụng trong đông y và tây y Ngoài ra nó còn được dùng trong kỹ nghệ thuốc lá, nước giải khát và chế thuốc chữa cháy
Cam thảo có vị ngọt, tính bình, vào 12 đường kính Có tác dụng bổ tỳ vị, nhuận phế, thanh nhiệt giải độc, điều hòa các vị thuốc Muốn thanh hỏa thì dùng sống, muốn ôn trung thì nướng [20]
Trong y học, ngoài công dụng làm cho thuốc ngọt dễ uống, làm tá dược chế thuốc viên, thuốc ho, thuốc giải độc, hiện nay cam thảo có 2 công dụng chủ yếu: chữa loét dạ dày và ruột và chữa bệnh Addison [12]
Trong cam thảo người ta đã phân tích thấy có 3-8% glucoza, 2,4-6,5% sacaroza, 25-30% tinh bột, Rễ chứa carbohydrat 4,7-10,97%, tinh bột 4,17-5,92%, glycyrizin 5,49- 10,04% flavonoid có khoảng 20 chất, trong đó những chất chính là liquiritin, isoliquiritin…
Những hoạt chất chính trong cam thảo là chất glyxyridin ( glycyrrhizin) có tỷ lệ từ 6-14% có khi lên tới 23%
Thuốc có tác dụng giải độc đối với rất nhiều loại thuốc, khả năng giả độc của cam thảo có liên quan tới sự thủy phân glyxyrizin ra acid glycuronic
Năm 1953, Otto Gessner còn cho biết cam thảo có khả năng giải chất độc của độc tố uốn ván
Theo J.A Molhuysen (1950), cam thảo có tác dụng gần giống như corticosteroid trong việc tăng bài tiết nước và muối NaCl ra khỏi cơ thể, gây ra tình trạng phù nề Đồng thời, cam thảo cũng có tác dụng chữa lành các vết loét trong hệ tiêu hóa.
Một số tác giả khác còn cho rằng cam thảo có tác dụng lợi tiểu, tiêu viêm, chữa táo bón.
Tổng Quan Về Trà Hòa Tan
Bên các sản phẩm từ trà (chè) đã được sử dụng lâu đời thì hiện nay tại nước ta và trên thới giới xuất hiện một dòng sản phẩm mới gọi là trà thảo mộc Từ xưa con người đã biết sử dụng các loại thảo mộc để làm thuốc hay thức ăn, hoặc có thể chế biến các loại nước uống bằng phương pháp thủ công Hiện nay cac sản phẩm trà thảo mộc đã được sản xuất trên quy mô công nghiệp được sản xuất rộng rải
Trà thảo mộc là loại trà được sản xuất từ lá, hoa, quả hay rể cây từ thiên nhiên Chúng có rất nhiều công dung tốt cho sức khỏe nhờ chứa nhiều nhóm polyphenol là một chất chống oxy hóa, phòng ngừa các bệnh ung thư và nhiều hợp chât có lợi khác
Cuộc sống ngày càng phát triển, con người ngày càng bận rộn hơn, do đó một loại trà có thể pha và uống liền ra đời Trong thời gian gần đây, một loại trà đang phổ biến đó là trà hòa tan Ưu điểm của loại này là có thể pha và uống ngay, không mất nhiều thời gian để trà ngấm nước như trà truyền thống Loại trà hòa tan này được phát triển trong những năm 1930, nhưng không được sử dụng rộng rãi như hiện nay và trong thời kỳ đổi mới và mở cửa (1986 – 1996), thị trường tiêu thụ chè trong nước trở nên sôi động, phát triển nhanh chóng về chủng loại, mẫu mã, bao bì, phân phối,… Đã xuất hiện các mặt hàng trà mới, như trà túi lọc (tea bag), trà hòa tan, trà đặc sản, trà hoa (nhài, sen,…)
Và loại trà hòa tan được ưa chuộng, sử dụng rộng rãi hiện nay là trà Lipton Người đầu tiên sáng lập ra thương hiệu số 1 thế giới là Thomas Lipton, một người Châu Âu Những công nghệ mới đã góp phần làm đa dạng hóa các sản phẩm trà Lipton với các loại trà túi, trà hòa tan và cả trà trong lon uống ngay Vị đậm đà của trà truyền thống được kết hợp với rất nhiều hương vị khác nhau tùy theo sở thích và khẩu vị của người tiêu dùng như trà chanh, trà đào, trà dâu, trà bạc hà
1.5.2 Lợi ích việc uống trà [6]
Trà không chỉ là một loại nước uống dùng để thưởng thức mà còn có rất nhiều lợi ích cho sức khỏe như:
Ngừa ung thư giúp ngăn chặn quá trình lão hóa, bão vệ tế bào cơ thể nhờ trong trà có chứa hợp chất polyphenol và flavonoid
Trà thảo mộc hỗ trợ cải thiện quá trình trao đổi chất, góp phần giảm nguy cơ béo phì Khi các chất trong cơ thể không được chuyển hóa hiệu quả, chúng có thể tích tụ thành calo dư thừa Trà thảo mộc đóng vai trò thúc đẩy quá trình chuyển hóa chất, giúp ngăn ngừa sự tích tụ calo, góp phần duy trì cân nặng lành mạnh.
