Tình hình ô nhiễm Bacillus cereus
Các ổ chứa và lối sống của Bacillus cereus
Bacillus cereus là vi khuẩn phổ biến trong tự nhiên, có mặt trong đất, trầm tích, bụi và thực vật Bào tử của chúng có khả năng lây lan và tồn tại bên ngoài môi trường sống tự nhiên B cereus sensu lato thường tồn tại dưới dạng bào tử trong đất, nảy mầm và phát triển khi tiếp xúc với chất hữu cơ hoặc vật chủ như côn trùng và động vật Nghiên cứu cho thấy vi khuẩn này có thể phát triển và tạo bào tử trong đất, thể hiện vòng đời hoại sinh Một kiểu hình đa bào với phương thức sinh trưởng dạng sợi đã được quan sát, cho thấy khả năng di chuyển qua đất Ngoài ra, B cereus cũng được phát hiện trong ruột của côn trùng, nơi chúng có thể tồn tại cộng sinh với vật chủ Các cộng đồng vi sinh vật trong ruột côn trùng được coi là môi trường sống tự nhiên cho một phần vòng đời của B cereus Sự tồn tại của các chế độ hình thái khác nhau, như chế độ dạng sợi, có thể là sự thích nghi với các chu kỳ sống khác nhau, từ chu kỳ sống cộng sinh đến vòng đời gây bệnh nhanh chóng.
Bacillus cereus thường được tìm thấy trong phân của người khỏe mạnh với mức độ khác nhau Sự hiện diện phổ biến ở mức độ thấp của vi khuẩn này trong môi trường, thực phẩm và thức ăn cho thấy B cereus có thể xuất hiện thoáng qua trong ruột của động vật có vú Dữ liệu gen từ chủng B cereus ATCC cung cấp thêm thông tin về đặc điểm di truyền của vi khuẩn này.
Nghiên cứu về chủng B anthracis và B cereus ATCC 14579 cho thấy khả năng trao đổi chất của chúng thích nghi tốt hơn với việc sử dụng protein làm nguồn dinh dưỡng thay vì carbohydrate Hơn nữa, các gen liên quan đến sự hình thành trong vật chủ được bảo tồn Một so sánh gần đây giữa kiểu gen và kiểu hình của các chủng B cereus ATCC 14579 và ATCC 10987 đã làm sáng tỏ thêm sự khác biệt này.
B cereus (14579) có khả năng chuyển hóa một lượng lớn carbohydrate vượt xa những gì được dự đoán từ phân tích gen Dữ liệu cho thấy rằng, bên cạnh vòng đời trong đất, loài vi khuẩn này còn thích nghi với lối sống trong vật chủ, đóng vai trò như một mầm bệnh.
Bacillus cereus là một loại vi sinh vật có khả năng tồn tại trong đường ruột động vật và phát triển trong thực phẩm Khả năng thích nghi của B cereus với môi trường này có thể góp phần vào tác dụng lợi khuẩn mà chúng được cho là có Tuy nhiên, việc sử dụng chúng không hoàn toàn an toàn cho con người, vì tất cả các chủng B cereus đều có khả năng sản sinh ít nhất một loại độc tố liên quan đến bệnh tiêu chảy Dù vậy, một số chủng sản sinh lượng độc tố không đáng kể ở nhiệt độ 37°C đã được Cơ quan An toàn Thực phẩm Châu Âu (EFSA) cho phép sử dụng trong chế phẩm sinh học.
B cereus được cho là có mặt trong nhiều môi trường, bao gồm cả nước, nhưng hiện tại chưa có nhiều dữ liệu về sự hiện diện của nó trong nguồn nước và các phương pháp tiêu chuẩn để phát hiện từ nước vẫn còn thiếu Nghiên cứu tại các vùng nước bề mặt của Na Uy đã phát hiện bào tử B cereus và các chủng gây độc tế bào từ một số con sông, cho thấy khả năng nguồn cung cấp nước có thể là một phương tiện để B cereus xâm nhập vào dây chuyền chế biến thực phẩm.
Bacillus cereus có thể chuyển từ đất sang thực phẩm
Bacillus cereus là một vi khuẩn có thể được tìm thấy trong nhiều loại thực phẩm như gạo, sản phẩm từ sữa, gia vị, thực phẩm khô và rau Vi khuẩn này có khả năng lây nhiễm chéo, phân phối bào tử hoặc tế bào sang các thực phẩm khác, bao gồm cả sản phẩm thịt Trong quá trình thu hoạch, B cereus có thể đi cùng nguyên liệu thực vật vào các khu vực sản xuất thực phẩm và bám vào thiết bị chế biến Đây là một tác nhân gây ô nhiễm phổ biến trong sữa, có thể dẫn đến hiện tượng sữa đông ngọt Bào tử hoặc tế bào B cereus có thể xâm nhập vào bầu vú bò trong quá trình chăn thả hoặc qua vật liệu lót chuồng và thức ăn Một nghiên cứu gần đây đã phát hiện số lượng lớn B cereus trên các lớp chăn ga gối đệm trong trang trại bò sữa.
