Khảo sát các hoạt tính sinh học của cao chiết cỏ mần trầu (Eleusine indica L.).pdf

NTTU-NCKH-04 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TƠNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2020 Tên đề tài: Khảo sát hoạt tính sinh học cao chiết cỏ mần trầu {Eleusine indica L.) số hợp đồng: 2020.01.012/HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyền Hồng Nhật Minh Đơn vị cơng tác: Viện Kỳ Thuật Công Nghệ Cao NTT Thời gian thực hiện: tháng, từ 03/2020 - 11/2020 TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 20 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÃI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2020 Tên đề tài: Khảo sát hoạt tính sinh học cao chiết cỏ mần trầu (Eleusine indica L.) sổ họp đồng: 2020.01.012/HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Hồng Nhật Minh Đơn vị cơng tác: Viện Kỳ Thuật Công Nghệ Cao NTT Thời gian thực hiện: 09 tháng, từ 03/2020 - 11/2020 Các thành viên phổi họp cộng tác: STT 01 02 03 04 05 Họ tên Chuyên ngành Cơ quan công tác CN Nguyễn Hoàng Nhật Minh TS Võ Thanh Sang sv Nguyễn Thị Huỳnh Như sv Dương Mộng Vy sv Nguyễn Ngọc Thao Trinh Công nghệ sinh học Viện KT-CNC NTT Sinh học Dược Viện KT-CNC NTT KT TP MT Khoa KT TP MT KT TP MT Khoa KT TP MT KT TP MT Khoa KT TP MT Ký tên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHŨ VIẾT TẤT DANH MỤC CÁC BẢNG BIẾU, so ĐỎ, HÌNH ẢNH TÓM TẮT KẾT QUẢ NGHIÊN cứu MỞ ĐẦU CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan tình hình nghiên cứu, luận giải mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.1 Viêm 1.2 Ung thư 1.2.1 Khái niệm ung thư .8 1.2.2 Nguyên nhân gây ung thư 1.2.3 Viêm gây ung thư 1.2.4 Apoptosis ung thư 1.3 Cỏ mần trầu 10 1.3.1 Tổng quan cở mần trầu 10 1.3.2 Nguồn gốc cỏ mần trầu 11 1.3.3 Hình thái cỏ mần trầu 12 1.3.4 ủng dụng cỏ mần trầu Việt Nam 14 1.3.5 Một so thuốc cỏ mần trầu 14 1.4 Các nghiên cứu nước cỏ mần trầu 15 1.4.1 Ngoài nước 15 1.4.2 Trong nước 16 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 17 Phương pháp nghiên cứu, kỹ thuật sử dụng: 17 2.1 Nội dung 1: Thu nhận liệu tổng quan cở mần trầu 17 2.2 Nội dung 2: Thu nhận cao phân đoạn cỏ mần trầu 17 2.2.1 Tách chiết cao ethanol mần trầu 17 2.2.2 Thu nhận cao phân đoạn mần trầu 17 2.3 Nội dung 3: Đánh giá hoạt tính ức chế tiêudiệt tế bào ung thư dày 17 2.3.1 Khảo sát độc tính tế bào (Cell cytotoxicity assay) 17 2.3.2 Khảo sát thay đổi hình thái mật độ tế bào ung thư kính hiển vi 18 2.3.3 Đánh giá mức biếu gene phân tử apoptosis bang RT-Realtime PCR 18 2.4 Nội dung 4: Đánh giá hoạt tính kháng viêm dòng tế bào RAW 264.7 19 2.4.1 Khảo sát thay đổi hình thái mật độ tế bào kỉnh hiến vi 19 2.4.2 Đánh giá mức biếu gene phân tử gây viêm RT-Realtime PCR 19 2.5 Kiểm định thống kê 20 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Thu nhận cao phân đoạn cỏ mần trầu 21 3.2 Đánh giá hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày 21 3.2.1 Khả gây độc tế bào ung thư ICso 21 3.2.2 Hình thái tế bào ung thư xử lý với cao phân đoạn 22 3.2.3 Đánh giá biếu gene gây apoptosis Realtime-PCR 23 3.3 Đánh giá hoạt tính kháng viêm .25 3.2.1 Khảo sát thay đoi hình thái mật độ tế bào kính hiển vi 25 3.2.2 Đánh giá biểu gene gây viêm Realtinie-PCR 27 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 4.1 Kết luận .29 4.2 Kiến nghị 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHŨ VIẾT TẮT ABTS 2,2 -azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) Bax Bcl2-associated X protein COX-2 Cyclooxygenase-2 DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium DPPH 2,2-Diphenyl-1 -picrylhydrazyl FBS Fetal bovine serum FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power Assay GAPDH Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase GPx-1 Glutathione peroxidase HO-1 Heme Oxygenase-1 IC50 Half-maximal inhibitory concentration IL Interleukin LPS Lipopolysaccharide NOS Nitric oxide synthase Nrf2 Nuclear factor erythroid 2-related factor NỌO-1 NAD(P)H Ọuinone Dehydrogenase PARP-1 Poly [ADP-ribose] polymerase qRT-PCR Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR SOD-2 Superoxide Dismutase TNF-a Tumor necrosis factor-a DANH MỤC CÁC BẢNG BIẾU, so ĐỒ, HÌNH ẢNH Bảng 3.1 Giá trị IC50 gây độc tế bào BGC-823 cao phân đoạn cỏ mần trầu 21 Hình 1.1 Mối liên quan ROS, stress oxy hóa, viêm, sinh lý te bào bệnh lý Hình 1.2 Bản đồ the phân phối cỏ mần trầu giới (CABI 2019) Chấm đỏ thể xâm lấn cùa cây, có Việt Nam 12 Hình 1.3 Hình thái cỏ mần trầu 13 Hình 1.4 Ảnh chụp cận cảnh cỏ mần trầu 13 Hình 3.1 Biểu đồ thể giá trị IC50 gây độc tế bào cùa cao phân đoạn mần trầu 21 Hình 3.2 Sự thay đổi hình thái tế bào ung thư xừ lý cao Dichloromethane 22 Hình 3.3 Mức độ biếu gene gây apoptosis (so sánh t-test) 23 Hình 3.4 Mức độ biểu cùa gene gây apoptosis (so sánh ổídák, two-way ANOVA) Error! Bookmark not defined Hình 3.5 Đỉnh nhiệt độ nóng chảy hình ảnh điện di gene gây apoptosis 24 Hình 3.6 Sự thay đổi hình thái cùa tế bào RAW 264.7 26 Hình 3.7 Mức biểu gene phân tử gây viêm 27 Hình 3.8 Đỉnh nhiệt độ nóng chảy hình ảnh điện di gene gây viêm 28 TÓM TẤT KỂT QUẢ NGHIÊN cứu STT 01 02 Kết đạt Công việc thực Nội dung 1: Thu nhận dừ liệu - Tài liệu tống quan hoạt tính sinh học tông quan vê cỏ mân trâu cỏ mần trầu Nội dung 2: Thu nhận cao - Quy trình thu nhận cao phân đoạn có phân đoạn cỏ mần trầu hoạt tính sinh học có độ ẩm đạt chuẩn dược điên 03 Nội dung 3: Đánh giá hoạt - Sự thay đơi vê hình thái tê bào ung thư tính ức chế tiêu diệt tế bào dày BCG-823 xử lý với mầu phân ung thu dày BGC-823 đoạn - Mức biêu phân tử tín hiệu nội bào liên quan đến chế cảm ứng apoptosis 04 Nội dung 4: Đánh giá hoạt - Sự thay đoi hình thái tế bào RAW tính kháng viêm dịng tế 264.7 hoạt hóa, xử lý với mầu bào RAW 264.7 cao phân đoạn - Mức biểu phân tử tín hiệu nội bào liên quan đến chế gây viêm 05 STT Nội dung 5: Báo cáo nghiệm - Cuốn báo cáo nghiệm thu đề tài hoàn thu đề tài chỉnh Sản phẩm đăng ký Cao phân đoạn cỏ mần trầu Sản phẩm đạt 10 g cao phân đoạn có hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày kháng 01 viêm 01 Bài báo khoa học chấp 02 nhận đăng tạp chí SCOPUS Đã gửi tạp chí Thời gian thực hiện: 09 tháng từ, 03/2020 - 11/2020 Thời gian nộp báo cáo: tháng 12/2020 MỞĐẢƯ Cỏ mần trầu (Eleusine indica) nghiên cứu nhiều nơi giới biết đến với nhiều thông tin trị bệnh thuốc dân gian, nhiên Việt Nam vần chưa có nghiên cứu dược lý cị mần trầu Do đề tài thực nhằm đánh giá hoạt tính sinh học từ cao phân đoạn cở mần trầu thu nhận Thủ Dầu Một, Bình Dương, Việt Nam Ket tách chiết thu cao Ethanol với hiệu suất 14,81% trọng lượng khô độ ẩm 7,25% Các cao phân đoạn có hiệu suất độ ấm là: cao Ethyl acetate (hiệu suất 4,47%, độ ẩm 3,04%), cao Butanol (hiệu suất 9,61%, độ ẩm 3,73%), cao Hexane (hiệu suất 7,73%, độ ấm 5,26%) cao Dichloromethane (hiệu suất 2,56%, độ ấm 1,74%) Giá trị IC50 gây độc tế bào ung thư dày BGC-823 cao phân đoạn Ethyl acetate, Dichloromethane, Hexan, Butanol 177,3 pg/mL; 165,6 pg/mL; 183 pg/mL 380,2 pg/mL, tương ứng Nghiên cứu mơ hình liều lượng thời gian cùa cao phân đoạn Dichloromethane mần trầu nồng độ 85, 100, 125 150 pg/mL 24 48h ảnh hương đến tế bào ung thư dày, gây biến dạng gây chết tế bào khối u nồng độ thời gian tăng Mầu thử giúp gia tăng biểu gene Caspase-3, Caspase-9, PARP-1 NQO-1 xử