PHẦN III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. KẾT QUẢ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN VÀ TÍNH CHẤT CƠ BẢN CỦA
3.1.4. Kết quả nghiên cứu hoạt tính sinh học trong nguyên liệu
3.1.4.1. Kết quả khảo sát khả năng kháng oxy hóa của dịch chiết lá Cóc đỏ
Với cao cồn của lá cóc đỏ, cao nước của các nguyên liệu lá cóc đỏ và chất chuẩn acid ascorbic tiến hành khảo sát khả năng kháng oxy hóa như thí nghiệm2.3.6.2 và được trình bày trong bảng 3.4:
Bảng 3. 4. Kết quả khảo sát khả năng kháng oxy hóa nguyên liệu
Mẫu thí nghiệm Nồng độ (µg/ml) IC50
(µg/ml)
100 125 150 175 200
Cao cồn 26,73 53,08 78,08 96,89 134,00 53,72a
Cao nước 35,59 41,15 46,35 52,43 61,32 120,70b
Acid ascorbic 28,50 35,93 39,79 42,82 48,61 186,60c
Qua bảng , cho thấy ở các dãy nồng độ khác nhau thì cho khả năng kháng oxy hóa khác nhau, nồng độ càng tăng thì khả năng kháng oxy hóa tăng. Khi nồng độ tăng từ 100 đến 200 (µg/ml) thì khả năng kháng oxy hóa của cao cồn tăng từ 26,73% đến 134,00%, của cao nước là 35,59% đến 61,32% và của acarbose là 28,50 đến 48.61% cho thấy cao chiết từ lá Cóc đỏ có hoạt tính kháng oxy hóa. Nồng độ càng cao thì khả năng kháng oxy hóa càng giảm và ngược lại nồng độ càng thấp thì hoạt tính kháng oxy hóa càng cao.
Khi nồng độ cao chiết thấp có thể các hợp chất có hoạt tính sinh học trong dung dịch ít nên dung dịch cao chiết có khả năng kháng bắt gốc tự do DPPH• thấp khi đó lượng các nhóm –OH không đủ để trung hòa các gốc tự do trong dung dịch phản ứng nên khả năng kháng oxy hóa thấp dẫn đến phần trăm kháng oxy hóa thấp, khi tăng nồng độ cao chiết từ 0.5 đến 1(µg/ml) thì khả năng kháng oxy hóa tăng lên đáng kể. Do khi nồng độ cao chiết tăng lên thì các lượng hợp chất có hoạt tính sinh học trong dung dịch sẽ tăng lên, khả năng ức chế gốc tự do của DPPH• cũng như các hợp chất có chứa nhiều
gốc – OH sẽ trung hòa các gốc tự do trong dung dịch phản ứng làm thay đổi màu dung dịch phản ứng từ màu tím của DPPH• sang màu vàng nhạt nhanh hơn so với hàm lượng hợp chất có nhóm –OH ít nên khả năng kháng oxy hóa sẽ tăng lên.
Khi so sánh giữa IC50 của cao chiết cồn, cao chiết nước và Acid ascorbic thấy rằng cao chiết cồn có IC50 à thấp nhất 53,72 cũng là cao có khả năng khán oxy hóa tốt nhât sau đó là cao chiết nước với IC50 120,70 và Acid ascorbic IC50 186,60 . Qua kết quả phân tích cho thấy acid ascorbic là 1 loại thuốc thương mại đã được tinh sạch có hoạt tính kháng oxy hóa cao, tuy nhiên khi so sánh kết quả cao chiết từ cồn và cao chiết nước của lá cóc đỏ thì khả năg ức chế oxy hóa của lá cóc đỏ tốt hơn so với acid ascorbic rất nhiều.
