Các Nhân Tố Ảnh Hưởng Đến Quyết Định Sử Dụng Mobile Banking.docx

Giớithiệuvềchi Syzygium

ThựcvậthọcchiSyzygium

ChiSyzygium(Trâm) thuộc họMyrtaceae(Sim, ĐàoKim nươnghay HươngĐ à o ) , b ộ M y r t a l e s (ĐàoK imn ư ơ n g),lớpMagnoliopsida( H a i lám ầm), n g à n h Magnoliophyta(Mộclan).

PhầnlớncácloàiSyzygiumlàcâythângỗvàcâybụithườngxanh.Mộtvàiloàiđ ượctrồnglàmcâycảnhvìchúngcótánláđẹpvàmộtsốloàiđượctrồngđểlấyquảănởdạ ngquảtươihaylàmmứthoặcthạch,trongđóloàiquantrọngnhấtlàđinhhương(Syzygiu maromaticum)vớicácchồihoachưanởlàmộtloạiđồgiavịquantrọng.

Trênthếgiới,theothốngkêcủatrangWorldFloraOnline,chiSyzygiumcótới1217l oài.ỞViệtNam,theoNguyễnTiếnBânvàcộngsự[1],chiSyzygiumcó70loài,trongđóbal oàiTrâmkhếS y z y g i u m c e r a s i f o r m e ( B l u m e )Merr.&L.M.Perry.

(synonym:Syzygiumlineatum(DC.)Merr.&L.M.Perry);TrâmbullockSyzygiumb u l l o c k i i (Hance)Merr.& L M Pe rr yv à RùrìlálớnSyzygium attopeuense(Gagnep.)Merr.&L.M.PerryphânbốnhiềuởcáctỉnhmiềnBắcvàmiềnTrungnướctanhấtlàởVĩ nhPhúc,QuảngBình,QuảngTrị,ThừaThiênHuế.

Tìnhhìnhnghiên cứuvềthànhphầnhóahọcchiSyzygium

Hiệnnay,đãcórấtnhiềucôngtrìnhnghiêncứucủacácnhàkhoahọctrênthếgiớivềt hànhphầnhoáhọcvàhoạttínhsinhhọccủacácloàithuộcchiSyzygiumnhấtlàcácloàiS.aq ueum,S.aromaticum,S.cumini,S.guineensevà

S.samarangense.KếtquảchothấycácloàithuộcchiSyzygiumrấtgiàucácchấtchuyểnhóa thứcấpbaogồmflavonoid,terpenoid,lignan,alkylphloroglucinol,tanin,vàdẫnchấtchr omne[2].Chínhnhữngthànhphầnnàyđãtạonêncáchoạttínhsinhhọcnhưhoạttínhkháng viêm,khángnấm,khángvikhuẩn,chốngoxihóa,chốngbệnhtiểuđường,gâyđộctếbào[3], khángHIV,chốngtiêuchảy,chốnggiunsánvàkhángvirus[4].VớisốlượngloàiSyzygium khálớn(trên1000loài)thìđâychínhlàmộtkhotàngthiênnhiênphongphúđượcnhiềunhàk hoahọctrênthếgiớiquantâm.

Flavonoidlàmộttrongnhữngnhómchấtphânbốrộngnhấttrongtựnhiên,c ó mặt khôngnhữngởthựcvậtbậccaomàcònởmộtsốthựcvậtbậcthấpvàcáclo ài tảo.Nhómh ợpchấtnàyvàdẫnchấtglycosidecủachúngcũngđượcphânlậpnhiềunhấttrongcácl oàithuộcchiSyzygium.TrongđócáchợpchấtphânlậpchủyếutừcácloàiS.samarangens e,S.guineense,S.aqueum,S.aromaticumvàS.cumini.

4′,6′-dimethoxy-3′-methyldihydrochalcone(5),2′,4′-dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′- dimethyldihydrochalcone(6),stercurensin(7),2′-hydroxy-4′,6′-dimethoxy-3′- methylchalcone(8),[6 , 7], 2′, 4′-dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′dimethylchalcone

(9)[8],2′,4′-dihydroxy-3′,5′-dimethyl-6′-methoxychalcone(10),2′,4′-dihydroxy-6′- methoxychalconeorcardamonin(11)[9],pinocembrin(12),(-)-strobopinin(13),8- methylpinocembrin(14),d e m e t h o x y m a t t e u t c i n o (15),7-hydroxy-5- methoxy-6,8- dimethylflavanone(16)[10],7,8,3′,4′-tetrahydroxy-3,5-dimethoxyflavone(17)[11], 7-hydroxy-3,5-methoxy-6,8-dimethylflavone(18),q u e r c e t i n (19)[10,1 2 ] , kaempferol(20)[13],gallocatechin(21),myricetin(22)[9],(-)-epigallocatechin(23), (-)-epigallocatechin3-O-gallate(24),samarangeninA (25),samarangeninB(26), prodelphinidinB-23″-O-gallate(27),prodelphinidinB-23,3″-di-O-gallate(28)[14].

[ 5 ] , m e a r n s i t r i n (31)[15], quercitrin(32),hyperin(33),reynoutrin(34),guaijaverin(35)[10],tamarixetin3-

[ 1 2 ] , kaempferol3-O-β-D-glucuronopyranoside(38),myricetin3-O-β-D- g l u c u r o n o p y r a n o s i d e (39),m e a r n s e t i n 3-O-(4″-O-acetyl)-α-L- rhamnopyranoside(40),m y r i c e t i n 3-O-(4″-O-acetyl)-α-L- rhamnopyranoside(41),4′-methoxymyricetin3-O-α-L- rhamnopyranoside(42),myricetrin4 ″-O-acetyl-2″-O-g a l l a t e (43)

[1 3] my ri ce ti n- 3-O-glucoside(44),my ri ce ti n- 3-O-β-D-(6″-galloyl) galactoside(45)[9].

*CáchợpchấtChromoneglycoside(Hình1.3) hấtchromoneglycosidebiflorin(46),isobiflorin(47),6-C-β-D-(6′-O- galloyl)glucosylnoreugenin(48),và8-C-β-D-(6′-O-galloyl)glucosylnoreugenin(49).

Nhómchấtnàycũngchiếmsốlượngkhálớnchỉsauflavonoidtrongcáchợpchấtphânl ậpđượctừchiSyzygiumnóichungvàmộtsốloàiphổbiếnđãđượcnêut r ên T ừloàiS s a m a r a n g e s e p h â nl ậpđ ư ợ cc á c hợpc h ấts y a m a r i n A - E (53-54)

[17],lupenylstearate(55),lupeol(56)[18],botulin(57), betulinicacid (58)[6, 19].TừloàiS a r o m a t i c u m p h â nl ậpđ ư ợ co l e a n o l i c a c i d (59),a r j u n o l i c a c i d (60),c o r o s o l i c a c i d (61),a s i a t i c a c i d (62),m a s l i n i c a c i d (63)

[ 2 0 ] ; l i m o n i n (69)[ 1 2 ] ; caryolane-1,9β-diol(70),clovane-2,9β-diol( 7 1 ) , α -humulene( 7 2 ) , h u m u l e n e epoxideII(73),β-caryophyllene(74),β-caryophylleneoxide(75)

[16].TừloàiS.gu ineense thuđượccáchợpchất2-hydroxyloleanolicacid(65),2- hydroxylursolicacid(66),terminolicacid(67),6- hydroxyasiaticacid(68),arjunolicacid 28-O-β- gl ucop yran osylester(76),asiaticacid28-O-β-glucopyranosylester(77)

[21]vàtừloàiS.cuminithuđượchợpchấtolean-12-en-3-ol-3β-acetate64[22].

MộtsốhợpchấtsteroidphânlậptừloàiS.samarangense[18]baogồmcycloartenyl st e a r a te (78),β-sitosterylstearate(79),2 4- methylenecycloartenylstearate(80),s i t o s t e r o l (81)stigmasterol (82)và từloàiS. aromaticumphânlậpđượcβ-sitosterol-3-O-β-D-glucoside(83)[16].

3-O-methylellgicacid3′-O-α-L-rhamnopyranoside(88)[23],gallotannins1,2,3,6- tetra-O-galloyl-β-D-glucoside(89),1 , 2 , 3 , 4 , 6 - p e n t a-O-galloyl-β-D- glucoside(90), casuarictin(91),casuarinin(92)[9].

TừloàiS.aromaticumđãphânlậpđượcf e r u l i c a l d e h y d e (95),e u g e n o l (96),eugenylacetatee(97),trans-coniferylaldehyde(98),3-(4-hydroxy-3-methoxy- phenyl)p r o p a n e - 1 , 2 - d i o l (99),1-O- methylguaiacylglycerol(100),e p o x i c o n i f e r y l a l c o h o l (101)

[16].TừloàiS.cumini[24]đãphânlậpđược7-hydroxycalamenene(102),m e t h y l - β-orsellinate(103).TừloàiS.aqueumđãphânlậpđược4-hydroxybenzaldehyde(93)

Năm2018,Yanga[25]đãphânlậpđược9 hợpchấtlàdẫnxuấtcủaacylphlorogluci ol:SamaroneA-D(104-

106,108)vàjamboneB(107),jamboneE( 1 0 9),jamboneF(110),jamboneB(111)và2- pentadecyl-5,7-didydroxychromone

Tìnhhìnhnghiên cứuvềhoạttínhsinhhọcchiSyzygium

CácnghiêncứuchothấymộtsốloàithuộcchiSyzygiumđãthểhiệnhoạttínhchốngo xyhóa,khángkhuẩn,gâyđộctếbàoungthư,chốngđáitháođường,vàhoạttínhkhángviêm đángchúý.

DịchchiếtmethanoltừlácủaloàiS.aqueumthểhiệnhoạttínhchốngoxyhoát hôngquakhảnăngthudọngốctựdoABTS[26].Dịchchiếtnướctừquảcủaloàinàytrong mụitrườngacidpH4,2cúhoạttớnhchốngoxyhúamạnhvớigiỏtrịI C 50n h ỏhơn50àg/ mL[27].

DịchchiếtmethanolcủaloàiS.samarangensethểhiệnhoạttínhchốngoxyh ó a ởmức trung bìnhvới cả2 thửnghiệmDPPH và FRAP[10].Trong khiđó, dịchchiếtmethanolcủarễcâynàycókhảnăngchốngoxihóatốthơn[28].

DịchchiếtmethanolvànướccủaláloàiS.aromaticumcũngthểhiệnhoạttính chốngo xy hóatrênmôhìnhthửnghiệmkhảnăngthudọngốctựdoDPPH [29].Dịch chiếtethanoltừnụhoacủaloàinàycókhảnăngứcchếquátrìnhoxyhóatốtnhấtvới giỏtrịEC50(àg/mL)tươngtựnhưchấtchuẩn,acidascorbic[30].

0=9,85àg/ mL[31].Dịchchiếtmethanoltừlácũngcóhoạttínhchốngo xyhóakhátốtkhisosánh vớiBTHvàacidascorbiclàcácchấtđốichứng.Dịchchiếtmethanoltừhạtthểhiệnhoạttí nhchốngoxyhóakhátốt,theođóhàmlượngc á c hợpchấttanninlàyếutốquyếtđịnhđếnh oạttínhchốngoxyhóacủadịchchiếtmethanolnày[32].

Dịchc h i ếtm e t h a n o l từlác ủaloàiS g u i n e e n s e k h ô n gt h ểhiệnh o ạtt í n h chốngoxyhóa[33]thôngquahoạtđộngthudọngốctựdoDPPH,tuynhiêntinhdầulác ủaloàinàylạicóhoạttínhchốngoxyhóacao[34].

Cách ợpc h ất2 ′ , 4 ′ -dihydroxy-3′,5′-dimethyl-6′- methoxychalcone[10],7 , 8 , 3 ′ , 4 ′ -tetrahydroxy-3,5- dimethoxyflavon[11],gallocatechin,myricetin,europetin-3- rhamnoside,1 , 2 , 3 , 4 , 6 - p e n t a-O-galloyl-β-D- glucose,casuarictin,c a s u a r i n i n[9],2′,4′-dihydroxy-6′- methoxychalcone,pinocembrin[10,35]cóhoạttínhchốngoxyhóa thôngquathửnghiệmthudọngốctựdo DPPH.

DịchchiếtmethanoltừlácủaS.aqueumthểhiệnđộctínhthấptrêndòngtếbàoung thưvỳngười(MDA-MB-231)vớigiỏtrịIC50>100àg/mL[36].

Dịchc h i ếtmethanoltừthânc ủal o à iS s a m a r a n g e n s e g â yđ ộ ct í n h m ạnhtr êndòngtếbàoungthưruộtkếtcủangườiSW-

480đượcđánhgiábằngphươngphápsomàuMTT[10].Hợpchấtflavopiridolphânlậ ptừloàiS.cuminiđượcthửnghiệmđộctínhtrêncácdòngtếbàoungthưMCF7,A27 80,PC-

3vàH460chothấyk h ản ăngg âyđ ộ cmạnhn h ấttrêndòngt ếb à o A 2 7 8 0 v ớig i á t r ịI

Dịchc h i ếte t h e r d ầuhoả,e t h y l a c e t a t e v à m e t h a n o l t ừq u ảc ủal o à iS.samarangenseđềuc ó k h ản ăngc h ố ngl ạiv i k h u ẩnG r a m ( + ) v à G r a m ( - )

T u y nhiên,dịchchiếtmethanolcóhoạttínhchốngvikhuẩncaohơncácdịchchiếtcònlại [38].Dịchchiếtmethanoltừlácủaloàinàycókhảnăngứcchếmạnhhơnđốivớisựphátt riểncủavikhuẩnB.cereusvàS.entericahơncảkhángsinhchloramphenicol[ 3 9 ] v à dị chc h i ếte h a n o l từlác ủal o à i n à y thểhiệnk h ản ăngkhángkhuẩncaohơndịchchiếtm ethanol[40].DịchchiếtethylacetatetừrễcủaloàiS.samarangensethểhiệnkhảnăn gứcchếmạnhtrêncácvikhuẩnP.aeruginosacòndịchchiếtnướcvàmethanoltừrễloài nàylạiứcchếhiệuquảtrênv i khuẩnS.typhi[28].

Tinhd ầuS a r o m a t i c u m c ót á c d ụngứ cc h ếc a o v i k h u ẩnv à n ấmn h ưS a ureus,E.coli,P.aeruginosa,C.albicans,AspergillusflavusvàPenicilliumkhisosánhđ ốichứngdươnglàkhángsinhciprofloxacinvàketoconazole[29].Ngoàira,dịchc h i ế te t h a n o l v à m e t h a n o l c ủal o à iS a r o m a t i c u m thểhiệnh o ạtt í n h k h á n g khuẩn caochốnglạivikhuẩnS.aureusvàP.aeruginosa[41].

DịchchiếtnướctừrễloàiS.samarangensethểhiệnhoạttínhchốngđáitháođ ư ờ ngt hôngquahoạtđộngứcchếalpha- amylasetốthơnsovớidịchchiếtmethanolvàethylacetatee[28].

DịchchiếtmethanoltừlácủaS.guineensethểhiệnkhảnăngứcchếhiệuquảenzymα- amylase(IC50=6,15μg/mlg/mL)đốivớihoạtđộngchốngđáitháođường[33].

Cáchợpc h ấtp h â n l ậpt ừl á c ủal o à iS.aqueum[5]baogồmp h l o r e t i n , m y ri g a l o n e-G,myrigalone B,europetin-3- rhamnosideđềucókhảnăngchốngđái tháođườnghiệuquả.

DịchchiếtmethanoltừlácủaS.aqueumthểhiệnhoạttínhkhángviêmtốtthôn gquakhảnăngứcchếenzymelipozygenase(LOX)vàkhảnăng ứcchếCOX-1v à C O X -

2 Dịchc h i ếtn à y thểhiệnk h ản ă n g ứ cc h ếCOX-

1mạnhhơncelecoxib[43].Dịchchiếte t h y l acetatee,methanolvànướctừrễcủaloàiS.s amarangense,thểhiệnhoạttínhkhángviêmtốtt h ô n g quathửnghiệmbiếntínhalbum in.Dịchchiếtmethanolcó tỷlệphầntrămbiếntínhalbumincaonhấtsauđóđếndịchchiế tnướcvàethylacetatee[28].

Tình hìnhnghiên cứuvềchiSyzygiumởViệtNam

ỞViệtN a m c h iS y z y g i u m c óc á c l o à i s a u đ ư ợ cs ửd ụngt r o n g y h ọcc ổtruyền:S.aromaticum(L).Merr.etPerry(đinhhương),S.cuminii(L.)Skeels(trâmmốc)

;S.jambolanum( L a m k )DC,S.jambos (L.)Alston,S.polyanthum(Wight)W a l p

H a n c e )M err &L.M.Perry(TrâmBullock),S.cerasiforme(Blume)Merr.&L. M.Perry(Myrtaceae) (trâmkhế),S.myrsinifolium(Hance)Merr.&L.M.Perry

(Myrtaceae)( tr âm mùi),S.samarangense(Blume)Merr.&L.M.Perry(câyroi)[44].

LoàiS.cumini(trâmmốchaytrâmvối)đượcsửdụngrộngrãitrongyhọcd â n g ianđểchữabệnh tiểuđường.Loạithảodượcnày cũng có khảnăngđiềutrịrốiloạntiêu hóa baogồmđầy hơi,cothắt ruột, cácvấn đềvềdạdày,tiêu chảy nặngvàkiếtlỵ.Ngoàira,trâmmốccũnghỗtrợgiảmnhẹcácvấnđềvềphổinhưviêmphếquả nvàhen.Mộtsốngườisửdụngcâytrâmnhưthuốckíchthíchvàthuốcbổ.Khikếthợpvớicác loạithảomộckhác,hạttrâmsẽcókhảnăngđiềutrịtáobón,cácbệnhvềtuyếntụy,cácv ấnđềvềdạdày,rốiloạnthầnkinh,trầmcảmvàkiệtsức.Trâmmốcđôikhiđượcdùngtrựct iếpquađườngmiệngvà cổhọngđểgiảmđaudoviêmsưng.Trâmvốicũngđượcápdụngtrựctiếpchodađểchữaloé tda,viêmda.Chiếtxuấthạttrâmvốivàvỏcóthểlàmgiảmlượngđườngtrongmáu[44].

LoàiS.aromaticum(đinhhương)cóvịcayngọt,mùithơm,làmấmbụng,sát trùng Nước sắc nụ đinhhươngcó tác dụngdiệtmộtsốloạivi khuẩn đườngruộtthuộcchiShigella.Tinhdầucủanócũngcótácdụngdiệtkhuẩnmạnhđốivớinhiều loạivi khuẩn Từlâu,người ta đã biếtdùngđinh hươngđể làm thơmhơithở.TrongyhọcĐôngphương,đinhhươngđãđượcsửdụngtừlâuởTrungQuốclàmch ấtkíchthíchthơm.Công dụngphổbiếncủanólàdùngchếbộtcary.Nóthuộcloạigia chữađaubụng,nấcc ụt,kíchthíchtiêuhoá(sắcuốnghoặcmàivớicácvịthuốckhác).Dù ngngoàiđểxoabópvànắnbógẫyxương.Cũngdùngchữaphongthấp,đauxương,nhức mỏi,lạnhtaychân.Chữaphongthấp,đauxương,nhứcmỏi,lạnhtaychânvớiđơnthuốcgồm: đinhhương20g,longnão12g,cồn90độ250ml,ngâm7ngàyđêm,lọcbỏbã,khi dùnglấybông chấmthuốc,nắnbópnơiđaunhức,mỗingày1-2lần[45].

LoàiS.polyanthum(sắnthuyềnhaysắnvỏ)đượcngườidânsửdụnglánonđểăngỏ ivàlácóthểgiãnátđắpchữavếtthươngchảymủdaidẳng,vếtmổnhiễmkhuẩn,vếtbỏng,gãy xươnghở.BệnhviệnHữuNghịViệtTiệp-

HảiPhòngđãdùngl á sắnthuyềnchữacókếtquảnhữngvếtthươngnhiễmkhuẩn,làmcho vếtthươngchóngkhôvàlêndanon,đặcbiệtlàkhôngbịsẹolồi.Trạmnghiêncứudượcl iệuT h á i Bìnhđã bàochếthuốc mỡsắnthuyền đểbôi ngoàichàmcókếtquảtốt.Thuốcgồmsắnthuyền10g,nghẻrăm6g,trầukhông2g,phènphi2g ,vazelinđánhnhuyễnt h à n h thuốcmỡ.Đểchữakiếtlỵmãntính,lấyvỏsắnthuyềnkhô12 g,thânrễcâys e o gà 3 0 g , cám gạon ếpra ng c h o t h ậtvàngt hơ m 3 0 g ,sắcvới400ml nướ cc ò n 100ml,uốnglàm2lần trongngày.Vỏsắnthuyềnsấykhô,tánbộtchouốngmỗilần2 g vớinướccơmlạichữatiêuchảy ởtrẻem[44].

LoàiS.jambos(câyroi)cóvịngọt,chát,tínhbình.Vỏrễcótácdụnglươnghuyết,ti êuthũng,sáttrùng.Cáchợpchấtchiếttừlácâycótácdụngvớinhiềuloạiv i k h u ẩng â y b ệ nh,đ ặ cb i ệtl à c á c l o ạil i ê n c ầuk h u ẩn,v i k h u ẩnb ạchh ầuvàvikhuẩnphếcầu.Nhưvậy lároicótácdụngchốnglạivikhuẩnsinhmủvàvikhuẩng ây rabệnhvềđườnghôhấp[45].

LoàiS.bullockii(trâmbullock):Rễcủaloàinàyđượcngườidânsửdụngđểch ữah olao,thổhuyết,đaurăng,viêmgan,ỉachảy,phongthấp[45].Chođếnnay,chỉcótácgiảT HKhánhvàcộngsựnghiêncứuvềthànhphầntinhdầutừlácủaloàitrâmbullock(S.b ullockii)vàlátrâmquảtrắng(S.tsoogii)bằngGC-

MS[46].T r o n g tinhdầulátrâmbullockcósesquiterpenehydrocarbon(60,67%),ses quiterpenescóchứao x y ( 9 , 4 0 % ) , m o n o t e r p e n e cóc h ứa oxy( 6 , 2 7 % ) , monoterpeneh y d r o c a r b o n ( 0 , 4 1 % ) v à c á c t h à n h phầnc h ư a x á c đ ị nht ê n c h i ếm( 1 5 ,7 2 % ) T r o n g đ óp h ầnc h í n h củat i n h d ầulàE- caryophyllene( 4 9 , 6 5 % ) , spathulenol(4,29%),caryophylleneoxide(4,14%),bicyclo germacrene(3,35%),2- tridecanone(3,25%),α-humulene(2,78%),9-epi-(E)- caryophyllene(1,03%)vàaromadendrene(1,01%).Láloàitrâmquảtrắng(S.tsoo ngii)đãxácđịnhđược46hợpc h ấtc h i ếm9 9 , 7 1 % t ổngl ư ợ ngt i n h d ầu.T h à n h p h ầ nchínhlàsesquiterpeneh y d r o c a r b o n (71,51%),monoterpenehydrocarbon(18,25%),ses quiterpenescóchứao x y (9,58%),monoterpenecóchứaoxy(0,37%).Cáchợpchấtc hínhbaogồmE-c a r y o p h y l l e n e (23,40%),bicyclogermacrene(21,23%),(Z)-β- ocimene(10,61%),α- humulene(6,33%),(E)-β-ocimene(4,99%),δ-cadinene(2,77%),(E,E)-α-farnesene (3,59%),germacreneD(2,52%),α-amorphene(2,34%),α-cadinol(2,31%)vàcis-β- elemene(2,15%).

Nhưvậy,chiSyzygiumlàmộtchiđadạngvềloàivàcónhiềuhoạttínhsinhhọcthú vị.Tuynhiên,ởViệtNamviệcnghiêncứuthànhphầnhóahọccũngnhưhoạttínhsinh họcvềcácloàithuộcchinàycònrấthạnchế.

Giớithiệuvềloài S.cerasiforme , S.bullockii và S.attopeuense

LoàiS.cerasiforme

LoàiS.cerasiforme(trâmkhế)cóchiềucaocâylêntới20m.Cànhmảnh,nhọn,v ỏnhẵnhoặcbongvảy,màuxámtrắnghoặcnâusẫm.Lácócuốngdài4–

4,7cm,hìnhelip,hìnhthuôndàihoặchìnhtrứng;gâng i ữanổirõởmặttrên,gânphụcótừ16 –20đôi.Cụmhoa2–

10cm,cảtậncùngvàở náchtrên,vớimộtsốnhánhtừgốc,đôikhiđơnlẻ;cuốngdàiđến20 mm;lábắc1,2x0,7mm,hìnhtamgiác.Hoamàutrắng,trắnglụchoặcvàngnhạt,haihoabê nngoàicủamộtbộba,cuống1mm,đàihoa5,4–

2,1mm,hìnhthuôn,đôikhicóhìnhlôngchim,bềnchắc.Cánhh o a dài4,4-

5,7mm,hìnhtrứnghoặchìnhtrứngthuôndài,cóhơn100chấmtuyếnt r ên mỗicánhho

15mm;baophấn0,7mm,hìnhtrứngthuôndài.Quảhìnhtrứngthuôn,dài1-1,3cm,đườngkính1cm[45,48].

Phânbốvàsinhthái:Câymọcởrừngnguyên sinhhoặcthứsinh,venđường,thảonguyên,bờsông,đồinúiđávôi,ởđộcaolênđến850m PhânbốrộngởcácnướcTrungQuốc,TháiLan,Campuchia,Lào,ViệtNam,Malysia,Ph ilipin.ỞViệtN a m , l o à iS c e r a s i f o r m e p h â nb ốc ủay ếuở c á c tỉnhT h a n h H ó a , Q u ảngB ì n h , QuảngTrị,ThừaThiênHuế,VĩnhPhúc.Câymọctựnhiêntrênđụnc átvenbiển,chịuđượckhôhạn.Rễcủaloàinàyđượcngườ idânsửdụngđểchữahola o,thổhuyết,đaurăng,viêmgan,ỉachảy,phongthấp[45,48].

LoàiS.bullockii

LoàiS bu ll ock ii ( t r â mb u l l o c k ) làc â y bụic a o đế n5m,càn hco n c ó màutr ắngxám khi khô, hơidẹt,lácó cuống rấtngắn đến gần nhưkhôngcuống; phiến láhì nhelip đến hìnhtrứng thuôndài,có kích thước 5-10× 2,5-5,5 cm,lácólông, mặtngoàihơinhạtkhikhô,phíatrêncómàunâus ẫmvàbóngkhikhô,cácgânp hụnhiềuvàởgóc.Cụmhoaởđầu,cóhìnhchùy,cụmcónhiềuhoavàphânnhánh,cu ốnghoanhỏhơn1 cm.Đàihoa hình nón ngược có các thùyhìnhgợn sóng. Cánhh o a màutrắng,phâncánhrõràng.Quảmàuđỏđếnđen,hìnhelipcókíchthước10x8 mm[48].

Phânbốvàsinhthái:Câysinhtrưởngvàpháttriểntrongthảmthựcvậtmở,t r ên đất séthoặcđấtcát.LoàinàychủyếumọcởTrungQuốc,LàovàViệtNam.Ởnướcta,câynàyđã đượcghinhậnởcáctỉnhBắcGiang,ĐồngNai,QuảngBình,QuảngTrị,QuảngNam.Q uảcóthểănđược.

