PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS CEREUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC

Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng địnhBước 5.. Để vi sinh vật thương do thay đổi nhiệt , thì nhiệt độ của dịch pha loãng Lắc huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng bằng máy vortex

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG THƯƠNG

I.Tổng quan về Bacillus

cereus

Liều lượng gây ngộ độc 10 6 -10 8 tế

II Phân Tích Bacillus

cereus

Nguồn nhiễm

5

Diarrhoeal toxin Emetic

Phạm vi áp

dụng

• Phương pháp được tham chiếu theo TCVN 4992:2005 ( ISO

7932:2004)

• Phương pháp này áp dụng cho các sản phẩm dùng cho người, thức

ăn chăn nuôi, các mẫu môi trường trong khu vực sản xuất và xử lý

thực phẩm.

• Cấy một lượng mẫu qui định lên bề mặt môi trường nuôi cấy đặc đựng

trong các đĩa petri

• Pha loãng theo tỉ lệ 1:9 ( 1 mẫu - 9 SPW )

• Ủ trong điều kiện hiếu khí 30 o C/18-48h

• Tính số lượng B.Cereus trong 1ml hoặc 1g mẫu

Nguyên tắc

8

Môi trường và hóa chất

Môi trường và hóa chất Mục đích SPW ( Saline Peptone Water ) Pha loãng mẫu

MYP agar base ( Mannitol- Egg Yolk-

HCL và NaOH 10% Chỉnh pH

1 0

Thành Phần Hàm Lượng Vai trò

Mannitol 10 g/l Phân biệt Bacillus cereus dựa trên

khả năng phân giải mannitol

Peptone 10 g/l Cung cấp nguồn nitơ và cacbon cho

vi sinh vật.

Sodium chloride 5 g/l Điều hòa áp suất thẩm thấu của

môi trường.

Agar 15 g/l Tạo thành dạng rắn cho môi trường

Egg yolk emulsion 100 ml/l Là một nguồn dinh dưỡng và chất

béo cho vi sinh vật.

Polymyxin B sulphate 0.3 mg/l  Ức chế sự phát triển của các vi

khuẩn Gram âm

Môi Trường MYP

Pha Loãng

12

Bước 4 Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định

Bước 5 Đọc kết quả

Cho dung dịch pha loãng SPW 90ml (sai số cho phép + 5% ) vô trùng vào túi nhựa (bình tam giác) chứa mẫu.

Đồng nhất mẫu và dịch pha loãng SPW trong máy dập mẫu trong 1 phút hoặc lắc đều bình tam giác trong 2 – 3 phút

14

Để vi sinh vật

thương do thay đổi

nhiệt , thì nhiệt độ

của dịch pha loãng

Lắc huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng bằng máy vortex để tránh các phần tử có vi sinh vật lắng xuống

Bước 1 Chuẩn bị mẫu và huyền phù

ban đầu

15

Bước 2 Pha loãng mẫu

Dùng pipet vô trùng lấy 1ml

huyền phù ban đầu với sai số

+5% cho vào một ống nghiệm

chứa 9 ml dịch pha loãng SPW

vô trùng ở nhiệt độ thích hợp.

Trộn kỹ bằng máy vortex trong 5 - 10 giây để thu được dung dịch pha loãng 10 -2 (đối với các loại mẫu làm

từ nguyên chất thì thu được dung dịch pha loãng là 10 -1 ) Nếu cần, lặp lại thao tác trên để có được dung dịch pha loãng 10 -3 , 10 -4 , 10 -5 cho đến khi thu được lượng vi khuẩn thích hợp.

16

• Dùng pipet vô trùng chuyển 0,1ml mẫu thử cho vào giữa đĩa petri Lặp lại qui trình với các dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo Sử dụng 2 nồng độ pha loãng liên tiếp, mỗi nồng độ

2 đĩa petri

• Dùng que cấy trái trái đều dịch mẫu lên khắp bề mặt đĩa petri,

sử dụng một que trãi vô trùng cho mỗi đĩa Để các đĩa khoảng

15 phút ở nhiệt độ phòng để chất cây bám vào thạch Lật úp đĩa và ủ 30°C/24 giờ.