Uống trà thảo mộc giúp giảm nguy cơ đột qụy và tim mạch: Một nghiên cứu tại
Hà Lan nhận thấy nếu ta uống 2-3 tách tà đen mỗi ngày thì nguy cơ đâu tom đột tử thấp hơn tới 70% Uống trà có thể giữa cho huyết mạch trơn mượt và không bị nghẽn
Bảo vệ hệ miễn dịch: Một cuộc thử nghiệm 21 gười tình nguyện uống 5 tách trà mỗi ngày trong 4 tuần, người ta nhận ra rằng hệt thống miễn dịch trong máu của người uống trà cao hơn
Giúp răng chắc khỏe do trong trà có chứa tamin và fluoride cóthể làm răng sát lại gần nhau Ngoài ra uống trà còn giúp sương cứng cáp, vững chắc hơn
Trên thị trường hiện nay, sản phẩm trà hòa tan được làm từ nhiều loại nguyên liệu khác nhau và khá phong phú về mẫu mã, hình thức Nhiều sản phẩm trà đã tạo nên dấu ấn và sự tin dùng của khách hàng như trà Lipton hòa tan, trà Gừng, Atiso, hoa Cúc hòa tan,…
Ngoài chức năng giúp giải khát, thanh nhiệt, mỗi sản phẩm trà thảo dược có tác dụng bồi bổ hoặc chữa trị một hay một vài chứng bệnh khác nhau tùy vào nguyên liệu sử dụng Một số sản phẩm trà thảo dược hòa tan có tính năng dược lý như sau:
- Trà khổ qua (Gohyah tea): được làm từ 100% khổ qua với công dụng bổ mật, nhuận gan, lợi tiểu
- Trà thanh nhiệt (The reshment tea): làm từ các loài thảo mộc tự nhiên, công dụng giúp giải nhiệt, bổ máu, giảm đau đầu và giảm huyết áp
- Trà Actiso (Actiso tea): từ thân, rể, hoa và lá Actiso, giúp mát gan, thông mật, lợi tiểu, tăng bài tiết mật và mịn da
- Trà rong biển (Seaweed tea): gồm rong biển và chè đen, làm mát cơ thể, giả cảm, trị bứu cổ
- Trà trái nhàu (Noni tea): được làm từ trái nhàu và cỏ ngọt, dùng cho người sỏi thận, cao huyết áp, tiểu đường, ho cảm, đau lưng, dau khớp, nhuận tràng
- Trà Gừng hòa tan: ché biến từ gừng, trị cảm lạnh, ho đau bụng, hỗ trợ tiêu hóa,…
- Trà hòa tan không có phụ gia: không được bổ sung hoặc phối trộn bất kỳ phụ gia nào, chứa chất tan được trích từ nguyên liệu, mang hương vị tự nhiên và đặc trưng cho loại nguyên liệu sử dụng
- Trà hòa tan có phụ gia: có thể bổ sung thêm một số chất phụ gia, điều vị, tạo hương như: vitamin C, acid citric, hương trái cây,…
Hình 1 5 Một số sản phẩm trà hòa tan
Tổng Quan Về Phương Pháp Tách Chiết
Khi cho nguyên liệu và dung môi tiếp xúc với nhau, ban đầu dung môi sẽ thấm vào nguyên liệu sau đó những chất trong tế bào nguyên liệu cây sẽ hòa tan vào dung môi rồi khuếch tán ra ngoài tế bào Trong quá trình tách chiết sẽ xảy ra một số quá trình sau: Khuếch tán, thẩm thấu, thẩm tích Trong thực nghiệm , việc chiết rắn-lỏng được áp dụng nhiều hơn gồm ngâm kiệt, ngâm dầm, chiết với máy Soxhlet,… Sự chiết bằng cách nấu nguyên liệu cây với nước còn được gọi là nước sắc Ngoài ra còn có sự chiết với phương pháp lôi cuốn bằng hơi nước, phương pháp sử dụng chất lỏng siêu tới hạn,…
Có nhiều cách để chiết xuất các hợp chất hữu cơ ra khỏi cây cỏ, các kỹ thuật đều xoay quanh hai phương pháp chiết lỏng – lỏng và chiết rắn – lỏng Chiết tách là sử dụng một loại dung môi hữu cơ thích hợp có khả năng hòa tan chất cần tách, tinh chế và cô lập hợp chất mong muốn
1.6.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình tách chiết nguyên liệu
Lựa chọn dung môi để tách chiết
Do cấu tạo hóa học của cây cỏ hoặc sinh khối thường là những chất liệu đại phân tử (polymer, cellulose, nấm mốc, thành tế bào vi sinh vật,…) tương đối trơ, không hòa tan trong dung môi hữu cơ, vì thế việc khảo sát hoạt chất tự nhiên nghĩa là chiết lấy và khảo sát các chất biến dưỡng thứ cấp có trọng lượng phân tử nhỏ [24]
Thông thường muốn nghiên cứu các hợp chất tự nhiên có tính ái dầu có mức độ phân cực khác nhau Tuy nhiên, đôi khi cũng nghiên cứu các hợp chất có tính ái nước Điều này được thực hiện bằng cách chiết những hợp chất tự nhiên có trong cây lần lượt bằng các dung môi có tính phân cực tăng dần hay chiết một lần lấy tất cả các hợp chất bằng cách sử dụng dung môi vạn năng methanol (có thể chiết hầu hết các hợp chất tự nhiên trong mẫu cây) [4]
Nguyên tắc của sự tách chiết là dung môi không phân cực (ví dụ: eter dầu hỏa, hexan, heptan, benzen, toluen,…) sẽ hòa tan tốt các hợp chất có tính không phân cực (ví dụ: các alcol béo, ester béo,…), dung môi phân cực trung bình (ví dụ: diethyl ether, chloroform,…) hòa tan tốt các hợp chất có tính phân cực trung bình (các hợp chất có chứa nhóm chức eter –O–, aldehyde –CH=O, cetone –CO–, ester – COO–…) và dung môi phân cực mạnh (ví dụ: metanol, ethanol,…) hòa tan tốt các hợp chất có tính phân cực mạnh ( các hợp chất có chứa nhóm chức –OH, – COOH…) [18]
Muốn chiết hợp chất ra khỏi cây cỏ cần chọn dung môi phù hợp, sử dụng kỹ thuật chiết tách phù hợp bằng cách ngâm dầm, bằng máy chiết Soxhlet,… Sau khi chiết, phần bã cây còn lại lọc bỏ, dung môi qua thu hồi bằng máy cô quay chân không ở nhiệt độ thấp 30-40 o C vì thực hiện ở nhiệt độ cao có thể làm hư hại một vài hợp chất kém bền nhiệt [18]
Chọn dung môi phải có tính trung tính, không độc, không quá dễ cháy, hòa tan được các hợp chất cần khảo sát Sau khi chiết tách xong, dung môi đó có thể được loại bỏ dễ dàng Cần tránh các dung môi quá độc như benzen hoặc dễ cháy do nhiệt độ sôi thấp như diethyl ether, cacbon tetraclorur,…
Khi nhiệt độ tăng thì độ nhớt của dung môi giảm, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình tách chiết Tuy nhiên, khi nhiệt độ tăng sẽ gây bất lợi cho quá trình tách chiết trong các trường hợp sau: Đối với những hợp chất bền nhiệt khi nhiệt độ tăng cao sẽ gây biến đổi hoặc làm mất tính chất hóa học của chúng Ví dụ: alkaloid, vitamin, glycosid,… Đối với tạp chất: Khi nhiệt độ tăng không chỉ độ tan của hoạt chất tăng mà độ tan của tạp chất cũng tăng theo làm cho dịch chiết thu được sẽ nhiều tạp chất như gôm, chất nhày… ngoài ra khi nhiệt độ tăng sẽ làm cho một số chất trong nguyên liệu bị trương nở, tinh bột bị hồ hóa, độ nhớt của dịch chiết tăng, gây khó khăn cho quá trình chiết [24] Đối với dung môi dễ bay hơi nhiệt độ sôi thấp, khi tăng nhiệt độ thì dung môi sễ bị hao hụt, có thể gây cháy nổ trong quá trình chiết nên thiết bị phải kín và có bộ phận hồi lưu dung môi
Khi bắt đầu chiết, các chất có phân tử lượng nhỏ (thường là hoạt chất) sẽ được hòa tan và khuếch tán vào dung môi trước, sau đó đến các phân tử lớn hơn (thường là tạp chất như nhựa, keo,…) Do đó, nếu thời gian chiết ngắn sẽ không chiết hết hoạt chất trong nguyên liệu cây, nhưng nếu thời gian chiết dài quá thì dịch chiết sẽ lẫn nhiều tạp gây bất lợi cho quá trình tinh chế và bảo quản [18] Độ mịn của nguyên liệu
Khi kích thước của nguyên liệu cây thô quá dung môi sẽ khó thấm ước nguyên liệu, hoạt chất khó chiết nguyên liệu, hoạt chất khó chiết vào dung môi nên thời gian sẽ lâu hơn Khi nguyên liệu cây mịn quá thì bề mặt tiếp xúc giữ nguyên liệu và dung môi tăng lên, lượng chất khuếch tán vào dung môi tăng, do đó thời gian chiết sẽ ngắn hơn
Tuy nhiên nếu nguyên liệu quá mịn, khi ngấm vào dung môi bột nguyên liệu bị dính vào nhau nhiều tế bào thực vật bị phá hủy, dịch chiết lẫn nhiều tạp [24]
Tổng Quan Bệnh Đái Tháo Đường
Đái tháo đường là tình trạng lượng đường trong máu tăng quá cao Đường glucose từ thức ăn carbohydrate khi đi vào máu sẽ không được chuyển hóa vào các tế bào cơ thể do tuyến tụy không sản xuất đủ lượng insulin cần thiết Insulin là hooc-môn giúp glucose từ máu đi vào tế bào để tạo ra năng lượng cho hoạt động sống của cơ thể.