LoàiS.attopeuense

LoàiS attopeuense ( r ùrìlálớn)làcâybụihaycây gỗcao3-

8m , đườ ngkínhtới4 5 c m , t h â n n h ẵn.C à n h c â y tạot h à n h g ó c , đ ư ờ ngk í n h c ỡ2 ,

2 , 5 m m , mảnh,b ềmặtn h ẵn,t r ắng,t ư ơ n g p h ả nvớim à u l á L á m ọcv ò n g ( t h ườngở c u ốic à n h ) h o ặcđ ố ip h ụ,m à u n â u n h ạt,k í c h t h ư ớ c5 - 1 1 , 5 x 1 - 2 c m , d à i g ấp5 -

8 l ầnchiềurộng,thườnghìnhmũimác,đôikhihìnhelipthuôndài,đáyđậm,đỉnhnhọnh oặctròn khôngcóđộnhọnrõrệt;gângiữatrêntrũng,dướinhô;gânphụ15-

20mỗibên,khoảngcáchhẹphoặcrộng,cáchnhau2-4mm,dốclên35độsovớigâng i ữa;gân phụthứbamờnhạt, hình lưới;cận biên bên trong1mmtừmép lá,thẳng;cuốngládài5mm, bằng1/10-1/15chiềudàiphiếnlá,đườngkính1-1,5 mm,mảnh,m à u nâusẫm,khôngtươngphảnvớimàuphiếnlá.Cụmhoaởphầncuốihoặcnác h

17cm, xếpthànhchùy, phânnhánhbậc3, xòer ộng,hoanhiều,45đến153;trụcdài 8-

15cm;lábắcvàlábắcliêntục,hìnhtamgiác.H o a n h ỏ,k h ô n g c u ống,c ụmh o a k í n r ộngk h ô n g p h ấn,k h ô n g c ó s ợi,k í c h thước2-3× 1-

1, 5 mm, hìnhnón;đàihoa4,tựdo, 0,3×1m m, hìnhbá nn gu y ệt;c án h hoa4,liền nhau,2×2mm,hìnhcầu;nhịngoàidài1,5mm,baophấnsongsong,tuyếnliênkếtdễ thấy.Quảhìnhcầulõm,kíchthước0,6x0,75cm,bềmặtnhẵn[48].

Phânbốvàsinhthái:Câymọcởrừngthứsinhhoặcnguyênsinh,vensôngt rên đ ịahìnhđátừ300-

1500m,phânbốchủyếuởTháiLan,LàovàViệtNam.ỞViệtNamcâyđượcpháthiện ởcáctỉnhGiaLai,LâmĐồng,NinhThuận,QuảngT r ịv.v Quảcóthểănđược,rễđượcn gâmrượuđểsửdụngnhưthuốc.

Giớithiệuvềhoạttínhkhángviêm

Sơ lượcvềviêm

Viêmlàmộtphảnứngphứctạpcủahệthốngmiễndịchtrongcơthểđốivớichấtgâykí chứng.Chấtgâykíchứngcóthểlàmầmbệnh,tếbàobịtổnthươngvàc á c hợpchấtđộchại. Phảnứngviêmmộtmặtnóilêntácđộngpháhoại,gâytổnt h ư ơ n g củanhântốbệnhlý,n hưngmặtkháccũngnóilênsứcđềkhángchốngđỡc ủacơthểnhằmtiêudiệtnguyênnhâ ngâybệnh,hạnchếtổnthương,phụchồicácchứcn ă ngc ơ thểb ịr ốiloạn.Phảnứ ngv i ê m đ ư ợ cđ ặ c t r ư n gn h ấtvớic á c b ệnhnhiễmtrùngdovisinhvật(nhiễmtrùngdovikhuẩn đặcbiệtlàấutrùng).Sựnhậnbiếtbanđầuvềbệnhnhiễmtrùnglàcácđạithựcbàovàtếbà omastcưtrútrongm ô , dẫnđế nv i ệcs ảnx u ấtn h i ềuc h ấtt r u n g g i a n gâ y v i ê m , ba o gồmc h e m o k i ne , cytokine,c á c a m i n h o ạtt í n h

[ 4 9 ] K h i c ó p h ảnứ ngv i ê m d i ễnr a , t ù y t h e o t ì n h trạngviêmcấphaymạntínhmà biểuhiệnmứcđộnặnghaynhẹ.Tìnhtrạngviêmc ấptínhsẽgâyranămtriệuchứngđiểnhì nh,đólà:đỏ,nhiệt,sưngtấy,đauvàmấtchứcnăngcơquan.Khácvớiviêmcấptính,cáct riệuchứngviêmmãntínhcóthểkhópháthiệnhơncáctriệuchứngviêmcấptính.Cácd ấuhiệucủaviêmmãntínhcóthểbaogồm:đaubụng,đautứcngực,mệtmỏi,đauhoặccứ ngkhớp,xuấthiệnc á c vếtloétởmiệnghoặcphátbantrênda.Cáctácnhângâyratìnhtrạn gviêmcóthểđến từnội sinhhoặc ngoạisinh.Tácnhângâyviêmngoạisinhbaogồm các yếu tốcơhọc(chấnthương,áplực,masát,dịvật),vậtlý(nhiệt,tiaphóngxạ,bứcxạ),hoáh ọc( h o á c h ấtg â y kíchứ ng,c h ấtđ ộ c,t h u ốc),s i n h h ọc( s ựk ếthợpk h á n g nguyên– khángthể),visinhvật(vikhuẩn,virus,mộtsốloạinấm,cácvisinhvậtđơnb à o ),k ý s i n h t r ù n g v à c ô n t r ù n g T á c n h â n g â y v i ê m n ộis i n h b a o g ồms ảnphẩmchuyểnh oá(uremáutănggâyviêmmàngphổi,màngtimhayaciduricmáutănggâyviêmkhớp),h oạitửkíngâyviêmvôtrùng,phảnứngtựmiễn(bệnhthấpkhớp,viêmcầuthận),viêmxung quanhtổchứcungthư[49].

Cónhiềucáchphânloạiviêmbaogồmphânloạitheonguyên nhân(viêmnhi ễmk h u ẩnvàv i ê m v ô k h u ẩn),theov ịt r í ( v i ê m n ô n g , v i ê m s â u ) , theodịchr ỉv i ê m (viêmthanhd ịch,viêmtơ huyế t,viêmm ủ).Tuynhiên, cáchphânlo ạiphổbiếnn hấtlà p hân loạit h e o d iễnbi ếnquá tr ìn h viêm,baogồm:viêmc ấptínhvà v i ê m mạ ntính.Viêmcấplàtìnhtrạngviêmcóthờigiandiễnbiếnngắn,kéodàitừvàiphútđếnvàing àyvàcóđặcđiểmtiếtdịchchứanhiềuproteinhuyếttươngcũngn h ư nhiềubạchcầuđanhânt rungtính.Trongviêmcấpcóđápứngtứcthờivàsớmvớitổnthươngthôngquaquátrìnhhuyđ ộng bạchcầutớivịtrítổnthươnggiúplàmsạchvikhuẩnvàcáctácnhângâyviêmkhác,đồngthờilà mtiêuhuỷcácmôhoạitửd oviêmgâyra.Tuynhiên,chínhbạchcầulạicóthểkéodàiviê mvàcảmứngsựtổnthươngmôdogiảiphóng cácenzym,chấttrung gian hóahọc vàcác gốc oxy cóđộctínhgâysưng, n ón g vàđỏ.Viêmm ạnlàtìnhtrạngviêmcódiễnbiếntừvàin g ày đếnvàithánghoặckéodàitheonăm.

Tạiổviêm,sẽxảyrabiếnđổichủyếulàrốiloạntuầnhoàn,rốiloạnchuyểnhóa,tổnt hươngmôvàtăngsinhtếbào.Trênthựctế,cácquátrìnhtrênđanxenvàliênquanchặtchẽv ớinhau.

Rốiloạntuầnhoàntạiổ viêm:Nhữngrốiloạnnàythườngdiễnrasớm,dễthấynh ất,xảyrangaykhiyếutốgâyviêmtácđộnglêncơthể.Bốnhiệntượngxảyratrongkhicórối loạntuầnhoànđólàrốiloạnvậnmạch,tạodịchrỉviêm,bạchcầuxuyênmạch,hiệntượn gthựcbào[50].Ngaykhiyếutốgâyviêmtácđộng,tạivịtríviêmlầnlượtcócáchiệntượn gcomạch,sunghuyếtđộngmạch,sunghuyếtt ĩ n h mạchvàtụmáu.Đâylànhữngbiểuhiện chínhcủarốiloạnvậnmạch.Đặcbiệt, ồngthờităngcườngquátrìnhsửachữa[51].

Rốiloạnchuyểnhóa:Dorốiloạnchuyểnhóavàtổnthươngmôđãthúcđẩyviệctạor acácchấttrunggiangâyviêmnhưhistamin,serotonin,acetylcholin;cáck i n i n h u y ếtt ư ơ n g ; l e u c o t r i en,s ảnp h ẩmc h u y ểnh ó a c ủaa c i d a r a c h i d o n i c ; c á c cyt ok in Interleukin-1,-6,-8(IL-1,IL-6,IL-

Tổnthươngmô:Đểbạchcầutớiđượcổviêm còn cần cóvaitròcủađạithựcb ào Dướitácdụngcủayếutốgâyviêm,đạithựcbàođượchoạthóa ,tiếtraTNF,IL-1vàIL-6làmchonguyênbàoxơvàtếbàonộimôcũngtiếtraTNF,IL- I,IL-

8,monocytechemoattractanprotein(MCP)dẫnđếnviệckéođạithựcbào,bạchcầut r u n g tínhtớinhữngmạchquanhổ viêm[52].Saukhibạchcầutớiđượcổ viêm,bạchcầ usẽbắtgiữvàtiêuhóayếutốgâyviêm– đâylàhiệntượngbạchcầuthựcb ào Lysosomtiêudiệtyếutốgâyviêmbằngcácenzy mnhưhydrolaseacid.Bêncạnhđó,quátrìnhoxyhóacácchấtgâyviêmnhờenzy moxydasecũnggiúptiêudiệtcácvisinhvậtngoạibào,enzymNO- synthetasegiúptiêudiệtcácvikhuẩnnộib à o Ngoàira,khiquátrìnhoxyhóatạiổviêmtă ngsẽtăngnhucầuoxy,nhưngsựsunghuyếtđộngmạchchưađápứngkịpdẫnđếnsunghu yếttĩnhmạ ch,từđókéotheohàngloạtnhữngrốiloạnchuyểnhóacủaglucid,lipidvàprotid.

Tăngsinhtếbàođểchữalànhvếtthương:Hiệntượngviêmkếtthúcbằngquátrì nhtáitạomôxơvàcácmạchmáu.Đâylàcơsởhìnhthànhmôsẹothaythếchonhumôtổnth ương,làmlànhvếtthương[52].

Viêmlàmộtcơchếbảovệquantrọngcủacơthể.Thôngthường,trongcácphảnứ ngvi êm cấptính,cácphảnứngvàtươngtáctếbào- phântửsẽgiúpgiảmthiểuhậuquảtổnthươnghoặcnhiễmtrùngxảyra.Quátrìnhnàygópph ầnphụchồic â n bằngnộimôicủamôvàgiảiquyếttìnhtrạngviêmcấptính.Tuynhiê n,tìnhtrạngviêmcấptínhkhôngthểkiểmsoátđượccóthểtrởthànhmạntínhvàlâudầndẫ nđếntổnthươngmôcùngmộtloạtbệnhnhư:bệnhtimmạch,xơvữađộngmạch,tiểuđườngty pe2,viêmkhớpdạngthấpvà ung thư[52].Đểngănchặn sựtiến triểncủaviêmcấptínhthànhmạntính,phảnứngviêmcầnđượcngănchặnđểtránhtổn thươngthêmmôởcáccơquanbaogồm:tim(xơvữađộngmạch),gan(viêmgan),thận(viê mcầuthận,bệnhthậncấpvàmạntính),phổi(xơphổi,xơnang,bệnhphổitắcnghẽnmạntính COPD,hensuyễn),ruột(viêmruột),não(viêmnão),tuyếntụyv à h ệthốngsin hs ản.Viê mlà mộtphảnứ nggi úp bảov ệcơ thể con người.Tu y nhiên,đâycũnglàmộtnguyênnh ânchínhgâyrasựtiếntriểnquámứccácbệnhlýnộitạng.Cytokinelàmộttrongnhữngngu yênnhâncóthểgâyrasựrốiloạnđiềuh òatrongviêm.Vìvậy,tácđộngvàocytokinecũn glàmộttrongnhữngbiệnpháphiệuquảđểphòngngừavàđiềutrịcácbệnhviêmnhiễm.

1.3.1.4 Vaitròc ủainterleukin-6 ( I L - 6 ) , T u m o r Necrosis Factors- α(TNF- α),n i t ơ m o n o x i t (NO)vàcyclooxygenase-2(COX-2)tronghiệntượngviêm

6)làmộtchấttrunggiantiềnviêmđượcsảnxuấtbởimộtsốtếbàonhưtếbàokhốiu,tếbà omỡ,nguyênbàosợi,đạithựcbào,tếbàoganvàt ế bàonộimô.Chúngsửdụnggp130nhưlà mộtthụthểtruyềntínhiệu[53,54].IL-

6 cótácdụngtoànthânđốivớitìnhtrạngviêm,phảnứngmiễndịch[54].Nóđượctạoratạivịt ríviêmdonhiễmtrùnghoặctổnthươngmô.IL-

6cảmứngsảnxuấtcácp r o tei n giaiđoạncấptínhnhưproteinphảnứngC,amyloidA tronghuyếtthanh,fibrinogenvàhepcidintronggan[55].IL-

6cũngđóngmộtvaitròquantrọngtrongphảnứngmiễndịchdotạorasựbiệthóacủacáctếbà oBđãhoạthóathànhcáctếb à o sảnxuấtkhángthể(Ab)vàkéodàithờigiansốngsótc ủacáctếbàonguyênbào Đồngthời,IL-

6thúcđẩysựpháttriểncủacáctếbàoTh17vàtếbàoTcũngnhưứcchếsựbiệthóacủat ếbàođiềuhòaT(Treg)[56].Khitìnhtrạngviêmcấptínhb ắtđ ầ ux ảyr a , I L -

6 s ẽl à m t r u n g g i a n c h o c á c p h ảnứ ngt r o n g g i a i đ o ạ nnày.Saukhikếtthúcv iêmcấptính,nếuIL-

6vẫnhoạtđộngnhưmộtcytokinetiềnviêmt h ì t ì n h t r ạngv i ê mc ấpt í n h c h u y ểnt h à n h v i ê m mã n t í n h T r o n g t ì n h trạngv i ê m mãntính,IL-

6hỗtrợquátrìnhtíchtụtếbàođơnnhântạivịtrítổnthương,thôngquaviệctiếtMCP- 1liêntụcvàtăngsi nh mạch.Điềunà ycóthểlàmtă ng nồngđộIL-6 tronghuyếtthanhvàtạocơsởchobướckhuếch đạicủaquátrìnhtăngsin h viêmmãntính.

Trongcác bệnhtựmiễn,IL-6 không chỉduy trìtình trạngviêmmàcònđiềuchỉnhcácphảnứngmiễndịch.

TNF- αlàmộtyếutốnhânđóngmộtvaitròquantrọngtrongmiễndịch,quátrìnhviêmvàkiểmsoát chukỳtếbào(tăngsinh,biệthóavàapoptosis)[57].MộtsốloạitếbàocóthểsảnxuấtTNF- α,baogồmđạithựcbàođãhoạthóa,tếbàođuôigai,b ạchc ầuđ ơn nhâ n, tế bà o t iê ud i ệttựn h i ê n (N K) , t ếbào CD4 +T , tếbào T CD8 + ,t i ểut h ầnk i n h đ ệ m( m i c r o g l i a ) v à t ếb à o h ì n h s a o [ 5 4 , 5 7 ] V ềmặtc h ứcnăng ,nóđượcbiếtlàcókhảnăngkíchh oạtmộtloạtcácphântửgâyviêmkhácnhau,baogồmcáccytokinevàchemokine khác.TNF-αtồntạiởdạnghòatanvàx u y ê n màng.TNF-αxuyênmàng(tmTNF- α)làdạngtiềnchấtđượctổnghợpbanđầuvàđượcxửlýbởienzymchuyển TNF- α(TACE)đểđượcgiảiphóngdướidạngTNF-αhòatan(sTNF-α)

[58,59].DosựthamgiacủaTNF- αtrongcơchếbệnhs i n h củacácbệnhtựmiễn,cácchấtứcchếTNF- αđãđượcpháttriểnvàứngdụngt h à n h côngtrongđiềutrịlâmsàngcácbệnhtựmiễnn hưbệnhCrohn[60].Thuốcđiềutrịhoạtđộngnhưchấtđốikhángbằngcáchngănchặnsựtươn gtáccủaTNF- αvớiTNFR1/2hoặctrongmộtsốtrườnghợplàchấtchủvậnbằngcáchkíchthíchtínhiệungược, gâyraquátrìnhapoptosiscủacáctếbàomiễndịchsảnxuấtTNF-α[61,62].

Trongtếbàocủaloàiđộngvậtcóvú,nitơmonoxit(NO)đượctạoravớisốlượnglớn bởienzyme tổnghợpnitricoxit(iNOS).NOchịutráchnhiệmvớisựgiãnmạchmáuvàtănghuyếtápbiểuhi ệntrongsốcnhiễmkhuẩnvàquátrìnhviêm[63].Q u á trìnhsảnsinhNOlàmộttrongcácphản ứngtựbảovệcủacơthểtuynhiênsựsảnsinhquámứclượngNOlạilànguyênnhândẫnđ ếnsựtổnthươngcủacáctếb à o vàmô,thúcđẩyquátrìnhviêmvàgâyracácbệnhviêm cấpvàmãntính.DovậymứcđộsảnsinhNOcóthểphảnánhmứcđộgâyviêmvàđượccoilàm ộttrongn h ữngyếutốchỉthịchoquátrìnhviêmxảyra.Các hợp chấtứcchếsựsảnsinhNOcóthểđượccoilàcáctácnhânchốngviêm.

Cácenzymecyclooxygenase(COX)cóvaitròxúctácchoquátrìnhchuyểna c i d arachidonicthànhPGH2làchấtcơbảnchoviệctạothànhcácprostaglandind ư ớ ixúctáccủaenzymetổnghợpprostaglandinvàthromboxane.Prostaglandincóv a i tròv ôcùng q uan trọngtrong vôsốcác quá trìnhsinhhọcl iê nq uan đế nq uá trìnhđiều chỉnhchứcnăngmiễndịch,sựpháttriểnthận,sinhhọcsinhsản,vàkhả

1 , d ạngc h ủy ếuc ủae n z y me , c ó m ặtở k h ắpcơ t h ể v à c u n g cấpmộtsốchứcnăngcân bằngnộimôi,chẳnghạnnhưduytrìniêmmạcdạdàybình thường,ảnhhưởngđếnlưulượngmáutrongthận vàhỗtrợquátrìnhđôngmáuthôngquaquátrìnhkếttậptiểucầu.Ngượclại,COX-

2,dạngcảmứng,đượcbiểuhiệntrongđápứngvớitìnhtrạngviêmvàcácyếutốkíchthíchsi nhlývàtăngtrưởngkhácvàthamgiavàoquátrìnhsảnxuấtcácprostaglandinvốnlàtrungg iang â y đauvàđápứngquátrìnhviêm.BìnhthườngnồngđộCOX-

2cóthểtăngcaogấp80lần.Dođ óviệc sản xuất cácPGcũng tăng, khicácPGtăng làm tăngtínhthấmthành mạch,gâysốtvàkíchthíchthầnkinhcảmgiáclàmtăngcảmgiácđau,đặcbiệtcácPGE2gâ yphùnề,đỏ.

Cácthuốckhángviêm

Cácchấthaythuốckhángviêmkhôngđảongượcđượcquátrìnhviêmmà c hỉgiớihạnhoặclàmchậmquátrìnhviêmbằngcáchứcchếviệcsảnxuấtcácchấttrunggia ngâyviêm.Cácthuốckhángviêmhiệnnayđượcchialàmhailoại:Loạisteroidvàloạ ikhôngsteroid.Trênthịtrườnghiệnnaychủyếulàcácthuốckhángv i ê m khôngsteroid( NSAIDs-Nonsteroidalanti- inflammatorydrugs),đasốlàcáct h u ố c tổng hợpvàcótácdụnghầuhếttrêncáclo ạiviêmkhôngphânbiệtnguyênnhân.Cơchếhoạtđộngcủacácthuốcnàylàkìmhã mhoạtđộngcủacácenzymecy clo ox yg en ase COX-1vàCOX-

2,làmgiảmtổng hợpcácprostaglandin(PG- yếut ố trunggianquantrọngnhấtgâynênphảnứngviêm)

[64].SựứcchếtổnghợpcácPGcủathuốcmộtmặtlàyếutốquyếtđịnhtácdụngkhángv iêmcủathuốcnhưnglạicótácdụngbấtlợiởđườngtiêuhoávàthậnkhisửdụngth uốckéodài.Hiệnnay,cácthuốcứcchếchọnlọcCOX-

2đượcxemlàíttácdụngphụtrêndạdày.Tuyn h i ê n , đ ố i v ớ i c á c t h u ố c n à y , k h ô n g có t h u ố c n à o h o à n t o à n ứ c c h ế COX-2m à khôngtácđộngtrênCOX-

1[65].Dođó,bêncạnhcácthuốctổnghợpthìxuhướngt ì m kiếmcácthuốckhángviêmc ónguồngốctừthiênnhiênđangđượcđẩymạnhbởinhữngtácdụngưuviệtcủanó như:tácdụngnhanh,antoànvàítgâyracácphảnứngphụ.

Đốitượngnghiêncứu

LoàiS.cerasiforme

Merr.&L.M.Perry(Trâmkhế)đượcthuháiởVĩnhPhúc,ViệtNamvàotháng4năm2022vàđư ợcxácđịnhtênkhoahọcbởiTS.NguyễnThếCường,ViệnSinhtháivàTàinguyênsinhvật,VA ST.Mẫutiêubản(NCCT-P101)đượclưutạiViệnHóasinhbiển,VAST,ViệtNam.

LoàiS.bullockii

MẫulávàcànhcâySyzygiumbullockii(Hance)Merr.& L.M.Perry(Trâmbullock)đượ cthuháiởVĩnhLinh,QuảngTrị,ViệtNamvàotháng7năm2022vàđượcgiámđịnhbởiTS.Lê TuấnAnh,ViệnNghiêncứukhoahọcMiềnTrung,VAST.Mẫutiêubản(NCCT-

LoàiS.attopeuense

MẫulávàcànhcâySyzygiumattopeuense(Gagnep.)Merr.&L.M.Perry(Rùrìlálớn)đ ượcthuháiởVĩnhLinh,

QuảngTrị,ViệtNamvàotháng9năm2022vàđượcgiámđịnhbởiTS.LêTuấnAnh,ViệnNghi êncứukhoahọcMiềnTrung,VAST.Mẫutiêubản(NCCT-

Phươngphápnghiêncứu

Phươngphápphânlậpcáchợpchất

Alufolien60F 2 5 4 (Merck1,05715),RP18F254S(Merck).Chấtsaukhitiếnhàn hsắcký đượcpháthiệnbằngđè ntửngoạiởhaibướcsóng254nmvà365nmhoặcdùngt huốcthửlàdungdịchH 2 SO41 0 %đượcphunđềulênbảnmỏng,sấykhôrồihơnóngtừtừđến khihiệnmàu.

SắckýcộtđượctiếnhànhvớiphatĩnhlàcácchấthấpphụphathuậnSilicagelvàp hađảoRP-18.Silicagelcókíchcỡhạtlà0,040-0,063mm(240-430mesh).PhađảoRP- 18(150m,FujiSilysiaChemicalLtd.).NhựatraođổiionDiaionHP-

GI L E N T 1100,phòngNghiêncứucấutrúc,ViệnHóasinhbiển,VAST.Cộtsửdụn gJ’sphereODS-H80kíchthước250mm20mmID.Mẫubơmtựđộng,t ốc

Phươngphápxácđịnhcấutrúchóahọccáchợpchất

Cấutrúchóahọccủacáchợpchấtphânlậpđượcxácđịnhbằngcáchsửdụngc á c p hép xác địnhth ôn gs ốv ậtl ývà cácp hươngphá pph ổhiệnđạ ikếthợpvớip h â n tíchsựtươn gthíchvớicácdữliệutrongtàiliệuthamkhảotracứuđược.Cácphươngphápphổhiệnđạib aogồm:

PhổNMR đ o t r ê n máyB r u k e r 6 0 0 MHz v à B r u k e r AM 5 0 0 F T -

T M S (TetrametylSilan).Cáckỹthuậtphổcộnghưởngtừhạtnhânđượcsửdụngba ogồm:Phổcộnghưởngtừhạtnhânmộtchiều: 1 H-

NMR, 1 3 CNMR;phổcộngh ư ở ngtừhạtnhânhaichiều:HSQC,HMBC,COSYvàN OESY.DungmôiđolàCD 3 OD,CDCl3v àDMSO- d 6 Việclựachọndungmôiđophụthuộcvàobảnchấtc ủatừng mẫu chất dựatrênnguyên tắc: dungmôiphải hòa tan hoàn toànmẫu đovàkhôngchekhuấtcáctínhiệuphântích.

PhổCDđ ư ợ c đ o t r ê n m á y C h i r a s c a n TMCD s p e c t r o m e t e r ( A p p l i e d PhotophysicsLtd.,Surrey,UK)tạiViệnHóasinhbiển,VAST.PhổCDđượcdùngđ ểxácđịnhcấuhìnhtuyệtđốicủacáchợpchấtquanghoạt.

PhổIR đot r ê n máySp ect ru m TwoFT-

IRspectrometer t ạiViệnH óa học,VAST.PhổUVđotrênmáyJ A S C O V-

2.2.2.6 Đođiểmnóngchảy Điểmnóngchảyđượcđotrênmáy Koflermicro- hotstagecủaViệnHoásinhbiển,VAST.

Nguyêntắc:Trướchếtcáchợpchấtđượctiếnhànhthủyphâncắtđứtmạchđường thànhcácđườngđơntrongmôitrườngacid.Saukhithủyphân,phầnđườngt á c h rađượct inhchếbằngsắckýsauđótiếnhànhđođộquaycựcrồisosánhvớiđộquaycựcriêngtương ứngcủachấtchuẩn.TừđóxácđịnhđượccấuhìnhD/Lcủađ ư ờ ng.Cácbướctiếnhànhnhưsau:

CáchợpchấtSL2,SP1-SP4,SA1-SA5.Cânmỗimẫu3,5mghòa tantrong0,5mldungdịchHCl2M(HCltrongdioxane/nướctỉlệ1/1,v/v)vàgianhiệtở60 o Ctro ng1,5giờ.Sauđóđểnguộidungdịch,rồitiếnhànhđuổiloạidungmôibằngkhínitơ.Cặnthuđượ cđemhòatantrong1mlnướcvàchiếtvớiethylacetatee(3lần,mỗilần1ml),thulấylớpnước.Lớ pnướcsauđóđượctrunghòabằngbạccarbonatrồiloạibỏphầnkếttủavàđểkhô.Đườngđơnđư ợcxácđịnhbằngphươngphápsắckýlớpmỏngvàsosánhvớimẫuchuẩn,sửdụnghệdungmôi MeCOEt/isoPrOH/Me2CO/H2O(20/10/7/6,v/v/v/ v)thuđượcvếtsắckýcủađườngglucose(mỗivếtsaukhixửlýthuhồiđượckhoảng0,9mg,R f0,42

[66].Sauđótiếnhànhđođộquaycựccủacácmẫuđườngglucosetinhkhiếtthuđượcgiátrị+48,0 (c0,08,H2O),đâylàtínhiệutươngứngvớigócquaycựccủađườngD- glucosechuẩn.Vìvậy,cóthểkếtluậnphầnđườngtrongcáchợpchấtSL2,SP1-SP4,SA1-

Phươngphápđánhgiáhoạt tínhứcchếsựsảnsinhNO

Nguyêntắc:Hoạttínhkhángviêmđượcđánhgiáthôngquatácdụngứcchếcủacáchợpc hấtphânlậpđượcđốivớisựsảnsinhNOtrongnhữngtếbàoRAW264.7đượckíchthíchvớiLPS[67,68].NồngđộNOtrongmôitrườngthựcnghiệmđượcxácđịnhthôngquaphảnứngGriess.PhảnứngdựatrênsựtạophứcmàucủaNOtrongthínghiệmở dạngnitritevớithuốcthửGriess( sulfanilamidevàn-1- ổimậtđộquangtạibướcsóng540nm.Hoạttínhkhángviêmđượctiếnhànhsaukhikiểmtrađộct ínhđốivớitếbàobằngphươngphápsomàuMTT[69,70].