Bào tử Bacillus cereus mang lại lợi thế lớn cho sinh vật, cho phép chúng tồn tại qua các quy trình xử lý nhiệt và gắn kết tốt trên các bề mặt như dây chuyền chế biến thực phẩm Sự khác biệt về tính chất bào tử, bao gồm tính kỵ nước và cấu trúc, ảnh hưởng đáng kể đến khả năng bám dính của chúng Điều này cho thấy rằng bào tử Bacillus cereus không nhất thiết phải được loại bỏ qua việc làm sạch bề mặt thường xuyên, và khả năng hình thành màng sinh học của chúng có thể đóng vai trò quan trọng trong sự tồn tại của loài này.
Bài tiểu luận này tập trung vào việc phân tích vi sinh thực phẩm, đặc biệt là định lượng Bacillus cereus trong các thiết bị công nghiệp thực phẩm, như đường ống dẫn sữa Bacillus cereus là một vi khuẩn có khả năng tạo bào tử và phát triển trong môi trường thực phẩm, gây ra mối nguy hiểm cho sức khỏe con người Màng sinh học của vi khuẩn này giúp bảo vệ bào tử và tế bào sinh dưỡng khỏi sự tác động của chất khử trùng, làm tăng khả năng tồn tại và phát triển của chúng trong các hệ thống công nghiệp Việc hiểu rõ về Bacillus cereus và các phương pháp định lượng là cần thiết để đảm bảo an toàn thực phẩm và kiểm soát ô nhiễm vi sinh trong ngành công nghiệp thực phẩm.
Công nghệ sản xuất thực phẩm hiện đại sử dụng việc làm lạnh để bảo tồn, tạo ra môi trường thuận lợi cho các vi khuẩn như B weihenstephanensis và B cereus, những loài có khả năng tồn tại qua xử lý nhiệt và phát triển ở nhiệt độ thấp Chúng thường được tìm thấy trong sản phẩm sữa và các thực phẩm được làm lạnh để kiểm soát sự phát triển của vi sinh vật Ngoài ra, các thực phẩm được xử lý nhiệt nhẹ với thời gian bảo quản lâu cũng tạo điều kiện cho sự phát triển của nhóm B cereus.
B cereus là một vi sinh vật phổ biến có khả năng phục hồi cao và không yêu cầu điều kiện sống khắt khe, do đó, không có loại thực phẩm nào có độ pH> 4,8 có thể hoàn toàn loại trừ khỏi nguy cơ hư hỏng hoặc gây bệnh Người tiêu dùng thường không tuân thủ các quy tắc chuẩn bị thực phẩm cơ bản, như làm lạnh chậm hoặc không đủ, bảo quản ở nhiệt độ môi trường hoặc giữ nhiệt kéo dài dưới 60°C, điều này tạo điều kiện cho B cereus phát triển và góp phần vào các trường hợp nhiễm khuẩn thực phẩm.
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus, a significant microorganism in food safety It explores the quantitative assessment of Bacillus cereus in food products, highlighting its implications for public health The study emphasizes the importance of monitoring this bacterium to prevent foodborne illnesses Additionally, it discusses the methods used for detecting and quantifying Bacillus cereus, ensuring compliance with food safety standards Overall, understanding Bacillus cereus is crucial for enhancing food quality and safety.
Đặc điểm sinh học
Bacillus cereus là trực khuẩn Gram dương, nội bào tử, có kích thước 0,5-1,5 x 2-4 μ Vi khuẩn không tạo giáp mô, không có khả năng di động.
- Hiếu khí và khị khí tùy ý.
- Trên môi trường NA hay TSA sau 24 giờ tạo nhóm lớn, nhăn nheo, xù xì
- Trên môi trường MYP: khóm hồng xung quanh có vòng sáng.
- Trên môi trường Mossel: khóm to hồng chung quanh có vòng sáng.
- Trên môi trường canh NB, TSB: đục tạo váng, sau cặn lợn cợn
- Trên môi trường đường: lên men glucose trong điều kiện hiếu khí và khị khí, không lên men mannitol.
