Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CAO CHIẾT CÂY LAN MỘT LÁ (Nervilỉa aragoa[.]
Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG NGUYEN TAT THANH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CAO CHIẾT CÂY LAN MỘT LÁ (Nervilỉa aragoana) VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO DICHLOROMETHANE Sinh viên thực : Chuyên ngành : Nguyễn Thị Thu Huyền Công nghệ Sinh học TP.HCM, tháng năm 2018 Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG gsQbữ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CAO CHIẾT CÂY LAN MỘT LÁ (Nervilỉa aragoana) VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO DICHLOROMETHANE Sinh viên thực Nguyễn Thị Thu Huyền Mã số sinh viên 1411528791 Lớp 14DSH02 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Giáo viên hướng dần PGS.TS Mai Đình Trị TP.HCM, tháng năm 2018 LỜI CẢM ƠN Tơi xin chân thành bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Thầy hướng dần PGS.TS Mai Đình Trị - Trưởng phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học Viện cơng nghệ Hóa học thuộc Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam đà tận tình bảo, truyền đạt nhừng kĩ bản, kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành tốt Khóa luận tốt nghiệp Bên cạnh đó, tơi vơ biết ơn quý Thầy Cô trường Đại học Nguyễn Tất Thành, đặc biệt Thầy Cô Khoa Công nghệ sinh học Mơi trường tận tình dạy dồ truyền đạt cho kiến thức cần thiết suốt năm theo học trường Và không quên cảm ơn tất Thầy Cơ, Anh chị, bạn bè phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học hết lịng dạy bảo, quan tâm giúp đỡ tơi q trình học tập trình làm thực tập Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình đà ln bên cạnh ùng hộ, động viên yêu thương suốt thời gian qua Gia đình chồ dựa vừng giúp co gắng nồ lực để hồn thành tốt q trình học tập trường Nguyễn Thị Thu Huyền Khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại Học Nguyễn Tất Thành 11 MỤC LỤC TÓM TẮT ĐẶT VÁN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỒNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu họ Orchidaceae, chiNervilia .2 1.1.1 Giới thiệu họ Orchidaceae 1.1.2 Giới thiệu chi Nervilia 1.2 Giới thiệu Lan 1.2.1 Phân loại khoa học (Đồ Huy Bích 2004) 1.2.2 Phân bố sinh thái 1.2.3 Mô tả thực vật (Wei, Chen et al 2012) 1.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học chi Nervilia 1.4 Hoạt tính sinh học chi Nervilia 15 1.4.1 Các nghiên cứu tác dụng duọc lý 13 1.4.2 Tác dụng sinh học Lan 14 1.5 Bệnh ưng thư 15 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúư 18 2.1 Nơi thực 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 Hóa chất - Thiết bị .18 2.3.1 Hóa chất 18 2.3.2 Thiết bị 19 2.4 Phuong pháp nghiên cứu 20 2.4.1 Phương pháp phân lập họp chất 20 2.4.2 Phương pháp xác định cấutrúc hóa học họp chất 21 2.5 Khảo sát nguyên liệu 23 2.5.1 Thu hái xử lý mầu 23 2.5.2 Điều chế cao từ Lan Nervỉlỉa aragoana 23 2.6 Phân lập họp chất từ cao dichoromethane 23 iii CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Ket qúa trình điều chế loại cao từ Lan Nervilia aragoana 26 3.2 Ket SKC silica gel cao dichloromethane 27 3.3 Khảo sát cấu trúc hợp chat NA-6A 28 3.4 Khảo sát cấu trúc hợp chất NA-1 31 Ket luận đề nghị 36 Kết luận 36 Đe nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 37 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 37 iv DANH MỤC CÁC CHŨ VIẾT TẲT Atmospheric Presure Chemical Ionization Khối phố kỳ thuật ion -Mass Spectrometry hóa-áp suất