đề tài định lượng nấm men nấm mốc bằng phương pháp đếm khuẩn lạc

NẤM MEN : • Nấm men là loại nấm đơn bào, thường có hình cầu hoặc hình bầu dục... NẤM MỐC : • Nấm mốc là loại nấm mọc ở dạng sợi đa bào hay còn gọi là sợi nấm.. Các nhánh sợi nấm hình ống

GVHD: ĐINH THỊ HẢI

THUẬN

NHÓM 3 : NôngThị Kim Chi- 2005210236

Lê Hoàng Quỳnh Nhi- 2005210379

An Thị Thanh- 2005211062 NguyễnTrần Anh Thư- 2005210464

4.TÍNH TOÁN

KẾT QUẢ

TỔNG QUAN:

NẤM MEN :

• Nấm men là loại nấm đơn bào, thường có hình cầu

hoặc hình bầu dục

• Nấm men thì trường màu trắng, trắng đục

• Nấm men tăng trưởng giới hạn trong phạm vi pH từ 4,0 đến 4,5.

NẤM MỐC :

• Nấm mốc là loại nấm mọc ở dạng sợi đa bào hay còn gọi là sợi nấm Các nhánh sợi nấm hình ống này có nhiều nhân giống hệt nhau về mặt di truyền, nhưng tạo thành một thể thống nhất.

• Nấm mốc thường phát triển chậm hơn so với nấm men sau khi được cấy vào môi trường.

• Nấm mốc có thể phát triển trong phảm vi nồng độ axit(pH) rộng hơn so với nấm men

PHÔ MAI

RAU CỦ QUẢ ,TRÁI

CÂY

BÁNH MÌ , CÁC LOẠI ĐẬU VÀ

HẠT

NGUỒN THỰC PHẨM:

PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC

THỦ CÔNG

TỰ ĐỘNG

Đầu tiên , người ta thường đặt đĩa petri lên

một lưới ô Sau đó đếm các khuẩn lạc

trong mỗi ô và đánh dấu khuẩn lạc đếm

được ở đằng sau của đĩa petri

Nguyên lí cơ bản của máy đếm khuẩn lạc tự động là máy đếm khuẩn lạc sẽ chụp một ảnh của đĩa, sau đó sẽ sử dụng một thuật toán để tách và đếm các khuẩn lạc có trên đĩa.

MÔI TRƯỜNG

VÀ HÓA CHẤT

MÔI TRƯỜNG-HÓA CHẤT MỤC ĐÍCH

Saline Peptone Water (SPW) Pha loãng mẫu

DG18 Nuôi cấy nấm men và nấm mốc

PHẠM VI ÁP DỤNG

TCVN 8275-1,2010

(ISO 21527-1:2008)

Sản phẩm thủy phân mô động vật hoặc thực vật bằng enzyme

Có vai trò khử độc cho môi trường

D-Glucoza (C6H12O6) Là nguồn vật chất cung cấp C trong quá trình sinh trưởng của vi sinh

vật

Kali dihydro phosphat (KH2PO4) Làm nên hệ thống đệm giúp điều chỉnh pH môi trường

Magie sulfat (MgSO4.H2O) Trung tâm hoạt tính của một số thành phần của sắc tố quang hợp

Dichloran (2,6-dicloro-4-nitroanilin) Ức chế sự kéo dài khuẩn ty nấm mốc mọc nhanh , vì thế cho phép phát

hiện những nấm mốc mọc chậmRose Bengal

Thạch Làm rắn môi trường chứ không phải là cơ chất dinh dưỡng cho vi sinh

vật sử dụng

Chloramphenicol Là kháng sinh, có tác dụng kìm khuẩn

Nước cất hoặc nước đã loại ion Là yếu tố quan trọng nhất quyết định sự phát triển của mọi sinh vật

DRBC

NaCl Duy trì cân bằng áp suất thẩm thấu

Peptone

Nguồn cung cấp các Nitrogen và cacbon, các axit amin chuỗi dài,

vitamin và các chất dinh dưỡng cần thiết khác

Nước cất Pha môi trường

SPW:

SPW là môi trường dinh dưỡng tốt để khuẩn lạc phát triển

Pepton là chất dinh dưỡng để cho vi khuẩn phát triển tốt, nước muối dùng để tạo áp suất thẩm

thấu.