Bước 3 Cấy và ủ mẫu

Bước 4 Đếm và chọn các khuẩn

lạc để khẳng định

• Đếm các đĩa có số khuẩn lạc dưới 150 sau 24 giờ nuôi cấy Khuẩn lạc B.cereus giả định là các khuẩn lạc lớn, màu hồng, được bao quanh bởi một vòng kết tủa Đếm các khuẩn lạc B cereus giả định trên những đĩa có số đếm phù hợp.

• Lấy 5 khuẩn lạc giả định, nếu trên đĩa có ít hơn 5 khuẩn lạc thì lấy tất cả các khuẩn lạc giả định có mặt Cấy ria, cấy đâm sâu hoặc chấm các khuẩn lạc đã chọn lên mặt thạch máu cừu, ủ ở 30°C trong 24 giờ Đọc kết quả.

18

Bước 5 Đọc Kết

Quả

Khuẩn lạc của B cereus môi trường thạch MYP

Dẹt, đường kính 2–3 mm, bờ hình răng cưa, màu đỏ hồng, xung quanh có vùng đục; tan máu β.

V : Thể tích dịch ược cấy trên mỗi ĩa (ml) đó: đó:

n1 : Số ĩa ở ộ pha loãng thứ nhất ược giữ lại đó: đó: đó:

n2 : Số ĩa ở ộ pha loãng thứ hai ược giữ lại đó: đó: đó:

 

21

Ví dụ giả

định

Lô hàng không đạt yêu cầu

Sản phẩm Loại vi khuẩn Giới hạn Vi Sinh Vật

(Trong 1g hoặc 1 ml sản phẩm)

Sữa dạng bột B.Cereus 10²

(Trong 1g hoặc 1 ml sản phẩm)

Sữa dạng bột B.Cereus 6,4x10 3 CFU/g có trong

mẫu kiểm nghiệm

(*) Theo quyết định số 46/2007/QĐ-BYT

A PCA

B MYP C.SPW

Câu hỏi: Các bước tiến hành nuôi cấy Bacillus cereus?

A Pha loãng mẫu – Chuẩn bị mẫu thử và huyền phù ban đầu

– Cấy và ủ mẫu – Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định – Đọc kết quả

B Chuẩn bị mẫu thử và huyền phù ban đầu – Cấy và ủ mẫu – Pha loãng mẫu – Đọc kết quả – Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định

C Chuẩn bị mẫu thử và huyền phù ban đầu – Pha loãng mẫu – Cấy và ủ mẫu – Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định – Đọc kết quả

D Chuẩn bị mẫu thử và huyền phù ban đầu – Cấy và ủ mẫu – Pha loãng mẫu – Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định – Đáp án: C

Câu hỏi: Quá trình ủ mẫu của B.cereus ở điều kiện nhiệt độ là bao nhiêu?

A 30°C

B 40°C

C 10°C

D 15°CĐáp án: A

Câu hỏi: Phương pháp đếm khuẩn lạc được sử dụng

để định lượng Bacillus cereus bằng cách nào?

A Đếm số lượng khuẩn trên một bề mặt cấy sau khi chúng đã phân tán đều

B Sử dụng phép đo hấp thụ ánh sáng để xác định nồng độ vi khuẩn

C Quan sát vi khuẩn dưới kính hiển vi điện tử

D Xác định sự thay đổi màu sắc khi vi khuẩn phát triển trên

môi trường agar

Đáp án: A

Câu hỏi: Bacillus cereus là một loại vi khuẩn gram

dương, có khả năng gây ra nhiều bệnh trên con người Chọn câu trả lời đúng liên quan đến tính chất của

Bacillus cereus?

A Bacillus cereus là vi khuẩn gram âm

B Bacillus cereus có khả năng tạo nên bào tử chịu nhiệt độ

cao

C Bacillus cereus là vi khuẩn chủ yếu gây nhiễm trùng ruột

D Bacillus cereus không thể tồn tại trong môi trường oxh

Đáp án: B