CáctếbàoRAW264.7đượccungcấptừĐạihọcPerugia,Ývàđượcnuôitro ngDMEMchứa10%FBS,2mML- glutamine,10mMHEPESvà1mMnatrip y r u v at e Cáctếbàođượccấychuyểnvào đĩa96giếng(2×10 5t ếbào/ giếng)vàủở37°Ctrongmôitrườngẩm(5%CO 2v à 95%khôngkhí).Sau24giờủ,môitrườngn u ô i cấyđượcthaythếbằngDMEMkhôngcóFBSvàủliêntụctrong3giờ.

Bước2:KiểmtrađộctínhcủacácchấtthửđốivớitếbàoRAW264.7theophươngph áp so màuMTT.

CácmẫuthửđượcphatrongDMSOvàphaloãngbằngmôitrườngnuôicấytếbàođế nnồngđộphùhợp.Chấtthử(10l)đượcđưavàocácgiếngcủakhay9 6 giếngđểcó nồngđộtươngtựnồng độcủathínghiệm NO.Sau đó,điềuchỉnhđểc ómậtđộtếbàophùhợp,hút190ltếbàovàocácgiếngcủakhay96g iếngđ ã cóchấtthử.Trêncùngmộtđĩathử,bốtrímộtsốgiếngđể làmđốichứngk h ô n g cómẫuthử,chỉcódungmôiphamẫulàDMSO1%. ĐểđĩanuôicấyvàotrongtủấmCO2ởđiềukiện37 o C,5%CO2n u ô itrong2 4 h Sau 24giờ,dungdịch10àlMTT (nồngđộcuốicựng là5mg/ml) được chovàomỗigiếng.Sau24giờ,loạibỏmôitrườ ng,tinhthểformazanđượchòatanb ằng5 0àl(DMSO)100%vàđogiỏtrịđộhấpthụ(OD)bằngmỏyquangphụ̉(540nm).

Cáctếb à o đư ợ cc h u y ểnvà ot r o n g đ ĩ a 96gi ếng( 2 × 10 5t ếb à o / g i ếng)vàđ ượcủở37°Ctrongmôitrườngẩm(5%CO 2và 95%khôngkhí).Sau24gi ờủ,môitrườngnuôicấyđượcthaythếbằngDMEMkhôngcóFBSvàủliêntụctrong3 giờ.Tếbàosauđóđượcủmẫunghiêncứuởcácnồngđộkhácnhautrong2htrướckhiđượck íchthíchsảnsinhyếutốNObằngLPS(10μg/mlg/ mL)trong24h.Mộtsốgiếngkhôngđượcủmẫumàchỉsửdụngdungdịchphamẫuđượcco ilàđốichứngâ m TrongkhiđốichứngdươngđượcsửdụnglàN G -Methyl-L- arginineacetatee(L-N M M A )

(Sigma)vàcácchấtthửđượcthựchiệnởcácnồngđộ100;20;4và0,8μg/ml g/mL.

Nitrite (NO2 -),được xem là chỉthịcho việc tạo NO,sẽđược xácđịnh nhờbộGr iess ReagentSystem(PromegaCooperation,WI,USA).Cụthểlà,100 μg/mlLmôitrườngnuôitếbào(ủmẫu)đượcchuyểnsangđĩa96mớivàđượcthêmvào100μg/mlLGr iess reagent: 50μg/mlLof1%(w/v)sulfanilamide trong5%(v/v)phosphoricacidvà5 0 μg/mlL0 1%(w/v)N - 1 - naphthylethylenediamined ih yd ro ch lo ri de p ha t ro ng n ư ớ c.Hỗnhợpnàyđượcủti ếpởnhiệtđộphòngtrong10phútvàhàmlượngnitritesẽđ ư ợ c đ o b ằ ngm á y m i c r o p l a t e r e a d e r ở b ư ớ csóng5 4 0 n m M ô i t r ư ờ ngD M E M k h ô n gFBSđượcsửdụ ngnhưgiếngtrắng(blank).Hàmlượngnitritecủatừngmẫut h í nghiệmđượcxácđịnhnhờv àođườngconghàmlượngchuẩnNaNO2v àđượcsosánh%vớimẫuchứngâm(LPS).

Cácthínghiệmđánhgiáảnhhưởngcủacáchợpchấtphânlậpđượcđếnsựsản si nhNOtrongtếbàoRAW264.7kíchthíchbởiLPSđượclặplại3lầnđểđảmbảotínhchính xác.GiátrịIC50(nồng độứcchế50%sựhình thànhNO)sẽđượcxácđịnhnhờvàophầnmềmmáytínhTableCurve2Dv4.

PhânlậpcáchợpchấttừloàiS.cerasiforme

MẫulátươiloàiS.cerasiforme(34,0kg)đượcsấykhôvàtánthànhbộtthuđược 9,0kgbộtkhô.Bộtkhôđượcsiêuâmvớimethanol(3lần20lít)trong10giờthuđượcdịch chiếtmethanol.Dịchchiếtnàyđượccấtloạidungmôiởápsuấtthấpthuđược430gcặnMe OH.CặnchiếtMeOHđượchòatanvớinướcvàsauđóđượcchiếtphânlớpbằngcácdun gmôin- hexane,diclomethanevàethylacetate.C á c dịchchiếtnàyđượccấtquayđểloạibỏdun gmôithuđượccácthànhphầncặntươngứngSLH(130g),SLD(75g),SLE(90g)vàlớpnướ c.

SaukhikiểmtrabằngTLC,cặnSLD(75g)đượcphântáchtrênsắckýcộtsilicage l,rửagiảigradientbằnghệdungmôicóđộphâncựctăngdầnn-hexane/ ethyla c e t a t e ( 2 0 / 1 , 1 0 / 1 , 2 / 1 , 1 / 1 , v / v ) t h u đ ư ợ cb ốnphânđ o ạ n,S L D 1 - SLD4tươngứng.PhânđoạnSLD3(15,2g)tiếptụcđượcsắckýtrêncộtsilicagelrửag i ả ib ằngd i c h l o r o m e t h a n e / m e t h a n o l/ nước( 5 / 1 / 0 , 1 ) t h uđ ư ợ c s á u p h â n đ o ạ n,SLD3A-

SLD3F.PhầnSLD3A(246mg)đượctinhchếtrêncộtHPLCđiềuchế,rửagiảibằngacetonitri l65%trongnước,thuđượchợpchấtSL13(16,7mg,tR=30,4phút)vàSL5(9,5mg,tR=47, 9phút).PhânđoạnSLD1C(321mg)đượcphânlậptr ênHPLCbằngcáchsửdụngACN 65%thuđượccáchợpchấtSL10(43,8mg,tR

0,8phút),SL4(48,8mgtR=38,9phút),vàSL1(14,7mg,tR=43,7phút).PhânđoạnSLD1 D(1,2g)đượcsắckýtrêncộtphađảoRP-18vớihệdungmôiMeOH/H 2 O(4/1,v/ v)thuđượchợpchấtSL8(35,0mg).PhânđoạnSLD1Eđượcp h â n lậpbằngcộtsilica gelvớihệdungmôirửagiảin-hexane/ethylacetate(7/1,v / v ) thuđượchợpchấtSL16(14,8mg).PhânđoạnSLD1Fcũngđượcphânlậptrênc ộtsilicagel vớihệdungmôirửagiảitươngtựSLD1E(H/E:7/1,v/ v)thuđượchợpchấtSL15(8,7mg)vàhợpchấtSL14(15,6mg).

PhầncặnSLE(89,0g)đượcphântáchtrêncộtsilicagel,rửagiảigradientvới hệdungmôicóđộphâncựctăngdầnCH2Cl2/

S L E 4 ,t ư ơ n g ứ ng.P h ânđ o ạ nS L E 2 đ ư ợ cp h â n đoạntrêncộtsilicagelvớihệdung môichạycộtCH2Cl2/MeOH(30/1)thuđược4phânđoạnnhỏSLE2A-SLE2D.PhânđoạnSLE2A(167mg)đượctinhchếtrêncột

30,2mg,tR=38,6phút)vàSL2(8,9mg,tR=41,3phút).PhânđoạnSLE2C( 1 28 mg)đượ cphânlậptrêncộtHPLCđiềuchếsửdụngdungmôiACN27%thuđượchợpchấtSL18(

52, 3m g, tR=3 5, 6 p hú t) vàSL7(5 , 3mg, tR=40, 3p hú t) P h â n đ o ạ nSLE2D( 1 5 6 m g ) đ ư ợ ct á c h t r ê n c ộtH P L C b ằngc á c h s ửd ụngA C N 25%thuđượchợpchấtSL9( 6,2mg,tR=31,7phút).

PhầncặnnướcđượcsắckýtrêncộtDiaionHP-20rửagiảibằngmethanol/ nước(gradient)vớitỷlệ

%methanollầnlượtlà25%,50%,75%và100%thuđược4phânđoạnlàSLW1(29,0g),SLW2( 42,0g)vàSLW3(18,0g)vàSLW4(21,0g).Phân đoạnSLW2(42,0g)đượcphânlậptrêncộtsilicagel,rửagiảibằnghệdungmôidichloromethan e/methanol(20/1,5/1,1/1và0/1,v/v,mỗilần2,5lít)thuđượcbốnphânđoạnnhỏhơn,SLW2A- SLW2D.PhânđoạnSLW2A(154mg)đượcphântáchtrêncộtHPLCbằngcáchsửdụngdung môiACN22%trongnướcthuđượchợpchấtSL17(16,6mg, tR=37,7phút)vàSL12(23,9mg,tR=40,2phút).PhânđoạnSLW2C(135mg)đượcphântáchtrê ncộtHPLCvớidungmôiACN30%trongnướcthuđượchợpchấtSL20(13,6mg,tR=36,2phút )vàSL11(9,9mg,tR=43,4phút).PhânđoạnSLW2D(176mg)đượctinhchếtrêncộtHPLCvới dungmôiACN16%trongnướcthuđượchợpchấtSL6(10,0mg,tR=25,2phút)vàhợpchấtSL1

SL13 SL5 SL10 SL4 SL1

(14,8mg) SL15 SL14 SL3 SL2 SL18 SL7 SL9 SL17 SL12 SL20 SL11 SL6 SL19

(16,7mg) (9,5mg) (43,8mg) (48,8mg)(14,7mg) (8,7mg)(15,6mg)(30,2mg)( 8 , 9 mg) (52,3mg)(5,3mg) (6,2mg) (16,6mg)(23,9mg)(13,6mg)(9,9mg t )(10,0mg)( 9 , 5 mg)

PhânlậpcáchợpchấttừloàiS.bullockii

Mẫucành,lácủaloàiS.bullockiiđượcphơikhôvànghiềnthànhdạngbột( 6 ,1 kg)đượcchiếtxuấtbằngsiêuâmvớimethanol(3lầnx15lít)trong1giờ,sauđócấtloạidu ngmôithuđượccặnchiếtmethanol(521g).CặnchiếtnàyđượchòatantrongH 2 Ovàchiế tphânđoạnlầnlượtvớin-hexane,dichloromethanevàethyla c e t a t e rồitiếnhành cô quayởápsuất giảmthuđượccáccặntươngứng,SPH(23,2g),SPD(17,3g),SPE(43,6g)vàlớpnước(SPW).

PhầncặnSPE(43,6g)đượcsắckýtrêncộtsilicagelrửagiảigradientbằnghệdung môiCH2Cl2/MeOH(40/1,20/1,10/1,5/1và2,5/1,v/ v,mỗilần1,3lít)thuđượcnămphânđoạntươngứngSPE1-

SPE5.PhânđoạnSPE3(14,2g)đượcphânlậptrêncột silicagelrửagiảibằnghệdungmôiCH2Cl2/MeOH(10/1,v/v)thuđượcbốnphânđoạnnhỏh ơn,SPE3A-

SPE3B4.PhânđoạnSPE3B1(216mg)đượcphântáchtrêncộtHPLCsửdụngdungmôiAC N38%trongnướcthuđượccáchợpchấtSP16(19,6mg,tR=34,6phút)vàSP8(33,7mg,t

R=36,2phút).PhânđoạnSPE3B2(328mg)c ũ n g đượcphântáchtrêncộtHPLCvớidung môiACN35%trongnướcthuđượch ai hợpch ấtSP11( 1 5 , 6mg,tR=41, 6phút)vàS P1 5 (41, 8m g, tR=44, 1phút).P h â n đoạnSPE3D(1,6g)đượcphânlậptrêncộtsắc ký phađảoRP-18r ửagiảibằngMeOH/H 2 O(1/4,v/ v)thuđượchợpchấtSP9(99,6mg).PhânđoạnSPE4(2,5 g)đượcphânlậptrêncộtphađảoRP-18rửagiảibằnghệdungmôiMeOH/

H2Ovớitỷlệtăng dầncủadung môiMeOH (1/4,1/1, 3/4và 1/0,v/v,mỗilần3lít)thu đượcbốnphânđoạntươngứnglàSPW1-

SPW4.PhânđoạnSPW2(32,4g)đượcphânlậpt r ê n c ộts i l i c a g e l rửag i ảig r a d i e n t bằngh ệd u n g m ô i CH2Cl2/MeOH( 5 0 / 1 , 20/1,

SPW2B4.PhânđoạnSPW2B1( 4 5 0 m g ) đ ư ợ ct i n h c h ết r ê n c ộtH P L C đ i ề uc h ế,d u n g m ô i AC N 1 5 % t r o n g nướcthuđượchợpchấtSP12(31,9mg,tR=46,8phút).Phânđ oạnSPW2B2

(354mg)đượctinhchếtrênHPLC(ACN10%)thuđượchợpchấtSP7(28,7mg,tR

I,2phút).PhânđoạnSPW2B4(521,4mg)đượctinhchếtrênHPLC(ACN20%)thuđ ư ợ c h ợpc h ấtS P 1 0 ( 3 5 , 4m g , tR=4 1 , 7 p h ú t ) P h â n đ o ạ nS P W 2 D ( 1 2 , 3 g ) đượcsắ ckýtrêncộtsilicagelrửagiảibằnghệdungmôiCH2Cl2/MeOH(8/1,v/ v)t h u đượcbốnphânđoạnnhỏ,SPW2D1-SPW2D4.PhânđoạnSPW2D3(2,1g)đượcphân tách trêncộtsephadex,rửagiảibằnghệdungmôiMeOH/H2O

S P W 2 D 3 C P hânđ o ạ nn h ỏS P W 2 D 3 A đượctinhchếtrêncộtHPLCsửdụngdung môiACN12%trongnướcthuđượchợpchấtSP17(17,2mg,tR=41,0phút),cònphânđoạn nhỏSPW2D3BđượctinhchếtrêncộtHPLCvớiACN15%trongnướcthuđượchợp chấtSP13(11,1mg,tR=4 7 , 2 phút).P h â n đ o ạ nSPW4( 2 5 , 1 g)đượcs ắck ý t r ê n c ộts i l i c a g e l rửag i ảig r ad i en t bằnghệdungmôiCH 2 Cl2/

MeOH(50/1,20/1,10/1,5/1;mỗilần1,0lít)thuđượcbốnphần,SPW4A-

SPW4B3.Phânđ o ạ nSPW4 B2 (3 6 7 mg) đượ ct i n h chết r ê n cộtHPLC điềuchếvớ idung môiACN 33% trongnướcthuđược haihợpchấtSP1(9,1 mg,tR

C,2phút)vàSP3(12,0mg,tR=48,2phút).PhânđoạnSPW4B3đượcphântáchtr ê n cộtH PLCvớidungmôiACN33%trongnướcthuđượchợpchấtSP2(11,2m g , tR=45,9 phút).PhầnSPW4D(7,6g)đượcsắckýtrêncộtsilicagelrửagiảibằngh ệC H2Cl2/ MeOH( 1 0 / 1 , v / v ) t h u đ ư ợ c b a p h â n đ o ạ n,S P W 4 D 1 -

S P W 4 D 3 HợpchấtSP4(12,4mg)thuđượckhitinhchếphânđoạnSPW4D2trêncột HPLCsửdụngdungmôiACN35%trongnướcvớit R= 39,8phút.PhânđoạnSPW4 D3(260mg)đượcphântáchtrênHPLC(ACN32%)thuđượchợpchấtSP6(8,9mg,tR

B,4phút)vàSP5(16,5mg,tR=45,4phút).

SPE3A SPE3B SPE3C SPE3D SPW2A SPW2B SPW2C

3ml/min Phân bố trong 4 lít nước

Chiết phân lớp lần lượt với H, D, E

SPE1SPE2 SPE3 SPE4 SPE5 SPW1SP W2 SPW3 SPW4

SPE3B1 SPE3B2 SPE3B3 SPE3B4 SP9 SPW2B1 SPW2B2SPW2B3S P W 2 B 4 SPW2D1SPW2D2S P W 2 D 3 S P W 2 D 4 SPW4B1S P W 4

SP16 SP8 SP11 SP15 (31,9mg) t4 6 , 8 (28,7mg) t

R 49,2 (35,4mg) t R 41,7 SPW2D3ASPW2D3BSPW2D3C SP1 SP3 (11,2mg) t 45,9 (12,4mg) t R 3 9 , 8

(19,6mg)( 3 3 , 7 mg)(15,6mg)(41,8mg) R HPLC HPLC (9,1mg)(12,0mg ) R SP6 SP5 t R 34,6 t R 36,3 t R 41,6 t R 4 4 , 1 ACN12 % ACN1 5% t R 4 3 , 2 t R 4 8 , 2 (8,9mg)( 1 6 , 5 mg) t 42,4 t45,4

PhânlậpcáchợpchấttừloàiS attopeuense

MẫulávàcànhtươiloàiS.attopeuenseđemsấykhôthuđược6,8kg,sauđóđượcnghiềnvà siêuâmvớimethanol(3lần10lít)trong4 giờ.Dịchchiếtmethanolnàyđemcấtloạibỏdung môiởápsuấtthấpthuđược550gamcặnMeOH.CặnchiếtMeOHđượchòatanvàonướcvàchi ếtphânlớpbằngcácdungmôin- hexane,dichloromethane,ethylacetate.Cácdịchchiếtsaukhicấtquaydướiápsuấtgiảmthuđ ượccáccặntươngứngSAH,SAD,SAEvàcặnlớpnước(SAW).

CặnethylacetateSAE(138,0g)đượctiếnhànhphântáchtrêncộtsilicagel,rửagiảig radientvớihệdungmôiCH2Cl2/MeOH(20/1,10/1,5/1và1/1,v/ v)thuđược4phânđoạnSAE1-SAE4.

PhânđoạnSAE2(15,2g)đượcđưalêncột sắckýphađảoRP- 18hệdungmôirửagiảiMeOH/H 2 O(1/1,v/v)thuđược4 phânđoạnSAE2A-

SAE2D.PhânđoạnSAE2B(253mg)tiếptụcđượctinhchếtrêncộtHPLCđiềuchếsửdụngdun gmôiACN15%trongnướcthuđượchợpchấtSA15(10,2mg,tR=23,2phút)vàSA16(8,4mg,tR

=27,3phút).PhânđoạnSAE2C(198mg)đượctinhsạchtrêncộtHPLCvớidungmôiACN 33%thuđược hợpchấttinhkhiếtSA6(13,1mg,tR=39,0phút).PhânđoạnSAE2D(324mg)cũngđượcphântá chtrêncộtHPLCsửdụngdungmôiACN24%thuđượchaihợpchấtSA14(13,7mg,tR=34,4ph út)vàSA13(14,5mg,tR=38,0phút).

Phânđ o ạ nS A E 3 ( 2 1 , 3 g ) đ ư ợ cp h â n t á c h t r ê n c ộtp h a đ ả oR P -

1 8 vớih ệdungmôirửagiảiacetone/H 2 O(1/3,5,v/v)thuđược4phânđoạnnhỏhơn,SAE3A- SAE3D.Tiếptheo,tiếnhànhphântáchphânđoạnSAE3B(395mg)trêncộtHPLCsửd ụngd u n gm ô i A C N 2 0 % t h u đượchợpc h ấtSA12( 6 , 2m g , tR=32,2phút),SA11(7,8mg,tR=3 3,4phút)vàSA10(12,3mg,tR=47,5phút).PhânđoạnSAE3C(231mg)đượcđiềuchếbằngcộ tHPLCvớidungmôiACN21%trongnướcthuđượchợpchấtSA9(11,1mg,tR=48,7phút). CònphânđoạnSAE3D(252mg)đượcphântách trêncộtHPLCsửdụngdungmôiACN22%trongnướcthuđượchợpchấtSA7(7,2mg,tR=67, 3phút)vàSA8(6,8mg,tR=74,9phút).

18,rửagiảivớihệdungmôiacetone/H 2 O(1/3,5,v/v)thuđược5phânđoạnnhỏSAE4A-SAE4E.PhânđoạnSAE4A(180mg)đượcphântáchtrêncộtHPLCsửdụngdung môiACN10%trongnướcthuđượchợpchấtSA1(24,5mg,tR=23,9phút).PhânđoạnSAE4B (350mg)cũngđượcphân táchtrêncộtHPLCvớidungmôiACN10%trongnước thuđượcchấtSA5(123mg,tR=35,1phút).PhânđoạnSAE4C(170 mg)đượctinh chếtrêncộtHPLC vớiACN16%trong nướcthu đượchợpchấtSA2(15,2mg,tR=23,3phút).PhânđoạnSAE4(170mg)đượctinhchếtrêncộtHPLCsửdụngdungmôiACN16%trongnướcthuđượchợpchấtSA3(15,7mg,tR=39,2phút)v àSA17(57,0mg,tR45,2phút).PhânđoạnSAE4E(135mg)đượctinhchếtrêncộtHPLCsửdụng dungmôiACN35%trongnước thuđượchợpchấtSA4(11,3mg,tR41,9phút).

ACN15% ACN33% ACN24% ACN20% ACN21% ACN10% ACN10%

SA15 SA16 SA6 SA14 SA13 SA12 SA11 SA10 SA9 SA7 SA8 SA1 SA5 SA2 SA3 SA17 SA4

(10,2mg) (8,4mg) (13,1mg) (13,7mg)(14,5mg)( 6 , 2 mg)(7,8mg)(12,3mg) (11,1mg) t R 4 8 , 7 (7,2mg) t

R 7 4 , 9 (24,5mg) (123mg) t3 5 , 1 (15,2mg) t R 2 3 , 3 (15,7mg)(57,0mg) (11,3mg) t R 4 1 , 9 t R 2 3 , 2 t R 2 7 ,

Thôngsốvậtlývàdữkiệnphổcủacáchợpchấtphânlậpđược

LoàiS.cerasiforme

3.2.1.1 HợpchấtSL 1: 5, 7- Di hy dro xy- 2 -is op ro pyl - 6, 8 -d im et hy l- 4 H- chr om en - 4- on e(hợpchấtmới).

179 o C.PhổUV(MeOH):λmax2 6 2 ,300nm.PhổIR(KBr):νmax3 4 2 4(pícrộng),2970,1 660,1624,1566,1248,1142cm -1 Phổ(+)-HR-ESI-MSm/z:249,1123[M+H] + ,tính toánlýthuyếtchocôngthức[C14H17O4] + :249,1121(Δ=+2,8ppm).Phổ(-)-HR- ESI-MSm/z:247,0975[M-

0,4ppm).Côngthứcphântử(CTPT):C14H16O4.M$8.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)v à 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.1.

[] 25 :−37,8(c0,1,MeOH).PhổUV(MeOH):λmax280n m PhổIR ( K B r ) : νmax3376( pí c r ộng),1 6 3 9 , 1 0 7 5 cm -1 PhổC D ( M eOH)θ (λnm):

−7,1( 2 9 0 ) , + 1 , 2 5 ( 3 1 4 ) m d e g P h ổ( + ) - H R - E S I - M S :m / z 5 7 1 , 1 4 4 3[ M + H ] + ,t í n h toánlýthuyếtchocôngthức[C28H27O13] + :571,1446(Δ=+0,5ppm);m/ z593,1292[M+Na] + ,t í n h t o á n l ý t h u y ếtc h o c ô n g t h ức[ C28H27O13Na]

+:5 9 3 , 1 2 6 6 (Δ= - 4 , 4 ppm).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z569,1301[M-

H] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C 28 H25O13] - :56 9, 1 30 1( Δ= - 1 , 0 p p m ) ;m/ z 6 0 5 , 1 0 6 8[ M+ Cl ] - ,t í n h to án l ý th uy ếtc h o côngthức[C28H26O13Cl] - :605,1067(Δ

Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.2.

Chấtrắnmàutrắng.Độquaycựcriêng[] 25: -35(c=0,01,MeOH).Phổ( + ) - HR-ESI-MS:m/z419,1340[M+H]

Chấtrắnkhôngmàu.Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/z271,0964[M+H]

+,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C 16 H15O4] + :271,0965(Δ=+0,3ppm).Phổ(-)-HR- ESI-MS:m / z 305,0575[M+Cl] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C16H14O4Cl] - :305,0586(Δ

H ] - ,t í n h toánl ý t h u y ếtc h o cô n g thức[C 16 H13O4] - :269.0819(Δ=0ppm).CTPT:C

16H14O4.M'0.Sốliệu phổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.4.

4 5 , 7 (c=0,1,MeOH).Nhiệtnóngchảy202-210 o C.UV:λmax2 1 0 ,295,360nm.Phổ(+)- HR-ESI-MS:m/z285,1125[M+H]

+,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[ C 17H17O4] + :285,1121(Δ=-1,4ppm).Phổ(-)-HR- ESI-MS:m/z569,1301[M-H] - ,t í n h toánlý thuyếtchocông thức[C17H15O4] - :569,1301(Δ=0ppm)

CTPT:C17H16O4.M(4.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng 4.4.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/ z451,1232[M+H] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C21H23O11] + 451,1235(Δ=-

+:47 3,10 54 (Δ=-4,2ppm).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z449,1088[M-

CTPT:C21H22O11.M450.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.5.

Chấtdạngbộtmàuvàng.Nhiệtnóngc h ảy17 0- 1 75 o C.Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/ z433,1131[M+H] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C21H21O10] + :433,1129(Δ=-

0,4ppm).CTPT:C21H20O10.MC2.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR

+,t í n h toánlýthuyếtc h o c ô n g t h ức[C15H11O7] + :303,0499(Δ=-0,3ppm).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z301,0356[M-H] - ,tínhtoánlý

D thuyếtchocôngthức[C15H9O7] - :301,0354(Δ=-0,7ppm).CTPT:C15H10O7.M 302.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.6.

Chấtdạngtinhth ểhìnhkimmàuvàn g Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/ z 4 3 1 , 1 3 3 8[M+H] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C22H23O9] + :431,1337(Δ=- 0,2ppm).CTPT:C22H22O9.M = 4 3 0 Sốliệup h ổ 1 HN M R ( 6 0 0 M H z ) và 1 3 CN M R

Chấtdạngdạngdầukhôngmàu.Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z267,1241[M-

M &8.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.8.