Bệnh tiểu đường xảy ra khi không có insulin, hoặc không đủ insulin hay insulin được tạo ra không hoạt động đúng chức năng để chuyển glucose ra khỏi máu
Những người mắc bệnh tiểu đường không những có luộng đường trong máu cao mà cả trong nước tiểu nữa Chính vì thế mà bệnh đáo tháo đường có tên gọi chuyên môn là Diabetes mellitus, theo tiếng Hy Lạp có nghĩa là mật ong
Hiện nay chưa có thuốc chữa khỏi bệnh tiểu đường
Một cách tổng quát bệnh tiểu đường chia làm hai loại: bệnh đái tháo đường loại
1 và bệnh đái tháo đường loại 2
Bệnh đái tháo đường loại 1
Thường xảy ra ở trẻ em từ 10 tuổi trở lên và chiếm 10% trong số các trường hợp bị bệnh Nguyên nhân do cơ thể không sản xuất được insulin vì hệ thống miễn dịch của cơ thể nhầm lẫn đã tân công vào các tế bào của tuyến tụy làm cho tuyến tụy không sản xuất insulin Khi không có insulin, tế bào sẽ không chuyển hóa được glucose làm cho lượng glucose trong máu tăng cao [18]
Bệnh đái tháo đường loại 2
Thường xảy ra ở người trên 50 tuổi, chiếm khoảng gần 90% trong tổng số trường hợp bị đái tháo đường Đối với những người bị đái tháo đường loại 2, mặc dù cơ thể vẩn sản xuất được insulin nhưng các tế bào không hoặc kém nhạy cảm với sự có mặt của insulin Lượng đường trong máu do không được chuyển hóa thành năng lượng nên giữ ở mức cao Khi đó, cơ thể phản ứng bằng cách tăng sản xuất insulin lên và gây quá tải trong tuyến tụy Theo thời gian lượng insulin được tiết ra dần dần giảm Bệnh đái tháo đường loại 2 còn có nguyên nhân tiềm ẩn trong cấu tạo gen, điều này làm cho bệnh phát triển nhanh hơn Nếu những người mang gen tiềm ẩn được phát hiện sớm và có biện pháp phòng ngừa bằng cách ăn uống hợp lí thì bệnh có thể không xuất hiện hoặc phát triển chậm, nhưng bệnh vẫn giữ ở dạng tiềm ẩn Trong trường hợp ngược lại bệnh sẽ phát triển rất nhanh [8]
Phương pháp điều trị đái tháo đường loại 1:
Với những người mắc bệnh đái tháo đường loại 1, họ sẽ phải tiêm insulin thường xuyên trong cả cuộc đời vì cơ thể họ không có khả năng tạo ra hormon này Insulin có nhiều loại nhưng nằm trong hai dạng chính tùy theo tác dụng nhanh hay chậm: dạng tác dụng nhanh dùng ngay trước bữa ăn để tăng lượng insulin trong cơ thể phù hợp với lượng carbohydrate sắp nhập vào, dạng tác dụng chậm dùng vào buổi tối đễ giữ lượng trong máu không tăng vọt trong nhiều giờ vào hôm sau [15]
Hiện nay, việc uống insulin dạng viên là không thể vì insulin trong môi trường dạ dày dễ bị phân hủy Do đó, các nhà khoa học đang nghiên cứu bọc insulin trong một vỏ nang thích hợp để thuốc có thể qua được dạ dày, giải phóng ra trong ruột non và ngấm vào máu Thời gian gần đây, ta thấy xuất hiện insulin dưới dạng bột, nó được đưa vào máu bằng đường phổi Qua nhiều năm nghiên cứu, người ta phát hiện được dạng thuốc bột này có hiệu quả rất cao [15]
Phương pháp điều trị đái tháo đường loại 2
Phụ thuộc tình trạng của bệnh nhân, phương pháp chữa trị gắn liền với việc ăn uống thích hợp, tăng cường hoạt động, chỉ bệnh nhân đái tháo đường loại 2 mới dùng thuốc kết hợp với những chất đặc hiệu nhằm làm giảm lượng đường huyết Bệnh nhân có thể dùng riêng thuốc viên hoặc kết hợp với phương pháp tiêm insulin [15]
Thuốc sử dụng để điều trị bệnh đái tháo đường loại 2 chủ yếu chia ba nhóm:
- Nhóm thuốc thúc tụy tạng tiết thêm insulin như nhóm sulfonylurea: glyburide (Micronase, Diabeta, Glynase), glipizide (Glucotrol, Glucotrol XL), glimepiride (Amaryl); và nhóm meglitinide: repaglinide (Pradin)
- Nhóm thuốc giúp insulin hoạt động hữu hiệu hơn như nhóm biguanide: metformin (Glucophage, Glucophage XR, Metformin XR, nhóm thiazolidinedione: glitazone, rosiglitazone (Avandia), pioglitazone (Actos)
- Nhóm ngăn ruột bớt hấp thu chất đường khi ăn bằng chất ức chế enzyme α- glucosidase: acarbose (Precose, Glucobay), miglitol (Glyset)
- Phương pháp ức chế enzyme α-glucosidase trong điều trị đái tháo đường loại 2 được ưu tiên sử dụng vì cơ chế đơn giản, an toàn, chỉ xảy ra trong bộ phận tiêu hóa chứ không tham gia vào quá trình chuyển hóa đường hay cải thiện chức năng của insulin cũng như kích thích sự sản sinh insulin… như các phương pháp khác.