Đặc điểm gây bệnh - độc tố - triệu chứng:
Vi khuẩn Bacillus cereus phổ biến trong tự nhiên và thường xâm nhập vào thực phẩm khi để qua đêm hoặc bảo quản lâu trong tủ lạnh, dẫn đến ngộ độc thực phẩm Vi khuẩn này sản xuất hai loại độc tố gây hại cho sức khỏe.
Độc tố gây tiêu chảy (Type 1) là một loại protein do vi khuẩn sản sinh trên thịt, rau quả và gia vị Chất độc này có khả năng phân hủy hoại biểu bì và niêm mạc ruột, dẫn đến tình trạng tiêu chảy nghiêm trọng, có thể đe dọa đến tính mạng.
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus in food, emphasizing its importance in food safety and quality control Bacillus cereus is a significant foodborne pathogen that can cause food poisoning, making its detection and quantification essential in food microbiology The study highlights various methods for determining the presence of Bacillus cereus in food products, underscoring the need for rigorous testing to prevent potential health risks Understanding the characteristics and behavior of Bacillus cereus is crucial for ensuring food safety and protecting public health.
Độc tố gây nôn mửa (Type 2), hay còn gọi là emetic toxin, thường xuất hiện trong gạo, cơm nguội và các loại đậu Độc tố này có bản chất là phospholipit, với tính ổn định cao, không bị phân hủy ở nhiệt độ cao cũng như trong dịch dạ dày.
Vi khuẩn sản sinh ra enzyme hemolyzin, một loại protein độc hại có khả năng gây tử vong Mặc dù độc tố này có thể bị cholesterol trong huyết thanh trung hòa, nhưng nó vẫn đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển của vi khuẩn.
Bacillus Cereus có thể gây nhiễm trùng và nhiễm độc khác nhau như: nhiễm trùng máu, viêm màng não và nhiễm trùng mắt.
- Thực ăn chứa mật độ vi khuẩn: 10 5 vi khuẩn/g thực phẩm đủ gây độc
- Biểu hiện: đau bụng, buồn nôn, nôn sau 1-5 giờ ăn phải thực phẩm nhiễm vi khuẩn Bệnh có thể kéo dài 24 giờ.
- Biện pháp phòng ngừa: không ăn thức ăn để nguội qua đêm, thức ăn luôn hâm nóng trên 80 ℃ trước khi ăn.
This article focuses on the quantitative analysis of Bacillus cereus in food samples, emphasizing the importance of understanding this bacterium's role in food safety Bacillus cereus is known for causing foodborne illnesses, making its detection and quantification crucial for public health The study employs various microbiological techniques to accurately measure the presence of Bacillus cereus, highlighting the significance of adhering to strict safety protocols in food handling and preparation By ensuring proper analysis, we can mitigate the risks associated with this pathogen and enhance food safety standards.
CƠ SỞ PHÂN TÍCH
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6404:2016 (ISO 7218:2007
7218:2007 WITH AMENDMENT 1:2013): VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI - YÊU CẦU CHUNG VÀ HƯỚNG DẪN KIỂM TRA VI SINH VẬT
Tiêu chuẩn này đưa ra các yêu cầu chung và các hướng dẫn/lựa chọn cho ba mục đích sử dụng chính sau đây:
- Áp dụng các tiêu chuẩn của các Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia có liên quan để phát hiện hoặc định lượng vi sinh vật.
- Thực hành phòng thử nghiệm tốt đối với các phòng thử nghiệm vi sinh vật trong thực phẩm.
Hướng dẫn công nhận phòng thử nghiệm vi sinh trong thực phẩm yêu cầu tuân thủ các tiêu chuẩn kỹ thuật theo Phụ lục B của TCVN ISO/IEC 17025 Các tổ chức quốc gia chịu trách nhiệm công nhận các phòng thử nghiệm này cần đảm bảo các tiêu chí chất lượng và độ tin cậy trong quy trình kiểm tra vi sinh vật Việc công nhận đúng quy trình không chỉ nâng cao chất lượng sản phẩm thực phẩm mà còn bảo vệ sức khỏe cộng đồng.
- Các hướng dẫn bổ sung trong lĩnh vực kiểm tra sinh học phân tử được quy định trong TCVN 11134 (ISO 22174).
Tiêu chuẩn này quy định việc kiểm tra vi khuẩn, nấm men và nấm mốc, đồng thời có thể áp dụng khi bổ sung hướng dẫn cụ thể về prion, ký sinh trùng và virus Tuy nhiên, tiêu chuẩn này không bao gồm việc kiểm tra các độc tố hoặc các chất chuyển hóa khác như các amin từ vi sinh vật.