+,t í n h t o á n l ý t h u y ết chocô ng t h ức[C 13 H21O3] + :225,1485(Δ=0ppm);m/ z247,1302[M+Na] + ,tínhtoánlýt h u y ếtchocôngthức[C13H20O3Na]

+:247,1305(Δ=+1,2ppm).CTPT:C13H20O3.M "4.Số liệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.9.

Chấtrắnmàutrắng.Độquaycựcriêng[] 25: +218(c=0,1MeOH).Phổ( + ) - HR-ESI-MS:m/z225,1484[M+H]

+,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[ C13H21O3] + :225,1485(Δ=+0,4ppm);m/ z247,1307[M+Na] + ,tínhtoánlýthuyếtc h o côngthức[C 13 H20O3Na] + :247,1305(Δ=- 0,8ppm).CTPT:C13H20O3.M"4.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):x emBảng4.10.

Chấtdạngkeokhôngmàu.Độquaycựcriêng[ ] 25 : +10,7(c=0,1,C H C l3).P hổ( + ) - H R - E S I - M S :m/z2 3 7 , 1 8 4 9 [ M + H ] + ,tínht o á n l ý t h u y ết chocô ng t h ức[C 15 H25O2] + : 237,1849(Δ=-0 ppm);m/z259,1671[M+Na]

0,7ppm).CTPT:C15H24O2.M= 236.Số liệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.11.

1 , MeOH).Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/z455,3521[M+H]

E4.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.12.

1 , MeOH).CTPT:C30H48O3.ME6.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR

3.2.1.16 HợpchấtSL16:7α-Methoxy-stigmast-5-en-3β-ol(Schleicheol2)

- 45,0(c=0,1, MeOH).CTPT:C30H52O2.MD4.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR

- 18,4(c=0,1, MeOH).PhổECD(MeOH)θ(λnm)mdeg:+0,78(243),+0,43(291).Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/z 361,1659[M+H] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C20H25O6] + :361,1646(Δ=-3,6ppm);m/ z383,1465[M+Na] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C20H24O6Na]

+:378,1911(Δ=1,8ppm).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z359,1502 [M-H] - ,tính toánlýthuyếtchocôngthức[C20H23O6] - :359,1500(Δ=-

0,6ppm).CTPT:C20H24O6.M 60.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):x emBảng4.15.

- 24,8(c= 0,1,MeOH).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z421,1140[M-

H] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C 20 H21O10] - :421,1140(Δ=0ppm);m/ z457,0894[M+Cl] - ,tínhtoánlýthuyếtc h o côngthức[C20H22O10Cl] - :457,0907(Δ=- 2,8ppm).CTPT:C20H22O10.MB2.

Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.16.

0,1,MeOH).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z453,1029[M-H] - ,tínhtoánlý thuyếtchocôngthức[C 20 H21O12] - :453,1028(Δ=+0,2ppm).CTPT:C20H22O12.ME 4.Sốliệu phổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.16.

Chấtdạngbộtvôđịnhhình.PhổECDkhôngchohiệuứngCotton.Phổ(+)-HR- ESI-MS:m/z363,1803[M+H]

=+0,5ppm).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z361,1657[M-

H] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthứcC20H25O6:361,1657(Δ=0ppm);m/ z397,1412[M+Cl] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C20H26O6Cl] - :397,1423(Δ=-

2,8ppm).CTPT:C20H26O6.M = 3 6 2 Sốliệup h ổ 1 HN M R ( 5 0 0 M H z ) và 1 3 CN M R (

LoàiS.bullockii

3.2.2.1 HợpchấtSP1:SyzybullosideA(2α,3β,6α-trihydroxyurs-12,20(30)-dien-28- oicacid28-O-β-D-glucopyranosylester)(hợpchấtmới)

[] 25 :+27,6(c=0,05,MeOH).IR(KBr):νmax(cm -1)3404,2927,1734,1646,1 0 7 0

Phổ( - ) - H R - E S I - M S :m / z 6 8 3 , 3 5 6 3[M+ C l ] - ,t í n h t o á n l ý t h u y ếtc h o c ô n g t h ức[C 36 H56O10Cl] - :683,3 567(Δ=+0,6ppm).CTPT:C36H56O10.Md8.Sốliệuphổ 1 HNMR(500MHz)và 13 CNM R(125MHz):Bảng4.18.

3.2.2.2 Hợpc h ấtS P 2 : S y z y b u l l o s i d eB (2α,3β,6α-trihydroxyurs-12-en-28- oica c i d 2 8 - O - β-D-glucopyranosylester)(hợpchấtmới)

1069.Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/ z685,3726[M+Cl] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C 36 H58O10Cl] - :685,3714(Δ=-

1,7ppm).CTPT:C36H58O10.Me0.Sốliệuphổ 1 HNMR(500MHz)và 13 CNMR(125MHz):xemBảng4.19.

3.2.2.3 Hợpc h ấtS P 3 : SyzybullosideC (2α,3β,6α-trihydroxylup-20(29)-en-28- oica c i d 28-O-β-D-glucopyranosylester)(hợpchấtmới)

[ ] 25 :+7,5(c=0,05,MeOH).PhổIR(KBr):νmax( c m -1)3395,2931,1734,1 6 4 5 , 1070.Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/ z685,3716[M+Cl] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C 36 H58O10Cl] - :685,3714(Δ=-

0,3ppm).CTPT:C36H58O10.Me0.Sốliệuphổ 1 HNMR(500MHz)và 13 CNMR(125M Hz):xemBảng4.20.

3.2.3.2 Hợp chất SP4: Syzygiumursanolide D (2α,3β,6β,23-tetrahydroxyurs-

Chấtdạngbộtkhôngmàu.Độquaycựcriêng[] 25: +23,4(c=0,05,M e O H ) PhổI R(KBr):νmax3 4 1 2 ,1732,1732,1646,1071cm -1 Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z

699,3511[M+Cl] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C36H56O11Cl] - :699,3517(Δ+0, 8ppm).C T P T : C36H56O11.M= 66 4 S ốliệup hổ 1 HNM R (500 MHz) và 1 3 CN M

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhkhôngmàu.CTPT:C36H58O11.Mf6.Dữliệuphổ 1 HN MR(500MHz)và 13 CNMR(125MHz):xemBảng4.22.

3.2.2.6 Hợpc h ấtS P 6:2 α,3β,6β,23-Tetrahydroxyurs-12-en-28-oica c i d 2 8 - O - β-D- glucopyranosyl ester

Chấtdạngbộtmàutrắng.CTPT:C36H58O11.Mf6.Sốliệuphổ 1 HNMR( 5 0 0 MHz)và 13 CNMR(125MHz):xemBảng4.23.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắng.CTPT:C17H20O10.M84.Sốliệuphổ 1 H NMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.24.

Chấtcódạngtinhthểkhôngmàu.CTPT:C14H16O9.M28.Sốliệuphổ 1 HNMR( 600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.25.

Chấtcódạngtinhthểhìnhkim.CTPT:C21H20O13.MH0.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.25.

175 o C.CTPT:C19H30O8.M86.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):x emBảng4.26.

24,6(c=1,0,MeOH).CTPT:C 13 H24O4.M = 2 4 4 Sốliệup h ổ 1 HN M R ( 6 0 0 M H z ) v à 1 3 CNMR( 1 5 0

1HNMR(500MHz)và 13 CNMR(125MHz):xemBảng4.28.

NMR( 50 0MHz)và 13 CNMR(125MHz):xemBảng4.28.

Chấtdạngbột.CTPT:C21H24O10.MC6.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CN MR(150MHz):xemBảng4.29.

192 o C.CTPT:C15H14O7.M06.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz): xemBảng4.30.

157 o CCTPT:C 8 H8O5.M4.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.31.

LoàiS.attpopeuense

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhkhôngmàu.Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/ z419,1337[M+H]

+,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C21H23O9] + :419,1337(Δ=0ppm);m/ z4 4 1 ,1 1 5 8[M+Na] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C21H22O9Na] + :441,1156(Δ -0,5ppm).CTPT:C21H22O9.MA8.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR

3.2.3.2 Hợp chất SA2: Syzyceroside B (muối natri của 6′

Chấtd ạngb ộtvôđ ị nhh ì n h m à u t r ắng.P h ổ( + ) - H R - E S I - M S :m / z 6 1 5 , 1 0 9 1[ M + N a ] +

:C28H25O13Na.MY2.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắngngà.Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/ z571,1462[M+H]

+,tínhtoánlýthuyếtchocôngthứcC28H27O13:571,1446(Δ=+0,7ppm);m / z 5 9 3 , 1 2 7 1[ M + N a ] + ,t í n h t o á n l ý t h u y ếtc h o c ô n g t h ức[C28H26O13Na]

+:593,1266(Δ=-0, 8ppm).Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z569,1304[M-

CTPT:C28H26O13.M570.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.33.

3.2.3.4 Hợp chất SA4: Syzyceroside D (4′-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→6)- glucopyranosyl]oxy- 2′-hydroxy-6′-methoxydihydrochalcone)(hợpchấtmới).

Chấtdạngbộtvôđịnhh ìn hk hô ng màu.Phổ(-)-HR-ESI-MS:m / z 5 9 5, 1 9 9 5[M-

H] - ,t í n h t o á n l ý t h u y ếtc h o c ô n g t h ức[C28H35O14] - :5 9 5 , 2 0 3 2 ;m / z 6 3 1 , 1 7 7 8[M+Cl] -, tínhtoánl ý thuyếtchocông thức[C28H36O14Cl] - :631,1799.Phổ(+)-HR- ESI-MS:m/ z614,2438[M+NH4] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C28H40O14N] + :614,2435.CTPT:

C28H36O14.MY6.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR

=0,8,MeOH).Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/z419,1337[M+H]

[C21H23O9] + :419,1337(Δ=0ppm).CTPT:C21H22O9.MA8.Sốliệu phổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.35.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.Phổ(-)-HR-ESI-MS:m/z373,1294[M-H] - , tínhtoán lýthuyết chocông thức[C20H21O7] - : 373,1293(Δ=- 0,2ppm);m/ z409,1060[M+Cl] - ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức[C20H22O7Cl] - :409,1060(Δ=0ppm).C

TPT:C20H22O7.M74.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.CTPT:C28H24O16.Ma6.Số liệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.36.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.Phổ(+)-HR-ESI-MS:m/ z60 3,09 71[M+H] + ,tínhtoánlýthuyếtchocôngthức:

[C27H23O16] + :603,0981(Δ=+1 ,6 ppm) Phổ( - )- HR - ES I- MS :m / z 60 1, 0 83 7[M- H] - ,tínhtoánlýt h u y ếtchocôngthức[C27H21O16] - :601,0835(Δ=-

0,3ppm).CTPT:CTPT:C27H22O16.M`2.Số liệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.37.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.CTPT:C21H20O12.MF4.Sốliệuph ổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.38.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.CTPT:C21H20O13.MH0.Sốliệuph ổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.39.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàn g CTPT: C21H20O11.MD8.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.40.

Chấtdạngbộtvôđịnhhìnhmàu vàn g C T P T : C20H18O11.MC4.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.40.

3.2.3.17 Hợp chất SA17: Ellagic acid 3,3’,4’-tri-O-methyl ether 4-O-β-D- glucopyranoside.

Chấtd ạngt i n h t h ểm à u t r ắng.Phổ( + ) - H R - E S I - M S :m / z 5 0 7 , 1 1 3 4[M+H]

+:524,1399(Δ=+ 0, 7 p p m ) ;m / z 5 2 9 , 0 9 7 2[ M + N a ] + ,t í n h t o á n l ý t h u y ếtc h o c ô n g t h ứcC 23H22O13Na:529,0953(Δ=-3,6ppm).Phổ(-)-HR-ESI- MS:m/z541,0753[M+Cl] - ,tínhtoánlý thuyếtchocôngthứcC23H22O13Cl:541,0754(Δ=+0,2ppm).CTPT:C23H22O13.M

P6.Sốliệuphổ 1 HNMR(600MHz)và 13 CNMR(150MHz):xemBảng4.42.

KếtquảthửhoạttínhứcchếsựsảnsinhNOcủacáchợpchấtphânlậpđược.46 1 HoạttínhứcchếNOcủacáchợpchấtphânlậptừloàiS.cerasiforme

HoạttínhứcchếNOcủacáchợpchấtphânlậptừloàiS.bullockii

Hợpchất %tếbàos ốngsút # IC 50 (àM) Hợpchất %tếbàos ốngsút # IC 50 (àM)

SP9 97,43 11,95 ± 0,82 L-NMMA a 86,76 33,8 ± 2,6 a đối chứngdương, # ở nồngđộ100àM

Hợpchất %tếbàos ống sút # IC 50 (àM) Hợpchất %tếbàos ống sút # IC 50 (àM)

HoạttínhứcchếNOcủacáchợpchấtphânlậptừloàiS.attopeuense

4.1.1.1 HợpchấtSL1:5,7-Dihydroxy-2-isopropyl-6,8-dimethyl-4H- chromen-4-one(hợpchấtmới)

HợpchấtSL1thuđượcdướidạngtinhthểhìnhkimmàuvàngnhạt.Trênphổkhốilượn gphângiảicaoHR-ESI-MScủahợpchấtSL1xuấthiệnpiciongiảphântửtạim/ z249,1128[M+H] +(ph ổiondương)vàm/z247,0975[M-H] -

(phổionâm),kếthợpv ớid ữkiệnp h ổ 1 3 CN M R v à H S Q C c h o p h é p x á c đ ị nhc ô n g t h ứcp h â n t ửC 14 H16O4.Phổ 13 CNMRvàHSQCchothấycótínhiệucộnghưởngcủa14nguyê ntửcarbontrongđócó4nhómmethyl(tạiδ C 2 0 , 5x2,8,0,và7,8),2nhómmethine(δ C

34,6và105,8)và8carbonbậc4(1nhómcarbonyl,δ C184,8),6carbonvòng thơm

(δ C1 6 1 , 6 ,157,7,154,9,108,5,105,0,và103,2)và1carbonolefintạiδ C1 7 6 , 4 TrênphổHSQ C,tínhiệuprotoncủacác nhómmethyltạiδ H1 , 3 6(6H,H-2’vàH-3’), 2,11(6-CH3)và2,24(8-

CH3)tươngtácvớicarbontươngứngtạiδ C2 0 , 5 ,7,8và8,0.Haip r o t o n methinetạiδ H6.07( H-3)vàδ H 2.96(H-

1′)cótươngtácHSQCvớicarbontươngứnglàδ C1 0 5 , 8và34,6.Hainhómmethylxuấth iệndướidạngtínhiệuđôitạiδ H1 , 3 6(6H,d,J=6,6Hz)cùngvớitínhiệunhómmethine(δ H2 , 9 6 , sept.)chothấysựcómặtcủanhómisopropyl[71].DữliệuphổNMRcủahợpchấtSL1(Bản g4.1)c h o t h ấyc ó c ó s ựt ư ơ n g đ ồ ngv ớid ữliệuc ủah ợpc h ất5 - h y d r o x y - 7 - m e t h o x y - 2 - isopropyl-8-

ThànhphầnhóahọcvàhoạttínhứcchếsựsảnsinhNOcủaloàiS

XácđịnhcấutrúchóahọccáchợpchấtphânlậptừloàiS.cerasiforme

4.1.1.1 HợpchấtSL1:5,7-Dihydroxy-2-isopropyl-6,8-dimethyl-4H- chromen-4-one(hợpchấtmới)

HợpchấtSL1thuđượcdướidạngtinhthểhìnhkimmàuvàngnhạt.Trênphổkhốilượn gphângiảicaoHR-ESI-MScủahợpchấtSL1xuấthiệnpiciongiảphântửtạim/ z249,1128[M+H] +(ph ổiondương)vàm/z247,0975[M-H] -

(phổionâm),kếthợpv ớid ữkiệnp h ổ 1 3 CN M R v à H S Q C c h o p h é p x á c đ ị nhc ô n g t h ứcp h â n t ửC 14 H16O4.Phổ 13 CNMRvàHSQCchothấycótínhiệucộnghưởngcủa14nguyê ntửcarbontrongđócó4nhómmethyl(tạiδ C 2 0 , 5x2,8,0,và7,8),2nhómmethine(δ C

34,6và105,8)và8carbonbậc4(1nhómcarbonyl,δ C184,8),6carbonvòng thơm

(δ C1 6 1 , 6 ,157,7,154,9,108,5,105,0,và103,2)và1carbonolefintạiδ C1 7 6 , 4 TrênphổHSQ C,tínhiệuprotoncủacác nhómmethyltạiδ H1 , 3 6(6H,H-2’vàH-3’), 2,11(6-CH3)và2,24(8-

CH3)tươngtácvớicarbontươngứngtạiδ C2 0 , 5 ,7,8và8,0.Haip r o t o n methinetạiδ H6.07( H-3)vàδ H 2.96(H-

1′)cótươngtácHSQCvớicarbontươngứnglàδ C1 0 5 , 8và34,6.Hainhómmethylxuấth iệndướidạngtínhiệuđôitạiδ H1 , 3 6(6H,d,J=6,6Hz)cùngvớitínhiệunhómmethine(δ H2 , 9 6 , sept.)chothấysựcómặtcủanhómisopropyl[71].DữliệuphổNMRcủahợpchấtSL1(Bản g4.1)c h o t h ấyc ó c ó s ựt ư ơ n g đ ồ ngv ớid ữliệuc ủah ợpc h ất5 - h y d r o x y - 7 - m e t h o x y - 2 - isopropyl-8- o n e [71].

Hình4.2.Phổ(+)-HR-ESI-MScủahợpchấtSL1

Hình4.3.Phổ(-)-HR-ESI-MScủahợpchấtSL1 Bảng4.1.SốliệuphổNMRcủahợpchấtSL1

8 103,2 - 8-CH3 8,0 2,24(s) a ĐotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz

2thôngquaphântíchdữliệuphổHMBC,vớisựxuấthiệntươngtácgiữaprotonH-2′vàH-3′ (δ H1 ,3 6 )vớiC-2 (δ C1 7 6 , 4 ) / C -1′(δ C3 4 , 6 ) , g iữa H-1′(δ H2 , 9 6 )vớiC-2 và C-3(δ C1 0 5 , 8 ) , v à g iữa H-3 (δ H6,07)v ớiC - 4 (δ C184,8)/C-2/C-

9(δ C1 5 4 ,9 ) Từnhữngphântíchdữliệuphổởtrên,hợpchấtSL1đượcxácđịnhlà5,7- di h y d r ox y - 2 - is o p ro py l - 6, 8 - d im e t h y l - 4Hchromen-4- one.Đâylàmộthợpchấtmới.

4.1.1.2 Hợp chất SL2: 5,7-Dihydroxyflavanone 7-O-β-D-(6′′-O- galloylgl ucop yran osid e) (hợpchấtmới)

HợpchấtSL2thuđượccũngởdạngtinhthểhìnhkim,màuvàngnhạt.Côngthứcp hântửcủahợpchấtSL2làC28H26O13đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốiphângiảic a o H R - E S I -

M S d ựat r ê n s ựx u ấth i ệnc ủap í c iongiảp h â n t ửt ạim / z 5 7 1 , 1 4 4 3[M+H] +và m/ z569,1307[M-

[δ H7,50(2H,d,J=8,4Hz),7,42(2H,t,J=8,4Hz),7,37(1H,t,J=8,4Hz)],haitínhiệu doublettạiδ H6 , 1 5và6,20(mỗitínhiệu1H,d,J meta= 1,8Hz)tươngứngvớiH-6vàH- 8,mộttínhiệuprotoncủanhómmethinecónốivớinguyêntửoxycódạngdoubletdoublettạ iδ H5,63(dd,J,4,3 ,0 Hz,H-

2),vàhaiprotoncủanhómmethylenelaihoásp 3 tạiδ H2 , 8 3(dd,J,8,3 , 0 Hz,H eq -

3).Ngoàiracòncócáctínhiệucủamộtphântửđườngglucosevàmộtvòngbenzenet hế4vịtrícótínhđốixứngtrụcbậchai(nhánhgalloyl).Protonanomerđượcnhậnbiếttạiδ H5,09

′),haiprotonvòngthơmcủanhánhgalloyltạiδ H6 , 9 4(2H,s).Trênphổ 13 CN M R vàHSQC củaSL2xuấthiệntínhiệucủa28carbon,baogồm15carboncủaflavanone a g l y c o nyl(C=O)tạiδ C1 9 7 , 0vànhómcacboxylatetạiδ C1 6 5 , 8tươngứngvới

′củaphầngalloyl.DữliệuphổNMRcủaSL2(Bảng4 2 ) g ầng i ốngv ớid ữliệuc ủah ợpc h ấtp i n o c e m b r i n - 7-O-β-D- g l u c o p y r a n o s i d e (SL3)chỉkháclàhợpchấtSL2cóthêmnhómgalloyl.Dođó,c óthểdựđoánhợpchấtSL2cócùngkhungaglyconevớihợpchấtSL3[72].

Phầnaglycone códạngkhungcủamộtflavanoneđượcxác địnhbởicáctínhiệu t ư ơ n g táctrênphổHMBCgiữa H-2(δ H5,63)v ới C-3(δ C42,0)/C-4(δ C1 9 7 , 0 ) / C -1’(δ C13 8 ,7 )/

1 0 Hằngsốtươngtáclớn(J 2,3=11,4 Hz)giữaH-2vàH ax -3chothấyH-

2theohướngequatorial[73,74].Trongtựnhiênphầnlớncácflavanonec ó nhómph enylliênkếtvớiC-2địnhhướngα/ equatorial[75],dođócấuhìnhtuyệtđốicủatrungtâmlậpthểC-

2đượcdựđoánlà2S.ĐiềunàyđượckhẳngđịnhchínhxácnhờphântíchphổCD.PhổCD củaSL2xuấthiệnhiệuứngCottonâmtại290n m (-

Hình4.9.Phổ(+)-HR-ESI-MScủahợpchấtSL2

Hình4.10.Phổ(-)-HR-ESI-MScủahợpchấtSL2

(δ C1 6 5 , 8 ) ViệcgáncácgiátrịphổNMRcủahợpchấtSL2đượcthựchiệnmộtcáchchínhx ácnhờphântíchphổ 1 H- 1 HCOSY.Trênphổ 1 H-

Nhữngphântích nê utrêncho th ấynhánhđường g lu cose đã b ịthếtạiC-6′

′đ ã cộnghưởngvềphíatrườngthấphơn(độdịchchuyểnhóahọccaohơn).Liênkếtglyc os i d e g i ữađ ư ờ ngg l u c o s e v ớiC -

7 c ó d ạngβ đ ư ợ cx á c địnhdựav à o h ằngs ốtươngtác lớn(J 1′′,2′′=7,8Hz) của proton anomertạiδ H5 , 0 9 T h ê mvào đó, sựcómặtc ủađườngD- glucosetronghợpchấtSL2cũngđượcxácđịnhbằngcáchthủyphâna c i d [66],sảnphẩ mthuỷphânsaukhiđiềuchếbằngsắckýlớpmỏngđượcđemđogócq ua y c ựcch o t h ấyc ó g i á trịd ương( x e m m ục2 2 2 7 ) D o đ ó , h ợ pc h ấtS L 2 đ ư ợ cxácđịnhlà5,7- dihydroxyflavanone 7-O-β-D-(6′′-O- galloylglucopyranoside) Đ â y làhợpchấtmới.

3,45(dd,12,0, 1,8) a đotrongDMSO -d 6 , b 150M Hz, c 600MHz,δ # s C ốliệuc ủahợpch ấtpinocem brin-7-O-β-D-glucopyranosideđo tronghỗnhợpCDCl 3 vàCD 3 OD[72]

HợpchấtSL3thu đượcdưới dạngchấtrắn,màutrắng.Côngthứcphân tửcủahợpchấtSL3làC21H22O9đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốiphângiảicaoHR-ESI- MSd ựatrên sựxuất hiện của píc iongiảphântửtạim/z419,1340 [M+H] + Phổ 1 H NMRc ủaSL3cũngchothấysựxuấthiệntínhiệucủam ộtvòngbenzene thếmo no [ δ H7 , 5 3(2H,d,J=8,4Hz,H-2′,H-6′),7,42(2H,t,J=8,4Hz,H-3′,H-5′),7,39(1H,t,

J=8,4Hz,H-4′)],hai tínhiệudoublettạiδ H6 ,1 5và6,20tươngứngvới2protoncủan h ó mmethinethuộcvòngthơ mthứ2(H-6vàH-

8),mộttínhiệuprotoncủanhómmethi n e liênkếtvớioxydạngdoubletdoublettạiδ H5 , 6 5(dd,J,4Hz,3,0Hz,H-

2)vàhaiprotonlaihóasp 3 củanhómmethylenetạiδ H2 , 8 5(dd,J,4,3,0Hz,H eq -

J=7,2Hz).HằngsốtươngtáclớnJ=7,2Hzkhẳngđịnh liênkếtβcủa đường glucose. Hơnnữatrênphổ 13 C

NMRc ủaSL3cũ ngxuấthiệnt ín hiệuc ủa21car bo n, b ao gồm15carbon đặ t trưng củaflavano ne aglycone, 6carbon củađườ nghexose và1nhómcarbonyl(C=O )tạiδ C1 9 6 , 7 C ũ n g g i ố n g n h ư h ợ pc h ấtS L 2,h ằngs ốt ư ơ n g t á cJ 2,3l ớn( 1 2 , 0 H z ) giữaprotonH-2(δ H5 , 6 5 )vàH ax -3(δ H3 , 3 2 )chothấyH-

2địnhhướngaxial.TừdữliệuN M R củaSL3(Bảng4.3)kếthợpsosánhvớidữliệucủahợp chấtđãbiếtpinocembrin-7-O-β-D- glucopyranoside(phânlậptừloàicâyEchiochilonfruticosum

5,41(dd,13,8, 3,6) 77,96 78,7 5,40(dd,13,2, 3,0) 3,06(dd,17,4, 13,8) 42,26 43,4 3,03(dd,16,8, 13,2) 2,76(dd,17,4, 3,6) 2,86(dd,16,8, 3,6)

[ 7 2 ] c h o t h ấys ựp h ù h ợp.V ì v ậyhợpc h ấtSL3đ ư ợ cx á c đ ị nhl à pinocembri n-7-O-β-D-glucopyranoside.

C16H14O4đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốiphân giảicaoHR-ESI-MSdựatrên sựxuấth i ệnc ủap í c i o n g i ảp h â n t ửtạim / z 2 7 1 , 0 9 6 4[ M + H ] + ,2 6 9 , 0 8 1 9 [M- H] -v à 305,0575[M+Cl] -

C C H a,d (độbội, JHz) δ * C b,c H b,d (độbội, J Hz) l 3 c 150MHz, d 600MHz,δ C sốliệucủahợpchất(±)- strobopininđotrongsốliệucủahợpchấtdemethoxymatteucinolđotrongCDCl 3 [79]

Phổ 1 HNMRcủaSL4chothấysựxuấthiệncủacáctínhiệuvòngthơmthế mon o t ạiδ H7 , 5 0 ( 2 H ,d,J =8,0Hz,H-2′, H-6′),7,42 (2H, t,J =8,0Hz,H-3′,H-5′),

7,37(1H,t,J=8,0Hz,H-4′)(vòngB),mộttínhiệusingletcủaprotonởvòngthơm thứ2tạiδ H6 , 0(H-8)

(vòngA),mộttínhiệuprotoncủanhómmethineliênkếtvớioxydạngdoubletdoublettạ iδ H5 , 6 5(dd,J,4,3,0Hz,H-2)và haiprotonlai hóasp 3 củanhómmethylenetạiδ H2,85(dd,J,4,3,0Hz,H eq -

3)và3,32(dd,J=1 7 ,4 ,12,0 Hz, H ax -3) (vòng C) Trên phổ 13 CNMR xuất hiệntín hiệucủa nhóm

C=Otạiδ C1 9 7 , 4 ,dođóhợpchấtSL4cókhungflavanonegiốngnhưSL3.Tuynhiên,trênphổN MRcủahợpchấtSL4khôngthấyxuấthiệntínhiệucủađườngnhưSL3,thayv à o đ ó l à s ự x u ấth i ệnthêmm ộtt í n h i ệus i n g l e t t ạiδ H1,97/ δ C7,0đ ặ c t r ư n g c ủanhómmethylgắnvào vòngthơm.Từdữliệuphổ 1 Hvà 13 CNMR(Bảng4.4)củahợpchấtSL4kếthợpsosánhvớidữli ệuphổcủahợpchấtstrobopinin[78]chothấycósựtươngđồng.Dođócóthểkhẳngđịnh cấutrúccủahợpchấtSL4phânlậpđượcchính làhợpchấtstrobopinin, hợpchấtđãđ ượ cphânlậptừloàiS.samarangense n ă m2004[35].