Tổng Quan Về Enzyme α- Glucosidase
Enzyme α- glucosidase với những tên khác như maltase, glucoinvertase, glucosidoinvertase, glucosidosucrase, maltase- glucoamylase, nitrophenyl α-D- glucosidase, transglucosidase, α-glucosidase, glucosidoinvertase, α-D-glucosidase, α- glucosidase hydrolase, α-1,4-glucosidase, thuộc nhóm hydrolase ( nhóm enzyme xúc tác các phản ứng thủy phân) [23]
1.8.2 Cơ chế hoạt động Enzyme α- Glucosidase α-glucosidase là một enzyme nằm ở tế bào biểu mô niêm mạc ruột non đảm nhận việc phân giải các đường disaccharide và carbohydrate Hiện nay, xu hướng sử dụng các loại thuốc ức chế enzyme α-glucosidase trong việc điều trị đái tháo đường như acarbose, migliton đã trở nên phổ biến
Hình 1 6 : Vai trò của α-glucosidase trong quá trình hình thành glucose
Dưới tác dụng của α-amylase, tinh bột sẽ bị thủy phân thành maltose Sau đó, dưới tác dụng của α-glucosidase, đường maltose sẽ tiếp tục bị thủy phân thành đường glucose Ngoài sự hấp thu tinh bột, cơ thể còn hấp thu saccharose Dưới tác động của α-glucosidase, đường saccharose cũng bị thủy phân thành đường glucose và fructose
Do đó, ức chế α-glucosidase làm cho quá trình thủy phân maltose và saccharose diễn ra chậm Do đó, hàm lượng glucose không tăng mạnh sau khi ăn
Tổng Quan Về Quá Trình Oxy Hóa
Năm 1954, bác sĩ Denham Harman thuộc đại học Berkeley (California), là nhà khoa học đầu tiên nhận ra sự hiện hữu của gốc tự do trong cơ thể với nguy cơ gây ra những tổn thương cho tế bào Trước đó, người ta cho rằng gốc này chỉ có ở ngoài cơ thể
Gốc tự do (free radical) là những nguyên tử, nhóm nguyên tử hoặc phân tử ở lớp ngoài cùng có những electron không ghép đôi Gốc tự do có thể tồn tại độc lập, tuy nhiên thời gian tồn tại của các gốc tự do thường rất ngắn Các electron này có năng lượng cao, rất kém bền nên dễ dàng tham gia vào nhiều phản ứng hóa học như phản ứng oxi hóa - khử, phản ứng polymer hóa…
1.9.2 Sự hình thành gốc tự do
Các gốc tự do được sinh ra và tích lũy và tạo ra quá trình sinh sống của con người, đó chính là nguyên nhân dẫn đến bệnh tật và làm tăng tốc độ quá trình lão hoá cơ thể con người Trong các quá trình phản ứng hóa học, đôi khi một electron bị kéo ra khỏi phân tử, và phân tử đó trở thành một gốc tự do, với số điện tử lẻ Các gốc tự do luôn tìm cách chiếm đoạt các electron của các phân tử khác để đạt trạng thái cân bằng Quá trình này hình thành nên một chuỗi các gốc tự do liên tiếp nhau, gây rối loạn hoạt động của tế bào
Các gốc tự do trong cơ thể sinh vật sinh ra có 2 nguồn gốc, đó là nguồn nội sinh và nguồn ngoại sinh
• Gốc tự do có nguồn nội sinh là các gốc tự do được chính cơ thể tạo ra
• Gốc tự do có nguồn ngoại sinh được hình thành trong cơ thể do các yếu tố ngoại lai như ô nhiễm môi trường, tác động của tia tử ngoại trong ánh nắng mặt trời, thuốc lá, rượu, thuốc chữa bệnh
1.9.3 Vai trò của gốc tự do trong cơ thể
1.9.3.1 Tác dụng có hại của gốc tự do [1]
Stress oxy hóa (oxidative stress) xảy ra khi sự hình thành gốc tự do vượt quá mức kiểm soát của các hệ thống chống oxy hóa trong cơ thể Tình trạng này dẫn đến hàng loạt bệnh lý của tuổi già như Parkinson, Alzheimer và một số bệnh thần kinh khác, bệnh xơ vữa động mạch, đái tháo đường, bệnh phổi, ung thư
Hình 1 7 Tác nhân bên ngoài gây ra gốc tự do
− Quá trình peroxid hóa lipid: Màng tế bào giàu acid béo chưa bão hòa nên đễbị tấn công bởi tác nhân oxy hóa, quá trình này gọi là sự peroxid hóa lipid Việc làm hư hại lipid làm ảnh hưởng đến tính linh động của màng dẫn đến một số bệnh như đái tháo đường, bệnh trên hệ tim mạch.
− Làm hư hỏng protein: protein bị peroxid hóa có thời gian tồn tại dài hơn, do đó chúng có thể khuyếch tán trong tế bào và mô trong thời gian dài, vì thế chúng có thể phản ứng với các phân tử protein khác và khơi mào cho phản ứng dây chuyền.
− Phá hủy DNA: các gốc tự do dễ dàng tấn công DNA thông qua việc tấn công vào nhóm đường deoxyribose và base nitơ của nhóm purin và pirimidin hình thành thể đột biến.
− Quá trình lão hóa: lão hóa là một quá trình phức tạp trong đó các tổn hại do oxy hóa đóng vai trò rất quan trọng Các phản ứng sinh hóa bên trong tế bào tạo ra các gốc tự do hoạt động, các gốc này nhanh chóng phản ứng với các phân tử quanh nó là nguyên nhân chính gây xáo trộn hoạt động của các ty lạp thể, bám vào các ADN gây đột biến bên trong các tế bào Vì thế, các gốc tự do là nguyên nhân của sự tự hủy hoại và lão hóa ở cấp tế bào.
1.9.3.2 Tác dụng có lợi của gốc tự do
Khi nồng độ tồn tại ở nồng độ trung bình, gốc tự do rất có lợi và cần thiết cho các hoạt động của cơ thể sống.
Hình 1 8 Các bệnh do gốc tự do gây ra
Vai trò của gốc tự do trong quá trình trao đổi chất và trong chuỗi hô hấp tế bào, hầu hết các dạng sống đều cần đến gốc tự do cho các quá trình diễn ra trong cơ thể ở mức độ vi mô Trong tế bào của sinh vật sống, hàng triệu các phản ứng hóa học diễn ra mỗi giây nhằm tạo năng lượng cho hoạt động sống và tạo nên những chất cần thiết để xây dựng cơ thể Rất nhiều phản ứng trong số đó đòi hỏi sự di chuyển của các điện tử từ phân tử này sang phân tử khác, đặc biệt trong chuỗi hô hấp tế bào.
Các gốc tự do luôn đóng vai trò trung gian quan trọng cho sự di chuyển điện tử này
Gốc tự do đóng vai trò quan trọng trong hệ miễn dịch Khi cơ thể tiếp xúc với các yếu tố ngoại lai như vi khuẩn, hệ miễn dịch kích hoạt các đại thực bào sản xuất gốc tự do để tiêu diệt các tác nhân gây hại.
Bên cạnh tác dụng giúp tiêu diệt các vi sinh vật lạ, gốc tự do còn góp phần quét dọn những tế bào già, chết trong cơ thể tạo điều kiện cho những tế bào mới sinh sôi và phát triển Đồng thời gốc tự do còn góp phần tiêu diệt các tế bào bất thường như tế bào ung thư.