Tiêu chuẩn này quy định về vi sinh vật trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi và môi trường sản xuất thực phẩm cũng như môi trường sản xuất ban đầu.
Tiêu chuẩn này nhằm đảm bảo tính hợp lệ của quy trình kiểm tra, xác định sự đồng nhất trong các kỹ thuật kiểm tra giữa các phòng thử nghiệm Mục tiêu là đạt được kết quả đồng nhất tại các phòng thử nghiệm khác nhau và bảo vệ sức khỏe nhân viên bằng cách ngăn ngừa nguy cơ lây nhiễm.
TIÊU CHUẨN VIỆT NAM TCVN 4992 : 2005 (ISO 7932:2004): VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ THỨC ĂN CHĂN NUÔI – PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS
7932:2004): VI SINH VẬT TRONG THỰC PHẨM VÀ
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus in food, emphasizing its significance in food safety and quality control It discusses the methods for quantifying Bacillus cereus, highlighting its potential health risks associated with food contamination The research aims to provide insights into effective monitoring and prevention strategies to mitigate the impact of this bacterium in the food industry Understanding the behavior and characteristics of Bacillus cereus is crucial for ensuring consumer safety and maintaining food integrity.
THỨC ĂN CHĂN NUÔI – PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS CEREUS GIẢ ĐỊNH TRÊN ĐĨA THẠCH – KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC Ở 30oC
Tiêu chuẩn này quy định phương pháp định lượng Bacillus cereus giả định có khả năng phát triển trên đĩa thạch thông qua kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở nhiệt độ 30oC Tiêu chuẩn này có thể được áp dụng cho nhiều lĩnh vực khác nhau.
- Các sản phẩm dùng cho con người và thức ăn chăn nuôi.
- Các mẫu môi trường trong khu vực sản xuất và xử lý thực phẩm.
Thuật ngữ và định nghĩa
Bacillus cereus giả định (presumptive Bacillus cereus) được xác định qua các phương pháp thử nghiệm thực tiễn, trong đó giai đoạn khẳng định chủ yếu dựa vào thử nghiệm trên thạch MYP và thử hồng cầu Thuật ngữ "giả định" được sử dụng để nhấn mạnh rằng giai đoạn khẳng định không thể phân biệt rõ ràng B.cereus với các loài Bacillus khác có liên quan, như B.anthracis và B.thuringiensis, mặc dù các loài này thường ít gặp hơn.
B.weithenstepanensis, B.mycoides Một phép thử tính di động bổ sung có thể giúp để phân biệt B.cereus với B.anthracis khi nghi ngờ có mặt B.anthracis
Vi sinh vật tạo ra các khuẩn lạc đặc trưng trên bề mặt môi trường cấy chọn lọc và cho phản ứng khẳng định dương tính theo các điều kiện quy định trong tiêu chuẩn này.
Cấy mẫu thử theo quy định, sử dụng sản phẩm lỏng hoặc huyền phù, lên bề mặt môi trường cấy đặc chọn lọc trong đĩa Petri.
Chuẩn bị các đĩa trong cùng một điều kiện với dung dịch pha loãng thập phân của mẫu thử hoặc huyền phù ban đầu Ủ các đĩa trong điều kiện hiếu khí ở nhiệt độ 30oC trong khoảng thời gian từ 18 đến 48 giờ.
Để tính số lượng B.cereus trong một mililit hoặc một gam mẫu, cần dựa vào số lượng khuẩn lạc khẳng định thu được trên các đĩa ở các độ pha loãng đã chọn Kết quả này phải có ý nghĩa và được xác nhận theo các phương pháp thử nghiệm quy định.
Phép thử Thực hiện Kết quả khẳng định
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus, a significant bacterium in food safety It emphasizes the importance of quantifying Bacillus cereus in food products to prevent foodborne illnesses The study highlights various methods for detecting and measuring this bacterium, ensuring that food quality and safety standards are upheld Understanding the role of Bacillus cereus in food contamination is crucial for developing effective prevention strategies in the food industry.
Từ mỗi đĩa đã chọn, hãy lấy năm khuẩn lạc giả định; nếu số lượng khuẩn lạc trên đĩa ít hơn năm, thì hãy lấy tất cả các khuẩn lạc có mặt.
Khi khuẩn lạc trên các đĩa mọc quá dày, việc chọn lọc các khuẩn lạc riêng lẻ trở nên khó khăn Do đó, cần cấy ria năm khuẩn lạc giả định lên các đĩa chứa môi trường hoàn chỉnh và ủ trong tủ ấm ở 30oC trong khoảng thời gian từ 18 đến 24 giờ.