Vậy có thể kết luận là cao chiết cồn có khả năng kháng oxy hóa tốt hơn so với cao nước. nhưng bên cạnh đó khả năng khán oxy hóa của cao nước vẩn cao hơn acid ascorbic. Vì thế sẽ chọn cao chiết nước để đảm bảo các cấu tử hòa tan trong cao chiết nước sẽ cho giá trị cam quan sản phẩm tốt hơn nhưng khả năng kháng oxy hóa vẫn tốt hơn so với acid ascorbic.
3.1.4.2. Kết quả khảo sát khả năng ức chế enzyme α-glucosidase
Với cao cồn của lá cóc đỏ, cao nước của các nguyên liệu lá cóc đỏ và chất chuẩn acid ascorbic tiến hành khảo sát khả năng năng ức chế enzyme α-glucosidase như thí nghiệm 2.3.6.1 và được trình bày trong bảng 3.5:
Bảng 3. 5: Kết quả khảo sát ức chế enzyme α-glucosidase Mẫu thí
nghiệm
Nồng độ (µg/ml) IC50
(µg/ml)
5 25 50 75 100
Cao cồn 58,46 80,87 89,74 92,69 95,96 0,10a
Cao nước 60,10 82,76 94,58 98,07 108,37 3,30b Acarbose 4,65 10,47 39,54 60,42 79,07 127,60c
Khi tăng nồng độ cao chiết của các phân đoạn từ lá cây Cóc đỏ thì hàm lượng các hoạt chất có khả năng ức chế hoạt tính enzyme α-glucosidase trong cao chiết cũng tăng, khi đó hoạt tính enzyme α-glucosidase bị các hoạt chất trong cao chiết của các phân đoạn ức chế nên hoạt lực của enzyme α-glucosidase hoạt động trong dung dịch yếu đi, nên khi enzyme α-glucosidase tham gia phản ứng xúc tác với cơ chất para-nitrophenyl- α-D-glucopyranoside sẽ tạo hàm lượng p-nitrophenol thấp thể hiện ở giá trị mật độ quang thấp, thì phần trăm ức chế của enzyme α-glucosidase sẽ cao. Khi nồng độ các cao chiết còn thấp thì lượng các hoạt chất có khả năng ức chế hoạt tính enzyme α-glucosidase không đủ hoặc ức chế nhưng thấp, khi đó enzyme α-glucosidase tham gia phản ứng xúc tác với cơ chất sẽ tạo hàm lượng p-nitrophenol nhiều, dẫn đến giá trị mật độ quang cao thì phần trăm ức chế của enzyme thấp.
Acarbose là một loại thuốc sử dụng để ức chế hoạt tính của enzyme α – glucosidase hiện diện trong tế bào biểu mô của ruột non, đã được chứng minh làm giảm lượng đường huyết sau bữa ăn cải thiện sự trao đổi glucose mà không làm tăng bài tiết insulin huyết ở bệnh nhân, không gây đề kháng insulin và giảm các biến chứng do tiểu đường. Những loại thuốc này rất hữu ích khi sử dụng cho những người vừa mới được chuẩn đoán mắc bệnh tiểu đường loại 2 và những người có nồng độ glucose trong máu cao hơn mức được coi là nghiên trọng đối với bệnh tiểu đường. Sử dụng cùng với thuốc metformin hoặc sulfonylurea như một loại thuốc bổ trợ để điều trị bệnh đái tháo đường loại 2 ở người bệnh tăng glucose trong máu không kiểm soát được bằng acarbose dùng đơn độc và giữ cho lượng đường trong máu ở phạm vi an toàn. Do đó, việc làm chậm sự hấp thụ carbohydrate với một chất ức chế hoạt tính enzyme α–glucosidase có nguồn gốc từ thực vật là một phương pháp điều trị có tiềm năng cho việc quản lí hoạt động của bệnh tiểu đường loại 2 và bệnh nhân có lượng glucose tăng cao.