Ngoài hai vai trò trên gốc tự do còn tham gia vào nhiều quá trình có lợi khác cho cơ thể như đóng vai trò là chất dẫn truyền thần kinh, hoặc làm nhiệm vụ là tế bào tín hiệu (cell signalling) và cần thiết cho việc hình thành một số hormon nhưthyroxin
1.9.3.3 Cơ chế kháng oxy hóa
Chất kháng oxy hóa là những chất có khả năng ngăn ngừa và loại bỏ tác dụng độc hại của các gốc tự do một cách trực tiếp hoặc gián tiếp Chất kháng oxy hóa có thể trực tiếp phản ứng với các gốc tự do hoạt động để tạo ra những gốc tự do mới kém hoạt động hơn, từ đó có thể ngăn cản chuỗi phản ứng dây chuyền được khơi mào bởi các gốc tự do
Chất kháng oxy hóa cũng có thể gián tiếp tạo phức với các ion kim loại chuyển tiếp trong phản ứng fenton hoặc ức chế các enzym xúc tác cho các quá trình sinh ra gốc tự do nhằm ngăn cản sự hình thành gốc tự do trong cơ thể
Cơ chế khơi mào các phản ứng oxy hóa của kim loại:
FC 1+ + ROOH → FC 3+ + RO ● + OH -
Hình 1 6: Cơ chế kháng oxy hóa của chất kháng oxy hóa
Các chất kháng oxy hóa
Tổng Qua Về Một Số Vi Khuẩn Gây Bệnh
Vi khuẩn E.coli thuộc nhóm vi trùng đường ruột Enterobacteriaceae, có nhiều trong tự nhiên, trong đường ruột của người và gia súc Trong đường ruột, chúng hiện diện nhiều ở đại tràng nên còn gọi là vi khuẩn đại tràng Vi khuẩn E.coli nhiễm vào đất, nước… từ phân của động vật Chúng trở nên gây bệnh khi gặp điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của chúng
Vi khuẩn thuộc loại trực khuẩn gram âm, di động bằng tiêm mao quanh tế bào, không tạo bào tử, loại có độc lực thì có capsul, loại không có độc lực không có capsul Kớch th ước trung bỡnh (0,5à x 1-3à) hai đầu trũn Một số dũng cú lụng bỏm (pili) Đặc điểm nuôi cấy và sinh hóa:
Là loại hiếu khí hay hiếu khí tùy nghi Nhiệt độ thích hợp 370C nhưng có thể mọc trên 400C, pH 7,4
Trên môi trường thạch dinh dưỡng NA , Trên thạch máu, Trên môi trường chẩn đoán chuyên biệt EMB (Eozin Methyl Blue) ,Trên môi trường Rapid’ E.coli,Trên môi trường Macconkey, Endo,Trên các môi trường đường
Các phản ứng sinh hóa:
The bacteria exhibit the following biochemical characteristics: indole production (positive), methyl red test (positive), Voges-Proskauer test (negative), citrate utilization (negative), hydrogen sulfide production (negative), nitrate reduction (positive to nitrite), and lysine decarboxylase activity (positive).
Hình 1 9 Vi khuẩn E Coli Đặc điểm kháng nguyên và độc tố
Gồm 4 loại kháng nguyên: O, K, H, F và nội độc tố gây tiêu chảy, ngoại độc tố gây tan huyết và phù thủng Độc tố của E.coli: Loại E.coli có giáp mô (kháng nguyên K) gây ngộ độ mạnh hơn loại không giáp mô
Nội độc tố đường ruột: Gồm 2 loại chịu nhiệt và không chịu nhiệt Cả hai loại này đều gây tiêu chảy Loại chịu nhiệt ST (Thermostable), Loại không chịu nhiệt LT (Thermolabiles).Những dòng E.coli sản sinh độc tố (ETEC)
Cơ chế gây ngộ độc: khi cơ thể bị nhiễm vi khuẩn với số lượng nhiều kèm theo độc tố của chúng E.coli gây tiêu chảy thường gặp các nhóm sau: Nhóm EPEC
- Những dòng E.coli có cả 2 loại nội độc tố LT và ST sẽ gây ra tiêu chảy trầm trọng và kéo dài
- Gần đây người ta phát hiện chủng E.coli mới ký hiệu là E.coli O157:H7 Chủng này đã gây ra những vụ ngộ độc lớn trên thế giới trong những năm gần đây (theo CDC, Center for Disease Control and prevention của Mỹ) :
- Năm 1982, lần đầu tiên người ta ghi nhận được nguồn bệnh do E.coli O157:H7
- Năm 1985, người ta nhận thấy triệu chứng hoại huyết có liên quan đến chủng O157:H7
- Năm 1990, bùng nổ trận dịch từ nguồn nước nhiễm chủng E.colimO157:H7
- Năm 1996, xảy ra trận dịch khá phức tạp ở Nhật Bản do uống nước táo chưa diệt khuẩn
- Escherichia coli có thể sống ở điều kiện ngoại cảnh từ vài tuần đến vài tháng, có khả năng chịu được các yếu tố lý hóa khắc nghiệt
- Hóa học: các chất sát khuẩn thong thường như nước Javen 1/200, phenol 1/200 giết chết vi khuẩn sau 2-4 phút
- Vật lý: Escherichia coli nhạy cảm với nhiệt độ cao Nhiệt độ 55 0 C giết vi khuẩn sau 1 giờ và 60 0 C sau 30 phút Môi trường lạnh Escherichia coli bị phá hủy trong
Salmonella là vi khuẩn Gram âm nguy hiểm gây ngộ độc thực phẩm Chúng thuộc họ Enterobactriaceae và có thể gây ra các bệnh nghiêm trọng như thương hàn và nhiễm trùng huyết Salmonella có hình dạng trực khuẩn, di chuyển bằng roi, không tạo bào tử và phát triển tối ưu ở nhiệt độ 35-37 độ C và độ pH 7,2 Vi khuẩn này có thể tồn tại ở nhiệt độ từ 180 C đến 400 C, nhưng sẽ bị tiêu diệt ở 600 C trong 60 phút.
Salmonella là vi khuẩn kỵ khí tùy nghi phát triển được trên các môi trường nuôi cấy thông thường Trên môi trường thích hợp, vi khuẩn sẽ phát triển sau 24 giờ
Khuẩn lạc đặc trưng của Salmonella trên môi trường này là tròn, lồi, trong suốt, có tâm đen, đôi khi tâm đen lớn bao trùm khuẩn lạc,môi trường xung quanh chuyển sang màu đỏ
Có hai loài vi khuẩn Salmonella, Salmonella bongori và Salmonella enterica Salmonellosis (bệnh gây ra bởi vi khuẩn Salmonella) là bệnh có thể truyền nhiễm từ thú sang người và ngược lại Ngoài ra, sự lây nhiễm cũng thường xảy ra qua thực phẩm, đặc biệt là qua trứng và thịt gia cầm Hầu hết các loại Salmonella đều tác hại trực tiếp vào bao tử khiến người bệnh đau bụng, tiêu chảy và nôn mửa trong vài ngày Tuy nhiên, cũng có loại vào đường ruột, gây thương hàn khiến người bệnh có thể tử vong
Khả năng nhiễm khuẩn Salmonella
Do không bảo đảm an toàn thực phẩm trong khâu chế biến, đặc biệt là trong các nhà bếp lớn phục vụ nhiều thực khách, bởi các chất bài tiết (nước bọt, nước tiểu, phân và nước dịch cơ thể khác) của người bệnh, ngay cả trong trường hợp bệnh chưa phát và người bệnh được xem là khỏe mạnh khi khám nghiệm lâm sàng; và động vật, đặc biệt là từ các loài bò sát không bị phát hiện nhiễm bệnh (tỷ lệ nhiễm là 90%), một mối nguy hiểm, đặc biệt là đối với trẻ nhỏ
− Mặt nước bị ô nhiễm và nước tù đọng (ví dụ như trong ống vòi sen và các thiết bị truyền nước mà không được sử dụng lâu dài trước đó)
− Trứng tươi sống đến từ gia cầm bị nhiễm khuẩn salmonella (thường là salmonella chỉ có trên vỏ trứng.