Hình thành khuẩn lạc màu hồng được bao quanh bởi một vùng kết tủa.
Thử hồng cầu trên thạch huyết cừu
Cấy ria hoặc chấm các khuẩn lạc đã chọn lên mặt thạch huyết cừu để thể hiện phản ứng hồng cầu một cách rõ ràng Sau đó, ủ ở nhiệt độ 30oC trong khoảng thời gian 24 giờ ± 2 giờ và tiến hành giải thích phản ứng hồng cầu.
Phản ứng dương tính, độ rộng của vùng hồng cầu có thể thay đổi
Các khuẩn lạc giả định thường có kích thước lớn, màu hồng, cho thấy chúng không lên men mannitol Những khuẩn lạc này thường được bao quanh bởi một vùng kết tủa, chỉ ra sự hình thành lexitinase.
Nếu các đĩa chứa vi sinh vật lên men mannitol tạo ra axit, màu hồng đặc trưng của khuẩn lạc B.cereus có thể bị nhạt đi hoặc hoàn toàn biến mất.
Một số chủng B.cereus không sản sinh hoặc chỉ sinh ra ít lexitinase, dẫn đến việc các khuẩn lạc không có vùng kết tủa xung quanh Do đó, các khuẩn lạc này cần được xác nhận thêm.
GIỚI HẠN CHO PHÉP B.CEREUS
Theo Quyết định 46/2007/QĐ-BYT của Bộ Y tế về việc ban hành “Quy định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học và hoá học trong thực phẩm”.
Sản phẩm GIỚI HẠN B cereus
(Trong 1g hoặc 1ml sản phẩm)
Sản phẩm chế biến từ ngũ cốc, khoai 10 2
Bài tiểu luận này tập trung vào việc phân tích vi sinh thực phẩm, đặc biệt là định lượng Bacillus cereus trong các sản phẩm thực phẩm như củ, đậu đỗ, bột, miến và mì sợi, những sản phẩm này cần được xử lý nhiệt trước khi sử dụng Việc xác định sự hiện diện và mức độ của Bacillus cereus là rất quan trọng để đảm bảo an toàn thực phẩm và bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng.
Sản phẩm chế biến từ ngũ cốc, khoai củ, đậu, đỗ: bánh, bột (dùng trực tiếp, không qua xử lý nhiệt trước khi sử dụng)
Quy trình phân tích
Cân 10g đối với mẫu rắn hoặc hút 10ml đối với mẫu lỏng + 90ml Saline Peptone Water Đồng nhất mẫu bằng máy Stomacher trong 60 giây
Dàn đều dịch lỏng lên khắp bề mặt đĩa thạch bằng que dàn mẫu vô trùng cho đến khi khô bề mặt thạch Ủ 30°C/24 giờ
Tính và biểu thị kết quả
Khẳng định B.cereus giả định trên môi trường thạch máu cừu bằng phản ứng Haemolysin Ủ 30°C/24 giờ Đếm khuẩn lạc
The article focuses on the analysis of Bacillus cereus in food, emphasizing its significance in food safety and quality It explores the methods for quantifying this bacterium, which is known to cause foodborne illnesses Understanding the presence and concentration of Bacillus cereus is crucial for preventing contamination and ensuring public health The study highlights various techniques used in microbial analysis, aiming to improve food safety standards and protect consumers from potential health risks associated with this pathogen.
This article focuses on the quantitative analysis of Bacillus cereus in food microbiology It emphasizes the significance of accurately measuring the presence of this bacterium, which can pose health risks through food contamination Understanding the methods for detecting and quantifying Bacillus cereus is crucial for ensuring food safety and quality The study explores various analytical techniques and their effectiveness in identifying this pathogen, highlighting the importance of microbiological assessments in the food industry Ultimately, the research underscores the need for rigorous monitoring to prevent foodborne illnesses associated with Bacillus cereus.
Dụng cụ, môi trường, thiết bị
STT Dụng cụ Mục đích
1 Bình tam giác Chứa dung dịch hóa chất, chứa mẫu
2 Pipet Vận chuyển một lượng thể tích (huyền phù hoặc dung dịch pha loãng) xác định
3 Đĩa petri Nuôi cấy vi sinh vật
4 Que cấy trải Trải đều dịch mẫu lên khắp bề mặt đĩa
5 Quy trải Trải mẫu vật, làm mịn bề mặt thạch
Bảng môi trường và hóa chất
Môi trường và hóa chất Mục đích SPW (Saline Peptone Water) Pha loãng mẫu MYP agar base (Mannitol -
Egg Yolk - Polymixin) Nuôi cấy B.cereus
Môi trường Polymixin B Egg Yolk Blood agar base được sử dụng để khẳng định sự hiện diện của vi khuẩn B.cereus, với sự bổ sung của máu cừu nhằm tăng cường khả năng phát triển cho các loài vi sinh vật khó mọc Để điều chỉnh pH, HCl và NaOH 10% được sử dụng trong quá trình chuẩn bị môi trường.