HợpchấtSL5thuđượcdướidạngtinhthểh ì n h kim,màuvàngnhạt.Côngth ứcphântửcủahợpchấtSL5làC17H16O4đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốiphângiảic a o H R -

E S I - M S d ựat r ê n s ựx u ấth i ệnc ủap í c i o n giảp h â n t ửt ạim / z 2 8 5 , 1 1 2 5[M+H]

H] - Trênphổ 1 HNMRcủaSL5tươngtựSL4cũngxuấthiệntínhiệubộ5protoncủavòngt hơmthếmonotạiδ H7 , 4 7(2H),7,43(2H),7,25(1H) , tínhiệudoubletdoubletcủa nhómmethine liênkếtvớioxytạiδ H5 , 4 1(dd,J

=1 3 , 8 ,3,6Hz)và2tínhiệucủa2protongerminaltạiδ H3 , 0 3(1H,dd,J,8,13,2H z ) và 2,86(1H,dd,J,8,3,6Hz).Bêncạnhđólàsựxuấthiệncủa2tínhiệuđơncủanhóm methyltạiδ H2 , 0 7(3H2,s).Trênphổ 13 CNMRcủahợpchấtSL5chỉrõtínhiệucủa15carb onđặctrưngchokhungflavanonevới1tínhiệucarbonởv ù n g t r ư ờ ngrấtt h ấpđ ặ ct rưn gc h o n h ó m c a r b o n y l t ạ iδ C196,3và1 t í n h i ệuc ủacarbonlaihóasp 3 l i ê nkếtvớioxytại δ C7 8 , 7 ;1carbonnhómmethylenetạiδ C4 3 , 4v à haicarbonnhómmethylởtrườngcaoδ

C7,6và6,9.Khisosánhphổ 1 3 CNMRc ủaSL5(Bảng4.4)vớiphổcủahợpchấtdemeth oxymatteucino lđãđượcbáocáo trong[79]chothấysựtươngđồngvềgiátrị.Hơnn ữatínhiệuphổ 1 HNMRcũngtươngđốigiốngnhauvềđộdịchchuyểnhóahọccũngnh ưhằngsốtươngtácJ.Từkếtquảphântíchphổvàsosánhvớitàiliệuthamkhảo[79],hợpchất

HợpchấtSL6thuđượcdạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.Côngthứcphântử củahợp chấtSL6C 21H22O11đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốiphângiảicaoHR-ESI-

MSd ựat r ê n s ựx u ấth i ệnc ủap í c i o n g i ảp h â n t ửtạim / z 4 5 1 , 1 2 3 2[ M + H ] + ,m / z 449,1088[M-H] - ,m/z473,1074[M+Na] +

6′′ 62,1 62,3 3,88(d,11,4),3,55 (d,11,4) a đotrongCD 3 OD b 150MHz, c 600MHz,δ # sốliệucủahợpchất2-hydroxyaringenin7-O- βglucosideđotrongCD 3 OD[80]

Trênphổ 1 HNMRcủaSL6xuấthiệntínhiệuđặctrưngcủavòngthơmthế2n h ó m th ếcótính đốixứngtạiδ H7 , 0 1(2H,d,J=7,8 Hz)và6,58(2H,t,J

=7,8Hz),t í n hiệusingletcủa2protonmethylenelaihoásp 3 tạiδ H3 , 1 0(2H,s),haitínhiệutại δ H5 , 9 2(d,J=1,2Hz)và6,04(d,J=1,2Hz)đượccholàcủa2proton(H-6vàH-

8)ởvịtrímetasovớinhaudohằngsốtươngtácnhỏJ meta= 1,2Hz,tínhiệutạiδ H4 , 8 4 làcủapr ot on an om er x á c đị nhs ực ó m ặtcủađơ nvịđ ư ờ ng.Khá c v ới3hợpchấtflava noneS L3 -

SL 5,h ợpchấtSL6kh ôn gc ò n x uấth i ệnt ín h i ệup ro to n c ủanh óm methinetạiC- 2vàtrênphổ 13 CNMRtínhiệucủacarbonnàyxuấthiệnởtrườngδ C1 0 7 , 6 ,thấphơnhẳnsovớ ikhoảngδ C7 7 , 6–80,4ppmchứngtỏC-

2làcarbonbậc4v à đãgắnthêm1nhómhydroxyl.TrênphổcarboncủaSL6xuấthiệntí nhiệuđặct r ư n g c ủ an h ó m c a r b o n y l tạiv ù n g t r ư ờ ngr ấtt h ấpδ C1 9 6 , 6 ,t í n h i ệuc ủac a r b o n a n o m e r tạiδ C101,7ppmvàcáctínhiệucủaphầnđườngglucosetrongkh oảngδ C62,3-

78,3ppm.TừdữliệuphổNMRcủahợpchấtSL6(Bảng4.5)kếthợpvớisosánhdữliệuphổc ủahợpchất2-hydroxynaringenin-7-O-β-D- glucoside[81]chothấyc ó sựtrùngkhớp.Vìvậy,cóthểkếtluậnhợpchấtSL6là2- hydroxynaringenin-7-O-β -D- glucoside,h ợpch ấtn à y c ũ n g đã đ ư ợ cp h â n l ậpt ừr ễv à càn h l o à iB e r c h e m i a formo sananăm1995[81]vàtừquảcủaloàiChaenomelessinensis[80].

+.Trênphổ 1 HNMRcủahợpchấtSL7chothấysựcómặtcáctínhiệuđặctrưngcủavòn gthơmthếđốixứng2n h ó m thếgiốngSL6tạiδ H7,78(2H,d,J=8,4Hz),6,95(2H,d,J=8

,4Hz),2tínhiệudoubletkháctạiδ H6,22(1H,d,J=1,8Hz)và6,39(1H,d,J =1,2Hz) củav ò n g t h ơ m t h ế metakhác và 1tínhiệucủaproton anomertạiδ H5 , 4 0(d,J =1,2 ungflavonolgồm1carboncarbonylC=Otạiδ C1 7 9 , 6(C-4),2carbonlaihoá sp 2 l i ê n kếtoxytạiδ C1 5 9 , 2 ( C - 2 ) ,136,2(C-

6′′ 17,6 17,6 0,95(t,6,0) - - a đotrongCD 3 OD, b đotrongDMSO-d 6 , c 150MHz, * d 600MHz,δ C # sốliệucủahợpchấtkaempferol3-O- rhamnosideđotrongCD 3 OD[82],δ C sốliệucủahợpchấtquercitinđotrongDMSO-d 6 [83]

Vịtrínhómthếđườngtrên khung flavonolđượcxácđịnhlàởvịtríC-3 dođộdịchchuyểnhóahọctrườngcaohơnδ C1 3 6 , 2(C-3)sovớiδ C1 6 1 , 6(C-5),166,2(C-

7) , 161,6(C-1′).Địnhhướngliênkếtcủaphầnđườngnàylàα- rhmanosidedohằngsốtươngtác củ ap ro to na no me rn h ỏ(J=1 , 2Hz) D ữliệuph ổc ủahợpch ấtS L7 (Bảng4.6)hoàntoànphùhợpdữliệuphổcủahợpchấtkaempferol3-O- rhamnoside[82].Vìvậy,hợpchấtSL7đượcxácđịnhlàkaempferol3-O- rhamnoside(haycòngọilàafzelin[84]) Hợpchấtnàyc ũngđãđượ cphâ nlậptừc â y

5H10O7đ ư ợ cxácđịnhbằngkhốiphổphângiảicaoHR-ESI-MSvớipícion giảphântửtạim/z303,0500[M+H] + m/z301,0356[M-H] - Phổ 1 HNMRcủaSL8 xuấthiệntínhiệuđặctrưngcủa5protonvòngthơmtừδ H6 , 1 8 -

7,67.Trongđó,tínhiệucủa2protontạiδ H6 , 1 8(1H,d,J meta=1,8Hz,H-

6),6,40(1H,d,J meta=1,8Hz,H-8)vòngthơmAthế2nhómthếgiốngvớihợpchấtSL7;3tín hiệutạiδ H7,67(1H,d ,J=1,8Hz),6,88(1H,d,J ortho= 8,4Hz),7,54(1H,dd,J=1,8,8,4Hz)của1vò ng thơmkhác(vòng B);1tínhiệuprotonhydroxylxuấthiệntạiδ H1 2 , 4 8đượccholàgắnvớ iC-5và1tínhiệuyếu,rộngtạiδ H9,34làcủa3nhómhydroxylC-7,C-3′,C-

4 ′ [86,87].Trênphổ 1 3 CNMRxuấthiện15tínhiệuđặctrưngcủaflavonolgiốngn hưhợpc h ấtS L 7 với1 t í n h i ệuc ủan h ó m c a r b o n y l t ạiδ C17 5 ,9 ,2 t í n h i ệuc ủacarb o nbậc4laihoásp 2 l i ê nkếtvớioxytạiδ C1 4 6 , 9và135,8.TrênphổNMRcủahợpchấtSL8k hôngquansátthấytínhiệucủađườngnhưhợpchấtSL7,vìvậyhợpchấtSL8thuộcnhómhợ pchấtflavonolkhôngthếglycoside.DữliệuphổcủaSL8(Bảng4 6 ) đ ư ợ cs o s á n h vớid ữliệup h ổc ủahợpc h ấtq u e r c e t i n [ 8 3 ] c h o t h ấys ựt ư ơ n g đồng.Vìvậy,cóthểkếtluậnhợ pchấtSL8chínhlàquercetin.

H22O9đượcxácđịnhbằngphổkhốiphângiảicaoHR-ESI-MSvớimảnhiongiảphântửtạim/ z431,1338[M+H] + Trênphổ 1 HNMRcuảhợpchấtSL9xuấthiệntínhiệucủamộtvòngthơm thếmonotạiδ H8,19(2H,d,J=7,8Hz),7,56(2H,d,J =7,8Hz)và7,64(1H,t,J=7,8Hz)

(vòngB),mộttínhiệuđơntạiδ H6,56(1H,s)củaprotonvòngthơmthế5nhómthế(vòngA),tínhiệ ucủaprotonnhómmethoxytạiδ H3,89 (3H, s), mộtproton olefintạiδ H7,02(1H,s, H- 3)vàprotonanomertạiδ H4,75(d,J=9,6Hz).Trênphổ 13 CNMRvàHSQCchothấycáctínhiệuđặ ctrưngcủađườngglucosevớibộtínhiệutrongkhoảngδ C(61,3-82,0)/δ H(3,27-

4,75)vàtínhiệucủaproton anomertạiδ H4,75tươngứngvới carbon tạiδ C73,2chothấyhợpchấtSL9nàylàdẫnchấtC- monosaccharide.Điềunàyđượcgiảithíchlàdođộdịchchuyểnhóahọccủatínhiệutrênphổcar boncủaSL9nằmởphíatrườngcaoδ C73,2,khácsovớihợpchấtSL6thếO- glycosidecóđộdịchchuyểnhóahọcnằmởvùngtrườngthấpδ C101,7.HằngsốtươngtáclớnJ 1′′,2′

′=9,6Hzcủaprotonanomerδ H4,75chứngtỏliênkết củađườnglà dạngβ.Vịtríthếcủaphầntửđườngnàyđượcxácđịnhlàgắnvới C-

3,79 (dd,12,0,1,8) a đotrongDMSO-d 6 , b 150MHz, c 600MHz,δ # sốliệucủahợpchấtkaplaninđotrong(CD 3 ) 2 CO[88]

(δ H7,64)củavòngBtrongphầnflavononeaglycone.DữliệuphổcủahợpchấtSL9(Bảng4.7)đư ợcsosánhvớidữliệuphổcủahợpchấtkaplanin[88]chothấysựphùhợp.Vìvậy,cóthểkếtluậnh ợpchấtSL9chínhlàkaplanin.

Hợpc h ấ tSL10t h uđ ư ợ c ở d ạ n g d ầ u k h ô n g m à u , c ô n g t h ứ c p h â n t ử l à C 14 H20O5đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốiphângiảicaoHR-ESI-

Hình4.23.CấutrúchóahọccủaSL10vàchấtthamkhảoendoperoxide7aBảng4.8.Sốliệup hổNMRcủahợpchấtSL10vàhợpchấtthamkhảoendoperoxide7a a đotrongCD 3 OD b 150MHz, c 600MHz, # δ C sốliệucủahợpchấtendoperoxide7ađotrongCDCl 3 [89]

Trênphổ 1 HNMRcủaSL10xuấthiện6tínhiệusinglettạivùngtrườngcaotron gkhoảngδ H1 , 0 5 -

1 , 4 9ppmlàcủacácprotonnhómmethyl,mộttínhiệusingletc ủaprotonnhómolefinxuấth iệntạiδ H7 , 2 1(s).Trênphổ 13 CNMRcũngchothấy2 tínhiệuởvùngtrườngrấtthấpδ C2 1 2 , 9và200,0làcủa2nhómcarbonyl,2tínhiệucủacarbo nolefin(C=C)tạiδ C1 3 1 , 1và144,4;2carbonlaihóasp 3 liênkếtvớioxytạiδ C8 0 , 0và97,8;

2 7 , 0 ).KhisosánhdữliệuphổNMRcủahợpchấtSL10vớidữliệuphổNMRcủahợpchấttổn ghợpendoperoxide7a[89]chothấycósựtươngđồngở1phầncấutrúc.Điểmkhácbiệtở đ âylàh ợpc h ấte n d o p e r o x i d e7 a c ó1 n h ó m p h e n y l [δ C1 2 5 , 6 ,1 2 8 , 1 ( 2 C ) , 1 28 ,

4thayvì2nhómmethylnhưtr o n g hợpc h ấtS L 1 0,T ừk ếtq u ảp h ổN M R c ủaSL10v às o s á n h v ớihợpc h ấtend oper ox id e7 a [ 8 9 ]c ó t h ểx á c địnhc ấut r ú c h ó a họcc ủah ợpc h ấtSL10làendo pero xi de G3[90].Theotracứucủachúngtôi,đâylàlầnđầ utiênsốliệuphổN MR củahợpchấtendoperoxideG3đượccôngbố.

HợpchấtSL11thuđượcdạngbộtvôđịnhhình,côngthứcphântửC13H20O3đ ư ợ c xácđịnhbằngphươngpháp phổkhốilượngphângiảicaoHR-ESI- MSdựavàop í c iongiảphântửm/z225,1485[M+H] +và m/z247,1302[M+Na] +

Trênphổ 1 HNMR x u ấthiện4t í n hiệusinglet t ạ i vù ng tr ườ ng ca oδ H1,17( 3 H , s),1,40(23H,s),2,21(3H,s).Trongđónhómmethyltạiδ H2 , 2 1liênkếtvớin h ó m hútđiệnt ửlàmgiảmmậtđộchechắnnêncộnghưởngtừdịchvềphíatrườngthấphơnsovới3nhóm cònlại.Tínhiệu singlet củaprotonxuất hiện tại vùngtrườngthấpδ H5,85(s)làcủaprotonnhómmethineol ef in TrênphổHSQCvà 1 3 CNMRxuấthiệntínhiệucủa5carbonbậc4tạiδ C200,8(C=O),δ C211,5,120,0(carbon o l e f i n ) ,δ C7 2 , 4(carbonliênkếtoxy)vàδ C37,0;2nhómmethylene(CH2)tạiδ C4 9 , 9và49,7;4nh ómmethyl(CH3)tạiδ C2 6 , 5 ,29,3,30,8,32,3và1nhómmethinetạiδ C

- - 5,85(s) - 2,21(s) 1,17(s) 1,40(s) 1,40(s) a đotrongCD 3 OD b 150MHz, c 600MHz,δ # C sốliệucủahợpchấtgrasshopperketoneđotrongCD 3 OD[91]

2 0 0 , 8 (C-9)đãxácđịnhnhómmethylliênkếtvớiC=O(C-9),tươngtácgiữaH- 12(δ H1 , 4 0 ) / H - 1 1(δ H1 , 1 7 )vớiC-1(δ C3 7 , 0 ) /C-6(δ C1 2 0 , 0 ) /C-2(δ C4 9 , 9 )xácđịnh2 nhómmethylcùnggắntrên1carbon(C-1)vàtươngtácgiữaH-13(δ H1 , 4 0 )vớiC-5(δ C72,4)/C- 4(δ C4 9 , 7 ) /C-6(δ C1 2 0 , 0 )xácđịnhnhómmethylgắnvớicarbonbịoxyhó a (C-

4,24)vớiC-2(δ C4 9 , 9 ) /C-4(δ C4 9 , 7 ) /C-1/C-5đãxácđịnhvịtríliênkếtcủacarbono l e f i n C- 6/C-7và2nhómhydroxyltạiC-3vàC-

5.DữliệuphổNMRcủaSL11đượcso sánhvớidữliệuphổcủahợpchấtgrasshopperketone[9 1]chothấysựtrùngkhớp.Vìvậy,hợpchấtSL11đượcxácđịnhlàgrasshopperketone.

HợpchấtSL12thuđượcởdạngbộtmàutrắng,công thứcphântửlàC13H20O3đ ư ợ cxácđịnhbằngphổ khốilượngphângiảicaoHR-ESI- MSdựavàopíciongiảphântửm/z 225,1484[ M + H ] +và m/z 247,1307[M+Na]

+.Trên phổ 1 HNMRxuất hiện tínhiệucủaproton2nhómmethylgerminaltạiδ H1,03

1,26 (d,6,0) 1,03(s) 1,06(s) 1,93 (s) a đotrongCD 3 OD b 150MHz, c 600MHz, # δ C sốliệucủahợpchấtvomifoliolđotrongCD 3 OD[91]

3);4carboncủan h ó m methyltạiδ C18,20, 2 2 , 1 0, 22, 46, 2 3 , 1 2 ; 4 n h ó m methine tạ iδ C1 2 8 , 7 , 135,57,125,7,166,1chothấytronghợpchấtcóchứa2liênkếtđôi.Bêncạnhđ ó cũ ngxuấthiệntínhiệucủacarbonlaihóasp 3 liênkếtoxytạiδ C7 8 , 5 9và67,3.NốiđôiC-7/C-8 cócấuhìnhtransdohằngsốtươngtác 3 J HH=16,0Hz.Độquay cựcd ươngc ủahợpc h ấtSL12([] 25: + 2 1 8 ) p h ù h ợpvớig i á t r ịt ươngứ ngc ủa(+)- vomifoliol([] 25: +197, 8)

[92].TừnhữngphântíchphổNMR, phổkhốil ư ợ ngvàcácthôngsốvậtlýnêutrênc ủahợpchấtSL12kếthợpsosánhdữliệut ươngứngcủahợpchất (+)-vomifoliol[ 9 1 ] c ó thểkết luậnhợpc h ấtSL12chínhlà( + ) - vomifoliol(Bảng4.10).

Hợpc h ấ tSL13t h uđ ư ợ c ở d ạ n g k e o k h ô n g m à u , c ô n g t h ứ c p h â n t ử l à C 15 H24O2đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốilượngphângiảicaodựaHR-ESI-

+.CấutrúccủahợpchấtSL13đượcxác địnhbằng phổ 1 H, 13 CNMR, HSQC,HMBC.PhổHSQCđãxácđịnhcáccarbonliênkếttrựctiếpvớihydro(Bảng4.11).

Trênphổ 1 HNMRxuấthiện2tínhiệusingletcủanhómmethyltạiδ H1,13(3H ,s),1,09(3H,s),1tínhiệudoubletcủanhómmethylδ H0 , 9 8(3H,d,J=6,0Hz)l i ên kếtvớicarb onchứa1hydro;4tínhiệucủaprotonolefintạiδ H5 , 4 9(s)/

5,64(s),4 ,9 9 (m ), 5, 0 4 ( m) ; t í n hi ệuc ủa4 n h ó m m e t h y le n e t ạiδ H(2,86/2,30),

(2,55/2,26).Trênph ổ 1 3 CNMRxuấthiệntínhiệu tạiδ C206,1làcủa nhómc a r b o n y l , 3 nhómm e t h y l t ạiδ C26,8,2 7 , 2 , 2 0 , 6 , 4 c a r b o n o l e f i n tại1 1 9 , 7 , 1 5 5 ,4 , 142,8và130,4,1carbonbịoxyhóatạiδ C71,7.Trênphổ HMBCxuấthiệntư ơng tácgiữaH-2(δ H2 , 8 6 ,2,30)vớiC-1(206δ C,1)/C-3(δ C3 7 , 2 ) ,H-14(δ H5 , 4 9 ,

9(δ C2 8 , 9 ) , xácđịnhvịtrínhómmethyleneolefinliênkếtvớiC-10vànhómcarbonylởC- 1.Ngoàiracòn cótươngtác HMBC giữaH-8 (δ H1 , 3 4 ,2,18)vớiC-9(δ C2 8 , 9 ) / C -

1 0 (δ C1 5 5 , 4 ) /C-7(δ C5 6 , 9 ) /C-6(130,4).Các tươngtácHMBCnàyđãgợiýcấutrúcvòng10cạnhcủahợpchấtSL13.Vịtrícủac á c nhómt hếcũngđược xácđịnhbằngphổtươngtácHMBCgiữaH-13(δ H1 , 0 9 ) / H -1 2 (δ H1 , 1 3 )vớiC- 11(δ C7 1 , 7 ) / C - 7(δ C5 6 , 9 )chothấy2nhómmethylgắntrựctiếpvớiC-11tạothànhnhóm1- hydroxyl-methylethylvànhómnàyliênkếtvớiC-7củavòng.Nhómmethyl(CH 3 -

3(δ C3 7 , 2 ) CácdữliệuphổcủaSL13đượcs os á n h v ớidữliệup h ổtươngứ ngc ủahợpchấ tl i s te a g e r m ac r a n e c h o thấysựphùhợp[93].Vìvậy,hợpchấtSL13đượcxácđịnhlàlist eagermacrane,mộthợpchấtđãđượcphânlậptừloàiLitseavericillatanăm2003.

Hợpc h ấ tS L 1 4 t h uđ ư ợ c d ạ n g t i n h t h ể k h ô n g m à u , c ô n g t h ứ c h ó a h ọ c l à C 30 H46O3đượcxácđịnhbằngphổ khốiphângiảicaoHR-ESI-

MSdựavàopíciong i ả phântửm/z455,3521[M+H] + ,m/z472,3768[M+NH4] + và m/ z477,3398[M+Na]

+.T rênp h ổ 1 HN M R c ủ aS L 1 4 x u ấ th i ệ n c á c t í n h i ệ u đ ặ c t r ư n g c ủ a m ộ t triterp enethuộcnhómlupane,baogồm:6nhómmehylvớicáctínhiệusinglettạiδ H0 , 9 3 ,0,98,0,99,1

29đ ư ợ c xácđịnhtạiδ C1 5 0 , 4và109,7,nhómcarboxylxácđịnhtạiδ C1 7 9 , 5vàcarbonketon etạiδ C218,2(C-3).

(độbội, J = a đotrongCDCl 3 b 150MHz, c 600MHz,δ # sốliệucủahợpchấtbetulonicacidđotrongCDCl 3 [94]

CácdữliệuphổNMRcủahợpchấtSL14(Bảng4.12)đượcsosánhvớidữliệuph ổNMRcủahợpchấtbetulonicacid[94]chothấysựphùhợp.Dođócóthểkếtluậnhợpc hấtSL14chínhlàbetulonicacid,hợpchấtđãđượcphânlậptừloàiV i b u rn um aw abuki[96].

C giốngvớidữliệuphổtươngứngcủahợpchấtSL14ngoạitrừcarbon ketonetronghợpchấtSL14đượcthaythếbằngcarboncarbinolδ C76,3(C-3)

(Bảng4.13).ĐiềunàyđượckhẳngđịnhbằngphổHSQCvàHMBC.TrênphổHMBCxuấthiệnt ươngtácgiữaH3-23vàH3-24vàC-3(δ C76,3)/C-4(δ C37,5)/C-5(δ C49,1)

(độbội, J = a đotrongCDCl 3 b 150MHz, c 600MHz,δ # củahợpchất3-epibetulinicacidđotrongC 5 D 5 N[97]

Hơnnữa,độdịchchuyểnhoáhọccủa C-3vềphíatrườngcaohơn(δ C7 6 , 3 ) v àhằngsốtươngtácnhỏ(J=2,4-3,0Hz)đãxácđịnhđịnhhướngα/axialcủanhómh y d r o x y tạiC-3(hayđịnhhướngH-3làβ/ equatorial).Địnhhướngliênkếtnàykhácvớiđịnhhướngβ-OHtạicarbonC-

[97].TừdữliệuphổcủahợpchấtSL15kếthợpsosánhvớidữliệuphổtươngứngcủahợp chất3-epi-betulinicacid[97]cóthểkếtluậnhợpchấtSL15chínhlà3-epi-betulinicacid. 4.1.1.16 HợpchấtSL16:7α-Methoxy-stigmast-5-en-3β-ol(Schleicheol2)

HợpchấtSL16thuđượcdạngtinhthểhìnhkim.Trênphổ 1 HNMRxuấthiện6 tínhiệ uđặctrưngcủanhómmethyltừ0,66-

0,99trongđó2tínhiệusinglettạiδ H0 , 6 6(3H,s)và0,99(3H,s)làđặctrưngcủanhómmethy lliênkếtvớicarbonbậc4,3tínhiệuképcủanhómmethyltạiδ H0 , 9 3 ,0,82,0,84(mỗitínhi ệucủa3H,d,J=

Bảng4.14.SốliệuphổNMRcủahợpchấtSL16vàhợpchấtthamkhảo a,c a đotrongCDCl 3 , b 150MHz, c 600MHz,δ # sốliệucủahợpchấtschleicheols2đotrongCDCl 3 [98]

Hz),mộtnhómmethinecarbinoltạiδ H3 , 6 2(1H,m).Trênphổ 13 CNMRcũngthấyxuấthiệntínhi ệuc ủa30carbonbaogồmtínhiệucủa2carbonliênkếtđôitạiδ C146,1và120,8,2ca r bo n liênkếtvớioxytạiδ C7 1 , 4và73,9vàmộttínhiệucủanhómmethoxytạiδ C5 6 , 3 Dữliệup hổproton,carbonvàHSQC(Bảng4.14)đãgợiýSL16làhợpchất

7đ ư ợ c x á c đ ị nhb ằngtươngtáctrênphổHMBCgiữaprotoncủanhómmethoxyδ H3 , 3 6vớ iC-7(δ C7 3 , 9 ) P r o t o n H αx -4xuấthiện dướidạngtínhiệudoubletdoublettại2,92(J,6,10,8Hz)xácđịnhhằngsốtươngtácgiữaH- 3vàH αx -4J H-3/H-4ax=10,8HzchứngtỏH-3địnhh ư ớ ngα/axial.ProtonH-

7xuấthiệndướidạngtínhiệubroadsinglettạiδ H3 , 3 0chothấyprotonnàyđịnhhướngβ/ equatorialvàdođónhómmethoxyđịnhhướngα.DữliệuphổNMR củaSL16đượcsosá nhvớidữliệuphổcủahợpchất7α-methoxy-stigmast-5-en-3β-ol(hayschleicheols2)

[98]chothấysựphùhợp.Vìvậy,cóthểkếtluậnhợpchấtSL16chínhlà7α-methoxy-stigmast- 5-en-3β-ol.

