Định Lượng Enterobacteriaceae Bằng Phương Pháp Đếm Khuẩn Lạc.pptx

ĐỊNH LƯỢNG ENTEROBACTERIACEAE BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP HCM GVHD Đinh Thị Hải Thuận 1 SVTH NHÓM 1 THÀNH VIÊN NHÓM 1 5 1 Lê Võ Hoài Bảo 2005200304 2 Nguyễn[.]

ĐỊNH LƯỢNG

ENTEROBACTERIACEAE BẰNG

PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC

Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP HCM

GVHD: Đinh Thị Hải Thuận

1 SVTH: NHÓM 1

4 Lê Thị Tuyết Ngân 2005200635

5 Nguyễn Lê Kiều Mị 2005200382

3

1 Enterobacteriaceae

Trực khuẩn gram (-) , Không sinh nha bào , có thể di động

hoặc không

vi khuẩn đường ruột hiếu khí hoặc kỵ khí tùy tiện

Lên men đường glucose có kèm theo sinh hơi hoặc không

2 Phạm vi áp dụng

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 5518 - 2:2007 ISO 21528 -2:2004

Phương pháp này dùng để định lượng

MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT MỤC ĐÍCH

SPW (Saline Peptine Water) Pha loãng mẫu

VRBG (Violet Red Bile Glucose)

Nuôi cấy Enterobacteriaceae

3 Môi trường & hóa chất

SPW (Saline Peptine Water)

Thành phần Vai trò

Sodium chloride Điều chỉnh trương lực

Peptone Cung cấp nito, nguồn thức ăn cho vi sinh vật

Nước Giúp cho quá trình trao đổi chất, các phản ứng

hóa sinh diễn ra thuận lợi

3 Môi trường & hóa chất

VRBG (Violet Red Bile Glucose)

Peptone Cung cấp Nitơ, nguồn dinh dưỡng cho vi sinh vật đặc biệt là amino acid

Cao nấm men Cung cấp các dưỡng chất (acid amin ).

Muối mật Ức chế chọn lọc.

Glucose Cung cấp năng lượng cho sự sinh trưởng và trao đổi chất.

Sodium chloride Duy trì áp suất thẩm thấu.

Đỏ trung tính Chỉ thị pH.

Tím tinh thể (Crystal violet) Ức chế chọn lọc

Thạch Tác nhân làm đông cứng môi trường.

Nước Giúp cho quá trình trao đổi chất, các phản ứng sinh hóa diễn ra thuận lợi.

Bước 1 Chuẩn bị mẫu thử và huyền phù ban đầu

Cân chính xác 10g (mẫu rắn) hoặc

10ml (mẫu lỏng)

Dung dịch pha loãng SPW 90ml

vô trùng

Đồng nhất mẫu trong vòng 2 - 3 phút

Bước 2 Pha loãng mẫu

Mục đích : giảm bớt VSV trong mẫu để thuận tiện cho việc

quan sát sự phát triển của chúng 9

Bước 3 Cấy và ủ mẫu

Khi môi trường đã đông đặc lại thì phủ kín thêm một lớp dày 10ml

của cùng loại môi trường VRBG Để cho đông đặc lại Lật úp đĩa và ủ

Bước 4 Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định

Đếm các đĩa có số khuẩn lạc dưới

150 sau 24 giờ nuôi cấy

Chọn 5 khuẩn lạc đặc trưng cấy ria lên môi trường dinh dưỡng

Chọn 5 khuẩn lạc đặc trưng cấy ria lên môi trường dinh dưỡng

Ủ các đĩa này ở 37 0 C trong

24 giờ

11

Không dùng que cấy bằng niken/crom

Âm tính khi màu của giấy lọc không chuyển sang màu sẫm trong vòng 10s

Bước 5 Khẳng định Enterobacteriaceae

6 Kết quả

Các khuẩn lạc cho kết quả âm tính oxidase và dương tính glucoza được khẳng định là

Enterobacteriaceae.

Enterobacteriaceae trong 1g/1ml mẫu (X) được tính theo công thức:

C1,2,3,4: Số khuẩn lạc Enterobacteriaceae đếm được tương ứng trên 4 đĩa của hai độ pha loãng liên tiếp

V: Thể tích dịch cấy đã cấy trên mỗi đĩa, tính bằng mililit

n1: Số đĩa ở độ pha loãng thứ nhất được giữ lại

n2: Số đĩa ở độ pha loãng thứ hai được giữ lại

d : hệ số pha loãng ứng với độ pha loãng thứ nhất được giữ lại

R1,2,3,4: tỉ lệ khẳng định dương tính tương ứng trên 4 đĩa của hai độ pha loãng liên tiếp.

14

Kết luận

Họ vi khuẩn Enterobacteriaceae là loại vi khuẩn phổ biến

nhất ảnh hưởng đến ngành thực phẩm Vi khuẩn trong nhóm

này được phát hiện và đếm bằng các xét nghiệm và phân tích

thông thường được thực hiện trong phòng thí nghiệm Trong bối

cảnh này, Số lượng vi khuẩn Enterobacteriaceae là một nghiên

cứu ngày càng quan trọng cho thấy chất lượng thực phẩm.

15

A.11 B.12 C.13 D.14

Câu 1: Theo cách phân loại của Bergey’s Manual (1984) chia

Enterobacteriaceae làm bao nhiếu giống chính?

Câu 2: chọn câu đúng nơi cư trú của Enterobacteriaceae ?