This article focuses on the quantitative analysis of Bacillus cereus in food samples Bacillus cereus is a significant foodborne pathogen that can cause gastrointestinal illnesses The study emphasizes the importance of monitoring this bacterium in food products to ensure food safety Effective detection and quantification methods are crucial for identifying contamination levels and mitigating health risks associated with Bacillus cereus Understanding its prevalence in various food items can help in developing better food safety practices and regulations.
STT Thiết bị Mục đích
Máy dập Stomacher Đồng nhất mẫu và dịch pha loãng
Nhìn thấy độ khuếch đại của khuẩn lạc để dễ dàng đếm
Tiệt trùng vi khuẩn cho các thiết bị, dụng cụ và hóa chất
The study focuses on the quantitative analysis of Bacillus cereus in food samples, highlighting its significance in food safety Bacillus cereus is a pathogenic bacterium that can cause foodborne illnesses, making its detection and quantification crucial for public health The research employs various microbiological techniques to accurately measure the presence of this bacterium in different food products Understanding the prevalence of Bacillus cereus can help in implementing better food safety practices and regulations This analysis contributes to the broader field of food microbiology, ensuring safer consumption of food items.
Các bước tiến hành
Bước 1 Chuẩn bị mẫu thử và huyền phù ban đầu
Cân chính xác 10g mẫu rắn hoặc 10ml mẫu lỏng với sai số cho phép ± 5%, sau đó cho vào túi nhựa vô trùng Thêm 90ml dung dịch pha loãng SPW vô trùng vào túi chứa mẫu và đồng nhất hỗn hợp trong 1 phút bằng máy dập mẫu hoặc lắc đều trong 2-3 phút Để bảo vệ vi sinh vật khỏi tổn thương do thay đổi nhiệt độ, cần duy trì nhiệt độ dịch pha loãng gần bằng nhiệt độ phòng trong suốt quá trình thao tác Để tránh lắng đọng bào tử trong pipet, nên để pipet ở tư thế nằm ngang khi làm đầy Cuối cùng, lắc huyền phù và dung dịch pha loãng bằng máy vortex để ngăn chặn sự lắng đọng của các phần tử vi sinh vật.
Sử dụng pipet vô trùng, lấy 1ml huyền phù ban đầu với sai số ± 5% cho vào ống nghiệm chứa 9ml dịch pha loãng SPW vô trùng ở nhiệt độ thích hợp Trộn kỹ bằng máy vortex trong 5 - 10 giây để thu được dung dịch pha loãng 10-2; đối với mẫu làm từ nguyên chất, dung dịch pha loãng đạt 10-1 Nếu cần thiết, lặp lại quy trình để thu được dung dịch pha loãng 10-3.
4, 10-5, cho đến khi thu được lượng vi khuẩn thích hợp.
Sử dụng pipet vô trùng, chuyển 0,1ml mẫu thử lỏng hoặc huyền phù vào giữa đĩa petri Nếu cần, lặp lại quy trình với các dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo, sử dụng hai nồng độ pha loãng liên tiếp, mỗi nồng độ với hai đĩa petri Dùng que cấy vô trùng để trải đều dịch mẫu lên bề mặt đĩa, mỗi đĩa sử dụng một que riêng Để các đĩa ở nhiệt độ phòng trong 15 phút cho đến khi chất cấy bám vào thạch, sau đó lật úp đĩa và ủ ở 30oC trong 24 giờ.
Bước 4: Đếm và chọn các khuẩn lạc để khẳng định Đếm các đĩa có số khuẩn lạc dưới 150 sau 24 giờ nuôi cấy Khuẩn lạc B cereus được xác định là các khuẩn lạc lớn, màu hồng, có vòng kết tủa xung quanh Chọn và đếm các khuẩn lạc B cereus giả định trên những đĩa có số đếm phù hợp; nếu có ít hơn 5 khuẩn lạc, lấy tất cả khuẩn lạc giả định có mặt Tiến hành cấy ria, cấy đâm sâu hoặc chấm các khuẩn lạc đã chọn lên mặt thạch máu cừu và ủ ở 30oC trong 24 giờ Cuối cùng, đọc kết quả.