Hợpc h ấ tS L 1 7 t h uđ ư ợ c d ạ n g t i n h t h ể k h ô n g m à u , côngt h ứ c p h â n t ử làC 20 H24O6đ ư ợ cxácđịnhbằngphươngphápphổkhốiphângiảicaoHR-ESI-

MSvớic á c píciongiảphântửm/z361,1659[M+H] + ,m/z378,1918[M+NH4] + ,m/ z38 3,14 65[M+Na] + ,m/z359,1502[M-H] - ,m/z395,1267[M+Cl] - Phổ 1 HNMRcủa hợpchấtSL17xuấthiệncáctínhiệuđặctrưng củahệproton vòngthơmthếkiểuAB

(1H,d,J=1,8 Hz,H-2)]và1tín hiệusinglettạiδ H6 , 7 5(2H,s,H-2′,H-6′)của vòngb e n z e n e thế4nhómởvịtrí1′,3′,4′,5′[99].Ngoàira,trênphổprotoncònxuấthiệntính iệucủa2nhómmethoxytạiδ H3,83và3,87(mỗitínhiệucủa3H,s),2nhómmethyleneliê nkếtvớioxytạiδ H3 , 7 7 / 3 , 8 5vàδ H3 , 5 9(2H,t,J=6,0Hz).Phổ 1 3 CN M R và

HSQCcủahợpchấtSL17cũngchothấytínhiệucủa20carbonbao gồm12c a r b o n của2vòng thơmtrongkhoảngδ C1 1 0 , 6 -

3-OCH 3 56,4 56,43 , 8 3 (3H,s) 3′-OCH 3 56,8 56,8 3,87(3H,s) a đotrongCD 3 OD b 150MHz, c 600MHz,δ # sốliệucủahợpchất(7S,8R)- dihydrodehydrodiconiferylalcoholđot r o n g CD 3 OD[99]

BêncạnhđóhằngsốtươngtáclớnJ 7,8=6,0Hzxácđịnhvịtrígiữa2protonH-7vàH- 8làtrans.PhổECDcủaSL17cóhiệuứngCottondương(+0,78mdeg)tại2 4 3 n m và(+0,43 mdeg)tại291nmphùhợphiệuứngCottondươngtại242nmvà2 9 3 n m c ủahợpc h ất( 7

S,8R)-dihydrodehydrodiconiferyla l c o h o l 9 ' -O-β-glucoside[100]nhưngngược hiệuứngCottonâmtại242nm và294nmcủahợpchất (7R,8S)- di hy drod eh ydo rd icon if eryl alcoholtrong[101]đãkhẳngđịnhcấuhình(7S,8R)c ủaSL17.TừdữliệuphổNMRcủahợpchấtSL17kếthợpsosánhvớidữliệuphổcủahợpchất dihydrodehydordiconiferylalcohol[99]cóthểkếtluậnhợpchấtSL17chínhlà( 7S,8R)- dihydrodehydordiconiferyla l c o h o l , hợpc h ấtđ ãđ ư ợ cp h â n l ậpt ừl o à iV i b u r n u m awabukinăm1996[102].

22O10đ ượ cxácđịnhbằngphổkhốiphângiảicaoHR-ESI-MSdựavàopíciong i ả phântửm/ z421,1140[M-H] -và m/z457,0894[M+Cl] -

OCH3 - # 56,2 56,4 3,72(s) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ * C sốliệucủahợpchấtBenzyl-6′-O-galloyl-β-D-glucopyranisideđo trong(CD 3 ) 2 CO+D 2 O[103],δ C sốliệucủahợpchất3methoxy-4-hydroxyphenol1-O-β-D-(6′-O-galloyl)- glucopyranosideđotrong(CD 3 ) 2 CO+D 2 O[104]

Trênphổ 1 HNMRcủahợpchấtSL18xuấthiệntínhiệucộnghưởngcủa 1vò ngbenzenthếmonotạiδ H7 , 3 5(2H,d,J=8,4Hz),7,28(2H,d,J=8,4Hz),7,23(1H,t,J=8, 4

Hz ) , mộtvòng thơmcủanhánhgalloyl tạiδ H7,14(2H,s),và mộtprotonanomercủađ ơnvịđườngglucosetạiδ H4 , 3 6(d,J=7,2Hz),2tínhiệuoxymethylenetạiδ H4 , 6 2 / 4 , 8 1vàδ H4, 4 5 / 4 , 5 7 Trênphổ 13 CNMRcũngchothấycáctín

7 7 , 9vớic a r b o n anomerδ C1 0 3 , 0 ,tínhiệunhómcarbonyltạiδ C1 6 8 ,3 Sựdịchchuyểnvềphíatr ườngthấp trên phổ 13 CNMR củaC-6′(δ C6 4 , 8 ) của phầnđường glucosevàC-7(δ C7 1 , 8 )đã gợiýnhánh galloylliênkếtvới C-6′củaphầnđường vàphầnđườngliên kếtvớiC -

7 b ằngl i ê n k ếte t h e r [ 1 0 3 ] H ằngs ốt ư ơ n g t á c l ớ nJ = 7 , 2H z c ủap r o t o n anome rtạiδ H4 , 3 6đãxác định liênkếtcủađường glucoselà dạngliênkếtβ.Dữliệu phổNMRcủahợpchấtSL18đượcsosánhvớidữliệuphổcủahợpchấtbenzyl-6ʹ-

O-galloyl-β-D-glucopyranoside[103]chothấysựtươngđồng.Dođó,cóthểkếtluận hợpchấtSL18chínhlàbenzyl-6′-O-galloyl-β-D-glucopyranoside.

NMR củahợpchấtSL19cũnggiống với dữliệuphổtương ứngcủaSL18(Bảng4.16)vớicáctínhiệuđặctrưngcủamộtđườngglucose,mộtnhánhg alloylvàmộtvòngthơm.Trênphổ 1 HNMRcủaSL19xuấthiệntínhiệucủa1vòngthơ m tươngtáckiểuABXtạiδ H6 , 7 2(1H,d,J meta=2,4Hz),6,64(1H,d,J ortho=8,4Hz),6,59(1 H,dd,J=8,4,2,4Hz),mộtnhómmethoxyvớitínhiệusinglettạiδ H3 , 7 2(3H,s)đãc h ỉr õ s ực ó m ặt củan h á n h 3 - m e t h o x y - 4 - h y d r o x y p h e n o l thayt h ếc h o v ò n g benzenethếmonotronghợpchấtSL18.Dođ ócôngthứcphântửcủaSL19dựđoánlàC 21 H22O12,côngthứcnàyđượckhẳngđịnhthôn gquaphổkhốilượngphângiảic a o HR-ESI-MSvớisựxuấthiện củapíciongiảphântửm/ z453,1029[M-H] - HằngsốtươngtáclớnJ=7,8Hzcủaprotonanomer(H-

L19(Bảng4.16)đượcsos á n h v ớid ữl i ệup h ổt ư ơ n g ứ ng3 - m e t h o x y - 4 - h y d r o x y p h e n o l 1-O-β-D-(6′-O-

C δ galloyl)- glucopyranoside[104]chothấycósựtươngđồng.Vìvậy,cóthểkếtluậnhợpc h ấtS L

Hợp chấtSL20thu được dạng bột vôđịnh hình.Trên phổ 1 H và 13 CNMR củaSL20cũngxuấthiệntínhiệuprotonvòngthơmtươngtáckiểuABXtạiδ H6 , 6 8(1H,d ,J orth o=7,8Hz),6,57(1H,dd,J=7,8,1,8Hz)và6,61(d,J=1,8Hz),1tínhiệutạiδ C5 6 , 2 / δ H3 , 7 6(3H,s)đượccholà củanhóm methoxy.Hơnnữa,cáctínhiệucủanhómoxymethylenetạiδ C6 2 , 2 / δ H3 , 6 0(2H,t,J=7,0H z),tínhiệucủamethylene[δ C3 6 , 1 / δ H2,57(1H,dd,J,8,7,8Hz)và2,68(1H,dd,J,8,7,0Hz)]và nhómmethinelaihóasp 3 tạiδ C44,2/δ H1 , 9 3(m)chothấytrongcấutrúcphântửcủa

3-OCH3,3′-OCH3 56,2 3,76 (s) a đotrongCD 3 OD b 125MHz, c 500MHz

DữliệuphổNMRcủaSL20nêutrênkhágiốngvớidữliệutươngứngcủahợpchấtsecoi solariciresinol[105].ĐiềunàyđượckhẳngđịnhthôngquatươngtáctrênphổHMBC(H ình4.33).Hơnnữa,khiphântíchphổkhốiphângiảicaoHR-ESI-

2,8ppm)đãchophépxácđịnhcôngthứcphântửcủahợpchấtSL20làC20H26O6.PhổECD củaSL20khôngchothấyxuấthiệnhiệuứngCottondođóđãgợiýcấuhình(8R,8′S)hoặc(

Hình4.34.CấutrúchoáhọccủacáchợpchấtSL1-SL20 trúccủacáchợpchấtphânlậpđượctừláloàiS.cerasiformechủyếulàcáchợpchấtflavonoid(fla vanonevàflavone),ngoàir a còncómộtsốcáctriterpene5vòngvàcáchợpchấtphenolickhác.

HoạttínhứcchếNOcủacáchợpchấtphânlậptừloàiS.cerasiforme

Haim ư ơ i hợpc h ấtp h â n l ậpđ ư ợ ct ừloàiS c e r a s i f o r m e đ ư ợcthửh o ạtt í n h kh án g viêmthôngquakhảnăngứcchếquátrìnhsảnxuấtnitơmonoxit (NO)trên dũngtếbàoRAW264.7đóđượckớchthớchbằngLipopolysaccharide(LPS1àg/ ml).KếtquảBảng3.1chothấy,tấtcảcáchợpchấtđềukhôngthểhiệnđộctínhđángkểtrong thửnghiệmbằngphươngphápsomàuMTT.Dođó,mứcđộsảnsinhNOtrongtếbàođãđượcx ácđịnhtrongsựcómặtcủacáchợpchấtSL1-SL20ởcácnồngđộp haloãng(từ0-

SL3,SL6,SL10,SL17cókhảnăngứcchếhiệuquảquátrìnhsảnxuấtNOtrêndòngtếbàođãđ ượchoạthóabằngLPSvớinồngđộứcchếIC50t ư ơ n gứng là 12,28 ±1,15,8,52±1,62,7,68±0,87,9,67 ±0,57,6 , 6 9 ±0,34,6,98±0,57àM.CỏchợpchấtSL13,SL18vàSL19ứcchếmứctrung b ỡ n h I C502 5 , 5 1đ ế n3 3 , 3 8àMsovớic h ấtđ ố ic h ứngd ư ơ n gN G -monomethyl-L- arginineacetatee(L-NMMA)

(IC503 2 , 5 0±1,00àM).CỏchợpchấtcũnlạithểhiệnhoạttớnhứcchếyếuhơnvớigiỏtrịIC50trong khoảngtừ33,17±0,78đến86,51±2,98 àM.Xộtvềsựliờnquangiữacấutrỳcvàtỏcdụngkhỏngviờmcủacỏchợpchấtphõnlậpđượccúthể đưaranhậnđịnhrằngnhữnghợpchấtflavanone(SL2,SL3vàSL6)cóhoạttínhứcchếsựsảnxuấ tNOđángkểhơnsovớicáchợpchấtflavone.

ThànhphầnhóahọcvàhoạttínhứcchếsựsảnsinhNOcủaloài S.bullockii

XácđịnhcấutrúchóahọccáchợpchấtphânlậptừloàiS.bullockii

4.2.1.2.HợpchấtSP1:SyzybullosideA(2α,3β,6α-trihydroxyurs-12,20(30)-dien-28- o i c acid28-O-β-D-glucopyranosylester)(hợpchấtmới)

HợpchấtSP1thuđượccódạngbộtkhôngmàu.PhổIRcủahợpchấtSP1đãchothấ ysựcómặtcủacácnhómchứchydroxy(3401cm -1 ),carboxyl(1734cm -

1),olefin(1646cm -1 )vàether(1070cm -1 ).TrênphổkhốilượngphângiảicaoHR-ESI-

0,6ppm)kếthợpvớidữliệuphổ 1 3 CNMRvàHSQCchophépxácđịnhcôngthứcphâ ntửcủaSP1làC36H56O10.

Hình4.36.Phổ(-)-HR-ESI-MScủahợpchấtSP1

=7,0 Hz),3tín hiệuprotonolefinbao gồm2tín hiệuđơn(δ H4 , 7 1và4,66,s, H2- 30)và1tínhiệutripletlàcủaprotonmethinetrongvòngtạiδ H5 , 3 1(1H,t,J=3,5Hz,H- 12),3tínhiệucủaprotonnhómmethinecarbonioltạiδ H3 , 6 3(ddd,J,0,9,5,4,5Hz,H- 2),2,89(d,J=9,5Hz,H-3)và3,99(ddd,J,5,10,5,4,0Hz,H-6),1 tính i ệuc ủap r o t o n a n o m e r t ạiδ H5 , 3 7( d ,J = 7 , 5H z ) v à t í n h i ệuc ủa7 n h ó m m ethylenetạiδ H0 , 9 4 / 1 , 9 3 ,1 , 6 0 / 1 , 6 4 , 1 , 9 7 / 2 , 0 0 , 1 , 1 8 / 2 , 0 3 , 1 , 9 0 / 2 , 3 1 ,

2,25/2,37.Phổ 13 CNMRvàHSQCcủaSP1đãchothấytínhiệucộnghưởngcủa36c a r b o n t rongđó30carbonđặctrưngcủamộttriterpene5vòng6cạnhvà6carboncủamộtđơ nv ịđ ườ nghe xo se (Bảng4 1 8) Phầnkhungtriterpenaglyconecómột

105,5( C H2)]và3tínhiệucủacarbonmethinecarbinol(δ C6 9 , 1 ,84,6,và68,8)trongkh icarbonđặctrưngcủaphầnđườngglucose(từC-1′đếnC-

Dữliệup h ổN M R c ủaSP1k h ág i ốngv ớid ữliệut ư ơ n g ứ ngc ủahợpc h ấtSyzyg iumursanolideC(SP4)ngoạitrừsựxuấthiệntínhiệucủanhómmethylthaythếc h o n h ó m h y d r o x y m e t h y l e n e tạiC -

2 3 [106].P h ầnđ ư ờ ngg l u c o s e liênk ếtvớia g l y c o n e ởvịtrícủacarbonketone(C- 28)đượcxácđịnhdựavàotươngtáctrênphổH M B C giữaprotonanomerH-1′

6(δ H3,99).Địnhhướngliênkếtcủacácnhómhydroxyđượcxácđịnhthôngquahằngsốt ư ơ n g tácvàtươngtáctrongkhônggiangiữacácprotontrênphổROESY.Hằngsốtư ơn g t ác lớn 3 J HH= 9,5 Hz củaH-2/H-3 và 3 J HH= 10,5 Hz của H-5/H-6chothấycácproton H-2/H- 3vàH-5/H-6 axc ó địnhhướngtrans/axial.Tương táctrong không gianc ủac á c p r o t o n t r ê n p h ổR O E S Y g i ữaH ax -2(δ H3 , 6 3 ) / H 3-24(δ H1 , 0 4 ) ,H -

26(δ H0 , 9 3 )đãxácđịnhcấuhìnhβcủaH-2vàH-6vàcấuhìnhαcủaH-

3.CáctươngtáctrênphổROESYnêutrênchothấyliênkếttransgiữacácvòngA/B,B/Ccủakhungtriterpene5vòngcủakhungursane.TươngtácgiữaH 3 -

27(δ H1 , 2 4 )vớiH-19(δ H2,46 )đãxácđịnh2vòngD/Eghépvớinhaukiểucisvàđịnhhướngliênkếtcủa2 axial),p r o t o n H 3 -29đượcxácđịnhlàβ- equatorial.KhiđótươngtácROESYgiữaH3-29vớiH-18đãxácđịnhH-

18địnhhướngβ.Liênkếtđườngglycosidecũngđượcxácđịnhlàdạngβthôngquahằngs ốtươngtáclớnJ=7,5Hzcủaprotonanomertạiδ H5 , 3 7vàhằng sốtương tácgiữa cácproton carbinoltrongphần đườngbao gồmJ H-1′/H-2 ′ =7,5Hz,J H-2′/H-3′=9,0Hz,J H-3′/H-

4′=9,0HzvàJ H-4′/H-5′=9,0Hzđãxácđịnhcácp r o t o n H-1′,H-2′, H-3′,H-4′, H-5′ đều chiếmvịtríaxial,đặctrưng chomột nhánhβ- glucopyranosyl.Phầnđ ư ờ n g đ ư ợ cx á c đ ị nhl à D - g l u c o s e b ằngp hươngp h á p t hủyp h ân acidhợpchấtSP1thuđượcđườngglucosevà xácđịnhđộquaycựcriêngcủađườngnày.Tínhiệugócquaycựcdươngcủaphântửđườ ngthuđượckhẳngđịnhc ấuhìnhđườngD- glucose[66].TừdữliệuphổNMR,hợpchấtSP1đượcxácđịnhlà2α,3β,6α-trihydroxyurs-

12,20(30)-dien-28-oica c i d 2 8-O-β-D- glucopyranosyle s t e r Đ ây làhợpchấtmớivàđượcnhómnghiêncứuđặttênlàsyzybullosid eA.

4.2.1.2 HợpchấtS P 2 : S y z y b u l l o s i d eB ( 2 α,3β,6α-trihydroxyurs-12-en-28- oica c i d 28-O-β-D-glucopyranosylester)(hợpchấtmới)

( 3 4 1 6 c m -1 ),c a r b o n y l (1733cm -1 ),olefin(1658cm -1 )vàether(1069cm -1 ).

Dữliệuph ổ 1 H, 1 3 CNMRvà HSQCc ủaS P2 cóđặ ct r ư n g củ am ộtursane glyc osidegiốngSP1ngoạitrừ s ựbiếnmấtc ủatínhiệul iê nkếtđôiC -20/C-

30và thayvàođólàsựxuấthiệntínhiệucủanhómmethyltạiδ H1 , 0 0(d,J=6,5Hz)/ δ C2 1 , 5(C-30)trongSP2(Bảng4.19).

3,81(dd,12,0, 2,0) a đotrongCD 3 OD, b 125MHz, c 500MHz

5(δ C61,3)c ũngn h ưt ư ơ n g t áct r ê n p h ổCOSYg i ữaH - 1 (δ H0,94v à

Tươngtác trênphổHMBCgiữa protonanomer tạiδ H5 , 3 7vớiC-28(δ C177,9)đã chỉr a liênkếtestercủaphầnđườngglucosevớiphầnaglyconetạiC-

28.Hằngsốtươngtáclớngiữa 2protonH-5/H-6 (J,5Hz)xác địnhđịnhhướngcủa haiprotonH-5vàH-6làtrans-axialvàdođóxácđịnhcấuhìnhαcủanhómOHtạiC- 6.Hóahọclậpthểcủavòng A /B /C/

DcủaSP2 cũ ngg i ố n g nhưSP1d ự avàot ư ơ n g tácgiống n h au trênphổROESY.

Hình4.44.Phổ(-)-HR-ESI-MScủahợpchấtSP2

Hình4.49.Phổ 1 H- 1 HCOSYcủahợpchấtSP2 ỞvòngEtươngtácROESYgiữaH-18vớiH-20/H3-29đãxácđịnhcấuhìnhβ của H-18, H-20 và H3-29 và do đóH-19 và H3-30 cócấu hìnhα Hằng số tươngtácJ

1′cùngvớigiátrịgócquaycựcriêngdươngcủaphầnđ ư ờn g glucosethuđượctừsựthủyphâ nacidđãxácđịnhcấutrúcphầnđườnglàβ-D- gl ucop yran osid e[ 6 6 ] D o đ ó , h ợ p c h ấ tSP2đ ư ợ cx á c đ ị n h l à 2α,3β,6α-

C δ C δ trihydroxyurs-12-en-28-oica c i d 2 8-O-β-D- glucopyranosidee s t e r.Đ â y l à h ợ p c h ấ t m ớ i vàđượcđặttênlàsyzybullosideB.

4.2.1.3 Hợpc h ấtS P 3 : S y z y b u l l o s i d eC(2α,3β,6α-trihydroxyup-20(29)-en- 28-oica c i d 28-O-β-D-glucopyranosylester)(hợpchấtmới)

HợpchấtSP3thuđượccódạngbộtkhôngmàu.PhổIRchothấysựcómặtcủacác nhómchứchydroxy,olefin,carbonylvàether,giốngnhưcáchợpchấtSP1 vàSP2.CôngthứcphântửcủahợpchấtSP3làC36H58O10đượcxácđịnhbằngphổkhốilượng phângiảicaoHR-ESI-MSdựavàosựxuấthiệncủapíciongiảphântửm / z 685,3716[M+Cl] -

( Δ=+0,3ppm).Phổ 13 CNMRcủaSP3chothấysựxuấthiệntínhiệucủa36carbon,baogồm3 0tínhiệucarbonđặctrưngcủatriterpene5vòngvàtínhiệu của6carboncủađường glucose.Tuynhiênkhácvới2hợpchấtSP1vàSP2,sựxuất hiệncủabộ tínhiệutạ iδ C151,7( C,C-20),δ C110,4(CH2,C-29)và19, 5( C H3,C -

30đãgợiýhợpchấtSP3làdẫnchấtg l y c o s i d e củamộttriterpenekhunglup-20(29)- ene[107].Tínhiệucủanhómcarboxylat(δ C1 7 6 , 1 ,C-

28),3nhómmethineliênkếtoxy(δ C6 9 , 4 ,84,5và68,8),vàmộtcarbonanomer(δ C9 5 , 3 )cũ ngđượcxácđịnhtrênphổcarbon.DữliệuphổcủaSP3đ ư ợcgiớit h i ệuở Bảng4 2 0 cóđ ư ợ clàd ựav à o v i ệcp h â n t í c h p h ổH S Q C , COSYvàHMBC.HợpchấtSP3cũngcó3 nhómhydroxytạicácvịtríC-2,C-3vàC-

6giốngnhưhợpchấtSP1vàSP2,đượcxácđịnhbằngtươngtáctrênphổHMBCgiữaH 3 - 23(δ H1 ,3 4 )/ H 3-24(δ H1 ,0 0 )vớiC-3(δ C8 4 ,5 )/C-4(δ C4 1 ,3 )/C -5(δ C6 1 ,7 )và tươngtáctrênphổCOSYcủaH-2(δ H3 , 6 2 ) / H - 3(δ H2 , 8 7 )vàH-5(δ H0 , 9 8 ) / H -

(δ H5 , 5 2 )vớiC-28(δ C1 7 6 , 1 ) CấuhìnhgiữaprotonH-2vàH-3làtrans- axialđ ư ợcxácđịnhbởihằngsốtươngtáclớnJ H-2/H-

3=10,0HzvàtươngtácCOSYgiữaH-2/H-24,H-3/H-5vàH-3/H3-23 (Hình 4.51).Hơnnữa,hằngsốtươngtác lớnJ H-5/H-6 =10,5HzđãxácđịnhđịnhhướngcủaH-5vàH- 6làtrans-axialvàcấuhìnhαcủanhómhydroxytạivịtríC-

6.KhácvớitriterpeneloạiursanetronghợpchấtSP1vàSP2,tươngtáctrênphổROESY củaSP3giữaH3-27(δ H1 , 0 6 )vàH-18(δ H1 , 6 8)đãxác địnhđịnhhướngα-axialcủaH3-27và H-18trong vòngD Hằngsố tươngtáclớnJ=1 1 , 0H z g i ữaH - 1 8 v à H -

1 9 c ũngc h ỉrõ2 p r o t o n nà y đ ị n h h ư ớ nga x i a l - a x i a l trongvòngE.ProtonH-

Elàtranst r o n gk h u n g l u p a n e c ủah ợpc h ấtS P 3 n à y H ơnn ữ a,tươngtácROESY giữaH α -22vớiH-18/H α -16đãkhẳngđịnhthêmcấudạngcủa2v ò n g D/

18địnhhướngliênkếtαvàcấudạngtranscủahaivòngDvàEnênđịnhhướngcủaC-28(tại vịtríC-17)đượcxácđịnhlàβ.TươngtácROESYgiữaH-18vàH 2 -

29cũngxácđịnhđịnhhướngliênkếtdạngαcủanhóm isopropenetạiC-19(dođịnhhướngcủaH-19làβ- axial).Tínhiệudoubletcủaprotonanomerxuấthiệntạiδ H5 , 5 2vớihằngsốtươngtáclớnJ=7,5 Hzđãxácđịnhdạngliênkếtβcủađườngglucose.Cấuhìnhtuyệtđốicủaphântửđườngglucose đượcxácđịnhlàDbằngphươngphápthủyphânacid[66]thuđượcđườngđơnvàđogócquayc ự cthuđượcgiátrịgócquaycựcdương.Từphântíchnhữngdữliệutrên,hợpchấtSP3đượcxá cđịnhlà2α,3β,6α-trihydroxyup-20(29)-en-28-oicacid28-O-β- gl u c o p yra n o s y le s t e r,đ â y l à hợpc h ấtmớiv à đ ư ợ cn h ó m n g h i ê n c ứuđ ặ tt ê n làsyzybullosideC.

H R - E S I - MSc ủ a h ợ p c h ấ tS P 4 c h ot h ấ y t í nh i ệ u c ủ a p í c i o ngiảp h â n t ửm / z 6 9 9 ,3 5 1 1[M+Cl] -( Δ=-

3,81(dd,12,0, 2,0) a đotrongCD 3 O D, b 125MHz, c 500M,δ , # C của syzygium ursanolid e

DữliệuphổNMR(Bảng4.21)củaSP4cũngtươngtựnhưSP1vớiđặctrưngcủamột ursaneglycoside.ĐiểmkhácnhaulàởhợpchấtSP4cóxuấthiệntínhiệun h ó m oxy methyleneδ C65,9/ δ H3,36và3,46,J,0Hz,H2-23)thaychonhómmethylδ C3 2 , 2 / δ H1 , 3 5(3H,s)trongSP1.TươngtácHMBCgiữaH2-23(δ H3 , 3 6và3 , 4 6 ) vớiC-

4trong hợpch ấtSP4.Vịt rí liênk ếtc ủađườ ngvớiaglyconeđượcxácđịnhlàC-

3=1 0 H z x á c địnhđ ị nhh ư ớ ngcủa2protonH-2vàH-3làtrans- axialvàhằngsốtươngtácnhỏJ H-5/H-6( b rs) equatorial,đ ồ ngt h ờit ươngt á c t r ê n p h ổROESYH - 3 (δ H3,31)/H-

6(δ H4,40)đ ãđ ị n h h ư ớ ngc ủa3 n h ó m t h ếh y d r o x y t r ê n k h u n g u rs a n e củaSP4là 2 α,

7,5Hzc ủaprotonanomertạiδ H5 , 3 7chothấyliênkếtcủaphầnđườnglàdạngβ.Quátrìnhthủy phânacidcủahợpchấtSP4thuđượcD- glucoseđượcxácđịnhbằngsắckýlớpmỏngTLCkhisosánhvớimẫuchuẩn,cũngnhưtínhi ệugócquaycựcdương[66].DữliệuphổNMRcủaSP4đượcsosánhvớidữliệuphổtươ ngứngcủahợpchấtS y z y g i u mursanolideC[ 1 0 6 ] chothấysựp hù hợp.Vìvậy,hợpch ấtSP4đượcxác địnhl à 2α,3β,6β,23-tetrahydroxyurs-12,20(30)-dien-28-oicacid28-O- β-D-g l u c o p y r a n o s y l ester(còngọilàSyzygiumursanolideC)[106].