lý tế bào với 20 pg/mL cao phân đoạn Dichloromethane mần trầu 24h Biểu gene Caspase-3, Caspase-8, Caspcise-9, Bax, PARP-1, Nrf2, HO1 NQO-1 tăng cao có ý nghía xử lý tế bào với 30 pg/mL cao phân đoạn Dichloromethane Mơ hình nghiên cứu liều lượng thời gian xử lý tế bào với mẫu cao phân đoạn Dichloromethane (nong độ 30 45 pg/mL, thời gian xử lý 24 48h) làm giảm hoạt hóa tế bào, giảm biến dạng tế bào RAW 264.7 ghi nhận kính hiển vi Cao phân đoạn cịn làm giảm biếu phân tử gây viêm iNOS, TNF-a, IL-6 IL-1Ị3 nồng độ 30 pg/mL 45 pg/mL Các kết cho thấy cao phân đoạn Dichloromethane có khả kháng viêm tiêu diệt tế bào ung thư dày thông qua việc giảm yếu tố gây viêm thúc đẩy tế bào ung thư đến trình apoptosis CHƯƠNG TĨNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan tình hình nghiên cứu, luận giải mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.1 Viêm Viêm tình trạng bệnh lý đặc trưng yếu tố ngoại lai từ bên ngồi xâm nhập vào the, từ kích hoạt tế bào miễn dịch đặc hiệu đến vị trí viêm đe tiêu diệt phân tử lạ nhằm bảo vệ thể Trong trình di chuyển đến vị trí nhiễm thơng qua lịng mạch máu, tế bào miền dịch giải phóng ROS gây ton thương nội mơ vơ tình khuếch đại viêm nhiễm cách kích hoạt đường gây viêm [16], Chang hạn, protein kinase c (PKC), c-Jun-N-terminal kinase (JNK) protein kinase hoạt hóa p38 (MAPK), từ kích hoạt sản xuất cytokine TNF-a chemokine IL-ip, IL-6 gây viêm [15, 52] Trong tế bào động vật có vú, NO tống họp ba đồng phân khác nitric oxide synthase (NOS), gồm eNOS, nNOS ÌNOS Trong đó, ĨNOS cao đại thực bào bị kích hoạt LPS góp phần vào trình gây viêm [42] Cyclooxygenase (COX), gồm hai dạng COX-1 COX-2, loại enzyme xúc tác cho chuyển đổi arachidonic acid thành prostaglandin E2 (PGE2) [43] COX-2 kích hoạt chịu số tác nhân kích thích sản xuất lượng lượng lớn phân tử tiền viêm vị trí viêm [13] Cùng với nhau, q trình stress oxy hóa viêm có mối liên hệ chặt chè thơng qua đường tín hiệu chun biệt từ trở thành tảng cho so bệnh lý số loại bệnh (Hình 1.1.) Hình 1.1 Mối liên quan ROS, stress oxy hóa, viêm, sinh lý tế bào bệnh lý [13] 1.2 ưng thư 1.2.1 Khải niệm ung thư Ung thư thuật ngữ chung cho nhóm lớn bệnh đặc trưng cho tăng sinh bất thường loại tế bào khác nhau, xuất phát gần nơi thể người Có đặc tính phát triển ung thư, bao gồm: (1) loại bị tín hiệu ức chế tăng trưởng, (2) tự cung cấp tín hiệu tăng trưởng, (3) khả trốn tránh apoptosis, (4) tiềm tăng sinh vơ hạn, (5) trì phát sinh mạch máu, (6) xâm lấn mô di [28] Các đặc tính phân thành ba giai đoạn: khởi đầu, thúc đẩy phát triển khối u Giai đoạn khởi đầu, thay đổi gene gây ảnh hưởng đến nhiễm sac the mồi tế bào ung thư, liên quan đến trình đột biến chọn lọc tế bào Chăng hạn đột biến diem, xóa, chèn, khuếch đại đoạn gene tạo lợi chọn lọc vơ tính cho tế bào khối u giúp sinh trưởng nhanh Giai đoạn thúc đẩy, khối u tăng trưởng dựa vào tồn mở rộng tế bào hư hỏng Cuối cùng, khối u phát trien đáng kể kích thước lẫn số lượng, tạo thành quần thể tế bào khối u, có khả xâm lấn di [19, 41], ... Tài liệu tống quan hoạt tính sinh học tơng quan vê cỏ mân trâu cỏ mần trầu Nội dung 2: Thu nhận cao - Quy trình thu nhận cao phân đoạn có phân đoạn cỏ mần trầu hoạt tính sinh học có độ ẩm đạt chuẩn... quan trọng có nghiên cứu dược lý cỏ mần trầu nước ta Do việc thực đê tài ? ?Khảo sát hoạt tính sinh học cao chiết cỏ mần trầu (Eleusìne indica L.)” để làm rõ mặt dược tính làm sở ứng dụng cho sản xuất... chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÃI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ - GIẢNG VIÊN 2020 Tên đề tài: Khảo sát hoạt tính sinh học cao chiết cỏ mần trầu (Eleusine indica L.) sổ họp