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus, a significant bacterium in food safety It emphasizes the importance of quantifying Bacillus cereus in food products to prevent foodborne illnesses The study outlines various methods for detecting and measuring this bacterium, highlighting its relevance in microbiological assessments Understanding the presence and concentration of Bacillus cereus is crucial for ensuring food quality and safety, making this research vital for food industry stakeholders.
B cereus giả định trong 1g/1ml mẫu (X) được tính theo công thức:
C1,2,3,4: Số khuẩn lạc B cereus giả định đếm được tương ứng trên 4 đĩa của hai độ pha loãng liên tiếp được giữ lại.
Thể tích dịch cấy trên mỗi đĩa được đo bằng mililit, với n1 là số đĩa ở độ pha loãng thứ nhất được giữ lại, n2 là số đĩa ở độ pha loãng thứ hai được giữ lại, và d là hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thứ nhất.
R1,2,3,4: tỉ lệ khẳng định dương tính tương ứng trong 4 đĩa petri được giữ lại ở hai độ pha loãng liên tiếp
Biểu thị kết quả dưới dạng thập phân giữa số 1.0 và 9.9 nhân với 10 n (n là số mũ thích hợp của 10)
Nếu chênh lệch các giá trị ở 2 đậm độ lớn hơn 2 lần, thì lấy giá trị của đậm độ pha loãng thấp hơn để tính kết quả.
Nếu 4 đĩa của sản phẩm lỏng nguyên chất hoặc có độ pha loãng ban đầu thấp hơn 15 khuẩn lạc, kết quả sẽ là trung bình cộng của các khuẩn lạc đếm được ở cả 4 đĩa, được tính cho mỗi 1g hoặc 1ml sản phẩm.
Nếu tất cả các đĩa không có khuẩn lạc nào mọc, đánh giá kết quả như sau:
Ít hơn 1 khuẩn lạc Bacillus trong 1ml sản phẩm.
Ít hơn 1/d khuẩn lạc Bacillus trong 1g sản phẩm.
An toàn phân tích
Các yêu cầu đối với phòng vi sinh
Hạn chế tiếp cận khu vực phòng thí nghiệm Vi sinh:
Khu vực phòng thí nghiệm Vi sinh được bảo vệ bằng biển cảnh báo hạn chế tiếp cận, nhấn mạnh rằng "Không phận sự, không được phép vào khu vực này" để đảm bảo an toàn cho những người không có thẩm quyền.
Những nhân viên không có phận sự, không được phép tiếp cận khu vực phòng thí nghiệm vi sinh.
Khách tham quan, người liên hệ công tác, và nhân viên cần tiếp cận khu vực phòng thí nghiệm phải được sự đồng ý của Phụ trách phòng Ngoài ra, cần có nhân viên bộ phận hướng dẫn trong suốt quá trình di chuyển để đảm bảo an toàn và quy trình đúng đắn.
The article focuses on the analysis of Bacillus cereus in food, emphasizing its significance in food safety and quality It discusses the methods for quantifying Bacillus cereus and highlights its potential health risks when present in food products The research aims to enhance understanding of this bacterium's role in foodborne illnesses, advocating for improved monitoring and control measures in the food industry Overall, the study underscores the importance of accurate detection and quantification of Bacillus cereus to ensure public health and food safety.
Các bề mă ̣t bàn làm viê ̣c trong phòng thí nghiệm phải được vê ̣ sinh kỹ bằng cồn 70 % trước và sau khi làm viê ̣c.
Các thao tác với chủng vi sinh vâ ̣t chuẩn phải được thực hiê ̣n trong tủ an toàn sinh học cấp 2.
Khi chuẩn bị hóa chất môi trường có cảnh báo nguy hiểm, việc đọc kỹ và tuân theo hướng dẫn pha chế cũng như tài liệu an toàn hóa chất (MSDS) là rất quan trọng để đảm bảo an toàn trong quá trình sử dụng.
Khi vâ ̣n hành các thiết bị có liên quan đến tính an toàn (nồi hấp, đèn Bunsen), cần đọc kỹ và tuân thủ hướng dẫn sử dụng thiết bị.
Yêu cầu đối với Rác thải hoặc mẫu đã kiểm nghiệm xong của phòng vi sinh
Rác thải vi sinh phải được phân loại và xử lý:
Rác thủy tinh vỡ và vâ ̣t dụng sắc nhọn (kim tiêm): gom vào thùng dày, có nắp đâ ̣y kín.