- Khuẩn Salmonella cũng có thể lọt vào trong nếu vỏ trứng bị hư hay là rạn nứt, hay là qua tay người), thường gây ngộ độc khi ăn trứng hoặc sản phẩm gia cầm chưa chế biến kỹ hoặc nấu chín
− Vi khuẩn này cũng có thể qua sữa chưa được tiệt trùng, cá ngừ sống, dưa chuột, cà chua, giá đỗ nhiễm khuẩn
Sức đề kháng Ở tự nhiên trong nước 1 tuần, trong phân 2 tháng Nhiệt độ 50 0 C/1h; 100 0 C/5 phút Dễ bị tiêu diệt bởi thuốc sát trùng thông thường
– Salmonella không lên men lactose, lên men đường glucose và sinh hơi Thường không lên men sucrose, salicin và inositol, sử dụng được citrate ở môn trường
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
VẬT LIỆU
Mẫu lá Cóc đỏ (Lumnitzera littorea) được thu hái ta tại rừng ngập mặn Cần Giờ Mẫu sau khi thu hái sẽ được định danh bởi Ts Phạm Văn Ngọt khoa Sinh trường Đại học Sư phạm TP.HCM Tiến hành thu hái mẫu vào tháng 09/2018 và được thu hái với số lượng là 5kg lá tươi và trưởng thành
Lá cây Cóc đỏ (Lumnitzera littorea) trưởng thành, lá mọc cách, tập trung ở đầu cành, phiến lá hình trứng ngược, dài 3-8 cm, rộng 1-2,5 cm, ít gân, cuống dài 0,5 – 1 cm, lá có màu xanh đậm, không bị sâu, tại rừng ngập mặn Cần Giờ Sau khi hái về, nguyên liệu rửa sạch, loại bỏ tạp chất, phơi khô và xay để tạo thành bột cây để chuẩn bị cho quá trình nghiên cứu
Thí nghiệm được tiến hành tại phòng thí nghiệm Sinh Hóa, Khoa Công Nghệ Sinh Học, trường Đại học Mở Thành Phố Hồ Chí Minh Địa chỉ: 68 Lê Thị Trung, Phú Lợi, Thủ Dầu Một, Bình Dương
Thời gian từ tháng 10/2018 đến tháng 12/2018
2.1.3 Hóa chất và thiết bị thí nghiệm
Các thiết bị trong phòng thí nghiệm: tủ sấy, lò nung, thiết bị lọc chân không, thiết bị cô quay, cân phân tích, máy đo OD, máy ly tâm, thiết bị máy sáy thăng hoa
NaOH , AlCl 3 , thuốc thử Fehling, Pb(CH3COO)2, K2C2O 4 , HCl, K3Fe(CN) 6 , ZnSO 4 - KI, Fe2(SO4) 3 , môi trường MHA, cồn tuyệt đối 96 0 , acid ascorbic, maltodextrin ( Việt Nam đạt mức độ tinh khiết phân tích)
DMSO, thuốc thử Folin-Ciocalteu, acarbose (Merck)
DPPH•, enzyme α-glucosidase, cơ chất p-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside (
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1 Phương pháp xác định hàm lượng polyphenol
- Định lượng hợp chất polyphenol tổng số của dịch chiết ban đầu theo phương pháp Folin-Ciocalteau của Aiyegoro và Okoh [7]
Phương pháp này được thực hiện dựa trên nguyên tắc các hợp chất polyphenol trong dung dịch phản ứng với thuốc thử Folin – Ciocalteau Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỉ lệ thuận với hàm lượng polyphenol trong một phạm vi nhất định Dựa vào cường độ màu đo ở bước sóng 765 nm và đồ thị đường acid gallic có thể xác định được hàm lượng polyphenol
2.2.2 Phương pháp xác định hàm lượng flavonoid
Hàm lượng flavonoid của chất chiết xuất được xác định theo phương pháp tạo màu với AlCl 3 bằng cách xây dựng đường chuẩn quercetin [21]
Phương pháp này được thực hiện dựa vào đặc tính tạo phức màu rất mạnh của các flavonoid với kim loại Al 3+ thường được sử dụng để khảo sát vì nó là kim loại tạo phức màu mạnh và không độc hại Cường độ màu của hỗn hợp tỉ lệ thuận với hàm lượng flavonoid Dựa vào cường độ màu đo ở bước sóng 425 nm và đồ thị đường chuẩn quercetin có thể xác định được hàm lượng flavonoid
2.2.3 Phương pháp ức chế enzyme α- glucosidase
Nghiên cứu khả năng ức chế α-glucosidase được xác định theo phương pháp của Apostolidis và cộng sự (2007) Để khảo sát khả năng ức chế hoạt tính enzyme α- glucosidase trên cao chiết ,ta sử dụng p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosid (pNPG) làm cơ chất Cơ chất p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosid sẽ bị enzyme α-glucosidase thủy phân chuyển hóa thành α-D-glucose và p-nitrophenol (pNP)
2.2.4 Phương pháp khảo sát khả năng kháng oxy hóa
Chất chống oxy hóa là những chất có khả năng ngăn ngừa, chống lại và loại bỏ các tác hại của các gốc tự do một cách trực tiếp hoặc gián tiếp Chất chống oxy hóa có thể trực tiếp phản ứng với các gốc tự do hoạt động để tạo ra những gốc tự do mới kém hoạt động hơn, từ đó có thể ngăn cản chuỗi phản ứng dây chuyền được khơi mào bởi các gốc tự do
Hoạt tính đánh bắt gốc tự do DPPH của chất chống oxy hóa liên quan đến khả năng cho hydrogen để trung hòa gốc DPPH·, tạo thành DPPH-H bền Quá trình này làm giảm hấp thụ ánh sáng tại bước sóng cực đại, dẫn đến màu tím của dung dịch phản ứng chuyển sang vàng nhạt Độ hấp thụ ánh sáng (OD) càng thấp biểu thị khả năng bắt gốc DPPH càng cao, phản ánh hiệu quả chống oxy hóa của chất.