Ống nghiệm Tủ cấy vô trùng

Đĩa petri Nồi hấp

Cốc thủy tinh (100ml,250ml) Tủ ấm

Bình tam giác (250ml) Máy dập mẫu (Stomacher)

Ống đong (100ml ) Máy trộn mẫu (vortex mixer)

Đầu tip Pipetman Cân phân tích ( 4 số lẻ )

Lò viba DỤNG CỤ :

QUY TRÌNH

ĐỊNH LƯỢNG

Lấy 10g/25g (mẫu rắn)

hoặc hút 10ml/25ml

(mẫu lỏng)

90ml dung dịch pha loãng SPW

Cho vào máy dập mẫu (mẫu rắn) hoặc lắc đều

(mẫu lỏng

Bước 1: Chuẩn bị mẫu thử

và huyền phù ban đầu

Mục đích: đồng nhất mẫu

DRBC hoặc DG18

Hút 0,1ml dd mẫu

Ủ các đĩa đã chuẩn bị trong môi trường hiếu khí, nắp hướng lên trên, tư thế thăng đứng trong tủ ấm ở

25 ±1°C trong 3-5 ngày

Bước 3:Cấy và ủ mẫu

Mục đích:Sau khi có mẫu ta cần cấy mẫu vào môi trường để vi sinh vật có môi trường phù hợp để phát tiển về kích thước, sau đó ta cần ủ trong nhiệt độ thích hợp để thời

gian cho vinh sinh vật phát triển

Chọn đĩa chứa ít hơn 150 khuẩn lạc

và đếm

Bước 4: Quan sát, chọn và đếm khuẩn lạc

Mục đích:Sau khi pha loãng và ủ để vi sinh vật phát triển về kích thước và số lượng ta có thể đếm số lượng nấm men-nấm mốc có trong dĩa, từ đó tính toán ra hàm lượng vi sinh có trong

sản phẩm

MÀU CỦA KHUẨN LẠC

Khuẩn lạc nhỏ có màu xanh lục hoặc trắng nhạt là nấm men

Khuẩn lạc có màu xanh nhưng cũng có thể có sắc tố tự nhiên là nấm mốc

TÍNH TOÁN

KẾT QUẢ

C: Tổng số khuẩn lạc nấm men hoặc nấm mốc đếm được trên 4 đĩa của 2 độ pha loãng liên tiếp V: Thể tích dịch cấy đã cấy trên mỗi dĩa ,tính bằng ml

n1 :số đĩa ở độ pha loãng thứ nhất được giữ lại n2 :số đĩa ở độ pha loãng thứ hai được giữ lại d: độ pha loãng đầu tiên được giữ lại

Tổng số nấm men hoặc nấm mốc trong 1g mẫu (X) được tính theo công thức :

Làm tròn số kết quả có được tới 2 số có nghĩa (chẳng hạn 2864 làm tròn là

2900 ) và biểu thị theo công thức :

a: số thập phân tương ứng có giá trị từ 1.0 đến 9.9

n : số mũ phù hợp của 10

Độ pha loãng 10^-2 10^-3

Số khuẩn lạc 99 11

Ví dụ cách tính tổng nấm men và nấm mốc

trong 1ml sữa lên men :

So khuẩn lạc nấm men hoặc nấm mốc đếm được trên 2 độ pha loãng liên tiếp là

-Ở độ pha loãng d=10^ -2 , đếm được 99khuẩn lạc và 91khuẩn lạc

-Ở độ pha loãng d= 10^ -3 , đếm được 11khuẩn lạc và 9khuẩn lạc

Với V=0.1g

->Làm tròn kết quả là 9.5x10^4

CFU/ml

Theo quyết định 46/2007 của Bộ Y tế:

-> Mẫu không đạt chỉ tiêu nấm men, nấm

mốc

CÂU HỎI

TRẮC NGHIỆM

1.Để tránh các bào tử lắng

xuống nhanh trong pipet

cần để pipet ở tưthế

Nằm ngang Thẳng đứng Nằm nghiêng

Cả A và B đềuđúng

A.

B.

C.

D.

1.Để tránh các bào tử lắng

xuống nhanh trong pipet

cần để pipet ở tưthế

Nằm ngang Thẳng đứng Nằm nghiêng

Cả A và B đềuđúng

A.

B.

C.

D.

2.Trong quá trình chuẩn bị

mẫu thử, mẫu thử có thể

được chứ trong

Cốc thủy tinh Túinhựavôtrùng Bình tam giác

Cả B và C đềuđúng

A.

B.

C.

D.

2.Trong quá trình chuẩn bị

mẫu thử, mẫu thử có thể

được chứ trong

Cốc thủy tinh Túinhựavôtrùng Bình tam giác

Cả B và C đềuđúng

A.

B.

C.

D.

B.

C.

D.

B.

C.

D.

4.Thời gian và nhiệt độ ủ

nấm men, nấm mốc?

30°C, 3-5 ngày 20°C, 2-3 ngày 25°C, 3-5 ngày Tất cả đều sai

A.

B.

C.

D.

4.Thời gian và nhiệt độ ủ

nấm men, nấm mốc?

30°C, 3-5 ngày 20°C, 2-3 ngày 25°C, 3-5 ngày Tất cả đều sai

A.

B.

C.

D.

5.Sự khác nhau giữa

hai môi trường DRBC

và môi trường DG18?

DRBC có chứa magiesulfat

DRBC cóchứa rose

bengal DG18 cóchứa glycerol khan

5.Sự khác nhau giữa

hai môi trường DRBC

và môi trường DG18?

DRBC có chứa magiesulfat

DRBC cóchứa rose

bengal DG18 cóchứa glycerol khan

THANK YOU

FOR LISTENING