A.Ống tiêu hóa ở người và động vật

B Đất, nước

C Thức ăn

D Tất cả A B C đều đúng

Câu 3: Chọn câu phát biểu SAI?

A Các vi khuẩn Enterobacteriaceae đều di chuyển được

B Các vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae là những trực

khuẩn gram âm, không sinh

nha bào

C Một số giống vi khuẩn thường không di động (Klebsiella,

Shigella), một số vi khuẩn khác di động nhờ có lông ở xung quanh thân tế bào

D Một số giống có vỏ nhìn thấy được nhờ kính hiển vi thường như Klebsiella

Câu 4: Các giống vi khuẩn họ Enterobacteriaceae có ý nghĩa y học nhất là?

Câu 6: Điền vào chỗ trống: Các vi khuẩn thuộc họ

Enterobacteriaceae lên men glucose, có sinh hơi hoặc không sinh hơi, oxidase … tính, catalase … tính, khử … thành

nitrite

A Dương; âm; nitrate

B Âm; dương; nitrate

C.Âm; dương; nitrite

D Dương; âm; nitrite

Câu 7 Phạm vi áp dụng của phương pháp định lượng

Câu 8: Trong định lượng Enterobacteriaceae, khi lên men glucoza xuất hiện màu gì thì phản ứng được khẳng định

là dương tính?

A Màu vàng

B Màu đỏ tía

C Màu hồng

D Màu xanh lam

Câu 9:Các loài vi khuẩn nào sau đây thuộc họ

Enterobacteriaceae?

A E.coli, Shigella, Proteus,Salmonella,V.cholerae

B Liên cầu ruột, Shigella, Klebsiella, Yersinia

C E.coli, Shigella, Salmonella, Klebsiella ,Yersinia

pestis

Câu 10:Trong định lượng Enterobacteriaceae,phép thử phản ứng oxidase xuất hiện màu gì thì phản ứng

A Thạch glucoza và thuốc thử oxidase

B Blood agar base

C Arginine dehydrolase

D Cả 3 môi trường trên

Câu 12: Mục đích của môi trường SPW là:

A Phục hồi

B Pha loãng mẫu

C Khẳng định

D.Nuôi cấy

Câu 13: Thành phần của môi trường VRBG:

A.Cao nấm men, dịch thủy phân mô động vật bằng enzyme, muối mật No.3, glucoza, Natri Clorua

B.Cao nấm men, dịch thủy phân mô động vật bằng enzyme, muối mật No.3, glucoza, Natri Clorua, đỏ trung tính

C.Cao nấm men, dịch thủy phân mô động vật bằng enzyme, muối mật No.3, glucoza, Natri Clorua, đỏ trung tính, tím tinh thể(crystal violet)

D.Dịch thủy phân mô động vật bằng enzyme, muối mật No.3,

Câu 14: Mục đích của NA/TSA trong nuôi cấy Entrerobacteriace:A.Pha loãng mẫu

Câu 19 Sắp xếp quy trình định lượng Enterobacteriaceae theo đúng thứ tự?

1/Cấy và ủ mẫu 2/Pha loãng mẫu 3/Khẳng định

Câu 22 Các khuẩn lạc cho kết quả oxidase và glucoza như thế nào thì được khẳng định là Enterobacteriaceae?

A Âm tính oxidase, dương tính glucoza

B Dương tính oxidase, âm tính glucoza

C Âm tính oxidase và glucoza

D Dương tính oxidase và glucoza

Câu 23 Đặc điểm của Enterobacteriaceae ?

A Cầu khuẩn, Gram (-)

B Trực khuẩn, Gram (+)

C Xoắn khuẩn, Gram (-)

D Trực khuẩn, Gram (-)

Câu 24:Đặc điểm khuẩn lạc Enterobacteriaceae trên môi trường VRBG?

A Có màu xanh đến màu vàng, có hoặc không có quầng tủa

B Có màu xanh đến màu vàng

C Có màu hồng đến màu tím hoặc đỏ tía

D Có màu hồng đến màu đỏ hoặc đỏ tía

Câu 25: Nguyên tắc định lượng Enterobacteriaceae

A VSV hình thành khuẩn lạc trên thạch glucoza mật đỏ tím,

phản ứng oxiase âm tính, lên men glucoza

B VSV hình thành khuẩn lạc trên thạch glucoza mật đỏ tím, phản ứng oxiase dương tính, lên men lactose

C VSV hình thành khuẩn lạc trên thạch glucoza mật đỏ tím,

phản ứng oxiase dương tính, lên men glucoza

D VSV hình thành khuẩn lạc trên thạch glucoza mật đỏ tím,

phản ứng oxiase âm tính, lên men lactose

Câu 26 Hầu hết các Enterobacteriacea điều có

A Sinh nha bào

B Lên men lactoza

C Di động

D tạo thành H2S

Câu 28: Những chủng thuộc họ Enterobacteriaceae có tính chất di động thì?

A Có nhiều lông ở xung quanh thân tế bào vi khuẩn

B Có một chùm lông ở một đầu tế bào vi khuẩn

C Có lông ở 2 đầu tế bào vi khuẩn

D Có một lông ở một đầu tế bào vi khuẩn

Câu 29: Cần chọn đĩa có bao nhiêu khuẩn lạc để khẳng định kết quả

A ≤ 150

B ≥ 150

C 300

D < 300

Câu 28 Thứ tự các bước định lượng Enterobacteriaceae bằng phương pháp đếm khuẩn lạc

1 Vô trùng môi trường & dụng cụ thí nghiệm

THANKS YOU

16