Hình 2.2: Cơ chế kháng oxy hóa
2.2.5 Phương pháp khảo sát khả năng kháng khuẩn
Khảo sát và đánh giá khả năng kháng khuẩn của nguyên liệu thông qua dịch chiết, các mẫu sau các công đoạn chế biến Cách đánh giá dựa vào đường kính vòng kháng khuẩn
Khả năng kháng khuẩn của cao chiết được xác định dựa trên khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn thể hiện qua đường kính vòng kháng khuẩn được tạo ra trên đĩa petri
Bảng 2 1: Mức tác động dựa vào đường kính vòng kháng khuẩn
Mức độ tác động Đường kính vòng kháng khuẩn
Không tác động (-) Không có vòng kháng khuẩn
2.2.6 Phương pháp sấy thăng hoa
Là quá trình làm khô vật liệu ở nhiệt độ thấp (T < 0°C), áp suất thấp (P< 4 mmHg), vật liệu trước khi sấy được tiến hành cấp đông sao cho tâm vật liệu sấy có nhiệt độ (T < 0°C) để nước bên trong vật liệu sấy hoàn toàn ở trạng thái rắn (nước đá), khi cấp nhiệt bằng phương pháp tiếp xúc hoặc bức xạ thì nước bên trong vật liệu thăng hoa từ trạng thái rắn sang trạng thái hơi đồng thời trên toàn bộ thể tích vật liệu sấy nên sản phẩm sấy có cấu trúc xốp, ít bị co rút biến dạng, nhiệt độ cuối quá trình sấy thấp nên sản phẩm sấy ít bị biến tính giữ được chất lượng dinh dưỡng và giá trị cảm quan
Sự biến đổi trạng thái hơi nước có hai trường hợp: lỏng – hơi và rắn–hơi có thể trình bày theo giản đồ:
Sự biến đổi trạng thái hơi nước trong giản đồ áp suất hơi bão hoà P và nhiệt độ
T Giao điểm của các đường cong biên đươc gọi là điểm ba Với các giá trị của thông số điểm ba, có khả năng tồn tại cả ba pha (nước đá – nước lỏng – hơi nước) Trạng thái đó trong nhiệt động lực học được gọi là trạng thái cơ bản biểu diễn trên giản đồ P – T bằng điểm ba thể Dưới điểm ba thể không thể có pha lỏng bền vững và nước sẽ ở trạng thái rắn (nước đá) hoặc ở trạng thái hơi Nói cách khác, với áp suất thấp, trở kháng của môi trường xung quanh nhỏ đến mức để mạng tinh thể nước đá dễ dàng bị phân rã và lập tức nó chuyển thành trạng thái hơi Trên đường cong nước đá – hơi, hệ thức giữa áp suất và nhiệt độ phải tương ứng với trạng thái cân bằng giữa pha rắn và pha hơi Quá trình thăng hoa được trình bày như sự dịch chuyển qua đường cong đó từ trái sang phải Đối với nước, thông số điểm ba là áp suất P= 4,58 mmHg và nhiệt độ T = 0,0098 °C Nhiệt độ đó tương ứng với nhiệt độ nóng chảy của nước ở áp suất khí quyển bình thường Vì vậy, khi đốt nóng dần dần nước đá trong không khí, thì nó sẽ chuyển qua trạng thái lỏng và sau đó bắt đầu bay hơi
Hình 2 2: Giản đồ trạng thái của nước
NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
Sơ đồ 2 1: Sơ đồ nghiên cứu
Khảo sát độc tính cấp ở nguyên liệu Khảo sát thành phần và tính chất nguyên liệu Xác định hàm lượng polyphenol và flavonoid Khảo sát hoạt tính sinh học của nguyên liệu
Khảo sát quá trình sản xuất trà hòa tan
Khảo sát quá trình sao Khảo sát quá tình trích ly Khảo sát quá trình phối trộn
Khảo sát hoạt sự ảnh hưởng bao bì trong quá trình bảo quản
Khảo sát chất lượng sản phẩm
Khảo sát Chỉ tiêu hóa lýKhảo sát quá Chỉ tiêu vi sinhKhảo sát hoạt tính sinh học Đánh giá cảm quan
2.3.2 Quy trình điều chế cao tổng từ lá cây Cóc đỏ (Lumnitzera littorea) Cách tiến hành
- Lá cóc đỏ được lựa chọn những lá tươi và trưởng thành, sau đó rửa sạch phơi khô xay nhuyễn và tiến hành trích ly theo sơ đồ 2.2 Cao chiết này được sử dụng để xác định hàm lượng polyphenol, flavonoid và các hoạt tính sinh học
Sơ đồ 2 2: Quy trình điều chế cao chiết lá cóc đỏ
Lá cây Cóc đỏ sau khi được thu hái sẽ đem phơi khô Lá cây Cóc đỏ phơi khô sẽ xay nhỏ giúp tăng diện tích tiếp xúc trong quá trình trích ly Trong quá trình trích ly sẽ tiến hành khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình trích ly để chọn ra thông số tối ưu thu được hàm lượng chất khô cao nhất
Kết thúc quá trích ly sẽ tiến hành lọc bằng máy lọc chân không để thu dịch chiết của lá cây Cóc đỏ, quá trích lọc chân không giúp tiết kiệm thời gian lọc và hạn chế sự bay hơi và bị oxy hóa các hợp chất sinh học có trong dịch chiết Dịch chiết sẽ được đem cô quay bằng máy cô quay chân không ở nhiệt độ 40 0 C áp suất thấp để làm bay hơi dung môi, hạn chế tối thiểu sự thất thoát hợp chất sinh học và thu được cao chiết
2.3.3 Quy trình sãn xuất trà hòa tan
Các nguyên liêu bao gồm lá cóc đỏ, đông trùng hạ thảo, atiso và cam thảo sẽ rữa sạch, phơi khô, xay nhỏ.Tiến hành khảo sát quá trình sao đối vớinguyên liệu lá cóc đỏ nhằm tìm ra thông số thời gian và nhiệt độ sao tối ưu để đảm bảo chất lượng Mỗi loại nguyên liệu được tiến hành trích ly riêng biệt nhằm tìm ra thông số tối ưu của quá trình trích ly với hàm lượng chất khô cao Hỗn hợp sau khi trích được lọc chân không để loại bỏ bã Dịch trích ly của các nguyên liệu sau khi lọc chân không bao gồm lá cóc đỏ, đông trùng hạ thảo, atiso, cam thảo sẽ tiến hành phối trộn để tạo ra hương vị đặc trưng cho sản phẩm và có giá trị cảm quan cao nhất, dịch sau phối trộn sẽ được cô đặc để làm tăng nồng độ chất khô có trong dung dịch bằng phương pháp cô quay chân không Sau đó tiến hành phối trộn maltodextrin để chuẩn bị cho quá trình sây thăng hoa và còn làm tăng giá trị cho sản phẩm Sản phẩm sau khi sấy thăng hoa thì sẽ được bao gói để đảm bảo sản phẩm tránh tiếp xúc với không khí và ánh sáng ảnh hưởng đến chất lướng sản phẩm.