Rác thải nhiễm và mẫu thực phẩm bị nhiễm vi sinh cần được hấp tiệt trùng ở nhiệt độ 121°C trong 30 phút Sau đó, chúng phải được cho vào thùng kín và chuyển giao cho dịch vụ thu gom rác vào cuối ngày làm việc.
Rác thải nhiễm vi sinh bao gồm các loại sau:
Mẫu thực phẩm, môi trường nuôi cấy và vâ ̣t dụng chứa (túi mẫu, đĩa petri, ống nghiê ̣m) sau khi cấy và nuôi ủ;
Đầu tip, khay đựng mẫu, cốc đựng típ, que cấy, que trang, giá ống nghiệm và các vật dụng tiếp xúc trực tiếp với mẫu nhiễm hoặc có nguy cơ bị nhiễm là những thiết bị quan trọng trong quy trình xét nghiệm Việc sử dụng đúng các dụng cụ này không chỉ đảm bảo độ chính xác của kết quả mà còn giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm chéo.
Găng tay, khẩu trang, bông gòn vê ̣ sinh mă ̣t bàn thao tác với mẫu nhiễm;
Trong môi trường chọn lọc, B.Cereus tạo ra khuẩn lạc lớn, mọc lăn với rìa nhăn Vi khuẩn này có mặt trong nhiều loại thực phẩm như sữa, thịt, rau quả, hỗn hợp gia vị và sản phẩm khô B.Cereus hình thành hai loại độc tố chính: độc tố gây tiêu chảy (diarrhoeal toxin) và độc tố gây nôn mửa (emetic toxin).
Bacillus cereus được phát hiện và định lượng thông qua các môi trường thạch chọn lọc như Mannitol – Egg Yolk – Polymein (MYP) và Cereus Selective Agar (MOSSEL), cùng với Polymycin Elgelb Mannitol Bromothymol Blue Agar (PEMBA) Việc khẳng định khuẩn lạc này có thể được thực hiện thông qua các thử nghiệm sinh hóa, với các đặc điểm nổi bật như khả năng lên men đường glucose sinh acid trong điều kiện kỵ khí, khử nitrate thành nitrite, thử nghiệm VP(+) dương tính, thủy phân L-tyrosine và khả năng phát triển trong môi trường có 0,001% lysozyme Ngoài ra, Bacillus cereus cũng có thể được định lượng bằng phương pháp MPN.
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus, a significant bacterium in food safety It emphasizes the importance of accurately quantifying Bacillus cereus in food products to prevent foodborne illnesses The study outlines various methods for detecting and measuring this bacterium, highlighting its relevance in the food industry Understanding the presence and levels of Bacillus cereus is crucial for ensuring food quality and safety.
Chúng em xin chân thành cảm ơn thầy Hoàng Xuân Thế đã tận tâm truyền đạt kiến thức và hướng dẫn nhóm chúng em trong suốt quá trình giảng dạy cũng như khi thực hiện bài tiểu luận, giúp chúng em hoàn thành công việc một cách tốt nhất.
Mặc dù chúng em còn hạn chế về kiến thức thực nghiệm và bài làm còn nhiều khiếm khuyết, chúng em rất mong nhận được sự góp ý từ thầy để có thể hoàn thiện hơn.
Chúng em xin chân thành cảm ơn thầy đã dành thời gian đọc bài của nhóm Trong bối cảnh dịch bệnh đang diễn ra phức tạp, chúng em chúc thầy cô có một năm giảng dạy hiệu quả và đạt được nhiều thành công.
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus in food, emphasizing its significance in food safety and quality control Bacillus cereus is a bacterium commonly associated with foodborne illnesses, and understanding its presence in food products is crucial for preventing contamination The study highlights methods for quantifying Bacillus cereus levels, which can help ensure compliance with health regulations Furthermore, it discusses the implications of Bacillus cereus in various food matrices, underlining the importance of proper food handling and storage practices to mitigate risks Overall, the research aims to enhance awareness and promote best practices in food safety regarding Bacillus cereus.
Nhóm chúng em mong nhận được thầy nhận xét để hoàn thiện hơn và sửa chữa sai sót ạ
This article focuses on the analysis of Bacillus cereus, a significant bacterium associated with foodborne illnesses It emphasizes the importance of accurately quantifying Bacillus cereus in food products to ensure safety and quality The study outlines various methods for detecting and measuring the presence of this bacterium in different food samples Understanding the behavior and growth conditions of Bacillus cereus is crucial for preventing contamination and outbreaks Overall, the research highlights the need for rigorous monitoring and control measures in the food industry to mitigate the risks posed by Bacillus cereus.