Khi so sánh giá trị IC50 về khả năng ức chế enzyme α-glucosidase của cao chiết lá cóc đỏ thì giá trị IC50của cao chiết còn là thấp nhất 0,10 so với cao chiết nước IC50
3,30, qua đó cho thấy khả năng ức chế enzyme α-glucosidasecủa cao chiết cồn cao hơn so với cao chiết nước Acarbose được biết đến như một chất ức chế α- glucosidase và đang được sử dụng phổ biến cho bệnh nhân đái tháo đường type 2. Với giá chị IC50 của Acarbose 127,60 cho thấy khả năng ức chế α- glucosidase của lá cóc đỏ tốt hốn với
Acarbose. Từ những kết quả trên cho thấy rằng tiềm năng rất lớn của lá cóc đỏ trong việc hổ trợ điều trị bệnh tiểu đường.
Do đó cao chiết cồn được đánh giá có khả năng ức chế enzyme α- glucosidase tốt hơn so với cao nước. Nhưng bên cạnh đó khả năng ức chế enzyme α- glucosidase của cao nước vẫn cao hơn Acarbose. Vì vậy cao chiết nước được chọn để đảm bảo các cấu tử hòa tan trong cao chiết nước sẽ cho giá trị cảm quan sản phẩm tốt hơn nhưng khả năng ức chế enzyme α- glucosidase vẫn tốt hơn so với Acarbose.
3.1.4.3. Kết quả khảo sát khả năng kháng khuẩn của dịch chiết từ lá Cóc đỏ Hoạt tính kháng khuẩn trong cao chiết lá Cóc đỏ là cơ sở để xác định khả năng kháng khuẩn của cao chiết với vi sinh vật kiểm định là Escherichia coli và Salmonella typhi trên môi trường MHA bằng phương pháp đục lỗ. Với cao cồn của lá cóc đỏ, cao nước của các nguyên liệu lá cóc đỏ và chất chuẩn Ampicillin tiến hành khảo sát khả năng khán khuẩn như thí nghiệm 2.3.6.3 và kết quả được trình bày trong bảng 3.6:
Bảng 3. 6. Khả năng kháng khuẩn của cao chiết lá Cóc đỏ Vi khuẩn Mẫu thí
nghiệm
Nồng độ (mg/mL)
50 100 150 200
E.Coli
Cao cồn 11,33c - 12,00b 14,66a
Cao nước - 13,70c 17,23b 18,16a
Ampicilin 7,00d 11,35c 17,00b 22,70a
Salmonella
Cao cồn - - 12,00b 14,66a
Cao nước - - 12,00b 13,33a
Ampicilin 8,00d 12,97c 19,50b 25,94a
Các giá trị có các chữ cái in thường đầu tiên khác nhau trong cũng một cột và chữ cái in thường thứ hai khác nhau trong cùng một hàng thì khác biệt có ý nghĩa ở mức thống kê 5%, (-): không kháng khuẩn
- Qua bảng ta thấy khả năng kháng khuẩn của cao lá Cóc đỏ được xác định dựa trên khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn thể hiện qua đường kính vòng kháng khuẩn được tạo ra trên đĩa petri. Đường kính vòng vô khuẩn càng lớn thì hoạt tính kháng
khuẩn của các cao chiết càng mạnh và ngược lại. Kết quả cho thấy đường kính vòng kháng khuẩn tỉ lệ thuận với nồng độ cao nước lá Cóc đỏ và cao cồn, nghĩa là
- Khả năng kháng khuẩn của cao nước lá Cóc đỏ tăng khi tăng nồng độ và ngược lại.
- Hoạt tính kháng khuẩn của cao nước lá Cóc đỏ nước với E.Coli rõ ràng và caohơn Salmonella. Các nghiệm thức cao chiết cho thấy hiệu lực kháng khuẩn tốt. Ở nghiệm thức 200mg/ml cho nghiệm thức cao nhất với đường kính vô khuẩn là 18,16 mm đối vơi Ecoli và đường kính vô khuẩn là 13,33 mm đối với Salmonella . Nồng độ càng cao tính kháng càng mạnh.
3.2. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT TRÀ HÒA TAN