Sơ đồ 2 3 Quy trình sản xuất trà hoà tan
Atiso Lá cóc đỏ Đông trùng hạ thảo Cam thảo
Cô dặc Phối trộn Sấy thănh hoa
Trích ly 1 Trích ly 3 Trích ly 4
2.3.4 Khảo sát thành phần và tính chất nguyên liệu
2.3.4.1 Khảo sát độc tính cấp ở lá Cóc đỏ
Lá cóc đỏ là nguyên liệu mới chưa được nghiên cứu, việc sử dụng loại lá cây này như một thực phẩm chỉ dừng lại theo kinh nghiệm dân gian Các nghiên cứu trước của nhóm tác giả cho thấy trong lá của cây cóc đỏ chứa nhiều các hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học như flavonoid, triterpenoid, steroid,v.v…Do đó, để làm cơ sở cho việc ứng dụng loại cây này trong thực phẩm, nhóm đã tiến hành khảo sát độc tính cấp của nguyên liệu trên đối tượng chuột
Cho chuột thử nghiệm dùng cùng liều thuốc trong điều kiện ổn định như nhau, quan sát các phản ứng xảy ra trong vòng 72 giờ
Cho 6 chuột (50% đực, 50% cái) nhịn đói ít nhất 12 giờ trước khi cho uống cao thử ở nồng độ cao nhất có thể qua kim cho chuột uống với thể tích 20 ml/kg (theo
Theo "Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu" của Bộ Y tế (QĐ 141/QĐ-K2ĐT ngày 27/10/2015), đối với nghiên cứu tiền lâm sàng, sau khi dùng thuốc, cần theo dõi cử động tổng quát, hành vi, trạng thái lông, ăn uống, tiêu tiểu và số lượng chuột chết trong vòng 72 giờ Nếu chuột không có biểu hiện bất thường hoặc tử vong sau thời gian này, thời gian theo dõi sẽ được kéo dài thành 14 ngày.
❖ Có 3 trường hợp có thể xảy ra:
- Trường hợp 1: Sau khi cho chuột uống cao thử, số chuột trong lô thử vẫn bảo toàn, xác định liều cao nhất có thể qua kim mà không làm chuột chết Liều này được ký hiệu là Dmax và liều tương đối an toàn Ds dùng trong các thử nghiệm dược lý có thể bằng hoặc nhỏ hơn 1/5 Dmax
- Trường hợp 2: Sau khi cho chuột uống cao thử, tỷ lệ tử vong là 100% thì thử với liều giảm ẵ so với liều đầu Tiếp tục giảm liều cho đến khi tỡm được liều tối thiểu gây chết 100% chuột (LD100) và liều tối đa không gây chết chuột nào (LD0) Tiến hành thử nghiệm xác định LD50: chia chuột làm 4 lô, mỗi lô ít nhất 6 con Chia 4 liều theo cấp số cộng khoảng từ LD0 – LD100 Ở những liều gần LD50, tăng số lượng chuột lên để sự đo lường được chính xác hơn Theo dõi chuột trong 72 giờ, ghi nhận các diễn biến của chuột, số lượng chuột chết/sống ở mỗi lô, lập phân suất tử vong để tìm LD50
- Trường hợp 3: Sau khi cho chuột uống cao thử, phân xuất tử vong thấp hơn 100%, không xác định được liều gây chết tuyệt đối, không thể xác định được LD50 Tuy nhiên, trong trường hợp này có thể xác định liều tối đa không gây chết chuột, gọi là liều dưới liều chết (LD0) Khi đó, liều tương đối an toàn Ds dùng trong các thử nghiệm dược lý có giá trị bằng 1/5 hoặc 1/10 liều LD0
2.3.5 Khảo sát thành phần hóa lý trong nguyên liệu
Mục đích : Xây dựng cũng như chuẩn hoá chất lượng của nguyên liệu cho quá trình nghiên cứu
- Nguyên liệu lá Cóc đỏ được thu hái về phân loại, rửa sạch, bảo quản Tiến hành khảo sát các chỉ tiêu hóa lý theo phương pháp của bảng 2.1
Bảng 2 1: Phương pháp khảo sát thành phần và tính chất nguyên liệu
Chỉ tiêu Phương pháp Độ ẩm (%) Sấy đến khối lượng không đổi
Hàm lượng chất khô toàn phần (%) Sấy đến khối lượng không đổi
Hàm lượng tro (%) Nung ở 550-600 0 C đến khối lượng không đổi Hàm lượng đường khử (%) Phương pháp Bertrand
Hàm lượng đường tổng (%) Phương pháp Bertrand
Hàm lượng polyphenol (% w/w khô) Phương pháp Folin – ciocalteu Hàm lượng flavonoid (% w/w khô) Phương pháp tạo màu với AlCl 3 trong môi trường kiềm trắc quang
Sơ đồ 2 4 Quy trình xác định hàm lượng pholyphenol
2.3.5.1 Xác định hàm lượng polyphenol trong nguyên liệu
Tiến hành định lượng hàm lượng polyphenol trong cao lá cóc đỏ sử dụng phương pháp Folin – Ciocalteu của Aiyegoro và Okoh Cụ thể, cân 2 gam cao lá cóc đỏ và tiến hành phân tích hàm lượng polyphenol theo sơ đồ 2.5.
- Dựa vào đường chuẩn acid gallic để xác định hàm lượng polyphenol có trong mẫu cao chiết Hàm lượng polyphenol có trong mẫu được tính bằng đương lượng acid gallic (GAE) có trong cao đem định lượng, theo công thức sau:
+0,5ml thuốc thử Folin – Ciocalteu
Hỗn hợp 1 Đo quang phổ tại α= 760 nm
+ Sau 3 Phút 1ml Na2CO3
- X: số mg acid gallic xác định theo đồ thị chuẩn (mg/ml)
- V: thể tích dịch chiết từ m (g)
- v: thể tích dịch chiết đem pha loãng
- k: hệ số pha loãng dịch chiết
- m: khối lượng đem chiết (g) 1000: hệ số chuyển đổi thành gam
2.3.5.2 Xác định hàm lượng flavonoid trong nguyên liệu
Hàm lượng flavonoid dựa theo phương pháp tạo màu với AlCl3 trong môi trường kiềm-trắc quang được trình bày ở mục 2.2.2
Lấy 2 g mẫu cao lá cóc đỏ, pha loãng 10 lần Sau đó đó xác định hàm lượng flavonoid theo sơ đồ 2.7
Đường chuẩn quercetin được sử dụng để xác định hàm lượng flavonoid trong mẫu cao chiết Hàm lượng flavonoid được tính toán bằng cách quy ra đương lượng quercetin trong mẫu cao đem định lượng Công thức tính như sau:
1ml Mẫu Cao chiết 4ml Nước
Hổn hợp 2 Đo quang phổ tại α= 510nm
Sơ đồ 2 5: Xác định hàm lượng flavonoid trong cao chiết
- a: nồng độ Flavonoid toàn phần dựa vào phương trình đường chuẩn
- V: thể tích dịch lọc đem phân tích (ml)
- m: khối lượng mẫu ban đầu (g)
2.3.6 Nghiên cứu hoạt tính sinh học trong nguyên liệu ban đầu
Sau khi thu được cao tổng và cao nước, sẽ tiến hành nghiên cứu khả năng ức chế enzyme α-glucosidase, khả năng kháng oxy hóa và khả năng kháng khuẩn