4.2.1.5 HợpchấtSP5:2α,3β,6β,23-Tetrahydroxyolean-12-en-28-oicacid28-O-[β- D-g lu co pyran osyl ] ester(chebulosideII)

HợpchấtSP5thu đượcởdạngbộtvôđịnhhìnhkhôngmàu.Phổ 1 HNMRcủah ợp chấtSP5chobiếtsựcómặtcủ a6nhómmethylvới6tínhiệuđơntạiδ H0 , 9 3 ,0 ,9 6 , 1,08,1,09,1,16và1,40;1tínhiệutripletr ộngcủaprotonolefintạiδ H5 ,3 3(1H,b r t,J=3,5 Hz)và

1tínhiệucủaprotonanomertạiδ H5,39.Phổ 13 CNMRvàHSQCc ũ n g chothấysựxuấthiệntín hiệucủa36carbontrongđócó30carbonđặctrưngchotriterpene khungolean-12- ene[109]gồmtínhiệucủa 7carbonbậc4

(1olefinδ C1 4 4 , 3 ,1 c a r b o n nhómc a r b o x y l a tδ C178,1),6 n h ó m m e t h i n e ( 1 o l e f i n , 3 oxymethine),8methylene(1oxymethylenetạiδ C6 5 , 9 ) ,2nhómmethyl.Cácnhómthế hydroxycủaSP5đượcxácđịnhđịnhhướngliênkếttạiC-2,C-3,C-

1′tạiδ H5,39đãxácđịnhliênkếtcủađườngglucosedạngβ.Dữliệup h ổN M R c ủahợpc h ấtSP5 đ ư ợcsos á n h v ớid ữliệup h ổc ủahợpc h ất2 α,3β,6β,23-tetrahydroxyolean-12-en-28- oicacid28-O-[β-D-glucopyranosyl]ester(haychebulosideII)

3,8(dd,12,0, 2,0) a đotrongCD 3 OD, b 125MHz, c 500MHz,δ * củachebulosideIIđotrongpyridine-d 6 [111]

4.2.1.6 Hợpc h ấtS P 6 : 2α,3β,6β,23-Tetrahydroxyurs-12-en-28-oica c i d 2 8 - O - β-D- glucopyranosyl ester(centellosideC).

HợpchấtSP6thu đượcdạngbộtmàutrắng.PhổNMRcủahợpchấtSP6cũngx u ất hiệncáctínhiệuđặctrưn gcủamộttriterpene5vòng6cạnhkhungursanevàmộtphầnđườngglucosetươngtự nhưhợpchấtSP4vớicáctínhiệucủa1liênkết

VịtrívàđịnhhướngcủacácnhómthếhydroxycũngtươngtựnhưhợpchấtSP4đư ợc xácđịnhlà2α, 3β, 6β.Phầnđườngglucose cũng được xácđịnhgắnvớiC-

28 (δ C177,9)và l i ê n k ếtđườ ngl àβ d ohằngsốtư ơn gt ácJ= 7,5H z c ủap r o t o n an o mer tạiδ H5 ,3 7 TừdữliệuphổNMRcủaSP6(Bảng4.23)kếthợpsosánhvớidữ liệup h ổt ư ơ n g ứ ngc ủahợpc h ấtmadecassic[ 1 1 2 ] c h o t h ấySP6làd ạnge s t e r gl ycosylc ủam e d e c a s s i c V ì v ậy,c ó thểx á c địnhh ợpc h ấtSP6là2α,3β,6β,23- t e t r a h y d r o x y u r s - 1 2 - e n - 2 8 - o i c acid28-O-β-D-glucopyranosylester.

HợpchấtSP7thuđượcdạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắng.Trênphổ 1 HNMRcủ aS P7xuấthiệntínhiệuđặctrưngcủavòngthơmthếđốixứng4nhómthếtạiδ H6,72(2H,s,H -2,H-

6),tínhiệusingletcủa2nhómmethoxytạiδ H3 , 8 7(6H,s),tínhiệucủa3nhómoxymeth inetạiδ H4,85(H-4′),4,34(H-5′)và5,21(H-

8).Phổ 13 CNMRvàHSQCcủaSP7chotínhiệucộngh ư ở ngcủa17carbonbaogồm2nhó mmethoxy,2methylene,6nhómmethinevà7carbonbậc4.TươngtáctrênphổHMBCgi ữaprotoncủanhómmethoxytạiδ H3 , 8 7vớiC-3/C-5(δ C56,8)vàgiữaH-2/H-

6(δ H6,72)vớiC-1(δ C130,2)/C-5(δ C149,3)/C-4(δ C1 3 7 , 0 )đãgợiý sựcó mặt củanhóm3,5- dimethoxy-4-hydroxyphenyl.T ươngtácgiữaH-8(δ H2 , 5 5 )vớiC-1′(δ C1 7 5 , 6 ) ,giữaH- 7(δ H5 , 2 1 ) / H - 9(δ H3 , 6 8 ,3 , 9 2 ) vớiC-2′(δ C8 1 , 6 )vàgiữaH-4′(δ H4 , 8 5 )vớiC-1′(δ C1 7 5 , 6 ) / C -3′

(δ C117,9)dựđoánsựcómặtcủamộtvòngbutyrolactone(vòngB).Tươngtáctrênph ổHMBC giữaH-4′vớiC-5′(δ C75,2)/C-6′(δ C7 5 , 2 ) ,giữaH-6′(δ H4 , 1 0 ,4,13)vớiC-

3′)tạiδ C117,9xá c địnhsựtồntạic ủam ộtvòngtetrahydrofurank h á c (vòngA ) Dođó,cấ iC-3′làtrungtâmcủacả3vòng.Từdữ

C δ δ C δ δ liệuphổNMRcủahợpchấtSP7(Bảng4.24)kếthợpsosánhvớidữliệuphổcủahợpc h ấtamarus ineA[113]cóthểkếtluậnhợpchấtSP7chínhlàamarusineA.

3,92(dd,12,0, 6,0) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ *

HợpchấtSP8thuđược dạngtinhthểkhôngmàu.Trênphổ 1 HNMRxuấthiệntínhiệusinglet củaprotonv òngthơ mthế5nhómth ếtạiδ H7,10( 1H, s),t ín hiệusingletcủamộtnhómmethoxytạiδ H3 , 9 2(3 H,s).Phổ 1 3 CNMRxuấthiệntínhiệucủa6carbonvòngthơmtạiδ C111,1-

5 , 8 ,1tínhiệucủanhómmethoxytạiδ C6 0 , 9 CáctínhiệutrongSP8đặctrưngcủaacidgallic[1 14]ngoạitrừnhómhydroxyc ủaacidgallicđượcthaybằngnhómmethoxy tronghợpchấtSP8.Ngoàira,trênphổN M R cònchothấybộtínhiệucủađườngglucosetạiδ

8 3 , 0 ) TừcácdữkiệnphổNMRcóthểdựđoáncấutrúccủahợpchấtSP8làmộtdẫnchấtgluco sidecủaacidgallic với1tínhiệucủađườ ngglucosebịdịchchuyểnvềphía

7 5 )làd o liênkếtvới1 nhómhút điệntử(C=O).Dữliệuphổcủa hợp chấtSP8(Bảng4.25)đ ư ợ csosánhvới dữliệuphổcủahợpchấtbergenin[115]chothấycósựtươngđồng.Vìvậy,cóthểxácđịnhhợpc hấtSP8chínhlàbergenin.

# * a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ C củabergeninđotrongMe 2 CO-d 6 +D 2 O[115],δ C c ủahợpchất1 1 - O - g a l l o y l b e r g e n i n [115]đotrongMe 2 CO-d 6

HợpchấtSP9thuđượcdạngtinhthểhìnhkim.TrênphổNMRcủahợpchấtSP9c ũ n gx u ấ th i ệnc á c t í n h i ệuđ ặ ctrưngc ủab e r g e n i n g i ốngn h ư h ợ pc h ấtSP8ngoạitrừs ựxuấthiện thêm tínhiệuđặc trưngcủa nhánhgalloylvới1 vòngthơm thếđốixứng4nhómthếtạiδ H7 , 1 3(2H,s),δ C110,3-

121,1và1nhómcarbonyltạiδ C166,8.Vìvậy,cóthểdựđoánSP9làdẫnchấtgalloylcủabergen in.Độdịchchuyểnh ó a họccủaC-2(δ C8 0 , 7 )vàC- ãgợiýphầngalloylthếởvịtríC-

11.Từs u y đoánnày,kếthợpsosánhdữliệuphổNMRcủahợpchấtSP9(Bảng4.25)với

11-O-galloylbergenin[115]c ó thểk ếtl u ậnh ợpc h ấtSP9c h í n hl à 11-O- galloylbergenincócấutrúchoáhọcnhưHình4.57.HợpchấtnàyđãđượcphânlậptừloàiM allotusjaponicaslầnđầutiênnăm1982[116].

6ʹ 62,8 62,7 3,69(dd,5,4,12,0)/3,87(dd,2,4, 12,0) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ # củaicarisideB 2 đotrongpyridine-d 6 [117]

HợpchấtSP10thuđượcdướidạngtinhthểhìnhkimkhôngmàu.Trênphổ 1 HN M R củ aSP10xuất hiện4 tín hiệu singlet của4 nhóm methyl tạiδ H0 , 9 8 ,1,21,1,23và2,31.Trongđótínhiệuδ H2 , 3 1đượccholàliênkếtvới1nhómhútđiệntửlàm vớicácn h ó m cònlại,tínhiệucủaprotonanomercũngxuấthiệntạiδ H4 , 3 6(1H,d,J=7, 8Hz)cùngvớitínhiệucủađườngglucosetạiδ H3 , 1 4 -

8địnhh ư ớ ngtranssovớinhaudohằngsốtươngtáclớnJ,6Hz.Trênphổ 13 CNMRxu ấthiệntínhiệucủanhómcarbonyltạiδ C2 0 0 , 2 ;2nhómmethineolefintại133,8,1 4 5 , 3 ;

2 t í n h i ệuc ủac a r b o n b ậc4 l i ê n k ếtvớio x y t ạiδ C68 ,4 ,7 1 , 1 là2 c a r b o n epoxy;1tínhi ệucủanhómoxymethinetạiδ C7 2 , 7và2nhómmethylenetạiδ C3 8 , 2 ,45,2.Tínhiệucủaprotona nomertạiδ H4,36vàδ Ct r o n gkhoảng62,7-78,1đặctrưngcủađườngglucose.Từdữliệuphổcủa hợp chấtSP10(Bảng 4.26)vàso sánh với dữliệuphổNMRcủahợpchấticarisideB 2[117] cóthểxácđịnhhợpchấtSP10chínhlàicarisideB

HợpchấtSP11thuđượcdạngbộvôđịnhhình.Trênphổproton xuấthiện3t í n h iệusinglettạiδ H0 , 8 6 ,1,16và1,22của3nhómmethyl;1tínhiệudoubletcủamethyltại δ H1 , 2 9( 3 H , d ,J = 6 , 6H z ) ; t í n hiệuc ủa2 n h ó m methylenet ạiδ H1 , 4 6 / 1 , 6 7v à 1 , 7

8 / 1 , 8 1 ; t í n hiệuc ủa2 o x y methinetạiδ H4 , 0 6và4 , 3 6 Tính i ệud o u b l et của2proton H-7,H-8 củanhómmethineolefintạiδ H5 , 8 0 ( H - 8 ) v à6,10(H-

7)địnhhướngtranssovớinhaudohằngsốtươngtáclớnJ,2Hz.Phổ 13 CNMRcuảSP11cũ ngchothấysựcómặtcủacácnhómchứctươngứngvớitínhiệuđặctrưngtrênphổpr oton,đólà4nhómmethyltạiδ C2 6 , 2 ,27,1,27,5và24,2,2carbonmethylenetạiδ C4 6 ,4và45,

7,2carbonmethineliênkếtoxytạiδ C6 5 , 3và69,6vàtínhiệucủa2carbonolefintạiδ C1 3 6 , 1và131,2.DữliệuphổNMRcủaSP11đượcso

H enetrongtàiliệu[118]thấyc ó sựtươngđồng,hợpchấtSP11cóthểxácđịnhlàmegastigman- 7-ene-3β,5α,6α,9-tetraol.

13 27,1 1,10(s) 27,1 1,16(s) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ # củahợpchấtmegastigman-7-ene-3,5,6,9-tetraolđotrong

HợpchấtSP12thuđượcdạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắng.DữliệuphổNMRcủahợp chấtSP12rấtgiốngvớihợpchấtSP11ởkhungmegastigmanes(Bảng4.28).ĐiểmkhácgiữaS

P11vàSP12làtrênphổNMRcủahợpchấtSP12cóthêmtínhiệup r o t o n anomercủađường tạiδ H4 , 3 7(d,J=8,0Hz)thaythếchotínhiệucủanhómh y d r o x y m et h i n e củahợpchấtSP

11.Hằngsốtươngtáclớncủaprotonanomerchứngtỏliênkếtđư ờ ngl à d ạngβ Vịtr í l i ê n k ếtc ủađ ư ờ ngv ớip h ầnaglycone megastigmaneđượcdự đoánlàliên kếtdạngO- glucoseởC-9do độdịchchuyểnhóahọccủaC-9vềphíatrườngthấphơnδ H/ δ C4,43/78,8sovớiSP11tạiC-9cóδ H/δ C4,36/69,6.Giá trị độdịchchuyển hóa học củaC-9 là

78.8 chothấy cấu hình tuyệtđốitạiC-9là(9R)

[119].DữliệuphổNMRcủahợpchấtSP12(Bảng4.28)sosánhvớihợpchấtactinidioionosi de[119]thấycósựphùhợp.VìvậycóthểkếtluậnhợpchấtSP12chínhlàactinidioionosidecócấ utrúchoáhọcnhưHình4.59. δ δ δ C δ δ

7′′ 168,5 168,4 - a đotrongCD 3 OD, b 125MHz, c 500MHz,δ # củaactinidioionosideđotrongCD 3 OD[119],δ C *củahợpchất actinidioionoside6′-O-gallateđotrongCD 3 OD[120]

HợpchấtSP13thuđượcdạngbộvôđịnhhình.DữliệuphổNMRcủaSP13đặctrưn gcủamộtmegastigmaneglucosidegiốnghợpchấtSP12(Bảng4.28).Hằngsốtươngtáclớ nJ=8,0Hzxácđịnhliênkếtđườnglàdạngβ.ĐiểmkháccủaSP13sovớiSP12đólàsựxuấthi ệnthêmcáctínhiệuđặctrưngcủanhómgalloylvớitínhiệusingletcủa2protonvòngth ơmthếđốixứngtạiδ H7,12(2H,s)vàmộtnhómcarbonyltạiδ C168,4.D o đó hợpch ấtSP13 d ựđ o ánlà dẫnc h ấtga l l o y l hợpch ấtSP12.Vịtrínhómgalloylđượcxácđịnhlàliênkếteste rvớiC-6′dođộdịchchuyểnhóahọccủaC-6′trongSP13vềphíatrườngthấphơn[δ H/ δ C( 4 , 3 7 ,4,53)/64,6]sovới

[119].DữliệuphổNMRcủahợpchấtSP13đ e msosánhvớidữliệuphổcủahợpchấtacti nidioionoside6′-O- gallate[120]chothấysựphùhợp.Vìvậycóthểkếtluận,hợpchấtSP13làactinidioionosi de6′-O-g a l l a t ecócấutrúchoáhọcnhưHình4.59.

6′′ 62,34 62,5 3,93 dd(12,0,2,5),3,74dd(12,0,5,5) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz, nd khôngpháthiệntrênphổ,  # củaphloridzosidđotrongCD 3 OD[121] ctrưngcủamộtdihydrochalcone.Đólàtínhiệucủa2nhómmethylenetại H2,89(2H,t,J

=6,6Hz)và 3,40(2H,t,J=6,6Hz),2tínhiệudoubletcủap rotonvòngthơmthếđốix ứng2nhómthếtại H6 , 6 9(2H,d,J=8,4Hz)và7,09(2H,d,J

=8,4 Hz) vàtínhiệucủa 2proton vòng thơmkháctại H6,13 (1 H, d, J=2,4H z ) , 5,91(1H, d,J =2,4Hz).Tín hiệu đặc trưngcủa đườngglucoseđượcxácđ ị n h bởianomertại C62,5/  H5 ,0 6(d,J=7,2Hz)và6tínhiệukhác xuấthiệnt r o n g khoảng

3 , 9 3.Phổ 13 CNMRcũngchothấysựcómặtcủacáctínhiệucarbonbịo xyhóahoặckhô ngbịoxyhóacủa2vòngthơm tại C116,1-156,4(vòngB)và C9 5 , 7 -

162,3(vòngA),tínhiệucủa2nhómmethylenetại C3 0 , 9và46,9,vàt í n hiệuđặc trưngcủanhómcarbonyltại C2 0 6 , 8 Liênkếtđườngglucoselàdạngβ dohằngsốtươn gtácJ= 7, 2Hz D ữliệuphổ NM R củahợpchấtSP 14 (Bảng4 2 9 ) đượcsosánhv ớidữliệuphổcủahợpchấtphloridzosid[121]thấycósựtươngđ ồ n g Vìvậy,cóthểkếtluận hợpchấtSP14chínhlàphloridzosid.

HợpchấtSP15thuđượcdạngtinhthểhìnhkimmàutrắng.Trênphổ 1 HNMRxuấthiệnc áctínhiệuđặctrưngcủavòngthơmthế3nhómthếtạiδ H6 , 7 5(1H,d,J=8 , 4Hz),6,80(1H,d,J=

(vòngB),tínhiệucủavòngthơmthế4nhómt h ếk h á c t ạiδ H5 , 9 2( 1 H , s ) v à 5 , 9 9 ( 1 H , s ) ( v ò n g A ) , t í n h i ệuc ủan h ó m methylenetạiδ H2 ,5 6(dd,J,2,

8,4Hz)và2,88(dd,J,2,5,4Hz)vàtínhiệucủa2nhómoxymethinetạiδ H4,04(dd,J,8,7,8 Hz)và4,62(d,J=7,8Hz).

Trênp h ổ 1 3 CN M R x u ấthiệnt í n h i ệuc ủa1 5 c a r b o n đ ặ ct r ư n g củak h u n g f l a v a n o l với12carbonthơmbịoxyhóahoặckhôngbịoxyhóatạiδ C9 5 , 6–146,3,1 δ δ δ

C carbonnhómmethylenetạiδ C2 8 , 5và2carbonnhómmethinebịoxyhóatạiδ C6 8 , 8v à 82,9.H ằngsốtươngtácJ H-2/H-3=7,8Hzđãxácđịnh2protonH-2vàH-

3chiếmvịtrítranssovớinhau.TừdữliệuphổNMRcủaSP15(Bảng4.30)vàsosánhvớidữ liệup h ổc ủa( + ) - c a t e c h i n [ 1 2 2 ] c ó t h ểx á c địnhh ợpc h ấtSP15chínhl à ( + ) - catechin.

6' 120,02 120,0 6,80(d,8,4) 107,20 107,26,43 (s) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ # của(+)-catechinvàδ * của (+)-gallocatechinđotrong(CD)CO- d 6 [122]

HợpchấtSP16thuđượcdạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắng.DữliệuphổNMRc ủah ợ p c h ấ tSP16g i ố n gv ớ i h ợ p c h ấ tS P 1 5 v ớ ic á c t í n h i ệ u đ ặ c t r ư n g c ủ a m ộ t fl avanol(Bảng4.30).ĐiểmkhácgiữaSP16sovớiSP15làởvòngthơmBcủahợpchấtSP16 cóthêm1nhómthếhydroxyl tạiC′-

7 , 2Hz)xácđịnhđịnhhướngtranscủa2protonnày.TừdữliệuphổcủaSP16kếthợpsosánhvới dữliệuphổcủahợpchất(+)-gallocatechin[122]cóthểkếtluậnhợpchấtSP16là(+)- gallocatechin(Hình4.61).

OCH3 52,66 52,3 3,92(s) a CD 3 OD, b 125MHz, c 500MHz,δ # củamethylgallateđotrongCD 3 OD[123]

HợpchấtSP17thuđượcdạngtinhthểhìnhkimmàutrắng.Trênphổ 1 HNMRxuấthiệntí nhiệuđặctrưngcủamộtvòngthơmthếđốixứng4nhómthếtạiδ H7 , 0 7( 2 H , s)vànhómme thoxytạiδ H3,92.Trênphổ 1 3 CNMRxuấthiệntínhiệucủa3carbont h ơ m b ậc4 b ịo x y h ó a t ạiδ C146 ,3( 2 C ) , 1 3 9 , 6 , 1 c a r b o n t h ơmb ậ c4 t ại121,4,2carbonmethinethơmtạiδ C

110,1vàtínhiệunhómcarbonyltạiδ C1 6 9 ,1 DữliệuphổNMRcủaSP17đượcsosánhvớidữliệuph ổtươngứngcủamethylgallate[123]chothấycósựtươngđồng.Dođó,cóthểkếtluậnhợpchấtSP

CáchợpchấtphânlậpđượctừloàiS.bullockiiđượctổnghợpởHình4.63.Cóthểnhậnthấ y,các hợpchấtphânlậpđượctừloàiS.bullockiicũngchủyếubao gồmcácchấtkhungtriterpene5vòng(6hợpchất)vàkhungmegastigmanengoàiracòncómộtsố hợpchấtflavonoid(chalconevàflavanol).

HoạttínhứcchếNOcủacáchợpchấtphânlậptừloàiS.bullockii

SP17khônggâyđộctínhtếbào.Dođó,mứcđộsảnsinhNOtrongmôitrườngnuôic ấytếbà ođượcxácđịnhtrongsựcómặtcủacácchấtphânlậpđượcSP1-

SP17tạid óy nồngđộđượcpha loóngdầntrongkhoảng0-100 àM.Từkếtquảởbảng 3.2, chothấycáchợpchấtphânlậpđược(trừhợpchấtSP11cóhoạttínhyếu)đềuthểhiệnkhảnă ngứcchếhiệuquảsựsảnsinhNOtrêndòngtếbàoRAW264.7đượchoạthóaL i p o p o l y s a c c h a r i d e vớinồngđộứcchếtrungbìnhIC50t r o n gkhoảng1,42đến13,70 àM,thấphơnnhiềusovớiđốichứng dươnglàL-NMMA (IC50=

3 3 , 8àM).Cỏchợpchấttriterpene5vũngthểhiệnhoạttớnhtốttrongviệcứcchếsảnsinhNO.Hợ pchấtmegastigmane(SP11)thểhiệnh o ạtt í n h t r u n g b ì n h t u y n h i ê n d ẫnc h ấtg l y c o s i d e (SP12)v à g a l l o y l g l y c o s i d e (SP13)c ủan ó l ạithểh i ệnh o ạttínht ốt.Hợpc h ấtflavanol(SP14,SP15)thểhiệnhoạttínhrấttốt.Đặcbiệt2hợpchấtSP7vàSP10t r o n gcấutrúccónhómepoxythểhiệnhoạttínhứcchếmạnhnhấtvớigiátrịIC50t ư ơ n gứnglà1,

89 và1,42 àM.Nhưvậyhợpchất triterpene 5vũngthểhiệnhoạt tínhứ cchếsựsảnsinhNOhiệuquảvàdođóđóngvaitròquantrongtronghoạtđộngch ốngviêm.

ThànhphầnhóahọcvàhoạttínhứcchếsựsảnsinhNOcủaloàiS

XácđịnhcấutrúchóahọccáchợpchấtphânlậptừloàiS.attopeuense

4.3.1.1 HợpchấtSA1:SyzycerosideA(1-[(Z)-styryl]-resorcin-2-carboxylicacid5-

HợpchấtSA1thuđượccódạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắng.Trênphổkhốil ư ợ ng phângiảicaoHR-ESI-MScủaSA1xuấthiệnpíciongiảphântửm/z:6 31 ,3 45 1[ M - H ] - và m / z 6 6 7 , 3 2 4 1[ M + C l ] - ,k ế t h ợ p v ớ i d ữ l i ệ u p h ổ 1 3 CN M R v à HSQCc h o p h é p x á c đ ị n h c ô n g t h ứ c p h â n tửc ủ aSA1l àC35H52O10.T r ê n p h ổ 1 HNMRcủaSA1xuấthiện tínhiệucủamộtvòngthơmthếmonotạiδ H7 , 0 9(1H,m)và7,15(4H),2tínhiệudoubletcủa2pr otonvòngthơmkhácởvịtrímetasovớinhautạiδ H6 , 4 3 v à 6 , 3 1(J meta= 2 , 4 H z ) ,2 tínhiệudoubletcủaprotonolefin tạiδ H7 , 2 2và

SA1,SA5vàSA6 Bảng4.32.SốliệuphổNMRcủahợpchấtSA1 a,b a,c

(độbội, J = Hz) a ĐotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,*tínhiệubịchelấp

Hình4.65.Phổ(+)-HR-ESI-MScủahợpchấtSA1 vòngthơmtrongđócó2carbonthơmliênkếtoxytạiδ C1 6 0 , 9và165,0,2carbonolefin tạiδ C1 3 4 , 9và127,4,mộtcarboncarboxylictạiδ C175 ,7và6carbonc ủaphầnđườnggluc osevớicarbonanomertạiδ C1 0 2 , 0 ,5carbonoxymethinetạiδ C78,0,77,7,74,6,70,9và1car bonoxymethylenetạiδ C62,0[124].Dữliệuphổ 1 H, 1 3 CNMRcủahợpchấtSA1(Bảng4.3 2)cósựtươngđồngvớihợpchấtlàgaylussacin(SA5)

[124],dođóhợpchấtSA1cócấutrúcphẳnggiốngvớiSA5.Tuynhiênhằngsốtươngtácgiữa2 protonolefinH-7vàH-8(J H-7/H-8=12,0Hz)nhỏhơnsovớihằng sốtươngtáccủahợpchấtSA5( J H-7/H-8=16,2Hz)có cấuhìnhE.Vì vậy,liênkếtđôiC-7/C- 8củahợpchấtSA1cócấuhìnhZ.CấuhìnhZcủahợpchấtSA1nàyđượckhẳngđịnhdựatươn gtáctrênphổCOSYgiữaH-7(δ H7,22)/H-8(δ H6,47).TrênphổHMBCcủaSA1xuấthiệntươngtác giữaprotonanomerH-1′′(δ H4 ,5 2 )vớiC-

′=7, 8Hzcủaprotonanomertạiδ H4,52đãxácđịnhliênkếtcủađườngglucoselàdạngβ.Phầ nđườngtrongphântửSA1đượcxácđịnhbằngphươngphápthủyphânacidkếthợpvớisắck ýlớpmỏngTLCvàsosánhvớichấtchuẩn[66,125].Kếtquảchothấyphầnđườngđượcxácđ ịnhlàD-glucose.D o đó,hợpchấtSA1đượcxácđịnhlà1-[(Z)-styryl]-resorcin-2- carboxylicacid5-O-β-D- glucopyranosidevàđượcnhómnghiêncứuđặttênlàsyzycerosideA.

4.3.1.2 Hợp chất SA2: Syzyceroside B (muối natri của 6′

Hình4.72.Phổ(+)-HR-ESI-MScủahợpchấtSA2

HợpchấtSA2thuđượcdạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắng.CôngthứcphântửcủaSA 2đượcxácđịnhlàC28H25O13NabằngphươngphápphổkhốiphângiảicaoHR-ESI- MSdựavàopíciongiảphântửm/z615,1091[M+Na] +

(tínhtoánlýthuyếtc h o côngthức[C 28 H25O13Na2] + :615,1085,Δ=+0,5ppm).Điềunàyđ ãgợiýsựcómặtcủanguyêntửnatritrongphântửcủahợpchấtSA2.