khí brs broad singlet Mũi đơn rộng C Chloroform d doublet Mũi đôi dd doublet of doublet Mũi đôi-đôi DEPT Distortionless Enhancement by Phô cộng hưởng từ hạt Polaerrization Transfer chiều APCI-MS DMSO Dimethyl sulfoxide EA Ethyl Acetate ESI-MS Electrospray Ionization Khối kỳ thuật ion Mass Spectrometry hóa-phun điện tử H fl-Hexane HCC Hepatocellular Carcinoma Ung thư gan nguyên phát HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence Tương quan H-C qua nhiều nối HPLC Sắc ký lỏng áp suất cao High-Performance Liquid Chromatography HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation Tương quan H-C qua noi Hz Hertz J coupling constant Hằng số ghép m multiplet Mũi đa Me Methanol NMR Nuclear Magnetic Resonance Phô cộng hưởng từ hạt nhân ppm part per million phần triệu singlet mũi đơn Sắc Ký Bản Mỏng SKBM V SKC Sắc Ký Cột SKLM Sac Ký Lóp Mỏng SRB Sulforhodamine B Số Thứ Tự STT t mũi ba triplet VI DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình ảnh sơ lồi thuộc chi Nerlivia Hình 1.2: Hình ảnh thực Lan Hình 1.3: Hình ảnh mơ tả Lan Hình 2.1: Silica gel Hình 2.2: Bản mỏng Hình 2.3: Hình ảnh cột sau nhồi silica gel cao chất Hình 3.1: Bản mỏng phân đoạn M1 Hình 3.2: Bản mỏng phân đoạn M4 (46) Hình 3.3: Cấu trúc hóa học tương quan HMBC họp chat NA-6A Hình 3.4: Cấu trúc hóa học tương quan HMBC họp chất NA-1 Sơ đồ 3.1: Quy trình điều chế loại cao Sơ đồ 2.1: Quy trình lập chất Vil DANH MỤC BANG Bảng 3.1: Kết SKC silica gel cao dichloromethane Bảng 3.2: Dừ liệu phổ NMR họp chất NA-6A Bảng 3.3: Dừ liệu phổ NMR hợp chất NA-1 Bảng 3.4 Ket hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào vú MCF-7 ung thu gan Hep G2 viii TÓM TẤT Lan một loại thuốc quý sử dụng rộng rãi dân gian với nhiều tác dụng khác Đe tài “Khảo sát hoạt tính sinh học cao chiết Lan (Nervilia aragocưia) thành phần hóa học cao dichloromethane” thực Phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học - Viện cơng nghệ Hóa học thuộc Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam từ tháng 03/2018 đến tháng 07/2018 Từ 4,0 kg bột khô Lan lá., thu hái Đaklak, điều che 280 g cao EtOH 96 %, sau chiết phân bố với dung mơi /7-hexane, dichloromethane, ethyl acetate nước thu cao tương ứng /ĩ-hexane (110 g), CH2CI2 (25 g), EtOAc (90 g) nước (45 g) Từ cao dichloromethane phân lập xác định cấu trúc họp chất tinh khiết Trong họp chất phân lập họp chat NA-6A (rhamnocitrin) lần đầu công bố lồi Nervilia aragoana, chop chất NA-1 (genistein-7-ơ-glucoside) lần đầu tìm thấy trong chi Nervỉlỉa Thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào cao chiết phương pháp SRB nồng độ thử nghiệm 100 pg/mL cao dichloromethane, ethyl acetate EtOH dòng tế bào ung thư vú MCF-7 ung thư gan HepG2, kết cho thấy phần trăm ức chế tương ứng 11,24; 19,35 12,73 % dòng tế bào ung thư vú MCF-7, phần trăm ức chế với tế bào ung thư gan HepG2 2,99; 19,50; 2,52 % IX ... VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG gsQbữ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CAO CHIẾT CÂY LAN MỘT LÁ (Nervilỉa aragoana) VÀ THÀNH PHẦN... sinh học cao chiết Lan (Nervilia aragocưia) thành phần hóa học cao dichloromethane? ?? thực Phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học - Viện cơng nghệ Hóa học thuộc Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ... học hoạt tính sinh học Lan (Nervilia aragoana) Làm sáng tỏ thành phần hóa học cao dichloromethane Từ Lan lá, sử dụng phương pháp thường quy phịng thí nghiệm hóa học hợp chất tự nhiên chiết tách,