PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
2.3.3 Quy trình sãn xuất trà hòa tan
Lá cây Cóc đỏ sau khi được thu hái sẽ đem phơi khô. Lá cây Cóc đỏ phơi khô sẽ xay nhỏ giúp tăng diện tích tiếp xúc trong quá trình trích ly. Trong quá trình trích ly sẽ tiến hành khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình trích ly để chọn ra thông số tối ưu thu được hàm lượng chất khô cao nhất.
Kết thúc quá trích ly sẽ tiến hành lọc bằng máy lọc chân không để thu dịch chiết của lá cây Cóc đỏ, quá trích lọc chân không giúp tiết kiệm thời gian lọc và hạn chế sự bay hơi và bị oxy hóa các hợp chất sinh học có trong dịch chiết. Dịch chiết sẽ được đem cô quay bằng máy cô quay chân không ở nhiệt độ 40 0C áp suất thấp để làm bay hơi dung môi, hạn chế tối thiểu sự thất thoát hợp chất sinh học và thu được cao chiết.
2.3.3 Quy trình sãn xuất trà hòa tan Thuyết minh quy trình
Các nguyên liêu bao gồm lá cóc đỏ, đông trùng hạ thảo, atiso và cam thảo sẽ rữa sạch, phơi khô, xay nhỏ.Tiến hành khảo sát quá trình sao đối vớinguyên liệu lá cóc đỏ nhằm tìm ra thông số thời gian và nhiệt độ sao tối ưu để đảm bảo chất lượng. Mỗi loại nguyên liệu được tiến hành trích ly riêng biệt nhằm tìm ra thông số tối ưu của quá trình trích ly với hàm lượng chất khô cao. Hỗn hợp sau khi trích được lọc chân không để loại bỏ bã. Dịch trích ly của các nguyên liệu sau khi lọc chân không bao gồm lá cóc đỏ, đông trùng hạ thảo, atiso, cam thảo sẽ tiến hành phối trộn để tạo ra hương vị đặc trưng cho sản phẩm và có giá trị cảm quan cao nhất, dịch sau phối trộn sẽ được cô đặc để làm tăng nồng độ chất khô có trong dung dịch bằng phương pháp cô quay chân không. Sau đó tiến hành phối trộn maltodextrin để chuẩn bị cho quá trình sây thăng hoa và còn làm tăng giá trị cho sản phẩm. Sản phẩm sau khi sấy thăng hoa thì sẽ được bao gói để đảm bảo sản phẩm tránh tiếp xúc với không khí và ánh sáng ảnh hưởng đến chất lướng sản phẩm.
Sơ đồ 2. 3. Quy trình sản xuất trà hoà tan
Atiso Lá cóc đỏ Đông trùng
hạ thảo Cam thảo
Sao
Trích ly 2 Lọc 2
Phối chế Cô dặc Phối trộn Sấy thănh hoa
Bao gói Maltodextrin
Nước
Sản phẩm
Trích ly 1 Trích ly 3 Trích ly 4
Lọc 1 Lọc 3 Lọc 4
Bã
2.3.4. Khảo sát thành phần và tính chất nguyên liệu 2.3.4.1. Khảo sát độc tính cấp ở lá Cóc đỏ
Mục đích
Lá cóc đỏ là nguyên liệu mới chưa được nghiên cứu, việc sử dụng loại lá cây này như một thực phẩm chỉ dừng lại theo kinh nghiệm dân gian. Các nghiên cứu trước của nhóm tác giả cho thấy trong lá của cây cóc đỏ chứa nhiều các hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học như flavonoid, triterpenoid, steroid,v.v…Do đó, để làm cơ sở cho việc ứng dụng loại cây này trong thực phẩm, nhóm đã tiến hành khảo sát độc tính cấp của nguyên liệu trên đối tượng chuột
Nguyên tắc:
Cho chuột thử nghiệm dùng cùng liều thuốc trong điều kiện ổn định như nhau, quan sát các phản ứng xảy ra trong vòng 72 giờ.
Cách tiến hành:
Cho 6 chuột (50% đực, 50% cái) nhịn đói ít nhất 12 giờ trước khi cho uống cao thử ở nồng độ cao nhất có thể qua kim cho chuột uống với thể tích 20 ml/kg (theo
“Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu”
của Bộ Y tế ban hành theo quyết định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27 tháng 10 năm 2015).
Theo dõi và ghi nhận cử động tổng quát, biểu hiện về hành vi, trạng thái lông, ăn uống, tiêu tiểu và số lượng chết của chuột trong vòng 72 giờ. Nếu sau 72 giờ, chuột không có dấu hiệu bất thường hoặc chết, tiếp tục theo dõi trong vòng 14 ngày.
❖ Có 3 trường hợp có thể xảy ra:
- Trường hợp 1: Sau khi cho chuột uống cao thử, số chuột trong lô thử vẫn bảo toàn, xác định liều cao nhất có thể qua kim mà không làm chuột chết. Liều này được ký hiệu là Dmax và liều tương đối an toàn Ds dùng trong các thử nghiệm dược lý có thể bằng hoặc nhỏ hơn 1/5 Dmax.
- Trường hợp 2: Sau khi cho chuột uống cao thử, tỷ lệ tử vong là 100% thì thử với liều giảm ½ so với liều đầu. Tiếp tục giảm liều cho đến khi tìm được liều tối thiểu gây chết 100% chuột (LD100) và liều tối đa không gây chết chuột nào (LD0). Tiến hành thử nghiệm xác định LD50: chia chuột làm 4 lô, mỗi lô ít nhất 6 con. Chia 4 liều theo cấp số cộng khoảng từ LD0 – LD100. Ở những liều gần LD50, tăng số lượng chuột lên để sự
đo lường được chính xác hơn. Theo dõi chuột trong 72 giờ, ghi nhận các diễn biến của chuột, số lượng chuột chết/sống ở mỗi lô, lập phân suất tử vong để tìm LD50.
- Trường hợp 3: Sau khi cho chuột uống cao thử, phân xuất tử vong thấp hơn 100%, không xác định được liều gây chết tuyệt đối, không thể xác định được LD50. Tuy nhiên, trong trường hợp này có thể xác định liều tối đa không gây chết chuột, gọi là liều dưới liều chết (LD0). Khi đó, liều tương đối an toàn Ds dùng trong các thử nghiệm dược lý có giá trị bằng 1/5 hoặc 1/10 liều LD0.