DữliệuphổNMRcủahợpchấtSA2(Bảng4.33)khágiốngvớihợpchấtSA1v à SA5n goạitrừviệcxuấthiệnthêmtínhiệucủanhánhgalloyltrênphổNMRcủaSA2.Đólàtínhiệ usinglettrênphổ 1 HNMRcủa2protoncủavòngthơmthếtetratạiδ H7 , 1 3(2H)vàtrênphổ 13 CN MRxuấthiệntínhiệuvòngthơmvới3carbonbậc4liênk ếtv ớio x y tạiδ C1 3 4 , 5 ,1 4 6 , 5 ( 2 C ) , 2 c a r b o n m e t h i n e tạiδ C110,3( 2 C H ) , 1 carbonbậc4tạiδ C121,2, và 1tínhiệucủa carbon carbonyl tạiδ C168,4.Tín hiệu củanhómoxymethylenecủaphầnđườngglucosebịdịchchuyểnvềphíatrườngthấptừ

120 δ δ C δ δ C6 2 , 0 / δ H3 , 6 6và 3,71trong hợpchấtSA1xuốngδ C6 4 , 8 / δ H4 , 3 8và4,68 tronghợpchấtSA2đãgợiýnhánhgalloylliênkếtestervớiphầnđườngtạiC-6′′.

7′′′ 168,4 - 168,4 - a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz, * tínhiệubịchelấp, nd tínhiệukhôngxácđịnhđược ĐiềunàyđượckhẳngđịnhthôngquatươngtácHMBCgiữaH-6′′

′=7, 8Hzxác địnhli ên kếtđ ư ờ nglàdạngβ.TươngtácgiữaprotonanomerH-1′′ (δ H5,04)/H-4/H-6(δ H6,83)vớiC-

5.HơnnữaquátrìnhthủyphânacidđãthuđượcđườngD- glucoseđượcxácđịnhbằngphương phápsắckýlớpmỏng(TLC)sosánhvớichấtchuẩ n[66,125].TừdữliệuphổNMR1 c h i ềuv à 2 chiềuđ ã x á c đ ị nhh ợpc h ấtSA2l àm u ốin g a l l o y l g l u c o p y r a n o s y l p i n o s y l v i ca c i d h a y m u ốin a t r i c ủa6 ′ ′-O- galloylgaylussacin. Đâylàh ợpc h ấtm ớil ầnđ ầ ut i ê n p h â n l ậpv à đ ư ợ cn h ó m n g h i ê n c ứuđ ặ tt ê n l à sy zycerosideB.

2(Bảng4 3 3 ) v ì v ậ y c h ú n g c ó cấut r ú c h ó ah ọc g i ố n g n h a u vàđiềun à y đ ư ợ c khẳn gđịnhchắcchắnhơndựavàophổ2chiềuHSQC,HMBCvàCOSY.Trênphổkhốilượng phângiảicaoHR-ESI-MSxuấthiệnpiciongiảphântửm/z569,1304[M-H ] -

( t í n htoánlýthuyếtchocôngthức[C28H27O13] + :571,1446,Δ=+0 , 7 p p m ) ,m/ z593,1271[M+Na] + ( t í n h toánlý thuyếtcho côngthức [C28H26O13Na] + :569,1300,Δ=-

0,8ppm),điềunàyđãchophépxácđịnhcôngthứcphântửcủaSA3làC28H26O13.Nhưvậy,điể mkhácbiệtduynhấtgiữahợpchấtSA3sovớiSA2làvềkhốilượngphântửvàhợpchấtSA2l àdạngmuốinatricủahợpchấtSA3.Hằngsốt ư ơn gtác 3 J H-7/H-8=16,2Hzgiữa2protonH- 7(δ H8 , 3 3 ) ,H-8(δ H6 , 8 3 )vàJ 1′′,2′

′=7,8H z củaprotonanomertạiδ H5 , 0 5đãxácđịnhcấuhìnhEcủaliênkếtđôiC-7/C-8và dạngliênkếtβcủađườngglycoside.Bởivậy,hợpchấtSA3đượcxácđịnhlà6ʹʹ-O- g a l l o y l g l u c o p y r a n o s y l p i n o s y l v i cacidhay6ʹʹ-O- galloylgaylussacin.Đâylàhợpchất δ δ mớivàđược n h ó m nghiêncứ uđặttên là syzycerosideC c ó cấutr úc hoáhọcnh ư Hìn h4.71.

4.3.1.4 Hợp chất SA4: Syzyceroside D (4′-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→6)- glucopyranosyl]oxy- 2′-hydroxy-6′-methoxydihydrochalcone).

HợpchấtSA4thuđược códạng bộtvôđịnhhìnhkhôngmàu.CôngthứcphântửcủaSA4làC28H36O14đ ư ợ cxácđịnhbằngphươ ngphápphổkhốilượngphângiảic ao HR-ESI-MSdựavàomảnhiongiảphântửm/ z595,1995[M-H] - ,m/z631,1778[M+Cl] - và m/ z614,2438[M+NH4] + ,đãxácđịnhđộbấtbãohòalà11.

6′-OMe 56,8 56,5 3,91(s) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ * củasalicifoliosideAđotrongCD 3 OD[126]

Trênphổ 1 HNMRcủaSA4xuấthiệntín hiệucủaprotonvòngthơmthếmono[ H7 ,25(2H,dd,J,4,7,2Hz),7,29(2H,dd,J,4, 4,8Hz)và7,17(1H,m ) ] ,

2tínhiệutripletcủa2nhómmethylenelaihóasp 3 [  H2 , 9 7(2H,t,J=7,8Hz)v à 3, 32(2H,m)],tínhiệucủa2protonởvịtrímetacủavòng thơmkhác[ H6 , 3 4( 1 H , d,J=2

,4Hz)và6,26(1H,d,J=2,4Hz)],vàtínhiệucủa1nhómmethoxyt ại H3,91(3H,s).Ng oàira,trênphổNMRcònxuấthiệntínhiệucủa2protonanomertại

 H5,02(d,J =7,8Hz)và4,37(d,J=7,8Hz)đồng thờilàtínhiệucủa12protoncủa2đườngsáu.Phổ 13 CNMRvàHSQCchothấysựxuấthiệncủa 28carbontrongđó12carboncủa2vòngthơm,2carbonnhómmethylene( C47,2và31,9),1carbo ncarbonyl( C206,4),1carbonmethoxy( C56,5)vàcáctínhiệucủa2phântửđườngglucose.Dữliệ uNMRcủaSA4(Bảng4.34)đặctrưngcủamộtdẫnchấtglycosidecủachalconevàđượcsosánhv ớihợpchấtsalicifoliosideA[126]chothấysựtươngđồngngoạitrừsựbiếnmấtcủanhómmethox yởvịtríC-3′trongSA4sovớisalicifoliosideA.TươngtácHMBCgiữaprotonanomerH-1′′ ( H5 , 0 2 )vớiC-4′( C1 6 4 , 3)xácđ ị n h vịtríđườngliênkếtvớiphầnaglyconetạiC- 4′.Đườngglucosethứ2liênkếtv ớ i đườngthứnhấttạiC-6′

′doxuấthiệntươngtáctrênphổHMBCgiữaprotona n o m e r H-1′′′( H4 , 3 7 )vớiC-6′′ ( C7 0 , 4 ) Hằngsốtươngtáclớn(J=7,8Hz)c ủ a 2protonanomer H5 , 0 2và4,37chothấ ycả2đườgnđềuliênkếtdạngβ.ĐườngglucoseđượcxácđịnhlàD- glucosenhờphươngphápthủyphânacidvàxácđịnhgócquaycựcdương[66].TừdữliệuphổNM R1chiềuvà2chiềucủaSA4phântíchởtrênkếthợpsosánhvớidữliệutươngứngcủa hợpchấtsalicifoliosideA[126]cóthểxácđịnhhợpchấtSA4là4′-O-[β-D-glucopyranosyl- (1→6)-glucopyranosyl]oxy-2′-hydroxy-6′- methoxydihydrochalcone.Đâylàhợpchấtmớivàđượcnhómnghiêncứuđặttênlàsyzyceroside D.

HợpchấtSA5thuđượcdạng bộtvô địnhhình màu trắngngà Côngthức phântửcủaSA5làC21H22O9đ ư ợ cxácđịnhbằngphổkhốilượngphângiảicaoHR-ESI- MSvớipiciongiảphântửm/z419,1337[M+H] +

(Δ=0ppm).DữliệuphổNMRc ủaSA5(Bảng4.35)cónhữnggiátrịđặctrưnggiốngvớihợ pchấtSA1với2vòngthơm,l i ênk ếtđ ôi( C 7 / C - etạiC-5dựavàotươngtácHMBCgiữaprotonanomer

5(δ C1 6 0 , 9 ) HằngsốtươngtáclớncủaprotonanomerJ=7,2Hzxácđịnhliênkếtđườngglu coselàdạngβ.DữliệuphổNMRcủaSA5đượcsos á n h dữliệuphổtươngứngcủahợpchất gaylussacin[124]chothấysựtươngđồng.V ì vậy,hợpchấtSA5đượcxácđịnhlàgaylussaci ncócấutrúcnhưHình4.64.

3,74(dd,12,0, 6,0) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ # củagaylussacinđotrongDMSO-d 6 [124],δ * của3,5-dihydroxy- stilbene-3-O-β-D-glucosideđotrongCD 3 OD[127]

HợpchấtSA6thuđượccódạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.Côngthứcp h â n t ửlàC20H22O7đ ư ợ cxácđịnhbằngphươngphápphổkhốilượngphângiảicaoHR-ESI-

MSdựa vàopiciongiảphântửm/z373,1294[M-H] -( Δ= - 0,2ppm)vàm/ z4 0 9 , 1 0 6 0[M+Cl] -

( Δ=0ppm).DữliệuphổNMRcủaSA6giốngvớihợpchấtSA5ngoạitrừviệcbiếnmấtcủanh ómcarboxyltronghợpchấtSA6sovớiSA5.Hằngsốt ư ơn g t á cJ = 7 , 8H z c ủap r o t o n a n o m e r đãx á c đ ị nhl i ê n k ếtd ạngβ củađ ư ờ ngglucopyranose Vịtríliênkếtcủađườ

3(δ C1 6 0 , 5 ) DữliệuphổNMRcủaSA6(Bảng4.35)đượcsosánhvới dữliệuphổcủahợpchất3,5-dihydroxy-stilbene-3-O-β-D- glucoside[127]thấycósựt ư ơ n g đồng.VìvậycóthểkếtluậnhợpchấtSA6phânlậpđượcchí nhlàpinosilvin3-O - β-D-glucopyranoside(hay3,5-dihydroxy-stilbene-3-O-β-D- glucoside)[127]cócấutrúchoáhọcthểhiệntrênHình4.64.

HợpchấtSA7thuđượccódạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.Trênphổ p rotoncủaSA7xuấthiệncáctínhiệuđặc trưngcủa3 vòngthơm,baogồm2 tínhiệudoublettạiδ H6 , 2 1và6,38ởvịtrímetavớihằngsốtươngtácnhỏJ=1,8Hzđặct rưn gcho1vòngthơmthếtetra(vòngA),tínhiệusinglettạiδ H7 , 0 2(2H)

H5 , 5 3(d,J=1,2Hz)và1tínhiệudoubletcủanhómmethyltạiδ H1 , 0 7đặctrưngc h o đườngr hamnose.Trênphổ 13 CNMRxuấthiện28tínhiệucủacarbontrongđó15tínhiệuđặc trưngcủaflavonol vớiđặc trưng là2 vòng thơm,1nhóm carbonyltạiδ C1 7 9 , 4 ,2carbonolefinbậc4liênkếtoxytạiδ C1 5 9 , 4và137,5.Ngoàira,trênphổ carbonc ò n x u ấthiệntính i ệu6 c a r b o n c ủađ ư ờ ngrhamnoseđ ặ c t r ư n g bởin h ó m met hyltạiδ C17,8và7carboncủanhánhgalloylđặctrưngbởinhómcarbonyl(δ C167,5)vàvò ngthơmthếđốixứng(δ C1 1 0 , 4 - 1 4 6 , 4 ) TươngtácHMBCgiữaprotona n o m e r H - 1′′ (δ H5 , 5 3 )vớiC - 3 (δ C1 3 5 , 7 )đ ã x á c đ ị n h đ ư ờ ngl i ê n k ếtvớip h ầna g l y c o n e tạiC- 3,tươngtácgiữaH-2′′(δ H5 , 6 5 )vớiC-7′′′

′bằngliênkếtester.Hằngsốtươngt á c nhỏJ=1,2Hzcủaprotonanomerđãxácđịnhliênkết củađườnglàdạngα.DữliệuphổNMRcủaSA7đượcsosánhvớidữliệuphổcủahợpchất2′′- gallicester của

[128]chothấysựphùhợp.VìvậyhợpchấtSA7đượcxácđịnhlàmyricetin-3-O-(2′′-O- galloyl)-α-L-rhamnopyranoside[128,129].

7′′′ 166,83 167,5 - 168,4 - a ĐotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ # của2′′-gallicestercủamyricitrinđotrongCD 3 OD[128]

Hình4.80.CấutrúchóahọcvàcáctươngtácHMBCchínhcủahợpchấtSA8 củahợpchấtSA8(Bảng4.36)rấtgiốngvớihợpchấtSA7vớinhữngtínhiệuđặctrưngcủafl avonolthế,mộtphântửđườngrhamnosevà1nhánhgalloyl.Vịtríliênkếtcủađườngrhamn osevớiphầnaglyconeđượcxácđịnhcũnglàC-

3 (δ C1 3 6 , 4 ) HằngsốtươngtáccủaprotonanomerJ=1,2Hzxácđịnhliênkếtcủađ ư ờ nglà dạngα.ĐiểmkháccủaSA8sovớiSA7làvịtrícủanhánhgalloycủaSA8đ ư ợcxácđịnhlàliê nkếtvớiphầnđườngrhamnoseởvịtríC-3′′′thôngquatươngtácHMBCgiữaH-3′′

′nhưtrongSA7.TừdữliệuphổcủahợpchấtSA8kết hợpsosánhvới dữliệuphổ tươngứngcủahợpc h ấtmyricetin-3-O-(3′′-O-galloyl)-α-L- rhamnopyranoside[128,129]cóthểxácđịnhSA8chínhlàmyricetin-3-O-(3′′-O-galloyl)-α-L- rhamnopyranoside.

Hình4.81.CấutrúchóahọccủahợpchấtSA9,SA10,SA11vàSA12

0,3ppm).DữliệuphổNMRcủahợpchấtSA9(Bảng4.37)cũngcónhữngđặctrưngcủamyricet in,nhánhgalloylgiốngnhư2 hợpchấtSA7,SA8.ĐiểmkhácbiệtcủaSA9sovới2hợpchấtSA7 vàSA8làởphântửđường.Tínhiệucủaprotonanomerxuấthiệntạiδ H5,61(d,J=6,0Hz,H-1′

NMRtrongđó4carbonoxymethinetạiδ C100,9,74,0,71,8,68,9và1carbonoxymethylenetạiδ C66,1đặctrưngcủađườngarabinose.Đồngthời δ δ

C dữliệuphổNMRcủaphầnđườngnàyđượcsosánhvớidữliệu phầnđườngtrong hợpchấtkaempferol3-O-α-arabinopyranoside-2′′-gallate[130]vàquercetin3-O-α- arabinopyranoside-2′′- gallate[131]chothấysựtươngđồng.D o đ ó cóthểxácđịnhphầnđườngnàylàarabinopyranose VớiđườngnămarabinopyranosethìhằngsốtươngtácJ=7,2Hzxácđịnhlàliênkếtdạngα,khác sovớicácđườngsáukhác.PhầnđườngarabinoseliênkếtvớiphầnaglyconetạiC-

3dođộdịchchuyểnhóahọccủacarbon olefin C-3nàyvềphíatrườngthấphơnδ C135,2sovớiC- 3khôngbịthếởhợpchấtSL8(kaplanin)cóδ C104,8.

4′ 136,91 138,0 - a ĐotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ # củahợpchấtmyricetin3-O-β-D-(2′′-galloyl)arabinopyranoside đotrongDMSO-d 6 [132]

′giốngnhưhợpchấtSA7vàđượcxácđịnhbởiđộdịchchuyểnhóahọcvềphíatrườngthấptrongp hổprotoncủaH-2′′(δ H5,47)trongSA9sovớikhôngthế(δ H3-

4).DữliệuphổNMRcủahợpchấtSA9(Bảng4.37)đượcs o sánhvớihợpchấtmyricetin3-O-β-

D-(2′′- galloyl)arabinopyranoside[132]thấytươngđồngvềđộdịchchuyểnhóahọcnhưngvềđịnhhư ớngliênkếtđườngthìngượclại.Vìvậy,cóthểkếtluậnhợpchấtSA9làmyricetin3-O-(2′′- galloyl)-α-arabinopyranoside.

HợpchấtSA10phânlậpđượccódạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.PhổNMRcủahợpchấtSA10cũngcócáctínhiệuđặctrưngcủamyricetinaglyconevà

/δ H5,34(d,J=1,2Hz)vànhómmethyltạiδ C17,6/ δ H0 , 9 9(3H,d,J=6,0Hz)đặctrưngchođườngrhamnose.Tuynhiên,khácvớihợpchấ tSA7,SA8,trênphổcủah ợ p c h ấ tS A 1 0 k h ô n gx u ấ t h i ệ n t í n h i ệ u c ủ a n h á n h g a l l o y l L iênk ế t c ủ a đ ư ờ n g rhamnosevớiaglyconelà ở vịtríC-

3giốngSA7,SA8vìkhi sosánhdữliệu phổcủaSA10vớiSA7vàSA8thấycósựphùhợp.HằngsốtươngtácnhỏJ=1,2Hzcủap ro t o n anomertạiδ H5 , 3 4đãxácđịnhliênkếtđườngrhamnoselàdạngα.Vìvậy,cóthểk ế t l u ậ n h ợ p c h ấ tSA10làm y r i c e t i n - 3-O-α-L- rhamnopyranoside[ 1 2 9 ] c ó c ấutrúchoáhọcnhưHình4.81.

(độbội, J = Hz) a ĐotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz

1cũng xuất hiệncác tín hiệu đặc trưngcủa myricetinbao gồmtínhiệucủa

110,0,2carbonolefinictạiδ C1 3 5 , 7và158,7,1carbonyltạiδ C1 7 9 , 3 Tínhiệucủađường glucoseđặctrưngbởiprotonanomertạiδ H5,39(d,J=7,8Hz),carbonanomertươngứngtạiδ C10 4,0vànhómoxymethylenetạiδ C62,5/ δ H3,64(dd,J ,4,5,4Hz)/

3docũngtươngđồngvềđộdịchchuyểnhóahọcgiốngvớiSA7đãphântíchởtrên.Hằngsốtươn gtáccủaprotonanomerJ=7,8Hzxácđịnhdạngliênkếtcủađườngglucoselàβ.DữliệuphổNMRcủaSA11(Bảng4.39)đượcsosánhvớidữliệuphổ δ δ δ C δ δ củahợpchấtmyricetin3- glucoside[133]thấycósựtươngđồng.Vìvậy,cóthểkếtluậnhợpchấtSA11chínhlàmyricetin 3-O-β-glucopyranoside(Hình4.81).

3,76 (d,11,4, 2,4) 3,68(dd,11,4, 6,0) a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, * c 600MHz,δ # củamyricetin3-glucosideđotrongCD 3 OD(5%DMSO-d 6 )[133], δ C củamyricetin3-O-β-D-galactopyranosideđotrongDMSO-d 6 [134]

HợpchấtSA12thuđượccódạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàngnhạt.PhổNMRcủahợ pchấtSA12giốngvớiSA11(Bảng4.39)vớicáctínhiệuđặctrưngcủaphầnaglyconelàm yricetinvàđườnghexose.ĐiểmkhácbiệtgiữaSA12sovớiSA11làhằng sốtươngt ácJcủaprotonH-4′′trongphầnđường.TronghợpchấtSA12hằngsốtương tácJ H-3/H-

4=3,0Hz nhỏhơnnhiềusovới hằngsố tương tácJ H-3/H-

′tronghợpchấtSA12sẽngượclạisovớiSA11.Hơnnữa,kếthợpsosánhhằngsốtươngtá cJ H-1/H-2=7,8HzvàJ H-3/H-4=3,0HzcủahợpchấtSA12vớiđườngβ-D-galactopyranose(J H-1/H-

2=7,8HzvàJ H-3/H-4 =3,0Hz)[135]chothấysựtrùngkhớp.Vì vậycóthểxác địnhphântửđườngtrongSA12chínhlàβ-D- galactopyranoside.Từdữliệuphổ NMR củaSA12kếthợpso

C sánhvớidữl iệ uphổ h ợ pchấtmy ri ce ti n- 3-O-β- galactopyranoside[ 1 3 4 ] cóth ểkếtluậnhợpchấtSA12chínhlàmyricetin-3-O-β-D- galactopyranoside(Hình4.81).

Hình4.82.CấutrúchóahọccủahợpchấtSA13,SA14 Bảng4.40.SốliệuphổNMRcủahợpchấtSA13,SA14vàcáchợpchấtthamkhảo

3,46 (d,11,4) 3,84(d,11,4) a đotrongDMSO-d 6 , b CD 3 OD, c 150MHz, d 600MHz,δ * # củaquercetin-3-O-rhamnopyranosideđotrong -

HợpchấtSA13thuđượccódạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàng.PhổNMRcủahợpchấ tSA13cho thấycác tínhiệuđặctrưng củaquercetin Trênphổ 1 H NMR xuấthiệntínhiệucủa1vòngthơmthếtetratại H6 , 2 1(s,H-6)và6,38(s,H-8),1v ò n g

4).PhầnđườngrhamnosecủaSA13đượcxácđ ị nhbởitínhiệuan o m e r t ại C1 0 1 , 9 /H5,37( s ) v à tính i ệuc ủa1 n h ó m m e t h y l tại C1 7,5 /

SA12đãphântíchởtrên.HằngsốtươngtácJn hỏ(singlet)của protonanomerđãxácđịnhliênkếtcủađườnglàdạngα- glycoside.D ữliệuphổNMRcủaSA13(Bảng4.40)đượcvớisosánhdữliệuphổcủahợpc h ấtquercitrin[136]chothấysựphùhợp.Vìvậy,cóthểkếtluậnhợpchấtSA13làq u e r c i t r i n

HợpchấtSA14códạngbộtvôđịnhhìnhmàuvàng.DữliệuphổNMRphầnagl yco ne quercetincủaSA14cũnggiốngvớihợpchấtSA13(Bảng4.40).Điểmkhácbiệtgiữa2hợpc hấtnàylàởphầnđường.PhầnđườngcủaSA14cónhữngđặctrưngcủaarbinopyranosidgiốn gvớiSA9vớitínhiệucủa6proton(1protonanomertạiδ H5 , 1 6(d,J=6,0Hz)và2protonnhó mmethylenetạiδ H3 , 4 6(d,J.4Hz),3,84(d,J.4Hz)và3protonnhómoxymethin etạiδ H3 , 6 6 ,3,83và3,92)vàtínhiệuc ộnghưởngcủa5carbon(1carbonanomertạiδ C1 0 4 ,

7 ,1carbonmethylenetạiδ C6 7 , 0và3carbonnhómoxymethinetạiδ C6 9 , 1 ,72,9và74,2). ĐườngarabinoseliênkếtvớiphầnaglyconeởC-3giốngnhưSA13vàhằngsốJ=6,0

Hzxácđịnhliênkếtc ủađườnglàdạngα,khácvớiđịnhhướngcủacácđườnghexosekhác.D ữliệuphổN M R củaSA14(Bảng4.40)đượcsosánhvớidữliệuphổtươngứngcủahợpc hấtq u e r c e t i n 3-O-α-L- arabinopyrannoside[137]chothấycósựtươngđồng.Vìvậy,cóthểk ếtl u ậnhợpc h ấtSA1

Hình4.83.CấutrúchóahọccủahợpchấtSA15,SA16 Bảng4.41.SốliệuphổNMRcủahợpchấtSA15,SA16vàhợpchấtthamkhảo

4′ 133,19 134,0 - # 132,94 * 133,6 - a đotrongCD 3 OD, b 150MHz, c 600MHz,δ C của(+)-gallocatechinvàδ C của (-)- epigallocatechinđotrong(CD 3 ) 2 CO[122]

HợpchấtSA15thuđượcdạngbộtvôđịnhhìnhmàutrắng.PhổNMRcủahợpchấtSA15t rùngkhớpvớihợpchấtSP14phânlậpđượctừloàiS.bullockiivớicáctínhiệuđặctrưngcủamột flavanol.Trênphổprotonxuấthiệntínhiệucủa2vòngthơmtạiδ H5,94,5,89(mỗitínhiệucủa1H ,d,J=2,4Hz)(vòngA)vàδ H6,42(2H,s)(vòngB);1nhómmethylenetạiδ H/δ C(2,53,2,84)/

68,7,4,56(d,J =7,4Hz)/82,8.Hằngsốtươngtác giữa2protonH-2vàH-3(J H-2/H-

3=7,2Hz)xácđịnh cấuhìnhtranscủa2protontrongvòngnày.TừdữliệuphổcủaSA15kếthợpsosánhvớidữliệuph ổcủa

HợpchấtSA16thuđượccũngcódạng bộtvôđịnh hìnhmàu trắng.PhổNMRcủahợpchấtSA16khátươngđồngvớihợpchấtSA15vềgiátrịcộnghưởng carbonv à protonđặctrưngcủagallocatechin(Bảng4.41).Điểmkhácbiệtcủahaihợpch ấtl àởhằngsốtươngtácgiữa2protonH-2vàH-3.ỞhợpchấtSA16,hằngsốtươngtácJ H-2/H- 3~0HzrấtnhỏsovớihợpchấtSA15 J H-2/H-3=7,2Hzđãxácđịnhcấu hìnhciscủa2protonnàytronghợpchấtSA16.DữliệuphổNMRcủaSA16đượcsosánhvớidữl iệuphổcủahợpchất(-)- epigallocatechin[122]chothấysựphùhợp.Dođó,hợpchấtSA16đượcxácđịnhlà(-)- epigallocatechin(Hình4.83).

3.1.1.17 Hợp chất SA17: Ellagic acid 3,3′,4′-tri-O-methyl ether-4-O-β-D- glucospyranoside.

HợpchấtSA17thuđượcởdạngtinhthểmàutrắng.Côngthứcphântửcủahợpch ấtSA17làC23H22O13đ ư ợcxácđịnhbằngphươngphápphổkhốilượngphângiảicaoHR- ESI-MSdựavàopíciongiảphântửm/z507,1134[M+H] +( Δ=-0,2ppm),m/ z524,1395[M+NH4] + ( Δ=+0,7ppm),m/z529,0972[M+Na] + ( Δ=-3,6 ppm),m/z541,0753[M+Cl] -

( Δ=+0,2ppm).TrênphổNMRcủaSA17xuấthiện2tínhiệusingletc ủap r o t o n t h ơ m t ạ iδ

H7,66( 1 H , s ) v àδ H7,85( 1 H , s ) , 3 t í n hiệusingletcủanhóm3nhómmethoxytạiδ H4 , 0 2(3 H,s),4,06(3H,s)và4,11(3H,s),tínhiệucủaprotonanomertạiδ H5 , 1 7(d,J=7,2Hz)và6prt onkháccủađườngsáutạiδ H3 ,7 0 ,3 , 5 1 , 3 , 4 3 , 3 , 3 0 (2)v à 3 , 2 2 P h ổc a r b o n x u ấthiệ nt í n h i ệuc ủa2 3 carbon,trongđó12c a r b o n thơmcủa2 v ò n g benzene v à 2 carbon carbonyl tạiδ C

Định dạng
Số trang	214
Dung lượng	6,83 MB